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1、單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,,ppt課件,*,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,,ppt課件,*,腫瘤相關(guān),基因,1,ppt課件,腫瘤相關(guān)基因1ppt課件,腫瘤相關(guān)基因,癌基因,抑癌基因,腫瘤轉(zhuǎn)移基因,腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因,腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因,2,ppt課件,腫瘤相關(guān)基因癌基因2ppt課件,癌基因（,oncogene,）,病毒癌基因,virus oncogene,（,v-onc,）,細(xì)胞癌基因,cellular oncogene,（,c-onc,）,原癌基因,,proto-onc,3,ppt課件

2、,癌基因（oncogene）病毒癌基因virus oncog,病毒癌基因,,virus oncogene,（,v-onc,）,1968,年,Duesberg,等首次發(fā)現(xiàn),,Rous,肉瘤病毒,基因組 編碼,酪氨酸蛋白激酶,基因，證實(shí)它在細(xì)胞轉(zhuǎn)化中起關(guān)鍵作用,來自病毒，因而被命名為病毒癌基因,4,ppt課件,病毒癌基因virus oncogene（v-onc）196,細(xì)胞癌基因,cellular oncogene,（,c-onc,）,1972,年,Bishop,核酸分子雜交法證實(shí)：,幾乎在所有高等動物細(xì)胞基因組中，都有和,v- onc,相似的,DNA,序列,這些序列是細(xì)胞基因組的成員之一，

3、其編碼的產(chǎn)物具有重要的功能,細(xì)胞癌基因在正常情況下的表達(dá)有時間、空間限制，表達(dá)產(chǎn)物參與細(xì)胞分化、增殖,5,ppt課件,細(xì)胞癌基因cellular oncogene（c-onc）,原癌基因（,proto-onc,）,未激活的細(xì)胞癌基因,在人體正常細(xì)胞中存在,是一種正?；?作用：調(diào)控細(xì)胞生長和分化,廣泛存在于生物界中，從酵母到人的細(xì)胞中都存在,6,ppt課件,原癌基因（proto-onc）未激活的細(xì)胞癌基因6ppt課件,原癌基因的分類,按原癌基因的結(jié)構(gòu)、產(chǎn)物的功能、所在的位置分為下列四類：,1.,蛋白激酶類,2.,信息傳遞蛋白類,3.,生長因子及其受體類,4.,核內(nèi)蛋白類,7,ppt課件,原癌

4、基因的分類按原癌基因的結(jié)構(gòu)、產(chǎn)物的功能、所在的位置分為下,細(xì)胞癌基因,與,致癌,癌基因在生物進(jìn)化中具高度保守性,正常細(xì)胞中的癌基因和腫瘤細(xì)胞中的癌基因的核苷酸順序十分相似，后者可使,NIH 3T3,細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，前者需經(jīng)激活后才具有轉(zhuǎn)化能力,說明：在正常情況下細(xì)胞癌基因不致癌，生理條件下內(nèi)外環(huán)境中的某些刺激可激活癌基因，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長、分化和信息傳遞,8,ppt課件,細(xì)胞癌基因與致癌癌基因在生物進(jìn)化中具高度保守性8ppt課件,通常認(rèn)為,：,癌基因,并不是腫瘤所特有,是細(xì)胞的正?；?能誘導(dǎo)正常細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，并使正常細(xì)胞獲得一個或多個新的生物特性的基因,只有在被激活后發(fā)生異常表達(dá)時，才會導(dǎo)致

5、,細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化,9,ppt課件,通常認(rèn)為：癌基因并不是腫瘤所特有 9ppt課件,細(xì)胞癌基因的生理功能主要表現(xiàn)為：,①,調(diào)節(jié)細(xì)胞生長,②,參與細(xì)胞分化和發(fā)育過程,具有正常生理功能的同時又具有潛在致癌能力的原癌基因，其致癌潛能的發(fā)揮，首先需要被激活,10,ppt課件,細(xì)胞癌基因的生理功能主要表現(xiàn)為：① 調(diào)節(jié)細(xì)胞生長10ppt課,常見的激活因素：,病毒,化學(xué)物質(zhì),輻射,11,ppt課件,常見的激活因素：病毒 11ppt課件,原癌基因的激活機(jī)理,1.,DNA,重排,,2.,基因放大,,3.,點(diǎn)突變,,4.,其它調(diào)控的異常,,12,ppt課件,原癌基因的激活機(jī)理

