《《多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段》》由會(huì)員分享,可在線閱讀,更多相關(guān)《《多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段》(40頁珍藏版)》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。
1、OOPOHO堿基堿基OOHOOPOHOOH堿基堿基533553A、解旋解旋 B、合成子鏈合成子鏈 C、合成子代合成子代DNA1. 2. 原理比較比較ATP提供提供高溫變性解旋高溫變性解旋解旋方式解旋方式解旋酶催化解旋酶催化能量能量場(chǎng)所場(chǎng)所活細(xì)胞活細(xì)胞 細(xì)胞核細(xì)胞核耐熱性低耐熱性低四種脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸引物酶引物酶 RNA生物體外生物體外 加入穩(wěn)定的緩沖液加入穩(wěn)定的緩沖液耐熱性高耐熱性高 TapDNA聚合酶聚合酶需加入人工合成的引物需加入人工合成的引物 DNA不需不需ATP提供提供PCR擴(kuò)增DNA復(fù)制DNA聚合酶聚合酶原料原料引物引物設(shè)備設(shè)備不需不需 常溫進(jìn)行常溫進(jìn)行嚴(yán)格控制溫度的溫控設(shè)備
2、嚴(yán)格控制溫度的溫控設(shè)備四種脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸5/3/G GG GT TC C3/5/G GA AC CC C5/3/AG引物引物5/3/GG引物引物變性變性95復(fù)性復(fù)性55延伸延伸725/3/G GG GT TC C5/3/G GG GT TC C5/3/GA引物引物5/3/GA引物引物5/3/GG引物引物5/3/GA引物引物3/3/5/G GA AC CC C3/5/G GA AC CC C5/3/GG引物引物5/3/GG引物引物5/3/GG引物引物3/5/3/GA引物引物1、關(guān)于DNA的復(fù)制,下列敘述正確的是( )ADNA聚合酶不能從頭開始合成DNA,只能從5端延伸DNA鏈BDNA復(fù)
3、制不需要引物C引物與DNA母鏈通過堿基互補(bǔ)配對(duì)進(jìn)行結(jié)合DDNA的合成方向總是從子鏈的3端向5端延伸2.DNA的復(fù)制需要引物,主要原因是的復(fù)制需要引物,主要原因是( )A可加快可加快DNA復(fù)制速度復(fù)制速度B引物可與引物可與DNA母鏈通過堿基互補(bǔ)配母鏈通過堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合對(duì)結(jié)合C引物的引物的5端有助于端有助于DNA聚合酶的延聚合酶的延伸伸DNA鏈鏈DDNA聚合酶只能從聚合酶只能從3端延伸端延伸DNA鏈鏈3.引物的作用是( )A打開DNA雙鏈B催化合成DNA子鏈C使DNA聚合酶能夠從引物的3端開始復(fù)制D提供模板4、PCR技術(shù)控制DNA的解聚與結(jié)合是利用DNA的( )A、特異性B、穩(wěn)定性C、熱變性D、
4、多樣性5、標(biāo)準(zhǔn)的、標(biāo)準(zhǔn)的PCR技術(shù)過程一般分為技術(shù)過程一般分為變性、復(fù)性、延伸三大步,這三變性、復(fù)性、延伸三大步,這三大步需要的溫度依次是(大步需要的溫度依次是( )A.92、50、72B.72、50、92C.50、92、72D.80、50、72引物引物引物引物6、上圖是哪次循環(huán)的產(chǎn)物(、上圖是哪次循環(huán)的產(chǎn)物( )A、第一次循環(huán)的產(chǎn)物、第一次循環(huán)的產(chǎn)物B、第二次循環(huán)的產(chǎn)物、第二次循環(huán)的產(chǎn)物C、第三次循環(huán)的產(chǎn)物、第三次循環(huán)的產(chǎn)物D、第四次循環(huán)的產(chǎn)物、第四次循環(huán)的產(chǎn)物7、Taq DNA聚合酶的特點(diǎn)( )A、耐強(qiáng)酸B、耐強(qiáng)堿C、耐高溫D、最適溫度378、PCR技術(shù)能快速擴(kuò)增技術(shù)能快速擴(kuò)增DNA片段,
5、在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)復(fù)制出上百片段,在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)復(fù)制出上百萬份的萬份的DNA拷貝,有效地解決了因?yàn)闃悠房截悾行У亟鉀Q了因?yàn)闃悠稤NA含量太低而難含量太低而難以對(duì)樣品進(jìn)行分析研究的問題。據(jù)圖回答相關(guān)問題:以對(duì)樣品進(jìn)行分析研究的問題。據(jù)圖回答相關(guān)問題:5-G-GT-C-3 5-G-G-OH(引物引物)3-C-CA-G-5 (引物(引物) 955-G-GT-C-3 3-C-CA-G-5 55 5-G-G-OH5-G-GT-C-3 3-C-CA-G-5 72 (1)在相應(yīng)的橫線上寫出引物)在相應(yīng)的橫線上寫出引物,并在復(fù)性這一步驟中將引物,并在復(fù)性這一步驟中將引物指置于合適的位置。指置于合適的位置。(2)在相
6、應(yīng)的橫線上寫出循環(huán)一次后生成的)在相應(yīng)的橫線上寫出循環(huán)一次后生成的DNA分子。分子。(3)若將作為原料的四種脫氧核苷酸用)若將作為原料的四種脫氧核苷酸用32P標(biāo)標(biāo)記,請(qǐng)分析循環(huán)一次后生成的記,請(qǐng)分析循環(huán)一次后生成的DNA分子的特點(diǎn):分子的特點(diǎn): (4) PCR技術(shù)一經(jīng)問世就被迅速而廣泛地用技術(shù)一經(jīng)問世就被迅速而廣泛地用于分子生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。例如它不僅可以用于分子生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。例如它不僅可以用于基因的分離、克隆和序列分析,還可于基因的分離、克隆和序列分析,還可以用于突變體和重組體的構(gòu)建,基因表達(dá)調(diào)控以用于突變體和重組體的構(gòu)建,基因表達(dá)調(diào)控的研究,基因多態(tài)性的分析,的研究,基因多態(tài)性的分析,_的的診斷,腫瘤機(jī)制的探索,診斷,腫瘤機(jī)制的探索,_鑒定等諸鑒定等諸多方面。多方面。核苷酸核苷酸遺傳病和傳染病遺傳病和傳染病刑事和醫(yī)學(xué)刑事和醫(yī)學(xué)思考:DNA聚合酶和DNA連接酶都能催化兩個(gè)核苷酸之間形成磷酸二脂鍵,兩者有什么異同練習(xí):課后題及練習(xí)冊(cè)內(nèi)容