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1、臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ) 第一章 血液一般檢驗(yàn) 皖北衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院 王玲玲 第一節(jié) 血液標(biāo)本采集與處理 一 血液標(biāo)本類型 二 血液標(biāo)本抗凝劑與添加劑 三 血液標(biāo)本采集 四 血液標(biāo)本運(yùn)送、保存與處理 1全血 2血漿 主要用于化學(xué)和凝血項(xiàng)目檢測(cè)等。 3血清 主要用于化學(xué)和免疫學(xué)等項(xiàng)目檢測(cè)。 血清與血漿比較，主要是前者缺乏纖維蛋白原及某些凝血因子。 4血細(xì)胞 靜脈全血 動(dòng)脈全血 末梢全血 一、血液標(biāo)本類型 靜脈全血 動(dòng)脈全血 血液標(biāo)本添加劑 抗凝劑 分離膠 促凝劑 二、血液標(biāo)本抗凝劑與添加劑 我是血漿， 還是血清呢？ 抗凝：采用物理或化學(xué)的方法 去除

2、或抑制某種凝血因子的活性， 以阻止血液凝固的方法稱為抗凝。 抗凝劑：能夠阻止血液凝固的 化學(xué)物質(zhì)稱為 抗凝劑 （ anticoagulant） 或抗凝物質(zhì)。 （一）抗凝劑 血細(xì)胞 抗凝劑 抗凝原理 臨床用途 真空采血管 顏色 枸櫞酸鈉 （ 檸檬酸鈉 ） 與血液中的 Ca2+結(jié)合形成可溶 性螯合物，使 Ca2+失去凝血作 用，阻止血液凝固 血栓與止血檢驗(yàn)（ 1:9） 血沉測(cè)定（ 1:4） 血液保養(yǎng)液 藍(lán)色 黑色 乙二胺四乙酸 EDTA-K2/K3/Na2 與血液中的 Ca2+結(jié)合形成螯合 物，使 Ca2+失去凝血作用，阻 止血液凝固 全血細(xì)胞分析 紫色

3、肝素 加強(qiáng)抗凝血酶 （ AT- ）滅活絲氨酸蛋白酶作用 血細(xì)胞比容測(cè)定 臨床生化項(xiàng)目 綠色 草酸鈉 與血液中的 Ca 2+形成草酸鈣沉 淀，阻止血液凝固 血細(xì)胞比容、血細(xì)胞計(jì)數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì) 數(shù)等 （不常用） 灰色 （一）抗凝劑 常 用 抗 凝 劑 添加劑 原理 臨床用途 真空采血 管顏色 促凝劑 激活纖維蛋白酶，使可溶性纖維蛋白 變成不可溶性的纖維蛋白聚體，進(jìn)而 形成穩(wěn)定的纖維蛋白凝塊 急診化學(xué)檢查 紅色 分離膠 離心后固化在血清與血塊之間形成隔 離層，使血清和血細(xì)胞完全分離 生化、血庫、 血清學(xué)等相關(guān)檢驗(yàn) 黃色 （二）添加劑 其 它 常 用 添 加

4、劑 血液標(biāo)本采集 靜脈采血法 皮膚采血法 動(dòng)脈采血法 三、血液標(biāo)本采集 （一）皮膚采血法 皮膚采血法，又稱毛細(xì)血管采血法，主要用于需要微量血液檢驗(yàn) 項(xiàng)目和嬰幼兒血常規(guī)檢驗(yàn)。 1、采血針皮膚采血法 （ 1）主要器材： 一次性采血針、 微量吸管、 消毒用品等。 一次性采血針 （一）皮膚采血法 （ 2）采血部位： 一般采用手指指端或耳垂， 嬰幼兒可選擇 趾或足跟內(nèi)外側(cè)緣。 世界衛(wèi)生組織（ WHO）推薦采血 部位為 左手中指或無名指指端內(nèi)側(cè) 。 選擇皮膚完好處采血。 （一）皮膚采血法 材料準(zhǔn)備 （ 3）簡要操作 選擇采血部位

5、 按摩 消毒 針刺 吸血 止血 （ ）簡要操作 （一）皮膚采血法 （ 4）注意事項(xiàng)： 采血時(shí)必須注意 嚴(yán)格消毒和生物安全防范 。 采血針應(yīng)為一次性使用的“ 專用采血針 ”，針刺深度以 2 3mm為宜。 取血時(shí)可稍加擠壓，但 切忌用力過大 ，以免使過多組織液混入血液中。 采血要 迅速 ，防止流出的血液發(fā)生凝固。 手工法血液標(biāo)本采集 順序 為： 血小板計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測(cè)定、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及白細(xì)胞分類計(jì) 數(shù)、血型鑒定等。 其他，激光皮膚采血法 （二）靜脈采血法 靜脈采血法臨床應(yīng)用廣泛，所采集的靜脈血能準(zhǔn)確反映全身血液的 真實(shí)情況，因其不易受氣溫和末梢循環(huán)變化的影

6、響，更具有代表性。 普通采血法 負(fù)壓采血法 1、普通采血法 即傳統(tǒng)的靜脈采血方法 。 （ 1）主要器材： 注射器、 試管、消毒用品等。 普通采血法 負(fù)壓采血法 （二）靜脈采血法 （ 2）采血部位： 通常采用 肘部靜脈 。 當(dāng)肘部靜脈不明顯時(shí)，可采用手背部、 手腕部和外踝部靜脈。 幼兒可采用頸外靜脈采血， 其它：股靜脈、大隱靜脈及鎖骨下靜脈等。 肘部靜脈 （二）靜脈采血法 材料準(zhǔn)備 （ 3）簡要操作 選擇靜脈 扎壓脈帶 消毒 穿刺 抽血 止血 放血與混勻 （二）靜脈采血法 （ 4）注意事項(xiàng)： 根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目判斷所需

7、采血量，選擇注射器。 嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作 。 采血時(shí)切忌將針?biāo)ㄍ赝?，以免注射器中的空氣進(jìn)入血循環(huán)形成氣栓。 為避免溶血，注射器和容器必須干燥，抽血時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生大量氣泡，抽血完畢 后應(yīng)先拔下針頭，然后將血液沿管壁徐徐注入容器，需要抗凝時(shí)應(yīng)與抗凝劑輕輕 混勻，切忌用力振蕩試管。 進(jìn)行血小板功能試驗(yàn)，為了防止血小板激活，須使用塑料注射器或經(jīng)硅化處理 后的玻璃試管或塑料試管。 采血一般取坐位或臥位，不能立位采血，因?yàn)轶w位影響水分在血管內(nèi)外的分布， 影響被測(cè)血液成分的濃度。 壓脈帶捆扎時(shí)間不應(yīng)超過 1分鐘，否則會(huì)使血液成分濃度發(fā)生改變。 （二）靜脈采血法 2、負(fù)壓采血法 又稱為真空

8、采血法 。 （ 1）主要器材： 負(fù)壓采血系統(tǒng) 雙向采血針 真空采血管 套管式 一次性采血針 頭皮靜脈式 一次性采血針 （ 2）采血部位： 同普通采血法。 （二）靜脈采血法 材料準(zhǔn)備 （ 3）簡要操作 選擇靜脈 扎壓脈帶 消毒 穿刺針端穿刺 混勻或不混勻血液 退出刺塞針端針頭 刺塞針端刺入采血管 止血 退出穿刺針端針頭 （二）靜脈采血法 （ 4）注意事項(xiàng)： 使用前切勿松動(dòng)或拔除采血管的膠塞頭蓋。 刺塞針端的乳膠套能防止拔除采血試管后繼續(xù)流血污染周圍環(huán)境，達(dá)到封閉采 血防止污染環(huán)境的作用，因此不可取