6、 1. DNA重排 12ppt課件,DNA,重排,插入具有高活性的啟動子或增強(qiáng)子,，使原癌基因持久、過量地表達(dá),負(fù)調(diào)控區(qū)的失活或丟失,,13,ppt課件,DNA 重排插入具有高活性的啟動子或增強(qiáng)子，使原癌基因持久、,DNA,重排,,1,插入具有高活性的啟動子或增強(qiáng)子，使原癌基因持久、過量地表達(dá),插入的啟動子或增強(qiáng)子來自細(xì)胞外（外源性）,如：雞,B,淋巴細(xì)胞瘤由于,ALV,的,LTR,插入,c-myc,的旁側(cè)（,5’,或,3’,端），使,c-myc,過量表達(dá),插入的啟動子或增強(qiáng)子來自細(xì)胞內(nèi)（內(nèi)源性）,如：內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒的,LTR,,14,ppt課件,DNA 重排1 插入具有高活性的啟動子

7、或增強(qiáng)子，使原癌基,染色體易位是原癌基因,DNA,重排的典型例子,人,B,淋巴瘤中免疫球蛋白基因與,c-myc,的重排，使,c-myc,激活,c-myc,基因定位于,8q24,，,,Ig,?,、,Ig,?,、,Ig λ,鏈的基因位點(diǎn)分別定位在,14q32,、,2p13,和,22q11,c-myc,易位到,Ig,位點(diǎn)的高活性轉(zhuǎn)錄區(qū)，從而組成一個高轉(zhuǎn)活性的重排基因，啟動,c-myc,轉(zhuǎn)錄，使,c-myc,表達(dá)增強(qiáng)，促進(jìn)細(xì)胞惡變，最后導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生,DNA,重排,,1,插入具有高活性的啟動子或增強(qiáng)子，使原癌基因持 久、過量地表達(dá),15,ppt課件,染色體易位是原癌基因DNA重排的典型例子DN

8、A 重排1,16,ppt課件,16ppt課件,DNA,重排,,2,負(fù)調(diào)控區(qū)的失活或丟失,小鼠,c-myc,，,c-fos,，,c-mos,等原癌基因在旁側(cè)順序具有,抑制轉(zhuǎn)錄啟動,的負(fù)調(diào)控區(qū),人,c-myc,的負(fù)調(diào)控區(qū)在,5’,端,428-1188bp,處，而在,B,淋巴瘤中，該區(qū)有多點(diǎn)突變或部分丟失,Duesberg,提出：,1,號外顯子被切斷時，,ras,基因即被激活,雖然這一結(jié)論還有待更多實(shí)驗證實(shí)；但是，原癌基因上游或下游旁側(cè)順序存在負(fù)調(diào)控區(qū)（并不是個別現(xiàn)象），因而使原癌基因被激活的可能性大為減少,17,ppt課件,DNA 重排　2 負(fù)調(diào)控區(qū)的失活或丟失小鼠c-myc，c,點(diǎn)突變,,

9、在,ras,基因族，在人體腫瘤中已從膀胱、小細(xì)胞肺癌（,Ha-ras,，,Kit-ras,），胃（,N-ras,），乳腺（,Ha-ras,）等證明在,12,或,61,號編碼子出現(xiàn)點(diǎn)突變所導(dǎo)致一個氨基酸的置換,突變（一個氨基酸置換）可使其編碼產(chǎn)物蛋白,p21,的,GTPase,活性明顯下降，從而影響,p21,的生物學(xué)活性,18,ppt課件,點(diǎn)突變　　在 ras 基因族，在人體腫瘤中已從膀胱、小細(xì)胞肺,基因放大,,基因擴(kuò)增，可導(dǎo)致基因過量表達(dá),基因放大一般被認(rèn)為與惡性演進(jìn)有關(guān)，未必是惡性早期的改變,在人體腫瘤中，如：,人肝癌中出現(xiàn),N-ras,重排及其基因放大,小細(xì)胞肺癌中,c-myc,及,L-m

10、yc,基因放大與癌轉(zhuǎn)移可能有關(guān),神經(jīng)母細(xì)胞瘤中,N-myc,基因放大明顯與病程發(fā)展有關(guān),19,ppt課件,基因放大　基因擴(kuò)增，可導(dǎo)致基因過量表達(dá)19ppt課件,其它調(diào)控的異常,,,反式（,Trans,）調(diào)控系統(tǒng),轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控異常,20,ppt課件,其它調(diào)控的異?！　　　》词剑═rans）調(diào)控系統(tǒng)20ppt課,反式（,Trans,）調(diào)控系統(tǒng),已證明某些基因產(chǎn)物可影響其它基因的轉(zhuǎn)錄，如：,病毒,HTLV-Ⅰ,，,Ⅱ,中,TAT,（,LOR,）區(qū),SV40,中的某些片段,RSV,的,gag,區(qū),原癌基因很可能會接受其它基因（包括病毒的基因產(chǎn)物）的控制或影響,值得注意的是：,v-myc,進(jìn)入細(xì)胞后，可

