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1、植物激素的檢測方法
1. 生物測試
生物測試法是最早采用的植物激素測定方法它是利用植物激素 的生理活性通過某些植物的組織和器官對植物激素產生的特異性反 應進行測定的。
優(yōu)點:簡便易行也能反映植物激素的生理活性
缺點:專一性較差且植物體內含有生長素類似物T拮抗物等影響測
定的結果 需在前處理中盡可能純化所要測定的組分 過程復 雜此外重復性差工作量大
2. 免疫檢測
免疫學技術應用于植物激素的測定有力地促進了激素定量研究的 發(fā)展它的基本原理是利用抗原和抗體的特異性競爭結合。
優(yōu)點:了檢測靈敏度可檢測出10-12 g的微量物質相應其前處理也 得到了簡化又改善了測定的專一性。
缺點:
2、抗體的制備較復雜。
3. 物理化學方法
物理化學方法分光譜法和色譜法兩種
1)分光譜法:主要有紫外吸收光漕紅外吸收光譜和熒光法 優(yōu)點:靈敏度高
缺點:專一性差
2)色譜法:利用物質在不同介質中的分配原理進行測定的,包括 紙上層析,薄層層析(TLC),氣相色譜(GC),高效液相色譜(HPLC)以 及氣質聯(lián)用(GC-MS)等,將分離和測定結合起來是色譜法的基本特點。
(1) 紙上層析和TLC:
優(yōu)點:設備簡單易操作
缺點:分離效率和靈敏度有限制
(2) GC 和 HPLC:
是在紙上層析和TLC的基礎上裝備了商品化的色譜柱和檢測
器,保證了檢測方法的專一、靈敏和準確
(3)
3、 GC 和 HPLC 方法:
分析植物激素,靈敏度和選擇性高,重復性好,但對前處理要 求較高;又因保留時間的分辨有一定限制,若達不到所需純度要 求可能會出現(xiàn)多種化合物的保留時間相同或接近而影響測定結果。 (4)在植物激素的理化檢測中儀器聯(lián)用是當代的發(fā)展趨勢:
最常用的結合系統(tǒng)是氣相色譜質譜聯(lián)用(GCMSD,技術,它是 目前最為可靠的激素檢測方法還可驗證其它測定方法的可靠性 而且還可鑒定未知物質的結構,但需經冗長的樣品純化程序設 備昂貴,使用和維護成本高。此外有氣液相色譜GLCD配以火焰 熱離子檢測器(FTDD快速靈敏地對植物細胞分裂素定量測定25], 也有薄層色譜與氣相色譜結合分析ABA。
4、
內源植物激素:植物體內產生的激素
主要有:、生長素(auxin)、赤霉素(GA3)、細胞分裂素(CTK)、
脫落酸(abscisic acid, ABA)、乙烯(ethyne,ETH)
和油菜素甾醇、 吲哚乙酸(IAA)玉米素(Z)、
玉米素核苷(ZR)反玉米素(ZT)復合胺、褪黑 激素秋水仙素吲哚丁酸
外源植物激素:人工合成加到植物中
2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸),吲哚丙酸、、蔡乙酸、
4-碘苯氧乙酸乙稀利水楊酸(SA)茉莉酸b9
(必久)矮壯素(ccc):又叫三西,碌化碌代膽堿 青 鮮素(mh)奈乙酸吲哚丙酸(IPA)吲哚丁酸(IBA) 6-芐基腺嘌吟(BA)激動
5、素(K)
蔡乙酸(NAA)
實驗儀器
中文:
LC-6A高效液相色譜儀
日本島津制作所產品
。。,硅膠柱(250mmX5mm)
日本島津制作所產品
SPD-6AV紫外-可見光度檢測器
日本島津制作所產品
C-R3A數(shù)據(jù)處理機
日本島津制作所產品
HPLC
Waters公司產
Alliance系列HPLC及Premier LCT MS/ MS質譜聯(lián)用設備 加拿大
Waters公 司
Xterra C18色 譜柱(100 mm x2.1 mm x3.5u m,加拿大 Waters公 司
美國HP-5890II型氣相色譜儀,配備FID檢測器,HP-3395積分儀
6、
1100型高效液相色譜儀
美國Aglent公司
SLC-10A VP高效液相色譜儀 日本島津公司
英文:
HPLC-UV analysis, an Agilent 1100 series HPLC-UV system (Agilent
Technologies, USA)
Both methanol and ethanol(HPLC grade) Merck (Darmstadt, Germany)
Acetic acid (analytical reagent grade) Fisher Scientific (Hanover Park, IL, USA).