9、下乳膠套。 采血完畢后，先拔下刺塞針端的采血試管，后拔穿刺針端。 一次采血，使用 玻璃 采血管多管采集血液標(biāo)本的分配順序?yàn)椋貉囵B(yǎng)管、無抗 凝劑血清管、枸櫞酸鈉抗凝管、其他抗凝劑管； 使用 塑料 采血管分配順序：血培養(yǎng)管（黃色）、枸櫞酸鈉抗凝管（藍(lán)色）、加或 未加促凝劑或分離膠的血清管、加或未加分離膠的肝素管（綠色）、 EDTA抗凝 管（紫色）、加葡萄糖分解抑制劑管（灰色） 。 （三）動(dòng)脈采血法 1主要器材 ： 2ml或 5ml注射器 （準(zhǔn)備 l000U/ml無菌肝素生理鹽水溶液， 以濕潤注射器內(nèi)腔、橡皮塞）， 或一次性動(dòng)脈采血針、消毒用品等。 2采血部位 多選用橈動(dòng)脈

10、（最方便） 股動(dòng)脈、肱動(dòng)脈。 3簡要操作 橈動(dòng)脈采血 （三）動(dòng)脈采血法 4. 注意事項(xiàng)： 隔絕空氣：用于血?dú)夥治龅臉?biāo)本，采集后先立即封閉針頭斜面，再混勻標(biāo)本。 立即送檢：標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，否則應(yīng)將標(biāo)本置于 2 6 保存， 但保存時(shí)間不應(yīng)超過 2小時(shí)。 防止血腫：采血完畢，拔出針頭后，用消毒干棉簽用力按壓采血處止血， 以防形成血腫。 血液標(biāo)本 預(yù)處理與保存 檢驗(yàn)后保存與處理 運(yùn)送 接受與拒收 四、血液標(biāo)本運(yùn)送、保存與處理 （一） 血液標(biāo)本運(yùn)送 生物安全原則 唯一標(biāo)識(shí)原則 及時(shí)運(yùn)送原則 四、血液標(biāo)本運(yùn)送、保存與處理 抗凝標(biāo)本凝固 （二） 血液標(biāo)本拒

11、收 采集容器不當(dāng) 標(biāo)本污染、容器破損 申請(qǐng)單和標(biāo)本標(biāo)識(shí)不一致 采血量不足或錯(cuò)誤 溶血 轉(zhuǎn)運(yùn)條件不當(dāng) 抗凝劑使用錯(cuò)誤 四、血液標(biāo)本運(yùn)送、保存與處理 預(yù)處理： 血常規(guī)檢測(cè)：室溫存放 血漿：可通過離心抗凝血獲得血漿； 血清：對(duì)未含促凝劑或分離膠采血管的血液標(biāo)本置于 37 孵育， 待血液完全凝固后離心分離血清； 含促凝劑或分離膠采血管的血液標(biāo)本可直接離心分離血清； 對(duì)于需要特定細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)，應(yīng)根據(jù)要求采用不同的細(xì)胞分離液 或分離技術(shù)分離細(xì)胞，同時(shí)盡量避免混入其他細(xì)胞。 四、血液標(biāo)本運(yùn)送、保存與處理 （三）血液標(biāo)本預(yù)處理與保存 保存： 1分離后標(biāo)本 不

12、能及時(shí)檢驗(yàn)或需保留標(biāo)本，一般應(yīng)將標(biāo)本置于 4 冰箱內(nèi)保存。 標(biāo)本需保存至少 1個(gè)月時(shí)，放置于 -20 冰箱內(nèi)保存。 標(biāo)本需保存至少 3個(gè)月時(shí)，分離后置于 -70 冰箱保存。 標(biāo)本存放時(shí)需要密封，以免水分揮發(fā)而使標(biāo)本濃縮。 標(biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。 2立即送檢標(biāo)本 如血氨（密封送檢）、紅細(xì)胞沉降率、血?dú)夥治觯芊馑蜋z）、 酸性磷酸酶、乳酸等標(biāo)本。 四、血液標(biāo)本運(yùn)送、保存與處理 四、血液標(biāo)本運(yùn)送、保存與處理 （四）血液標(biāo)本檢驗(yàn)后保存與處理 血液一般分析標(biāo)本：室溫 24小時(shí)后處理， 一般生化檢驗(yàn)項(xiàng)目： 4 存放 7天后處理， 特殊檢驗(yàn)項(xiàng)目：吸出血清或血漿 -20 冰 箱內(nèi)保存

13、 1個(gè)月以上。 保存檢驗(yàn)標(biāo)本時(shí)應(yīng)包括標(biāo)本信息的保 存， 且與分離的血漿或血清標(biāo)本相對(duì)應(yīng)。 保存原則是在有效的保存期內(nèi)確保被 檢測(cè)物質(zhì)不會(huì)發(fā)生明顯改變。 檢驗(yàn)后廢棄的血液標(biāo)本處理嚴(yán)格按 照國家標(biāo)準(zhǔn) 實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要 求 （ GB19489-2004），由專人負(fù) 責(zé)處理，根據(jù) 醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例 規(guī)定使用專用的容器或袋子包裝，由 專人送到指定的地點(diǎn)集中處理。 檢驗(yàn)后廢棄的血液標(biāo)本一般由專門 機(jī)構(gòu)采用焚燒的辦法處理。 處 理 保 存 （一）檢驗(yàn)申請(qǐng) （二）患者準(zhǔn)備 五、血液標(biāo)本采集、運(yùn)送與保存質(zhì)量保證 （三）標(biāo)本采集 （四）標(biāo)本運(yùn)送 第二節(jié) 血涂片

14、的制備與染色 一 血涂片制備 二 血涂片染色 第二節(jié) 血涂片的制備與染色 推片 載玻片 血液 將推片勻速向前，勿停頓。涂片的厚 薄取決于速度和角度：快、大 (厚 )。 慢、?。ū。? 一張滿意的血涂片應(yīng)厚薄均勻 頭 體 尾鮮明 涂片干燥后用鉛筆在血涂片的頭 部寫上姓名和編號(hào) 李 四 B 1 2 3 第二節(jié) 血涂片的制備與染色 良好血液涂片標(biāo)準(zhǔn) 厚薄要適宜 ， 頭體尾要明顯 ， 細(xì)胞分布要均勻 ， 血膜邊緣要整齊 ， 并留有一定的空隙 。 引起血涂片分布 不均的主要原因 ： 推片邊緣不整齊 用力不均勻 載片不清潔 第

15、二節(jié) 血涂片的制備與染色 二、血涂片染色 (一 )瑞氏染色法 (Wrights stain ) 1.瑞氏染料（復(fù)合染料） 酸性染料伊紅 (E-) 堿性染料亞甲藍(lán) (M+，又名美藍(lán) ) 美藍(lán)容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次級(jí) 染料 (即天青 ) ， 甲醇的作用： 溶解美藍(lán)和伊紅，解離為 M+和 E- ； 脫水作用，固定細(xì)胞形態(tài)，增強(qiáng)染色效果 第二節(jié) 血涂片的制備與染色 第二節(jié) 血涂片的制備與染色 2 染色原理 是染料透入被染物并存留其內(nèi)部的一種過程 。 物理的吸附作用 化學(xué)的親和作用 嗜酸性顆粒 堿性 與酸性染料 粉

16、紅色； 細(xì)胞核蛋白 酸性 與堿性染料 紫藍(lán)色或藍(lán)色； 中性顆粒 等電狀態(tài) 與伊紅和美藍(lán) 染淡紫紅色 。 第二節(jié) 血涂片的制備與染色 勿沖洗再加 瑞氏染色 液 5-8滴后將 液和 液充分混勻靜置 10分鐘 直接流水沖洗 3-5分鐘 （切勿先倒掉染液） 涂片經(jīng)水洗干燥后用油鏡 分類計(jì)數(shù) 100個(gè)白細(xì)胞 李 四 123 涂片干燥后加瑞氏染色 液 5-8滴 覆蓋整個(gè)血膜 1分鐘 3.pH值的影響 細(xì)胞各種成分均屬蛋白質(zhì) （ 兩性電解質(zhì) ） 第二節(jié) 血涂片的制備與染色 第二節(jié) 血涂片的制備與染色 染色所用玻片必須清潔 ， 無酸堿污染 。