11、關(guān)閉細(xì)胞本身,c-myc,的表達(dá)，同時，,c-myc,激活后亦可使另一個正常表達(dá)的,c-myc,等位基因關(guān)閉，提示：,myc,產(chǎn)物或由,myc,誘導(dǎo)產(chǎn)生的物質(zhì)對,c-myc,的轉(zhuǎn)錄發(fā)生,Trans,的負(fù)控制,,21,ppt課件,反式（Trans）調(diào)控系統(tǒng)已證明某些基因產(chǎn)物可影響其它基因的,轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控異常,,成纖維細(xì)胞經(jīng)生長因子處理后，結(jié)果：,c-myc,的,mRNA,量增高,轉(zhuǎn)錄水平并不改變,說明：,mRNA,轉(zhuǎn)錄后加工或穩(wěn)定性的改變,基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控：當(dāng)前了解甚少，原癌基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的異常了解的更少,,22,ppt課件,轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控異常?成纖維細(xì)胞經(jīng)生長因子處理后，結(jié)果：22pp,抑癌基

12、因,tumor suppressor gene,腫瘤抑制基因（抗癌基因）,最早由,A.Knudson Jr.,提出,細(xì)胞內(nèi)一類抑制腫瘤發(fā)生、生長的基因，最近又發(fā)展為指能對抗癌基因作用的基因,在生物體內(nèi)與癌基因功能相抵抗，共同保持生物體內(nèi)正負(fù)信號相互作用的相對穩(wěn)定,腫瘤抑制基因的失活和癌基因的激活都是癌化過程的一部分,23,ppt課件,抑癌基因 tumor suppressor gene腫瘤抑,抗癌基因主要功能,(1),誘導(dǎo)終末分化,(2),維持基因穩(wěn)定,(3),觸發(fā)衰老，誘導(dǎo)細(xì)胞程序性死亡,(4),調(diào)節(jié)細(xì)胞生長,(5),抑制蛋白激酶活性,(6),改變,DNA,甲基化酶活性,(7),調(diào)節(jié)組織蛋

13、白酶活性,(8),調(diào)節(jié)血管形成,(9),促進(jìn)細(xì)胞間聯(lián)系,24,ppt課件,抗癌基因主要功能(1) 誘導(dǎo)終末分化24ppt課件,腫瘤細(xì)胞,轉(zhuǎn)移基因與轉(zhuǎn)移抑制基因,腫瘤細(xì)胞,轉(zhuǎn)移基因,的激活,和,/,或,轉(zhuǎn)移抑制基因,失活均可誘發(fā)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移表型而導(dǎo)致轉(zhuǎn)移的發(fā)生,原發(fā)部位腫瘤組織中具有轉(zhuǎn)移潛性的細(xì)胞群是腫瘤轉(zhuǎn)移的細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ),25,ppt課件,腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移基因與轉(zhuǎn)移抑制基因腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移基因的激活和/或,目前發(fā)現(xiàn),：,癌基因 有,100,多個,抗癌基因 有,7,個,轉(zhuǎn)移基因,（,metastasis gene,）,有一些,?,直接促進(jìn)轉(zhuǎn)移發(fā)生的關(guān)鍵基因，其存在或表達(dá)增強(qiáng)會引起侵襲轉(zhuǎn)移

14、的發(fā)生,轉(zhuǎn)移相關(guān)基因（,metastasis-asscciated gene,,） 有一些,?,只涉及轉(zhuǎn)移的某個階段，并非參與整個轉(zhuǎn)移過程,,26,ppt課件,目前發(fā)現(xiàn)：癌基因 有100多個26ppt課件,目前發(fā)現(xiàn),：,轉(zhuǎn)移抑制基因,（,metastasis suppressor gene,）,有一些？,Soble,認(rèn)為：凡是能抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的基因均可命名為轉(zhuǎn)移抑制基因,抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移表型,研究表明，腫瘤的轉(zhuǎn)移與,轉(zhuǎn)移基因,激活,或,轉(zhuǎn)移抑制基因,失活,有關(guān)，是多種轉(zhuǎn)移相關(guān)基因及轉(zhuǎn)移抑制相關(guān)基因綜合作用的結(jié)果,27,ppt課件,目前發(fā)現(xiàn)：轉(zhuǎn)移抑制基因（metastasis suppr

15、es,腫瘤相關(guān)基因的發(fā)現(xiàn)和深入研究的意義：,——,,提高了人們的認(rèn)識,細(xì)胞增殖與分化的調(diào)控機(jī)制,惡性腫瘤的發(fā)生，發(fā)展規(guī)律,腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移機(jī)制,——,,為腫瘤的診斷提供了嶄新的途徑,腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移與某些特定的癌基因密切相關(guān)，對這些癌基因及其產(chǎn)物的檢測，為腫瘤的臨床診斷提供了一條嶄新的途徑，必將受到臨床實(shí)驗室技術(shù)人員和腫瘤工作者的重視,28,ppt課件,腫瘤相關(guān)基因的發(fā)現(xiàn)和深入研究的意義：—— 提高了人們的認(rèn)識,ras,癌基因,,—,參與人類腫瘤的發(fā)生發(fā)展,最初在急性轉(zhuǎn)化性逆轉(zhuǎn)錄病毒實(shí)驗中，從,Harvey,、,Kirsten,兩株大鼠肉瘤病毒中克隆出的轉(zhuǎn)化基因,自,82,年,Weinberg,

