《藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則課件》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則課件（60頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級(jí),第三級(jí),第四級(jí),第五級(jí),*,第十四章,生物藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證,1,第十四章,生物藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證,一、概述,二、生物學(xué)測(cè)定常用方法,三、方法的來(lái)源,四、分析方法,五、分析方法的驗(yàn)證,六、綜合分析,2,中國(guó),美國(guó),英國(guó),鑒別方法,化學(xué)反應(yīng)顯色法，紅外吸收?qǐng)D譜比對(duì)法，硫酸鹽的鑒別反應(yīng),化學(xué)反應(yīng)顯色法,硫酸鹽的鑒別反應(yīng),薄層色譜法,化學(xué)反應(yīng)顯色法,硫酸鹽特征反應(yīng),檢測(cè)項(xiàng)目,酸度，,溶液澄清度與顏色,，硫酸鹽，有關(guān)物質(zhì)，,干燥失重,，可見(jiàn)異物，不溶性微粒，異常毒性，細(xì)菌內(nèi)毒素，無(wú)菌。,PH,值（,4,5-7.0,）,干燥失重,

2、溶液檢查：溶液,S,、,溶液外觀,pH,溶液,S,的,pH,（,4.5-7.0,）,甲醇（氣相色譜）,含量測(cè)定,照抗生素微生物檢定法（通則,1201),測(cè)定。,色譜,法,色譜,法,鏈霉素,3,一、概述,保證藥品,安全、有效、質(zhì)量可控,是藥品研發(fā)和評(píng)價(jià)應(yīng)遵循的基本原則，其中，對(duì)藥品進(jìn)行,質(zhì)量控制,是保證藥品安全有效的基礎(chǔ)和前提。,方法驗(yàn)證的目的,是判斷采用的,分析方法,是否,科學(xué)、合理，,是否能有效控制,產(chǎn)品,的內(nèi)在質(zhì)量。,4,生物藥品質(zhì)控,生物藥品質(zhì)控中采用的方法包括,理化分析方法和生物學(xué)測(cè)定方法,。,一般要使用,動(dòng)物、細(xì)胞或生物分子,，因此對(duì)于,生物學(xué)測(cè)定,的判斷標(biāo)準(zhǔn)可適當(dāng)靈活掌握,對(duì)于,定

3、量測(cè)定方法,應(yīng)盡可能減少方法的變異，驗(yàn)證的結(jié)果仍應(yīng)能證明該方法具有相當(dāng)?shù)?準(zhǔn)確性和可靠性,，并應(yīng)以能夠有效控制產(chǎn)品質(zhì)量為基本標(biāo)準(zhǔn)。,5,二、,生物學(xué)測(cè)定常用方法,生物學(xué)測(cè)定系指,采用生物學(xué)方法，以反映被測(cè)物的生物學(xué)特性為目的的測(cè)定方法。,6,（一）、酶反應(yīng)試驗(yàn),是指在體外能促進(jìn)酶分子的活化或本身具備酶的活性，通過(guò)底物的變化檢測(cè)酶活性。主要用于酶、輔酶、激酶、激活劑、抑制劑等的活性測(cè)定。這類(lèi)方法的變異相對(duì)較小，結(jié)果比較準(zhǔn)確。,7,（二）、結(jié)合試驗(yàn),是基于產(chǎn)品與某種物質(zhì)的結(jié)合特性而設(shè)計(jì)的試驗(yàn)，如,免疫結(jié)合試驗(yàn),。目前主要用于生物制品的鑒別。由于在結(jié)合試驗(yàn)中測(cè)定的分子不一定都具有生物活性，所以一般不

4、用作制品的活性（或效力）測(cè)定。這類(lèi)方法的變異也相對(duì)較小。,8,（三）、細(xì)胞測(cè)定試驗(yàn),是指產(chǎn)品可以,誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生可測(cè)定的應(yīng)答,，如細(xì)胞增殖、聚集、分化、死亡、遷移或產(chǎn)生特定的化學(xué)物質(zhì)等。細(xì)胞測(cè)定試驗(yàn)一般能較好地反映制品的生物學(xué)活性，常用于各種,生物制品的活性（效力）測(cè)定,。與上述兩類(lèi)方法相比，這類(lèi)方法的變異較大。與使用傳代細(xì)胞相比，使用原代細(xì)胞的方法變異更大。,9,（四）、動(dòng)物試驗(yàn),是指以整體動(dòng)物為試驗(yàn)材料檢測(cè)制品生物學(xué)活性（或效力）的試驗(yàn)方法，如動(dòng)物保護(hù)力試驗(yàn)，一般用于,疫苗的效力,測(cè)定。由于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的成本高、周期長(zhǎng)和變異大，所以一般僅用于成品檢定。對(duì)于某些治療用的制品，由于其作用機(jī)理或本身化