17、 配制瑞氏染液必須用優(yōu)質(zhì)甲醇 。 稀釋染液必須用緩沖液 。 沖洗用水應(yīng)近中性 。 新鮮配制的染料偏堿 ， 須在室溫貯存一定時(shí)間 ， 貯存 時(shí)間愈久 ， 染色效果愈好 。 DeamGilliland 等采用吸光度比值 作為瑞氏染液的質(zhì)量 規(guī)格 。 第三節(jié) 白細(xì)胞顯微鏡檢查 一 白細(xì)胞計(jì)數(shù) 二 白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) 三 白細(xì)胞形態(tài)檢查 四 嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù) 五 紅斑狼瘡細(xì)胞檢查 血液 血漿 血細(xì)胞 紅細(xì)胞 白細(xì)胞 血小板 中性粒細(xì)胞 嗜酸性粒細(xì)胞 淋巴細(xì)胞 單核細(xì)胞 嗜堿性粒細(xì)胞 第三節(jié) 白細(xì)胞顯微鏡檢查 白細(xì)胞計(jì)數(shù)（ white bloo

18、d cell count）是指測(cè)定單位體積外周血中 各種白細(xì)胞的總數(shù)。 白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果僅反映循環(huán)池中的細(xì)胞數(shù)量。 一、白細(xì)胞計(jì)數(shù) 1原理 白細(xì)胞顯微鏡計(jì)數(shù)法是將全血用稀酸溶液稀釋一定倍數(shù)，使紅細(xì)胞破壞后， 充入改良牛鮑（ Neubauer）計(jì)數(shù)板內(nèi)，在普通光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)一定范圍 內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)，經(jīng)換算求出每升血液內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)。 2白細(xì)胞稀釋液 冰乙酸 破壞紅細(xì)胞，且使白細(xì)胞核固定清晰 亞甲藍(lán)或結(jié)晶紫 使白細(xì)胞核略著色，便于識(shí)別 蒸餾水 （一）方法 3器材 （ 1）改良牛鮑計(jì)數(shù)板 （ 2）改良牛鮑計(jì)數(shù)板專

19、用蓋玻片（血蓋片） （ 3）微量吸管 （ 4）顯微鏡 一、白細(xì)胞計(jì)數(shù) Neubauer計(jì)數(shù)盤（牛鮑氏計(jì)數(shù)盤） 蓋玻片 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板側(cè)面觀 液面高度為 0.1 mm 一、白細(xì)胞計(jì)數(shù) 大方格 中方格 小方格 每個(gè)大方格體積 =1X1x0.1=0.1mm3= 0.1 L 0.38ml稀釋液 混勻 20ul血液 充池、靜置 鏡下計(jì)數(shù)、計(jì)算

20、 4. 簡要操作 一、白細(xì)胞計(jì)數(shù) 計(jì)數(shù)：用低倍鏡計(jì)數(shù)四個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)（ N）。 計(jì)算： WBC/L=N/4 10 106 20 =N/20 X 109/L 0.1L 1L 1L 稀釋倍數(shù) 一、白細(xì)胞計(jì)數(shù) 1采血時(shí)間的影響 2計(jì)數(shù)誤差 （ 1）技術(shù)誤差（ technical errors） 器材誤差 采血與取血不當(dāng) 稀釋倍數(shù)不準(zhǔn) 充池不

21、當(dāng) 白細(xì)胞計(jì)數(shù)不準(zhǔn)確 （ 2）固有誤差（ inherent errors） 又叫計(jì)數(shù)域誤差 3. 有核紅細(xì)胞的影響校正公式： （二）質(zhì)量保證 y1 0 0 1 0 0 x校正后白細(xì)胞數(shù)/ L x：校正前白細(xì)胞數(shù) y：在白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)時(shí)，計(jì)數(shù) 100個(gè) 白細(xì)胞的同時(shí)計(jì)數(shù)到的有核紅細(xì)胞數(shù)。 一、白細(xì)胞計(jì)數(shù) 例：校正前白細(xì)胞數(shù)為 12 109/L，在作白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)時(shí)計(jì) 數(shù) 100個(gè)白細(xì)胞的同時(shí)數(shù)得的有核紅細(xì)胞數(shù)為 40個(gè)，則 校正后白細(xì)胞數(shù) L = 12 109/L

22、 = 8.6 109/L 40100 100 例：校正前白細(xì)胞數(shù)為 ，在作白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)時(shí)計(jì) 數(shù) 個(gè)白細(xì)胞的同時(shí)數(shù)得的有核紅細(xì)胞數(shù)為 個(gè)，則 校正后白細(xì)胞數(shù) 一、白細(xì)胞計(jì)數(shù) 4經(jīng)驗(yàn)控制 以血涂片中所見白細(xì)胞的多少粗略核對(duì)白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果有無大的誤差。 表 血涂片白細(xì)胞密度與白細(xì)胞總數(shù)的關(guān)系 血涂片白細(xì)胞 /HP WBC（ 109/L） 2 4 4 7 4 6 7 9 6 10 10 12 10 12 13 18 一、白細(xì)胞計(jì)數(shù) （三）方法學(xué)評(píng)價(jià) 白細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法學(xué)評(píng)價(jià) 方法 評(píng)價(jià) 顯微鏡計(jì)數(shù)法 設(shè)備簡單、費(fèi)用低廉；費(fèi)時(shí)、重復(fù)性較差；

23、 適用于基層醫(yī)療單位和分散檢測(cè) 血細(xì)胞分析儀法 操作簡便，效率高，重復(fù)性好； 儀器較貴，準(zhǔn)確性取決于儀器的性能及工作狀態(tài)； 適合于大批量的標(biāo)本集中檢測(cè) 一、白細(xì)胞計(jì)數(shù) 白細(xì)胞總數(shù) 高于參考區(qū)間的上限稱白細(xì)胞增多， 低于參考區(qū)間的下限稱白細(xì)胞減少。 白細(xì)胞總數(shù)增多或減少主要受中性粒 細(xì)胞數(shù)量的影響， 其臨床意義見白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。 （五）臨床意義 （四）參考區(qū)間 成人：（ 3.5 9.5） 109/L； 兒童：（ 5 12） 109/L； 6個(gè)月 2歲：（ 11 12） 109/L； 新生兒：（ 15 20） 109/L 一、白細(xì)胞計(jì)數(shù) 二、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)

24、 對(duì)各種白細(xì)胞分別計(jì)數(shù)， 即白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) （ differential count， DC）。 白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的方法有 顯微鏡分類計(jì)數(shù)法 血細(xì)胞分析儀分類計(jì)數(shù)法 （一）方法 顯微鏡分類計(jì)數(shù)主要是將染色好的 血涂片在油鏡下根據(jù)白細(xì)胞形態(tài)學(xué) 特征逐個(gè)分別計(jì)數(shù)（一般計(jì)數(shù) 100 200個(gè)白細(xì)胞），得出各種 白細(xì)胞的相對(duì)比值或百分率， 并注意觀察其形態(tài)的變化。 1簡要操作 血涂片制備 染色 低倍鏡下檢查 油鏡下分類計(jì)數(shù) 采血 高倍鏡下檢查 二、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) 最佳觀察部位： 體

25、 尾 交 界 處 頭 體 尾 體尾交界 2報(bào)告方式 （ 1）白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)結(jié)果：以各種白細(xì)胞所占的比值或百分率表示， 或者根據(jù)白細(xì)胞總數(shù)計(jì)算出各種白細(xì)胞的絕對(duì)值報(bào)告。 （ 2）幼稚或異常白細(xì)胞：發(fā)現(xiàn)幼稚或異常白細(xì)胞，應(yīng)計(jì)算在白細(xì)胞 分類比值或百分率中。 （ 3）有核紅細(xì)胞：血涂片中如見到有核紅細(xì)胞，應(yīng)逐個(gè)計(jì)數(shù)，但 不列入白細(xì)胞總數(shù)之內(nèi)，而是報(bào)告分類計(jì)數(shù) 100個(gè)白細(xì)胞的同時(shí) 見到的有核紅細(xì)胞個(gè)數(shù)。 （ 4）寄生蟲：如發(fā)現(xiàn)瘧原蟲等應(yīng)報(bào)告。 （ 5）紅細(xì)胞、血小板的形態(tài)：如有異常改變應(yīng)報(bào)告。 二、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) （二）方法學(xué)評(píng)價(jià)