16、等人發(fā)現(xiàn)人膀胱癌細(xì)胞系中有活化的,H-ras,基因后，對,ras,在人類腫瘤發(fā)生發(fā)展中所起的作用引起了極大關(guān)注,目前研究認(rèn)為：,ras,癌基因,參與細(xì)胞生長和分化的調(diào)控,參與多種腫瘤的形成與發(fā)展,29,ppt課件,ras 癌基因 —參與人類腫,ras,基因家族,家族中與人類腫瘤相關(guān)的特征性基因有：,,H-ras,,定位于,11,號染色體 是大鼠肉瘤病毒的轉(zhuǎn)化基因,,K-ras,,定位于,12,號染色體 是大鼠肉瘤病毒的轉(zhuǎn)化基因,,N-ras,,定位于,1,號染色體 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤中分離得到,30,ppt課件,ras 基因家族家族中與人類腫瘤相關(guān)的特

17、征性基因有：30pp,ras,基因家族,ras,家族的基因所共有的特征為：,,1.,基因組中有,5,個外顯子：,4,個編碼的外顯子和,1,個,5’,端非編碼外顯子,,2.,外顯子所編碼的蛋白為,188-189,個氨基酸殘基，分子量為,21kD,（,p21,蛋白），此蛋白具有高度特異性和同源性，尤其在氨基酸序列的前,80,個氨基酸殘基中，幾乎無種屬間差別，具有高度保守性,31,ppt課件,ras 基因家族ras家族的基因所共有的特征為：31ppt課,正常,ras,蛋白具有以下特點(diǎn)：,p21,（,ras,蛋白）位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)面，以軟脂酸共價鍵形式固定于脂質(zhì)雙層膜的內(nèi)表面,對,GTP,和,GDP,

18、具有高度親和力，并具有同源性,GTP,酶的活性,,32,ppt課件,正常ras蛋白具有以下特點(diǎn)：p21（ras蛋白）位于細(xì)胞膜的,ras,蛋白,ras,蛋白的生化性質(zhì)與,G,蛋白非常類似,G,蛋白具有從,膜結(jié)合受體,到,腺苷酸環(huán)化,過程的信號傳導(dǎo)作用，提示：,ras,蛋白可能也具有信號傳導(dǎo)通路的作用,目前，尚未發(fā)現(xiàn),ras,蛋白作用的特異受體和靶細(xì)胞,33,ppt課件,ras 蛋白ras蛋白的生化性質(zhì)與G蛋白非常類似33ppt課,G,蛋白,34,ppt課件,G蛋白34ppt課件,G,蛋白,35,ppt課件,G蛋白35ppt課件,ras,蛋白,有人推測：在哺乳動物細(xì)胞中,,ras,蛋白作用的靶分

19、子：,很可能是,磷脂酶,C,36,ppt課件,ras 蛋白有人推測：在哺乳動物細(xì)胞中36ppt課件,磷脂酶,C,,——,信號傳遞途徑的一個重要成份,被激活后的磷脂酶,C,PIP,2,,?,IP,3,+ DG,IP,3,和,DG,是促進(jìn)細(xì)胞增殖的第二信使,現(xiàn)已證實(shí)，在,ras,癌基因轉(zhuǎn)化的細(xì)胞中,IP,3,，,DG,和,PIP,2,的含量均明顯多于未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞,37,ppt課件,磷脂酶C ——信號傳遞途徑的一個重要成份被激活后的磷脂酶,38,ppt課件,38ppt課件,39,ppt課件,39ppt課件,ras,基因激活機(jī)制：,原癌基因的激活過程稱為活化,活化后的,ras,基因能使,NIH

20、3T3,細(xì)胞系轉(zhuǎn)化為腫瘤細(xì)胞,ras,基因活化的主要方式有：,(1),編碼區(qū)內(nèi)的突變,(2),插入激活,,40,ppt課件,ras基因激活機(jī)制：原癌基因的激活過程稱為活化40ppt課件,突變激活,,——,ras,基因家族的主要激活方式,在實(shí)體瘤中占,10,～,15%,目前較公認(rèn)：,ras,基因突變點(diǎn)位于三種,ras,基因的第,12,、,13,、,59,或,61,位氨基酸密碼子,Seeburg,等采用定點(diǎn)突變技術(shù)，對,H-ras,基因第,12,位密碼子,——,甘氨酸的所有置換氨基酸的可能性進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，此位點(diǎn)上，除置換氨基酸為脯氨酸外，其余的置換氨基酸均具有轉(zhuǎn)化潛能，但有程度差異,到目前