實驗試劑
7、中文:
,a-蔡乙酸(NAA),吲哚乙酸(IAA ), 6-芐基嘌吟(BA),K,GA(上
海伯奧生物科技公司)
ZT (上海麗珠東風生物技術有限公司
IBA (英國產,上?;瘜W試劑分裝站),
IPA(Sigma公 司)
褪黑激素、吲哚乙酸(山入)和復合胺(Sigma Chemica公司
甲醇和乙腈(HPLC級,加拿大VWR Scientific公司
甲酸(分析純,Sigma公司
IAA,GA3,Z (玉米素)和ABA Fluka公司
GA3 和 ABA Sigma 公司
IAA,ABA,GA 中國藥品生物制品檢定所
甲醇、三氯甲烷和乙酸乙酯
分析純
赤霉素GA3、
8、生長素、IAA和ABA (純度大于97%, Sigma公司)
冰醋酸(AR,上?;瘜W試劑公司)
玉米素核苷(zR) Sigma公司
玉米素(z) 中國科學院上海生物化學研究所
玉米素、赤霉素、生長素、脫落酸 Sigma,純度A99%
腺素、激動素、6-芐氨基嘌吟、秋水仙素、吲柴3-丁酸(科
密歐,純度A95%)
色譜純甲醇 德國MERCK公司
分析純乙酸、甲醇、乙酸乙酯、石油醚 西安化學試劑廠
英文:
GA3, IAA, ABA (脫落酸),JA, IBA, NAA, 2,4-D(2, 4-二氯苯酚代乙 酚),1-ethyl-3-(3-
dimethylaminoprop
9、yl) carbodiimide (EDC) and sodium dodecyl sulphate (SDS) Sigma-Aldrich (St. Louis, MO,USA).
Z, BA, GA, ABA and IBA Sigma-Aldrich (Steinheim, Germany)
IAA,NAAand 2,4-D PhytoTechnology
Laboratories(Shawnee Mission, USA)
植物激素的危害
矮壯素:毒理學的研究表明:即使在低于日允許攝入量濃度水平 下,矮壯素對動物的繁殖能力仍有不良影響。美國國家職業(yè)安全和健 康研究所發(fā)布的化學
10、物質毒性數(shù)據(jù)庫已將矮壯素列為疑似內分泌十 擾物質。
赤霉素:赤霉素可能干擾人體正常的內分泌系統(tǒng)袁長期食用會 在人體中蓄積袁造成器官的慢性中毒袁并可能引起癌變袁嚴重危及 消費者的身心健康??捎绊憴C體的內分泌系統(tǒng)受試動物的甲狀腺、 卵巢、腎上腺等內分泌腺重量明顯增加使得動物某些激素水平發(fā)生 改變,影響動物的生長發(fā)育 甚至發(fā)生癌變。
乙烯利:具有一定的神經毒性、致突變性和弱的激素樣作用。對 小鼠的免疫功能具有一定的抑制作用能導致小鼠體細胞、生殖細胞遺 傳損傷,使小鼠骨髓細胞微核率和雄性生殖細胞畸形率提高干擾精 子正常生成和成熟過程導致小鼠體細胞染色體畸變和生殖細胞基 因突變。乙烯利對人類具有潛在
11、的誘癌、致畸及其他多方面的危險。
蔡乙酸:有一定抑制睪丸細胞增殖活性、誘發(fā)睪丸細胞凋亡的作 用。
2, 4七:小鼠長期暴露在2, 4 - D的環(huán)境中會造成骨骼畸形,致 病率和死亡率增加;2, 4 - D具有急性神經毒性,對皮膚和眼睛有刺 激作用,吸入或接觸后,其急性毒性作用主要表現(xiàn)為神經性毒性; 慢性毒性作用表現(xiàn)為對血液、肝、腎的毒性及抑制某些酶的活力,抑 制某些蛋白質的合成。
NAA:屬于低毒農藥,大白鼠急性口服1_。50為1 000?5 900
mg - kg- 1。對人的眼睛、皮膚、粘膜和上呼吸道有刺激作用吸入后 可引起咳嗽、喘息、喉炎、氣短、頭痛、惡心、嘔吐通過食道引起 中毒,對肝、腎造成損害。
青鮮素:可能是致癌物 因為它能引起老鼠的染色體斷裂和畸
變。
多效唑:高劑量的多效唑對動物雄性生殖器官有損傷子代體重 和繁殖指數(shù)降低、肝臟受損 可能是致癌物質 應慎用;多效唑粉劑 對皮膚和眼睛有輕微至中等的刺激作用。
廠家:上海喜潤化學工業(yè)有限公司
植物組培及激素-上海世澤生物科技有限公司(比較全)