26、 白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)方法學(xué)評(píng)價(jià) 方法 評(píng)價(jià) 顯微鏡分類法 白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的參考方法，分類結(jié)果較準(zhǔn)確； 設(shè)備簡單、費(fèi)用低廉； 費(fèi)時(shí)，結(jié)果的準(zhǔn)確性取決于操作者個(gè)人的技術(shù)水平 血細(xì)胞分析儀 分類法 快速、重復(fù)性好，但對(duì)于某些細(xì)胞不能識(shí)別，特別是 白血病細(xì)胞、異型淋巴細(xì)胞和正常單核細(xì)胞； 只能用于篩查，異常標(biāo)本必須采用顯微鏡分類法進(jìn)行 復(fù)檢 二、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) （三）參考區(qū)間 白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)參考區(qū)間（成人） 白細(xì)胞 百分率（ %） 絕對(duì)值（ 109/L） 中性分葉核粒細(xì)胞 40 75 1.8 6.3 嗜酸性粒細(xì)胞 0.4 8.0 0.02 0

27、.52 嗜堿性粒細(xì)胞 0 1 0 0.06 淋巴細(xì)胞 20 50 1.1 3.2 單核細(xì)胞 3 10 0.1 0.6 注：本參考區(qū)間適用于靜脈血的儀器檢測(cè)方法。 此參考區(qū)間來源于中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) WS/T 405-2012。 二、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) （四）臨床意義 二者的臨床意義基本一致。 （ 1）中性粒細(xì)胞生理性增多： 一天之內(nèi)一般下午較上午高。 劇烈運(yùn)動(dòng)、情緒激動(dòng)、嚴(yán)寒、暴熱。 新生兒。 妊娠 5個(gè)月以上及分娩時(shí)。 以上常為一過性增多 吸煙者平均白細(xì)胞總數(shù)比不吸煙者高。 1. 白細(xì)胞總數(shù)與中性粒細(xì)胞 二、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) 中性粒細(xì)胞 病理性增高 嚴(yán)

28、重的組織損傷 大量血細(xì)胞破壞 急性感染 急性大出血 惡性腫瘤 急性中毒 白血病 （ 2）中性粒細(xì)胞病理性增高 二、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) 中性粒細(xì)胞 病理性減少 某些血液?。? 如再生障礙性貧血 某些感染： 傷寒、副傷寒沙門菌 慢性理化損傷 自身免疫性疾病： 如系統(tǒng)性紅斑狼瘡 脾功能亢進(jìn) （ 3）中性粒細(xì)胞病理性減少 二、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) 1生理變化 白天較低，夜間較高，上午波動(dòng)大，下午較恒定。 2病理變化 （ 1）嗜酸性粒細(xì)胞增多： 超敏反應(yīng)性疾病：如支氣管哮喘、蕁麻疹、過敏等。 寄生蟲?。喝缁紫x、鉤蟲等。 某些皮膚?。喝玢y屑病、濕疹等。 某些血

29、液?。喝缏粤＜?xì)胞白血病。 某些惡性腫瘤，如霍奇金病。 某些傳染?。喝缧杉t熱。 某些內(nèi)分泌疾病，如腦垂體功能低下。 2. 嗜酸性粒細(xì)胞 二、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) 2.病理變化 （ 2）嗜酸性粒細(xì)胞減少： 傷寒、副傷寒、大手術(shù)后。 長期使用腎上腺皮質(zhì)激素。 3嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)的其它應(yīng)用 （ 1）觀察急性傳染病的預(yù)后。 （ 2）觀察大手術(shù)和燒傷病人的預(yù)后。 （ 3）腎上腺皮質(zhì)功能測(cè)定。 2. 嗜酸性粒細(xì)胞 二、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) （ 1）嗜堿性粒細(xì)胞增多 慢性粒細(xì)胞性白血病： 常伴嗜堿性粒細(xì)胞增多，可達(dá) 10%或更多。 嗜堿性粒細(xì)胞性白血病： 嗜堿性粒細(xì)胞異常增多，可

30、達(dá) 20%以上， 多為幼稚型。 過敏性疾?。簼冃越Y(jié)腸炎、超敏反應(yīng)等。 骨髓纖維化和某些轉(zhuǎn)移癌。 （ 2）嗜堿性粒細(xì)胞減少 多無臨床意義。 3. 嗜堿性粒細(xì)胞 二、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) （ 1）淋巴細(xì)胞病理性增多 絕對(duì)增多：某些病毒或細(xì)菌所致的傳染病，如風(fēng)疹、流行性腮腺炎、傳單等； 某些慢性感染，如結(jié)核病恢復(fù)期也可見淋巴細(xì)胞增多，但白細(xì)胞總數(shù)多正常； 急、慢性淋巴細(xì)胞性白血病淋巴細(xì)胞增多明顯，且可導(dǎo)致白細(xì)胞總數(shù)增高。 相對(duì)增多：再生障礙性貧血、粒細(xì)胞缺乏癥等淋巴細(xì)胞百分率相對(duì)增高。 （ 2）淋巴細(xì)胞減少 主要見于長期接觸放射線或應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素之后， 在急性化膿性感染

31、時(shí)由于中性粒細(xì)胞明顯增高可導(dǎo)致淋巴細(xì)胞相對(duì)減少。 4淋巴細(xì)胞 二、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) （ 1）單核細(xì)胞增多 正常兒童單核細(xì)胞較成人稍高 病理性增多見于： 某些感染：如亞急性感染性心內(nèi)膜炎、瘧疾、黑熱病、急性感染的恢復(fù)期、 活動(dòng)性肺結(jié)核等。 某些血液病：單核細(xì)胞性白血病、粒缺恢復(fù)期、惡性組織細(xì)胞病、淋巴瘤 及骨髓增生異常綜合征（ MDS）等。 （ 2）單核細(xì)胞減少 意義不大。 5單核細(xì)胞 二、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) 胞體： 10 15 m，圓形。 胞核： 分 2 5葉，以 3葉核為主。 核染色質(zhì)： 粗糙，深紫紅色。 胞漿： 粉紅色，顆粒量多、細(xì)小

32、、 均勻、紫紅色 。 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 （一）外周血正常白細(xì)胞形態(tài) 1.中性分葉核粒細(xì)胞 胞體： 10 15 m，圓形。 胞核：彎曲呈桿狀、帶狀、臘腸樣。 核染色質(zhì)： 粗糙，深紫紅色。 胞漿： 粉紅色，顆粒量多、細(xì)小、 均勻、紫紅色 。 2.中性桿狀核粒細(xì)胞 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 （一）外周血正常白細(xì)胞形態(tài) 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 （一）外周血正常白細(xì)胞形態(tài) 中性粒細(xì)胞 (1)胞體： 13 15 m， 圓形。 (2)胞核： 多分為兩葉。 (3)核染色質(zhì)： 粗糙，深紫紅色。 (4)胞漿： 著色不清，橘黃色顆粒、粗大、 整齊排

33、列、均勻充滿胞質(zhì)。 3. 嗜酸性粒細(xì)胞 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 中性粒細(xì)胞 嗜酸性粒細(xì)胞 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 (1)胞體： 10 12 m， 圓形。 (2)胞核： 因顆粒遮蓋而胞核不清晰。 (3)核染色質(zhì)： 粗糙，深紫紅色。 (4)胞漿： 著色不清，紫黑色顆粒、量少、 大小不均、排列雜亂、可蓋于核上 。 4. 嗜堿性粒細(xì)胞 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 胞體： 6 15 m，圓形或橢圓形 。 胞核：圓形、橢圓形、腎形 。 核染色質(zhì)：深紫紅色，粗糙成塊，核外緣光滑。 胞漿：透明、淡藍(lán)色、多無顆粒，大淋巴細(xì)胞可有少量粗大、不均勻紫紅色顆粒。 5. 淋巴細(xì)胞 大淋巴細(xì)胞 小淋