21、為止，在腫瘤中尚未發(fā)現(xiàn)二個或三個位點(diǎn)同時突變,41,ppt課件,突變激活 —— ra,插入激活,ras,基因附近插入一個強(qiáng)啟動子（,promoter,）或增強(qiáng)子（,enhaner,）可使,ras,基因表達(dá)增強(qiáng),42,ppt課件,插入激活ras 基因附近插入一個強(qiáng)啟動子（promoter）,基因擴(kuò)增，堿基缺失,正?；虻臄U(kuò)增或非編碼外顯子的缺失也能使,ras,基因呈高表達(dá),但這兩種方式在,ras,基因激活中較少見,43,ppt課件,基因擴(kuò)增，堿基缺失正?；虻臄U(kuò)增或非編碼外顯子的缺失也能使,ras,蛋白,目前認(rèn)為：兩種形式,活化,非活化,通常情況下，細(xì)胞內(nèi)

22、的,ras,蛋白分子處于非活化狀態(tài),44,ppt課件,ras蛋白目前認(rèn)為：兩種形式44ppt課件,非活化狀態(tài)下的,ras,蛋白特征,:,具有,GTP,酶活性,能夠與,GDP,結(jié)合,當(dāng),ras,蛋白受到信號傳遞通道上游某一外界因子的刺激時，使,GDP,磷酸化變成,GTP,，隨后,ras,蛋白發(fā)生構(gòu)象改變，成為活化狀態(tài),活化的,ras,蛋白與,效應(yīng)分子,相互作用，實(shí)現(xiàn)生長信號的傳遞，而且這種作用發(fā)生，活化的,ras,蛋白會,迅速失活,，轉(zhuǎn)變?yōu)榕c,GDP,結(jié)合的非活化形式,此過程主要是,ras,蛋白自身的,GTP,酶作用，它能催化,GTP,水解，使活化,ras,蛋白能立即轉(zhuǎn)變成為非活化狀態(tài)的,ras

23、,蛋白,45,ppt課件,非活化狀態(tài)下的ras蛋白特征:具有GTP酶活性45ppt課件,活化的,ras,蛋白的生化性質(zhì),ras,基因的任何突變使正常的,ras,蛋白轉(zhuǎn)變?yōu)槟軌蚴?NIH 3T3,細(xì)胞轉(zhuǎn)化的蛋白，從生化角度上講，這種突變激活可分為二種,(1),突變失去內(nèi)在的,GTP,酶活性,(2),突變改變了對,GDP,和,GTP,的親和力,ras,蛋白功能取決于編碼蛋白的基因序列和與之密切相關(guān)的結(jié)構(gòu)域,突變激活的常見位點(diǎn)多集中在,GTP,、,GDP,結(jié)合的,domain,附近,結(jié)構(gòu)的改變導(dǎo)致了,ras,蛋白的功能異常,46,ppt課件,活化的ras蛋白的生化性質(zhì)ras基因的任何突變使正常的ra

24、s,ras,基因的突變,ras,基因的突變：擾亂正常狀態(tài)下活化與非活化,ras,蛋白的這種平衡機(jī)制，使正常非活化的,ras,蛋白轉(zhuǎn)變成活化形式,實(shí)際上，,ras,基因的,12,、,13,、,61,位密碼子的活化突變，并不影響,p21,蛋白與,GDP,和,GTP,的結(jié)合，但卻降低了,p21,蛋白自身,GTP,酶活性，使其水解,GTP,的速效大為降低，從而使,ras,蛋白維持于活化狀態(tài)，不斷激活靶分子，引起信號傳導(dǎo)的持續(xù)效應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞大量增殖，而發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化,47,ppt課件,ras 基因的突變ras基因的突變：擾亂正常狀態(tài)下活化與非活,理論上,,ras,蛋白維持于活化狀態(tài)有三種可能機(jī)制,(1)r

25、as,蛋白自身,GTP,酶活性降低，使,GTP,水解減少,(2)GDP,與,GTP,間的交換增加,(3),誘導(dǎo)了不需與鳥苷酸結(jié)合的,ras,蛋白的活化構(gòu)象,有人推測：,ras,蛋白的調(diào)節(jié)機(jī)制可能與其本身所具有的一種“開放”、“關(guān)閉”構(gòu)型有關(guān)，構(gòu)型處于“開放”時，能活躍地傳導(dǎo)特定的生長信號；而“關(guān)閉”時則不能傳導(dǎo)。如關(guān)鍵位點(diǎn)（,12,、,13,或,61,位密碼子）發(fā)生了點(diǎn)突變，則使這種構(gòu)型的開關(guān)不能再回轉(zhuǎn)到閉合狀態(tài)，使活化的,ras,蛋白持續(xù)傳導(dǎo)一種不適當(dāng)?shù)纳L信號,48,ppt課件,理論上ras 蛋白維持于活化狀態(tài)有三種可能機(jī)制(1)ras,ras,基因與人類腫瘤,82,年以來，在膀胱癌、乳