5、學(xué)性質(zhì)的原因，難以建立體外測(cè)活的方法，也可以采用動(dòng)物試驗(yàn)方法測(cè)定，但由于這類(lèi)方法的,變異一般相對(duì)較大,，在進(jìn)一步的研究中應(yīng)盡可能以體外法代替。,10,鑒于一種測(cè)定方法僅能反映制品某一方面的特性，且方法的變異一般較大，為更好控制產(chǎn)品質(zhì)量，必要時(shí)需,同時(shí)采用多種方法,進(jìn)行測(cè)定。,11,三、方法的來(lái)源（種類(lèi)）,根據(jù)質(zhì)控分析方法的來(lái)源，可將方法分為兩大類(lèi)，即,標(biāo)準(zhǔn)方法和非標(biāo)準(zhǔn)方法,。原則上，對(duì)于各類(lèi)方法均需進(jìn)行驗(yàn)證，但依方法來(lái)源的不同對(duì)于驗(yàn)證的要求有所不同。,12,（一）、標(biāo)準(zhǔn)方法（或正式方法、法定方法）,一般是指,已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)控方法,，,WHO,推薦的質(zhì)控方法也可作為重要參考。此類(lèi)方法在被確定為

6、標(biāo)準(zhǔn)方法前已經(jīng)過(guò)了適當(dāng)?shù)尿?yàn)證。,采用此類(lèi)方法前，也應(yīng)對(duì)該方法進(jìn)行適當(dāng)?shù)尿?yàn)證,如進(jìn)行專(zhuān)屬性和精密度的驗(yàn)證，以便證明在實(shí)際的使用條件下該方法也是適用的。,13,（二）、非標(biāo)準(zhǔn)方法,1,、標(biāo)準(zhǔn)方法的替代方法,此類(lèi)方法系指由申報(bào)者提出的可取代標(biāo)準(zhǔn)方法的替代方法。申報(bào)者在決定采用此類(lèi)方法時(shí)應(yīng)持慎重的態(tài)度，并需提供,表明新方法等同于或優(yōu)于原方法的依據(jù)以及全面的驗(yàn)證資料,，包括兩種方法的比較性資料。,14,2,、來(lái)自參考文獻(xiàn)的方法,是指在專(zhuān)業(yè)雜志或著作上發(fā)表并介紹的方法，一般要認(rèn)真對(duì)待此類(lèi)方法，并需進(jìn)行全面的驗(yàn)證。應(yīng)說(shuō)明參考文獻(xiàn)的出處，附原文及譯文。,15,3,、自己建立的方法,對(duì)于某些產(chǎn)品，尤其是創(chuàng)新性產(chǎn)

7、品來(lái)講，由于缺少可參考的方法，通常需要自己建立一種新的分析方法，對(duì)于這類(lèi)方法需進(jìn)行全面而嚴(yán)格的驗(yàn)證。,16,四、分析方法,生物藥品質(zhì)控分析方法的準(zhǔn)確性和可靠性與技術(shù)方法本身（包括方法的原理和方法的技術(shù)特點(diǎn)等）密切相關(guān)，一種系統(tǒng)的完整的分析方法應(yīng)包括：,17,（一）、分析方法的原理,（二）、供試品,應(yīng)說(shuō)明如何取樣，包括每次測(cè)定時(shí)取樣的數(shù)量、如何取用（單支或多支混合）等。,（三）、測(cè)試用儀器及參數(shù),（四）、測(cè)試用試劑,列出所有測(cè)試用的試劑和規(guī)格，并說(shuō)明其來(lái)源。如果某些試劑為自制或?qū)Σ少?gòu)的試劑進(jìn)行了加工處理，則應(yīng)詳述制備或處理過(guò)程。,18,（五）、標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的配備,（六）、供試品的配備：,（七）

8、、測(cè)試過(guò)程,按實(shí)驗(yàn)步驟詳述整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程，說(shuō)明關(guān)鍵步驟的實(shí)驗(yàn)條件。,（八）、計(jì)算,盡可能以表格的形式顯示所獲取的數(shù)據(jù)，說(shuō)明數(shù)據(jù)的處理方法，提供計(jì)算公式，并說(shuō)明計(jì)算方法的出處及采用依據(jù)。,（九）、結(jié)果報(bào)告：說(shuō)明結(jié)果報(bào)告的形式,（十）、判定標(biāo)準(zhǔn)：提供判定標(biāo)準(zhǔn)，說(shuō)明判定標(biāo)準(zhǔn)的制定依據(jù)。,19,五、分析方法的驗(yàn)證,質(zhì)控分析方法的驗(yàn)證就是根據(jù)方法的需要測(cè)定該方法的,專(zhuān)屬性、準(zhǔn)確性、精密度、線性、范圍、檢測(cè)限度、定量限度、耐用性,等幾個(gè)指標(biāo)中的一個(gè)或幾個(gè)，用于不同檢測(cè)目的的試驗(yàn)方法需進(jìn)行不同參數(shù)的測(cè)定，下表為各種檢測(cè)方法通常需測(cè)定的參數(shù)。,20,21,（一）專(zhuān)屬性,專(zhuān)屬性,系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解物、輔