34、巴細(xì)胞 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 都是什么細(xì)胞？ 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 6. 單核細(xì)胞 胞體： 12 20 m，圓形、橢圓形或不規(guī)則形。 胞核：腎形、山字形、馬蹄形、扭曲折疊不規(guī)則形 。 核染色質(zhì)：疏松網(wǎng)狀，淡紫紅色，有膨脹和立體起伏感 。 胞漿：半透明、灰藍(lán)色或灰紅色。顆粒細(xì)小、塵土樣紫紅色。 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 （二）外周血異常白細(xì)胞形態(tài) 1. 中性粒細(xì)胞的毒性變化 在嚴(yán)重傳染病、各種化膿性感染、敗血癥、惡性腫瘤、中毒、 大面積燒傷等病理情況下，中性粒細(xì)胞可發(fā)生下列形態(tài)改變 大小不均 中毒顆粒 空泡 杜勒體 核變性 即中性粒細(xì)胞體積大小懸殊。

35、 可能是在內(nèi)毒素等因素作用下 骨髓內(nèi)幼稚中性粒細(xì)胞發(fā)生 不規(guī)則分裂的結(jié)果。 常見于一些病程較長的化膿性感染。 （ 1）大小不均 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 中性粒細(xì)胞胞質(zhì)中出現(xiàn)的粗大、大小不等、分布 不均勻的紫黑色或深紫褐色顆粒，稱中毒顆粒。 可能因特殊顆粒生成受阻或發(fā)生顆粒變性所致。 常見于嚴(yán)重化膿性感染及大面積燒傷等。 （ 2）中毒顆粒 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 中性粒細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)一個(gè)或數(shù)個(gè)空泡。 一般認(rèn)為空泡是細(xì)胞受損后胞質(zhì)發(fā)生脂 肪變性或顆粒缺失的結(jié)果。 最常見于嚴(yán)重感染，特別是敗血癥時(shí)。 （ 3）空泡變性 空泡 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 是中性粒細(xì)胞

36、胞質(zhì)毒性變化而保留的局部嗜堿性區(qū)域。 呈圓形、梨形或云霧狀，天藍(lán)色或灰藍(lán)色，直徑 1 2m， 是胞質(zhì)局部不成熟的表現(xiàn)。 （ 4）杜勒體 杜勒體 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 （ 5）核變性 核腫脹 核變性 核碎裂 常見于細(xì)胞衰老后，嚴(yán)重感染時(shí)該類細(xì)胞增多。 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 2. 中性粒細(xì)胞的核象變化 中性粒細(xì)胞的核形標(biāo)志著它的發(fā)育階段。正常以 2 3葉為主。 病理情況下，中性粒細(xì)胞的核象可發(fā)生變化，即出現(xiàn)核左移或核右移。 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 外周血中桿狀核粒細(xì)胞增多并出現(xiàn)晚幼粒、 中幼粒甚至早幼粒細(xì)胞時(shí)稱為核左移 . 核左移常伴中毒顆粒、空泡、核變性等毒性變化。

37、 最常見于急性化膿性感染，急性中毒、急性溶血。 再生性核左移 伴白細(xì)胞增高 退行性核左移 白細(xì)胞總數(shù)不增高或減低 輕度核左移：僅見桿狀核粒細(xì)胞 6%。 中度核左移：桿狀核粒細(xì)胞 10%并有少數(shù)晚幼粒、中幼粒細(xì)胞。 重度核左移（類白血病反應(yīng)）：桿狀核粒細(xì)胞 25%， 出現(xiàn)更幼稚的粒細(xì)胞 （ 1）核左移 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 （ 2）核右移 外周血中 5葉核及 5葉核以上的中性粒細(xì)胞 3%時(shí)稱為核右移。 核右移常伴有白細(xì)胞總數(shù)的

38、減少，屬造血功能衰退的表現(xiàn)。 主要見于營養(yǎng)性巨幼細(xì)胞性貧血及惡性貧血、炎癥的恢復(fù)期。 如疾病進(jìn)展期突然出現(xiàn)核右移則是預(yù)后不良的表現(xiàn)。 巨多分葉核中性粒細(xì)胞 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 在病毒或過敏原等因素刺激下， 外周血淋巴細(xì)胞增生并發(fā)生形態(tài)上的改變，稱異型淋巴細(xì)胞。 3淋巴細(xì)胞的形態(tài)異常 型 （空泡型） 型 （不規(guī)則型） 型 （幼稚型） （ 1）異型淋巴細(xì)胞 異 淋 正常人血片中可偶見此種細(xì)胞。一般病毒感染異型淋巴細(xì)胞 5%， 而 傳染性單核細(xì)胞增多癥 時(shí)異型淋巴細(xì)胞常 10%。 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 即在淋巴細(xì)胞的主核旁邊另有一個(gè)游離的小核。 常見于

39、接受較大劑量的電離輻射之后或其他理化因子、抗癌藥物 等對(duì)細(xì)胞造成損傷時(shí)，常作為致畸、致突變的客觀指標(biāo)之一。 （ 2）衛(wèi)星核淋巴細(xì)胞 衛(wèi)星核 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 4其他異常白細(xì)胞 Pelger-Het畸形 棒狀小體 Chediak-Higashi畸形 三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 四、嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù) 顯微鏡計(jì)數(shù) 原理 用適當(dāng)?shù)南♂屢簩⒀合♂? 一定倍數(shù)，破壞大部分紅細(xì)胞和其它 白細(xì)胞，并使嗜酸性粒細(xì)胞染色， 混勻后充入計(jì)數(shù)池內(nèi)，計(jì)數(shù)一定體積內(nèi) 嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)，即可算出每升血液中 嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)量。 簡要操作 加稀釋液 0.38ml采血 取血 20l，混勻稀

40、釋 充上、下兩個(gè)計(jì)數(shù)池 靜置 低倍鏡下計(jì)數(shù) 四角和中央共 10個(gè)大方格 內(nèi)的嗜酸性粒細(xì)胞 計(jì)算。 五、紅斑狼瘡細(xì)胞檢查 （一）方法 系統(tǒng)性紅斑狼瘡（ SLE） 是一種原因不明，累及多個(gè)系統(tǒng)和器官的自身免疫性疾病。 90的病例為女性，尤其是育齡期婦女。 1原理 系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的血清中，存在一種紅斑狼瘡因子（ LE因子）。 它屬于一種 IgG型自身抗體（抗核抗體），在體外可使白細(xì)胞退化，導(dǎo)致細(xì)胞 核染色質(zhì)失去正常結(jié)構(gòu)，變成游離腫脹的圓形或橢圓形煙霧狀的均勻性物質(zhì)， 稱為“游離均勻體”；均勻體可吸引吞噬細(xì)胞（常為中性粒細(xì)胞）在其周圍形成 “花形細(xì)胞簇”；最

41、后被其中一個(gè)吞噬細(xì)胞吞噬形成 LE細(xì)胞。 2簡要操作 采集靜脈血 3ml，待其凝固 攪碎血凝塊，去除殘余凝塊 離心，使白細(xì)胞聚集在同一層面 孵育，去除白細(xì)胞層，離心 涂片、瑞 -吉染色 油鏡下找 LE細(xì)胞 LE細(xì)胞 五、紅斑狼瘡細(xì)胞檢查 （二）參考區(qū)間 陰性。 （三）臨床意義 系統(tǒng)性紅斑狼瘡病人，在疾病的活動(dòng)期， LE細(xì)胞陽性率一般為 70% 90%， 緩解期或激素治療后不易找到。 除系統(tǒng)性紅斑狼瘡?fù)猓渌淖陨砻庖咝约膊?，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、硬皮病、 活動(dòng)性肝炎等亦可呈陽性反應(yīng)。 發(fā)現(xiàn) LE細(xì)胞，必須結(jié)合臨床表現(xiàn)； 未找到 LE細(xì)胞，并

42、不能完全否定紅斑性狼瘡的診斷，應(yīng)進(jìn)一步作其它有關(guān) 的免疫學(xué)指標(biāo)檢查。 五、紅斑狼瘡細(xì)胞檢查 第四節(jié) 紅細(xì)胞檢查 一 紅細(xì)胞計(jì)數(shù) 二 血紅蛋白測(cè)定 三 紅細(xì)胞形態(tài)檢查 四 血細(xì)胞比容測(cè)定 五 紅細(xì)胞平均值 六 網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù) 七 嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞 計(jì)數(shù) 八 紅細(xì)胞沉降率測(cè)定 主要內(nèi)容 概述 紅細(xì) 胞的 發(fā) 育 過 程 網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟 48小時(shí)，紅 細(xì)胞存活月 120天 第四節(jié) 紅細(xì)胞檢查 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（ red blood cell count， RBC） 即測(cè)定單位體積外周血液中紅細(xì)胞的數(shù) 量，是診斷貧血等疾病最常用的檢查項(xiàng) 目之一。 臨床可通