26、腺癌、結(jié)腸癌、腎癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、胃癌、及造血系腫統(tǒng)瘤中，均檢出了,ras,癌基因的異常,Pulciani,等人研究表明，被檢腫瘤,DNA,中所含活化,ras,基因僅占,10,～,20%,（似乎,ras,癌基因在人類腫瘤發(fā)生發(fā)展中并非起主要作用）,事實(shí)上，,ras,癌基因參與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展，只不過突變率相差很大,49,ppt課件,ras 基因與人類腫瘤82年以來，在膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、,ras,基因與人類腫瘤,不同腫瘤類型，,ras,基因的突變率相差明顯，如：最高的是在胰腺癌中（,90%,） ，其次是甲狀腺癌（,53%,）和結(jié)腸癌（,47%,）,突變,ras,基因的種類與某些腫病

27、類型密切相關(guān)，即有,優(yōu)勢激活現(xiàn)象,。如胰腺癌、結(jié)腸癌、肺癌等以,K-ras,突變?yōu)橹?，造血系統(tǒng)腫瘤多發(fā)現(xiàn),N-ras,的突變，泌尿系腫瘤則以,H-ras,突變?yōu)橹?50,ppt課件,ras 基因與人類腫瘤不同腫瘤類型，ras基因的突變率相差明,ras,基因與人類腫瘤,目前的資料表明,H-ras,和,K-ras,的表達(dá)不僅與膀胱癌、腎盂癌、肺癌、結(jié)腸癌有密切的關(guān)系，而且也與膽囊癌、胰腺癌、腎母細(xì)胞癌、慢性淋巴細(xì)胞白血病、黑色素瘤形成密切相關(guān),N-ras,表達(dá)水平上升主要發(fā)生在造血系統(tǒng)的惡性腫瘤中，如,APL,、,AML,、,BL,，但在神經(jīng)母細(xì)胞瘤、纖維肉瘤，橫紋肌肉瘤中的表達(dá)也有一定的上升，并

28、認(rèn)為是這些腫瘤形成的主要原因,檢測,ras,突變對了解腫瘤的發(fā)生發(fā)展，以及監(jiān)測惡性腫瘤的治療效果具有重大意義,51,ppt課件,ras 基因與人類腫瘤目前的資料表明51ppt課件,c-myc,癌基因,c-myc,基因是,myc,基因家族的重要成員之一,c-myc,基因,是一種可易位基因,是一種多種物質(zhì)調(diào)節(jié)的可調(diào)節(jié)基因,是一種可使細(xì)胞無限增殖，促進(jìn)細(xì)胞分裂的基因,myc,基因參與細(xì)胞凋亡，,c-myc,基因與多種腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān),52,ppt課件,c-myc 癌基因c-myc基因是myc基因家族的重要成員之,人,c-myc,基因,：定位于,8q24,,Ig,?,、,Ig,?,、,Igλ,鏈的基因

29、位點(diǎn)分別定位在,14q32,、,2p13,和,22q11,c-myc,易位到,Ig,位點(diǎn)的高活性轉(zhuǎn)錄區(qū)，從而組成一個高轉(zhuǎn)活性的重排基因，啟動,c-myc,轉(zhuǎn)錄，使,c-myc,表達(dá)增強(qiáng)，促進(jìn)細(xì)胞惡變，最后導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生,53,ppt課件,人c-myc基因：定位于8q2453ppt課件,54,ppt課件,54ppt課件,c-myc,癌基因結(jié)構(gòu),c-myc,與禽類,髓細(xì)胞病毒,（,AMN,）,MC-29,的,v-myc,同源,c-myc,基因由,3,個外顯子及,2,個內(nèi)含子組成,第一個外顯子不編碼，只起調(diào)節(jié)作用,只有外顯子,2,和,3,與,v-myc,相對應(yīng)，編碼一個,439,個氨基酸的蛋白質(zhì),5

30、5,ppt課件,c-myc 癌基因結(jié)構(gòu)c-myc與禽類髓細(xì)胞病毒（AMN）M,c-myc,癌基因結(jié)構(gòu),c-myc,基因由啟動子,P1,或,P2,起始轉(zhuǎn)錄，并在第一內(nèi)含子中有一個潛在啟動子,P,，當(dāng)?shù)谝粋€內(nèi)含子發(fā)生斷裂時，,P,可被激活而成為一個異常轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)，但蛋白合成起始位點(diǎn)不變，并與正常,c-myc,基因產(chǎn)物相同,不同的動物中，,c-myc,基因的第,2,、,3,外顯子具有高度保守性，而第,1,外顯子則有較大的差異,小鼠和人的外顯子,1,有,70%,的同源性,56,ppt課件,c-myc 癌基因結(jié)構(gòu)c-myc基因由啟動子P1或P2起始轉(zhuǎn),c-myc,癌基因的表達(dá),c-myc,基因的表達(dá)與細(xì)