9、料等）可能存在下，采用的分析方法能夠準(zhǔn)確測(cè)定被分析物質(zhì)的特性的能力。,通常,鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定,方法中均應(yīng)考察其專(zhuān)屬性。,如采用的方法不夠?qū)?，?yīng)采用多個(gè)方法予以補(bǔ)充。,22,1,、,鑒別反應(yīng),專(zhuān)屬性,試驗(yàn)要求證明能與,可能共存的物質(zhì),或,結(jié)構(gòu)相似化合物,區(qū)分，需確證含被分析物的樣品,呈正反應(yīng),（可與已知對(duì)照物比較），而不含被測(cè)成分的樣品呈,負(fù)反應(yīng),，以及,結(jié)構(gòu)相似,或組分中的有關(guān)化合物，也應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)。,23,2,、雜質(zhì)檢查,作為,純度檢查,，所采用的分析方法應(yīng)確保,可檢出被分析物中雜質(zhì)的含量,，如有關(guān)物質(zhì)、重金屬、殘留溶劑等。因此雜質(zhì)檢查要求分析方法有一定的專(zhuān)屬性。,24,雜質(zhì)可獲得,

10、:,可向供試品中加入一定量的雜質(zhì)，證明雜質(zhì)與共存物質(zhì)能得到分離和,檢出,，并具適當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確度與精密度。,雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得,:,將供試品用強(qiáng)光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化的方法進(jìn)行破壞（制劑應(yīng)考慮輔料的影響），比較破壞前后檢出的雜質(zhì)個(gè)數(shù)和量。必要時(shí)可采用二極管陣列檢測(cè)和質(zhì)譜檢測(cè)，進(jìn)行色譜峰純度檢查,。,25,3,、含量測(cè)定,含量測(cè)定目的,是得到樣品中被分析物的,含量,或,效價(jià),的準(zhǔn)確結(jié)果。,在雜質(zhì)可獲得的情況下,，對(duì)于主成分含量測(cè)定可,在供試品中加入雜質(zhì)或輔料,，考察測(cè)定結(jié)果是否受干擾，并與未加雜質(zhì)和輔料的試樣比較測(cè)定結(jié)果。,26,在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，,可采用,另一個(gè)經(jīng)驗(yàn)

11、證,了的或,藥典,方法進(jìn)行比較，比對(duì)兩種方法測(cè)定的結(jié)果。也可采用,破壞性試驗(yàn)（,強(qiáng)光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化），得到含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣，,用兩種方法進(jìn)行含量測(cè)定比較測(cè)定結(jié)果,。必要時(shí)進(jìn)行色譜峰純度檢查，證明含量測(cè)定成分的色譜峰中不包含其他成分。,27,（二）準(zhǔn)確度,準(zhǔn)確度系指,用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或認(rèn)可的參考值之間接近的程度。有時(shí)也稱真實(shí)度。一般以回收率（）表示。,一定的準(zhǔn)確度為定量測(cè)定的必要條件，因此涉及到定量測(cè)定的檢測(cè)項(xiàng)目均需要驗(yàn)證準(zhǔn)確度，如含量測(cè)定、雜質(zhì)定量試驗(yàn)等。,28,準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)建立。該指標(biāo)的驗(yàn)證一般以,回收率,試驗(yàn)來(lái)進(jìn)行，試驗(yàn)設(shè)計(jì)需考慮在規(guī)定范圍內(nèi)

12、，,制備,3,個(gè)不同濃度,的樣品，各測(cè)定,3,次，即測(cè)定,9,次，報(bào)告已知加入量的回收率（）或測(cè)定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其可信限。,（二）準(zhǔn)確度,29,回收率,回收試驗(yàn)可在幾份相同試樣中加入適量待測(cè)組分的純品，以相同條件進(jìn)行測(cè)定，按下式計(jì)算回收率：,回收率添加組分試樣測(cè)定值原試樣測(cè)定值,/,組分添加量,回收率越高則認(rèn)為方法越可靠。,30,1,、含量測(cè)定,原料藥,可用已知純度的對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定，或用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。,制劑,可用含已知量被測(cè)物的各組分混合物進(jìn)行測(cè)定。,（二）準(zhǔn)確度,31,2,、雜質(zhì)定量試驗(yàn),雜質(zhì)的定量試驗(yàn)可向原料藥或制劑中加入,已知量雜