43、過各項(xiàng)紅細(xì)胞參數(shù)檢驗(yàn)和紅細(xì) 胞的形態(tài)觀察對(duì)貧血和某些疾病進(jìn)行診 斷和鑒別診斷。 一、紅細(xì)胞計(jì)數(shù) （一）顯微鏡計(jì)數(shù)法 （ 1） Hayem稀釋液：由 NaCl、 Na2SO4、 HgCl2和蒸餾水組成。其中 NaCl 和 Na2SO4調(diào)節(jié)滲透壓，后者還可提高比重防止細(xì)胞粘連， HgCl2為防腐 劑。該稀釋液的主要缺點(diǎn)是遇高球蛋白血癥患者，由于蛋白質(zhì)沉淀而 使紅細(xì)胞易凝集。 （ 2）枸櫞酸鈉甲醛鹽水稀釋液：由 NaCl、枸櫞酸鈉、甲醛及蒸餾水組 成。其中 NaCl和枸櫞酸鈉調(diào)節(jié)滲透壓，后者還有抗凝作用，甲醛為防腐 劑。該稀釋液配制簡單，可使紅細(xì)胞在稀釋后較長時(shí)間形態(tài)不發(fā)生改 變并且不凝集，

44、故應(yīng)用較廣。 （ 3）生理鹽水或 1%甲醛生理鹽水：急診時(shí)如無紅細(xì)胞稀釋液可用此液 代替。 1、試劑 一、紅細(xì)胞計(jì)數(shù) 一、紅細(xì)胞計(jì)數(shù) 用紅細(xì)胞稀釋液 將血液稀釋一定倍 數(shù)后，充入改良牛 鮑計(jì)數(shù)板中，在顯 微鏡下計(jì)數(shù)一定容 積內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)， 經(jīng)換算求出每升血 液中的紅細(xì)胞數(shù)量 。 取稀釋液 2.0ml 加入全血 10l，混 勻 充池 靜置 高倍鏡計(jì)數(shù)中央大 方格內(nèi) 4角和正中 5 個(gè)中方格內(nèi)的紅細(xì) 胞數(shù) 計(jì)算。 2原理 3簡要操作 （二）質(zhì)量保證 一 、紅細(xì)胞 計(jì)數(shù) 1紅細(xì)胞在室溫和 4 8 可穩(wěn)定 3天， 37 可穩(wěn) 定 36小時(shí)，以后逐漸減少。

45、 2血液加入稀釋液后和充池前需充分混勻；計(jì) 數(shù)時(shí)光線不能太強(qiáng)。 3當(dāng)白細(xì)胞 100 109/L 時(shí)，可對(duì)紅細(xì)胞計(jì)數(shù) 結(jié)果產(chǎn)生影響。處理方法是將計(jì)數(shù)所得的紅細(xì) 胞數(shù)減去計(jì)數(shù)所得的白細(xì)胞數(shù)；或者在高倍鏡 下注意識(shí)別，計(jì)數(shù)時(shí)勿將白細(xì)胞計(jì)入。在高倍 鏡下，白細(xì)胞體積通常比紅細(xì)胞體積略大，中 央無凹陷，細(xì)胞核隱約可見，無黃綠色折光。 4.技術(shù)誤差和固有誤差見白細(xì)胞計(jì)數(shù)。 （三）方法學(xué)評(píng)價(jià) 方法 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn) 顯微鏡 計(jì)數(shù)法 傳統(tǒng)方法 ， 設(shè)備簡單 ， 成本 低；為參考方法 ， 用于血細(xì) 胞分析儀異常檢查結(jié)果的復(fù) 核 費(fèi)時(shí) 、 重復(fù)性較差 ， 結(jié)果的準(zhǔn)確性取決于 操作者的技術(shù)水平 血細(xì)胞

46、 分析儀 法 操作簡便 ， 效率高 ， 易于標(biāo) 準(zhǔn)化 ， 重復(fù)性好 ， 適合于大 批量標(biāo)本篩查 、 健康人群體 檢 成本高 ， 環(huán)境條件要 求較高 ， 準(zhǔn)確性取決 于儀器的性能及工作 狀態(tài) 一、紅細(xì)胞計(jì)數(shù) 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法學(xué)評(píng)價(jià) （四）參考區(qū)間 1成年：男性（ 4.3 5.8） 1012/L，女性 （ 3.8 5.1） 1012/L；新生兒：（ 6.0 7.0） 1012/L。 2紅細(xì)胞計(jì)數(shù)醫(yī)學(xué)決定水平 高于 6.8 1012/L， 應(yīng)采取相應(yīng)的治療措施；低于 3.5 1012/L，可 診斷為貧血；低于 1.5 1012/L，可考慮輸血。 （五）臨床

47、意義 見血紅蛋白測(cè)定。 一 、紅細(xì)胞計(jì)數(shù) 血紅蛋白的分子結(jié)構(gòu) 二、血紅蛋白測(cè)定 卟啉環(huán)包著一個(gè)亞鐵離子組成一個(gè)亞鐵血紅素，每條多肽鏈含一個(gè)亞鐵血紅素， 每個(gè)血紅蛋白分子有四個(gè)珠蛋白肽鏈 血紅蛋白（ hemoglobin， Hb 或 HGB）是紅細(xì)胞的主要成 分，由珠蛋白和亞鐵血紅素 組成，每個(gè) Hb分子有 4條珠 蛋白肽鏈，分子量為 64 458。 二、血紅蛋白測(cè)定 Hb有多種形式及衍生物 HbO2 Hbred Hb MHb（ Hi） HbCO SHb 二、血紅蛋白測(cè)定 正常人 Hb種類及

48、含量 種類 多肽鏈組成 比例 HbA 22 大于 90% HbA2 2 2 約 2-3% HbF 22 小于 1% 二、血紅蛋白測(cè)定 1.原理 （一） HiCN測(cè)定法 RBC Hb Hi HiCN OD值 Hb（ g/L） =KA =540nm 溶血 氧化 結(jié)合 計(jì)算 直接計(jì)算結(jié)果 此處 K值為理論值，在實(shí)際應(yīng)用中更多采用 標(biāo)準(zhǔn)品參照，測(cè)定未知樣品血紅蛋白濃度 （一） HiCN測(cè)定法 HiCN法測(cè)定血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線求得樣品 Hb濃度 ？ A

49、:0.332， Hb=？ （二）其他測(cè)定方法 十二烷基硫酸鈉 法 （ sodium dodecyl sulfate hemoglobin， SDS-Hb） 堿羥血紅蛋白法（ alkaline haematin detergent， AHD575） 疊氮高鐵血紅蛋白法（ HiN3） 溴代十六烷基三甲胺法（ cetyltrimethyl ammonynm bromide， CTAB） 目前，自動(dòng)血液分析儀已多使用不含氰化鉀的 血紅蛋白測(cè)定方法 （三）質(zhì)量保證 1 合格的 標(biāo)本 2 主要 器材 分光光度計(jì)的波長、 光 柵 、比色杯 3 HiCN轉(zhuǎn)化液 的質(zhì)量要求

50、 4 HiCN參考液 定標(biāo) 5 開展 室內(nèi)質(zhì)控 （四）方法學(xué)評(píng)價(jià) 測(cè)定方法 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn) HiCN測(cè)定法 參考方法 ， 操作簡單 ， 反應(yīng)速 度快 ， 可檢測(cè) SHb之外的所有 Hb， HiCN參考品可長期保存 ， 便于質(zhì)控 KCN試劑有劇毒 ， 高白細(xì)胞 、 高球 蛋白血癥標(biāo)本可致渾濁 ， 對(duì) HbCO的反應(yīng)慢 ， 不能測(cè)定 SHb SDS-Hb測(cè)定法 次選方法 ， 操作簡單 ， 呈色穩(wěn) 定 ， 試劑無毒 ， 結(jié)果準(zhǔn)確 ， 重 復(fù)性好 SDS質(zhì)量差異大 ， 消光系數(shù)未定 ， SDS易破壞白細(xì)胞 ， 不適于同時(shí) 進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)的血液分析儀 AHD575測(cè)定法 試劑簡易 ，