31、胞的生長狀態(tài)有關(guān)：,生長因子刺激成纖維細(xì)胞，,c-myc,表達(dá)增強(qiáng),相反，在細(xì)胞分化時,c-myc,表達(dá)降低,在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，用,c-myc,表達(dá)結(jié)構(gòu)或反義寡脫氧核酸進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn),c-myc,在細(xì)胞,G,0,期到,S,期的過程中也起作用,表明,c-myc,表達(dá)的變化與細(xì)胞的增殖及分化狀態(tài)有關(guān)，其表達(dá)產(chǎn)物在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化或惡性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮作用,57,ppt課件,c-myc 癌基因的表達(dá)c-myc基因的表達(dá)與細(xì)胞的生長狀態(tài),c-myc,基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能,c-myc,基因的產(chǎn)物為磷酸化蛋白,p62,分子量為：,62kD,由,c-myc,基因的外顯子,2,和,3,共同編碼,由,439,個

32、氨基酸組成的蛋白質(zhì),c-myc,基因?qū)俸说鞍谆颍ㄎ患?xì)胞核內(nèi)，產(chǎn)物為核蛋白,58,ppt課件,c-myc 基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能c-myc基因的產(chǎn)物為磷,c-myc,基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能,具有轉(zhuǎn)化細(xì)胞的能力,具有與染色體,DNA,結(jié)合的特性,在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化及惡性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮作用,c-myc,蛋白在結(jié)構(gòu)上可分為：轉(zhuǎn)錄激活區(qū)，非特異,DNA,結(jié)合區(qū)，核靶序列，堿性區(qū)，螺旋,-,環(huán),-,螺旋（,HLH,）及亮氨酸拉鏈區(qū),59,ppt課件,c-myc 基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能具有轉(zhuǎn)化細(xì)胞的能力59p,螺旋,-,環(huán),-,螺旋,（,HLH,）,60,ppt課件,螺旋-環(huán)-螺旋（HLH）60pp

33、t課件,亮氨酸拉鏈（,leu zipper,）,61,ppt課件,亮氨酸拉鏈（leu zipper）61ppt課件,c-myc,基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能,在,c-myc,蛋白中，螺旋,-,環(huán),-,螺旋緊隨著堿性區(qū)，揭示其以特異性序列方式和,DNA,相互作用,在以原核生物為實(shí)驗對象的研究表明：堿性區(qū)以一個自由環(huán)存在，當(dāng)以特殊方式結(jié)合到,DNA,上時，則變成螺旋，該區(qū)是,c-myc,蛋白與,DNA,特異序列的結(jié)合部位,62,ppt課件,c-myc 基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能在 c-myc 蛋白中，,c-myc,基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能,c-myc,中：還存在著,與抑制細(xì)胞分化、自身抑制有關(guān)的區(qū)域,腫

34、瘤轉(zhuǎn)化所必需的區(qū)域,Smith,等研究了,c-myc,的亮氨酸拉鏈區(qū)，該區(qū)介導(dǎo)各種轉(zhuǎn)錄因子的二聚作用,在亮氨酸重復(fù)部位的突變能顯著降低,c-myc,抑制鼠紅白血?。?MEL,）細(xì)胞分化能力,此區(qū)的插入突變能消除,c-myc,的轉(zhuǎn)化活性,認(rèn)為：正是這些,c-myc,結(jié)構(gòu)成分的表達(dá)阻止了細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期，從而抑制許多細(xì)胞系的分化,63,ppt課件,c-myc 基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能c-myc中：還存在著6,c-myc,基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能,Cronch,等,對,c-myc,亮氨酸拉鏈區(qū)的亮氨酸進(jìn)行致突變研究,發(fā)現(xiàn)：突變導(dǎo)致失去自身抑制,說明：亮氨酸拉鏈區(qū)在自身抑制中具有重要作用,64,ppt

35、課件,c-myc 基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能Cronch等64ppt,c-myc,基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能,Stone,等研究認(rèn)為：,c-myc,分子的中間,1/3,以及,N-,端，,C-,端是腫瘤轉(zhuǎn)化所必需的，是,c-myc,基因與腫瘤轉(zhuǎn)化有關(guān)的區(qū)段（功能區(qū)域）,,c-myc,功能區(qū)域，促使,c-myc,在胞漿內(nèi)合成后，與其它蛋白形成寡聚體，再轉(zhuǎn)移到核內(nèi)，并結(jié)合到特異性的,DNA,序列上，從而激活和抑制許多靶基因的轉(zhuǎn)錄，引起細(xì)胞生長和分化的改變，發(fā)揮其生理調(diào)節(jié)功能及惡性轉(zhuǎn)化作用,65,ppt課件,c-myc 基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能Stone等研究認(rèn)為：6,myc,蛋白參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,細(xì)胞凋

