《《抗M2自身抗體》PPT課件.ppt》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《《抗M2自身抗體》PPT課件.ppt（21頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。

1、抗線粒體M2 抗體ELISA系統(tǒng)化檢測方法的建立及臨床意義探討,首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院 閆惠平 研究員，教授 ,背景介紹,自身免疫性疾病(autoimmune disease，AID)是嚴重影響人類健康的疾病之一,可累及人體的各系統(tǒng)、組織和器官,涉及臨床各專業(yè)學(xué)科。 自身抗體對疾病診斷、鑒別診斷有重要價值。 自身抗體主要檢測方法： 間接免疫熒光法、 ELISA、 免疫印跡 等多種方法,首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院,目前自身抗體檢測普遍問題,間接免疫熒光法（IFA)：操作技術(shù)水平要求較高、儀器試劑要好，有一定局限性。 ELISA法：多以手工操作為主，全自動酶聯(lián)分析儀檢測技

2、術(shù)應(yīng)用不普遍；檢測結(jié)果存在較大的不一致性；迫切需要解決檢測的系統(tǒng)化和規(guī)范化問題。 國產(chǎn)自身抗體檢測ELISA試劑：上市時間較短；許多缺乏大規(guī)模臨床應(yīng)用質(zhì)量評價；其正常參考區(qū)間以及對臨床疾病診斷的靈敏度和特異性等還缺乏大規(guī)模的經(jīng)臨床驗證的可靠數(shù)據(jù)。,原發(fā)性膽汁性肝硬化 Primary Biliary Cirrhosis, PBC, 多發(fā)于中年女性； 慢性膽汁淤積表現(xiàn)：ALP和-GT升高 AMA(9095%)、AMA-M2陽性； 肝內(nèi)膽小管進行性非化膿性炎癥； 肉芽腫性破壞，并進行性膽管消失； 熊去氧膽酸可以顯著改善生化指標(biāo) 肝纖維化、肝硬化最終肝衰竭。,首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院, 抗-

3、AMA-M2對PBC具有明確的疾病診斷意義，而且具有較高的疾病特異性， 問題：抗-AMA-M2陽性也常見于其他肝病或干燥綜合征等自身免疫性疾病，或者出現(xiàn)檢驗結(jié)果時陰時陽，給臨床診斷與鑒別診斷帶來困惑。 原因可能有多種： 臨床： 如HCV/HBV合并自身免疫??；自身免疫現(xiàn)象 檢驗： 檢測試劑的特異性、標(biāo)準(zhǔn)化； 項目本身的參考區(qū)間是否合適等,乙肝患者的自身免疫異常表現(xiàn),Cacoub,et al J.Hepatol.,43:764 (2005),全世界4億HBV感染者中，約20%的患者出現(xiàn)肝外臨床癥狀體征。 結(jié)節(jié)性多動脈炎（PAN）和膜性腎小球腎炎最嚴重最受關(guān)注。 對190名慢性乙肝

4、患者肝外病理體征（包括自身免疫疾病）和自身抗體的研究表明，兩者的陽性率（至少一項陽性）分別達到16%和15%。,83例肝癌患者自身抗體檢出率,,組別 例數(shù) 自身抗體陽性 ANA CS SMA AMA A 組 64 23（35.9） 16(25.0) 8(12.5) 5(7.8) 3(4.7) B 組 16 8（50.0） 4(25.0） 3(18.8) 3(18.8) 1(6.3) C 組 3 0 0 0 0 0 合計 83 31(37.3） 20(24.1） 11(13.3) 8(9.6) 4(4.8),A: HBV肝癌; B

5、: HCV肝癌; C:其他原因肝癌 HBV/HCV組自身抗體檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義。,趙海琳..閆惠平等，中國免疫學(xué)雜志2010, 26:1127,建立抗-M2 ELISA系統(tǒng)化檢測方法,儀器：ADC ELISA 400流水線式 全自動酶聯(lián)免疫工作站 試劑：抗M2型線粒體抗體檢測試劑盒 (上海科新生物技術(shù)股份有限公司) 檢測范圍：25-800RU/ml；陰性25RU/ml。,研究方法和試劑,研究內(nèi)容與方法,一、全自動酶聯(lián)免疫工作站系統(tǒng)重復(fù)性和精密度的評估。 1）對陰性、弱陽性、中陽性和強陽性4種不同濃度的樣品各一例進行復(fù)孔檢測；重復(fù)以上檢測6次。以評價該檢測方法的精密度和重現(xiàn)性。計算每一

6、個樣品的CV值。 2）設(shè)備單通道、多通道針對不同濃度樣本、不同取樣量的結(jié)果均一性的評價。,研究內(nèi)容與方法,二、不同疾病組標(biāo)本的檢測結(jié)果和臨床意義初步評價 研究對象：PBC 組 112例 HBV組 77例 NC 組 78例 合計 267例,首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院,1,全自動酶聯(lián)免疫工作站系統(tǒng)重復(fù)性和精密度的評估 在6次重復(fù)檢測中，分別對陰性（OD=0.032）、弱陽（OD=0.389）、中陽、（OD=0.752）和強陽（OD=2.027）4例不同抗體濃度的樣品各一份進行復(fù)孔檢測，以評價該檢測方法的精密度和重現(xiàn)性。,表1：不同濃度檢測樣本的SD和CV值

7、,結(jié)果,結(jié)果2、 ADC ELISA 400設(shè)備單通道、多通道針對不同濃度樣本、不同取樣量的結(jié)果均一性比較：CV均5%；表明該設(shè)備的穩(wěn)定性和重復(fù)性好。,結(jié)果-3 抗AMA-M2抗體在不同疾病組檢測結(jié)果和評價,3,,,表2: 抗AMA-M2抗體在不同分組中的陽性率,不同疾病組中抗AMA-M2陽性濃度值的分布,高通量ELISA檢測抗M2抗體對于PBC診斷的敏感性 （sensitivity）為89.3%。抗M2抗體對于PBC診斷的ROC曲線見圖1，曲線下面積（area under curve, AUC）為0.980。,圖1、抗M2抗體對于PBC診斷的ROC曲線,2,結(jié)果-4 抗 AMA-M2 手工

8、法與ELISA儀器法的比較評價,結(jié)果-4 抗 AMA-M2 凍存與新鮮樣本ELISA儀器法的比較評價,本研究的認識,國產(chǎn)全自動酶聯(lián)免疫工作站系統(tǒng)重復(fù)性和精密度的評估：加樣穩(wěn)定性、重復(fù)性均好。組內(nèi)組間差異均較小。 與國產(chǎn)試劑配套應(yīng)用與臨床常規(guī)，抗AMA-M2檢測結(jié)果與疾病的符合率達到以往國內(nèi)外的報道。 全自動酶聯(lián)免疫法可以達到系統(tǒng)化、標(biāo)準(zhǔn)化，彌補手工法的一些缺陷。,本研究的認識,系統(tǒng)化檢測使PBC與病毒性肝炎在檢測數(shù)值上有了明顯差異，期待有助于疾病的鑒別診斷。 下一步： 國產(chǎn)全自動酶聯(lián)免疫工作站檢測標(biāo)準(zhǔn)化 不同試劑間同樣單位值有無可比性？ 擴大病種病例觀察檢測數(shù)值對臨床診斷與鑒別診斷價值？ ELISA系統(tǒng)化與免疫印跡法的比較,衛(wèi)生部醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展研究中心 煙臺艾德康生物科技有限公司 上?？菩律锕?北京佑安醫(yī)院 張海萍、趙丹彤、 廖慧鈺、李卓敏等,致謝,