51、無毒 ， 呈色穩(wěn)定 ， 準(zhǔn)確性與精密度較高；可用氰 化血紅素作校準(zhǔn)品 575nm波長比色 ， 不便于自動(dòng)檢測(cè) ， HbF不能轉(zhuǎn)化 HiN3測(cè)定法 反應(yīng)迅速 ， 呈色穩(wěn)定 ， 準(zhǔn)確度 、 精密度較高 試劑有毒性 （ 為 HiCN的 1/7） ， HbCO轉(zhuǎn)化慢 （ 20分鐘 ） CTAB測(cè)定法 溶血性強(qiáng)且不破壞白細(xì)胞 ， 適 于血液分析儀檢測(cè) 精密度 、 準(zhǔn)確度略低 血紅蛋白測(cè)定方法學(xué)評(píng)價(jià) 成年男性 ： 130 175g/L 成年 女性 ： 115 150g/L 新 生 兒： 170 200g/L。 （ 五 ）參考區(qū)間 （六）臨床意義 極重度 重度 中

52、度 輕度 正常 120g/L 30 60 90 110 120 Hb（ g/L） 女性 男性 貧血的程度與臨床表 現(xiàn)并不一定一致 增 生理性增多 年齡性別及缺氧代償引起的增多 多 病理性增多 相對(duì)性增多 ； 絕對(duì)性增多 減 生理學(xué)減少 6個(gè)月 2歲的嬰幼兒 ； 中、晚期妊娠 的孕婦； 造血功能減退老年人 以上幾種情況所致的貧血統(tǒng)稱為 生理性貧血 少 病理性減少 骨髓造血功能低下：如再生障礙性貧血、白血病、惡性 腫瘤骨髓轉(zhuǎn)移等。 造血原料缺乏：如缺鐵引起的缺鐵性 貧血、缺乏維生素

53、 B12或葉酸所致的巨幼細(xì)胞性貧血。 紅 細(xì)胞破壞增加：各種溶血性貧血。 紅細(xì)胞丟失過多：急、 慢性失血 WHO定義 RBC、 Hb或 Hct低于同年齡同地區(qū)同性別參考值下 限，即為 貧血（ anemia） RBC+Hb的變化 （六）臨床意義 三、紅細(xì)胞形態(tài)檢查 - 大小異常 紅細(xì)胞 異常形態(tài) - 染色異常 - 結(jié)構(gòu)異常 - 形態(tài)異常 正常形態(tài) 紅細(xì)胞 三、紅細(xì)胞形態(tài)檢查 （一）正常紅細(xì)胞形態(tài) 正常的紅細(xì)胞呈雙凹圓盤 形，細(xì)胞大小均一，平均直 徑約 7.2 m，瑞氏染色后為 淡粉紅色，血紅蛋白充盈良 好，呈正常色素性、向心性 淺染，中央有生理性淡染區(qū) 胞質(zhì)內(nèi)無異常

54、結(jié)構(gòu)。除健康 人外，部分再生障礙性貧血、 急性失血性貧血和白血病等 患者的紅細(xì)胞亦呈正常形態(tài)。 1.大小異常 大紅細(xì)胞 大小不等 小紅細(xì)胞 巨紅細(xì)胞 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 直徑小于 6m 直徑大于 10m 直徑大于 15m 指同一血涂片中 紅細(xì)胞大小懸殊， 直徑相差 在 1倍 以上 小紅細(xì)胞 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 大紅細(xì)胞和巨紅細(xì)胞 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 紅細(xì)胞大小不等 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 2.形態(tài)異常 橢圓形紅細(xì)胞 靶形紅細(xì)胞 球形紅細(xì)胞 口形紅細(xì)胞 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 棘形紅細(xì)胞 緡錢狀排列 裂片紅細(xì)胞 紅細(xì)胞形態(tài)不整 鐮刀形 紅

55、細(xì)胞 淚滴形紅細(xì)胞 球形紅細(xì)胞 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 口形紅細(xì)胞 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 橢圓形紅細(xì)胞 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 靶形紅細(xì)胞 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 鐮刀形紅細(xì)胞 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 裂片紅細(xì)胞 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 棘形紅細(xì)胞 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 紅細(xì)胞形態(tài)不整 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 淚滴形紅細(xì)胞 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 緡錢狀紅細(xì)胞 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 3. 染 色 異 常 高色素性紅細(xì)胞 低色素性紅細(xì)胞 嗜多色性紅細(xì)胞 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 高色素性紅細(xì)胞 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 低色素性紅細(xì)胞 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài)

56、嗜多色性紅細(xì)胞 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 4結(jié)構(gòu)異常 染色質(zhì) 小體 嗜堿性點(diǎn)彩 紅細(xì)胞 卡波氏環(huán) 有核紅細(xì)胞 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 染色質(zhì)小體 染色質(zhì)小體（ Howell-Jolly body） ： 又稱豪 -焦小體， 位于成熟或幼稚紅細(xì)胞胞 質(zhì)內(nèi)的紫紅色小體，直徑 1 2m， 1至數(shù)個(gè)不等，為 核碎裂或溶解后的殘余物。 最常見于巨幼細(xì)胞性貧血， 也見于溶血性貧血及脾切 除術(shù)后。 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 卡波氏環(huán) 卡 -波環(huán)（ Cabot ring）： 存在于成熟或幼稚紅細(xì)胞 胞質(zhì)內(nèi)，呈紫紅色線圈狀 或 “ 8”字形結(jié)構(gòu)，可能是 紡錘體的殘余物或脂蛋白 變性所致 。

57、 常與染色質(zhì)小體并存，見 于溶貧、巨幼貧、白血病 及鉛中毒等。 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞 嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞 （ basophilic stippling cell）： 指在瑞氏染色涂片中，紅細(xì) 胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)形態(tài)大小不一、 數(shù)量不等的灰藍(lán)色點(diǎn)狀物 。 在鉛、鉍、鋅、汞等重金屬 中毒時(shí)增多，為鉛中毒診斷 的篩查指標(biāo)。重癥巨幼細(xì)胞 性貧血和骨髓纖維化等亦可 見增多。 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 有核紅細(xì)胞 有核紅細(xì)胞（ nucleated erythrocyte， NRBC）： 即幼稚紅細(xì)胞。存在于 骨髓中， 1周內(nèi)新生兒 外周血涂片可見少量， 成人外周血中出現(xiàn)有核

58、紅細(xì)胞屬病理現(xiàn)象，常 見于各種溶血性貧血、 白血病、紅白血病等。 （二）異常紅細(xì)胞形態(tài) 都來認(rèn)一認(rèn)，分別屬于哪一種？ 血細(xì)胞比容的概述（概念） 血細(xì)胞比容測(cè)定方法 血細(xì)胞比容質(zhì)量控制 血細(xì)胞比容方法學(xué)評(píng)價(jià) 血細(xì)胞比容參考區(qū)間 血細(xì)胞比容臨床意義 四、血細(xì)胞比容測(cè)定 內(nèi)容 血細(xì)胞比容概念 血細(xì)胞比容（ hemotocrit， HCT； packed cell volume， PCV），是指一定體積（ 1L）的全血中 （抗凝血）紅細(xì)胞所占容積的相對(duì)比例（小數(shù)或 百分?jǐn)?shù)） HCT的高低主要與紅細(xì)胞數(shù)量、大小有關(guān)，主要用 于貧血和紅細(xì)胞增多的診斷，反應(yīng)血液稀