13、質(zhì),進(jìn)行測(cè)定。,如果不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測(cè)定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較，如藥典標(biāo)準(zhǔn)方法或經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的方法。,當(dāng)雜質(zhì)的光譜與主成分的光譜相似，則可采用原料藥的響應(yīng)因子近似計(jì)算雜質(zhì)含量（自身對(duì)照法）。并應(yīng)明確單個(gè)雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成分的重量比（）或是面積比（）。,32,33,（三）精密度,精密度系指,在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一均質(zhì)樣品，經(jīng)多次取樣進(jìn)行一系列檢測(cè)所得結(jié)果之間的接近程度（離散程度）。,該指標(biāo)目的是考察分析方法在不同的時(shí)間、操作人員、試驗(yàn)室下，所得結(jié)果的,重現(xiàn)性和重復(fù)性,。涉及,定量測(cè)定的項(xiàng)目,考察方法的精密度。,34,精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差,表示。取樣

14、測(cè)定次數(shù)應(yīng)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，至少用,6,次結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。,精密度可以從三個(gè)層次考察：,重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性。,（三）精密度,35,1,、重復(fù)性,重復(fù)性系指,在,同樣的操作,條件下，在,較短時(shí)間,間隔內(nèi)，由,一個(gè)分析人員,測(cè)定所得結(jié)果的精密度。,重復(fù)性測(cè)定,可在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用,9,次測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，如制備,3,個(gè)不同濃度的樣品，各測(cè)定,3,次，或采用同,一批樣品,（把被測(cè)物濃度當(dāng)作,100,），用至少測(cè)定,6,次的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。,36,2,、中間精密度,中間精密度系指,在同一試驗(yàn)室，由于試驗(yàn)室內(nèi)部條件改變，如時(shí)間、分析人員、儀器設(shè)備、測(cè)定結(jié)果的精密度。,驗(yàn)證設(shè)計(jì)方案中的變動(dòng)因素一般為,日

15、期、分析人員、設(shè)備,。,37,天數(shù),操作者,儀器（或色譜柱）,第一天,A,A,B,B,第二天,A,B,B,A,第三天,A,B(,或,A),B,B(,或,A),38,3,、重現(xiàn)性,指不同實(shí)驗(yàn)室之間不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。,當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。,39,（四）線性,線性系指,在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，檢測(cè)結(jié)果與試樣中被分析物的濃度（量）直接呈線性比例關(guān)系的能力。,線性是定量測(cè)定的基礎(chǔ)，涉及定量測(cè)定的項(xiàng)目，如雜質(zhì)定量試驗(yàn)和含量測(cè)定均需要驗(yàn)證線性。,做法,:,可用一,貯備液,經(jīng)精密稀釋?zhuān)蚍謩e精密稱樣，制備一系列被測(cè)物質(zhì)濃度系列進(jìn)行測(cè)定，,至少制備,5,個(gè)濃度。以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作

16、為被測(cè)物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性,.,40,（五）范圍,范圍系指,能夠達(dá)到一定的準(zhǔn)確度、精密度和線性，測(cè)試方法適用的試樣中被分析物的高低限濃度或量的區(qū)間。,范圍通常用與分析方法的測(cè)試結(jié)果相同的單位（如百分濃度）表達(dá)。,涉及到定量測(cè)定的檢測(cè)項(xiàng)目均需要對(duì)范圍進(jìn)行驗(yàn)證，如含量測(cè)定、含量均勻度、溶出度或釋放度、雜質(zhì)定量試驗(yàn)等。,41,1,、,含量測(cè)定,范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的,80,100,或更寬。,2,、雜質(zhì),雜質(zhì)測(cè)定時(shí)，范圍應(yīng)根據(jù)初步實(shí)測(cè)，擬訂出規(guī)定限度的,20,。如果含量測(cè)定與雜質(zhì)檢查同時(shí)測(cè)定，用面積歸一化法，則線性范圍應(yīng)為雜質(zhì)規(guī)定限度的,-20,至含量限度（或上限）的,+20,。,（五）范圍,42,（六）檢測(cè)限,檢測(cè)限系指,試樣中的被分析物能夠被檢測(cè)到的最低量，但不一定要準(zhǔn)確定量。,該驗(yàn)證指標(biāo)的意義,在于考察方法是否,具備靈敏,的檢測(cè)能力。因此對(duì)雜質(zhì)限度試驗(yàn)，需證明方法具有足夠低的檢測(cè)限，以保證需要控制的雜質(zhì)被測(cè)出。,43,1,、直觀法,直觀評(píng)價(jià)可以用于,非儀器分析,方法，也可用于儀器分析方法。,檢測(cè)限的測(cè)定是通過(guò)對(duì)一,系列已知濃度,被分析物的樣品進(jìn)行分析，并以能,準(zhǔn)確（或被可靠）地檢