59、釋和血 液濃縮變化 還可根據(jù) RBC、 Hb、 Hct計(jì)算紅細(xì)胞平均值 HCT測(cè)定可采用直接離心法（包括溫氏法和微量 法），或間接血液分析儀法 四、血細(xì)胞比容測(cè)定 溫氏法 微量法 折射儀法 黏度法 比重測(cè)定法 放射性核素法等 四、血細(xì)胞比容測(cè)定 血細(xì)胞比容測(cè)定方法 其中微量法為推薦方法，放射性 核素法為參考方法 （一）溫氏法 1原理 溫氏（ Wintrobe） 法是利用血液中不同的有 形成分比重的差異，將定 量的抗凝血以一定的速度 和時(shí)間離心后，血液中有 形成分沉淀，讀取壓實(shí)紅 細(xì)胞層在全血中所占體積 的百分比 四、血細(xì)胞比容測(cè)定 1.Wintrobe管

60、 2.paustrue管 （一）溫氏法 2簡要操作 抗凝血注入 Wintrobe管 以 2264g離心力離心 30分鐘 讀數(shù) 再離心 10 分鐘 判讀結(jié)果 四、血細(xì)胞比容測(cè)定 （二）微量法 微量法是采用一次性使用的毛細(xì)玻璃管將 抗凝靜脈血注入其中，或先將毛細(xì)玻璃管 肝素化并干燥后直接采集毛細(xì)血管血，然 后以相對(duì)離心力 12500g離心 5分鐘，取出毛 細(xì)玻璃管，測(cè)量其中紅細(xì)胞柱、全細(xì)胞柱 和血漿柱的長度，判讀結(jié)果 四、血細(xì)胞比容測(cè)定 （三）質(zhì)量保證 1抗凝劑 目前多選用肝素或 EDTA-K2用于 HCT測(cè) 定，對(duì)紅細(xì)胞影響小 2選用合格的器材 溫氏管、微量

61、管、高速離心 機(jī)等 3離心 RCF直接影響到 HCT， ICSH建議溫氏法 RCF 2264g。 RCF與 RPM可相互轉(zhuǎn)換 4規(guī)范化操作，避免操作誤差 5結(jié)果判讀與分析 離心后血漿與血細(xì)胞的分界 面應(yīng)為平面，目光平視，讀數(shù)時(shí)讀取自還原紅細(xì) 胞層以下的紅細(xì)胞的高度 四、血細(xì)胞比容測(cè)定 （四）方法學(xué)評(píng)價(jià) 方法 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn) 溫氏法 應(yīng)用廣泛，無需特殊儀器 難以完全排除殘留血漿（可達(dá) 2% 3%），測(cè)定值比真實(shí)值略高，標(biāo)本用 量多，耗時(shí)長。 微量法 WHO推薦的常規(guī)方法， CLSI推薦的參 考標(biāo)準(zhǔn)。標(biāo)本用量少，相對(duì)離心力 高，結(jié)果準(zhǔn)確、快速、重復(fù)性好 仍有殘留血漿

62、，但較溫氏法少。需微 量高速離心機(jī) 微量離 心計(jì)算法 可常規(guī)用于 HCT測(cè)定的校準(zhǔn)。 HCT=（離心 HCT值 0.0119） /0.9736 需用參考方法測(cè)定全血 Hb和壓積紅細(xì) 胞 Hb， HCT=全血 Hb/壓積紅細(xì)胞 Hb 血液分 析儀法 無需單獨(dú)采血，檢查快速，精密 度高，無血漿殘留引起的誤差 準(zhǔn)確性不及微量離心法，需定期校正 儀器 放射性 核素法 ICSH曾推薦為參考方法，準(zhǔn)確性 最高 方法繁瑣、特殊，不適用于臨床常規(guī) 檢查 四、血細(xì)胞比容測(cè)定 HCT測(cè)定的方法學(xué)評(píng)價(jià) （五）參考區(qū)間 成年人 男性 0.40 0.5

63、0 女性 0.35 0.45 兒童 0.33 0.42 新生兒 0.47 0.67 四、血細(xì)胞比容測(cè)定 （六）臨床意義 1增高 ：各種原因引起的血液濃縮；原發(fā)性或繼發(fā) 性紅細(xì)胞增多癥；新生兒。 2降低 ：各種原因引起的血液稀釋；各種原因引起 的貧血 3臨床補(bǔ)液量的參考 各種原因?qū)е旅撍畷r(shí)， HCT都會(huì)增 高 4真性紅細(xì)胞增多癥診斷指標(biāo) 當(dāng) HCT大于 0.7， RBC為 （ 7 10） 109/L， Hb大于 180g/L，即可診斷 5計(jì)算紅細(xì)胞平均指數(shù) ，對(duì)貧血的形態(tài)學(xué)分類有幫助。 6血液流變學(xué)指標(biāo) 自發(fā)性凝血時(shí)， HCT可 0.6 四、血細(xì)胞比容測(cè)定

64、概述 計(jì)算方法 參考區(qū)間 臨床意義 五、紅細(xì)胞平均指數(shù) 內(nèi)容 （一）概述 紅細(xì)胞平均指數(shù)包括： 紅細(xì)胞平均體積 （ MCV） 紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量 （ MCH） 紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度 （ MCHC） 為貧血的形態(tài)學(xué)分類和鑒別診斷提供 重要線索 五、紅細(xì)胞平均指數(shù) （二）計(jì)算方法 儀器法與手工法基本相似，但不完全相同 手工法費(fèi)時(shí)費(fèi)力 儀器法自動(dòng)計(jì)算，報(bào)告準(zhǔn)確 而且儀器法還有其他多種參數(shù)可以參考， 如紅細(xì)胞直方圖 五、紅細(xì)胞平均指數(shù) 手工法：紅細(xì)胞平均指數(shù)的計(jì)算 如果 RBC=4.01012/L,Hb=124g/L,Hct=0,4

65、2， 那么 MCV=? MCH=? MCHC=? （二）計(jì)算方法 MCV由血液分析儀直接測(cè)定細(xì)胞信號(hào)獲得 MCH=Hb/RBC MCHC=Hb/（ RBC MCV） HCT= RBC MCV 儀器法：紅細(xì)胞平均指數(shù)的計(jì)算 如果 MCH=30pg,MCV=120fl， 那么 MCHC=? （二）計(jì)算方法 （三）參考區(qū)間 人群 MCV（ fl） MCH（ pg） MCHC（ g/L） 成人 80 100 27 34 314 354 1 3歲 79 104 25 32 280 350 新生兒 86 120 27 36 250 370 五、紅細(xì)胞平均指數(shù) MC

66、V、 MCH、 MCHC參考區(qū)間 （四）臨床意義 貧血形態(tài)學(xué)分類 MCV MCH MCHC 臨床意義 正常細(xì)胞性貧血 正常 正常 正常 急性失血、急性溶血、再生 障礙性貧血、白血病等 大細(xì)胞性貧血 增高 增高 正常 巨幼細(xì)胞性貧血 單純小細(xì)胞性貧血 降低 降低 正常 慢性炎癥、尿毒癥等 小細(xì)胞低色素性貧血 降低 降低 降低 缺鐵性貧血、珠蛋白生成障 礙性貧血、慢性失血等 五、紅細(xì)胞平均指數(shù) 貧血形態(tài)學(xué)分類及臨床意義 網(wǎng)織紅細(xì)胞定義 網(wǎng)織紅細(xì)胞形態(tài) 網(wǎng)織紅細(xì)胞染色方法 網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)方法 網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)參考區(qū)間 網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的臨床意義 網(wǎng)織紅細(xì)胞生成指數(shù) 六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù) 六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù) 網(wǎng)織紅細(xì)胞（ reticulocyte， Ret）是介于晚幼紅細(xì)胞 和成熟紅細(xì)胞之間的過渡階段細(xì)胞，其胞質(zhì)中尚殘 留部分嗜堿性物質(zhì)（核糖體和核糖核酸），可被某 些染料活體染色后呈藍(lán)色或紫色的網(wǎng)狀或顆粒狀結(jié) 構(gòu)，故名為網(wǎng)織紅細(xì)胞。 Ret體積略大于成熟紅細(xì)胞（直徑 8.0 9.5m），仍 具有合成血紅蛋白的能力，約 1 2天后，過渡為成 熟紅細(xì)胞。 IC