36、亡（,Programmed Cell death,，,PCD,）研究的深入，發(fā)現(xiàn),myc,蛋白參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,c-myc,基因表達(dá)的失調(diào)是多種細(xì)胞凋亡的主要誘因,細(xì)胞發(fā)生凋亡的速度及其對誘導(dǎo)因素的敏感性均依賴于,c-myc,蛋白的含量,尚未成熟胸腺細(xì)胞中：,myc,基因的高表達(dá)是胚胎胸腺細(xì)胞凋亡的誘因，而且在凋亡細(xì)胞的死亡階段，也觀察到,c-myc,基因的高水平表達(dá)，如果用反義寡核苷酸阻斷,c-myc,基因的表達(dá)，則細(xì)胞凋亡受到嚴(yán)重干擾,66,ppt課件,myc 蛋白參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡細(xì)胞凋亡（Programmed,myc,蛋白參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,Evan,發(fā)現(xiàn)，,c-myc,表達(dá)的失調(diào)也會啟動

37、去除生長因子后培養(yǎng)細(xì)胞的成熟前凋亡,觀察了小鼠,IL-3,依賴性髓樣細(xì)胞株,32D,，發(fā)現(xiàn)在洗去,IL-3,后，可立即觀察到,c-myc,基因表達(dá)下調(diào)，結(jié)果使培養(yǎng)細(xì)胞停止于,G1,期,將攜帶,c-myc,基因載體轉(zhuǎn)染,32D,細(xì)胞，獲得穩(wěn)定表達(dá),c-myc,基因的,32D,細(xì)胞克隆，結(jié)果這種細(xì)胞去除,IL-3,后，不停止于,G1,期，而是啟動以凋亡為特征的程序性細(xì)胞死亡,結(jié)果揭示細(xì)胞凋亡是清除固定突變及細(xì)胞周期調(diào)控失衡的細(xì)胞的重要機(jī)制，一旦細(xì)胞發(fā)生障礙，,c-myc,基因會啟動凋亡程序，相反，則導(dǎo)致腫瘤形成,67,ppt課件,myc 蛋白參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡Evan發(fā)現(xiàn)，c-myc表達(dá)的失,myc

38、,癌基因與人類腫瘤,myc,基因定位于染色體,8q24,Ig,?,,、,Ig,?,、,Igλ,鏈的基因位點(diǎn)分別在,14q32,、,2p13,和,22q11,在,BL,中：,c-myc,基因位點(diǎn)與,Ig,基因位點(diǎn)之間的易位，即,c-myc,易位到,Ig,位點(diǎn)的高活性轉(zhuǎn)錄區(qū)，從而組成一個高轉(zhuǎn)活性的重排基因，啟動,c-myc,轉(zhuǎn)錄，使,c-myc,表達(dá)增強(qiáng)，促進(jìn)細(xì)胞惡變，最后導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生,68,ppt課件,myc 癌基因與人類腫瘤myc基因定位于染色體8q2468p,myc,癌基因與人類腫瘤,在不同的人體腫瘤細(xì)胞系中，已發(fā)現(xiàn),c-myc,或,c-myc,相關(guān)序列的擴(kuò)增,粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞系,視網(wǎng)膜

39、母細(xì)胞瘤細(xì)胞系,某些神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系,乳腺癌細(xì)胞系,某些肺癌細(xì)胞系,腸癌細(xì)胞系,成骨肉瘤、軟骨肉瘤、脊索瘤、脂肪肉瘤、橫紋肌肉瘤,69,ppt課件,myc 癌基因與人類腫瘤在不同的人體腫瘤細(xì)胞系中，已發(fā)現(xiàn)c-,myc,癌基因與人類腫瘤,c-myc,過量表達(dá)與腫瘤的早期復(fù)發(fā)有關(guān),在致瘤中，已發(fā)現(xiàn),ras,與,myc,、,sis,與,myc,、,myc,與,fos,偶聯(lián)激活，協(xié)同致瘤等,許多資料表明,c-myc,位點(diǎn)在所有受檢的,B,細(xì)胞腫瘤中有重排,70,ppt課件,myc 癌基因與人類腫瘤c-myc過量表達(dá)與腫瘤的早期復(fù)發(fā)有,myc,癌基因與人類腫瘤,Casares,等：發(fā)現(xiàn)定位在,8,號染

40、色體上的,c-myc,與定位在,14,號染色體上的,Ig,重鏈基因有同樣的,14.2Kb,的,EcoR,Ⅰ,酶切片段，因而認(rèn)為發(fā)生了,8∶14,易位,8∶14,易位可能是,何杰氏淋巴瘤,的一個標(biāo)志,N-myc,在人神經(jīng)母細(xì)胞瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤和小細(xì)胞肺癌中有擴(kuò)增，擴(kuò)增的程度與腫瘤的發(fā)病進(jìn)程有關(guān),Schwab,等報告,20%,的神經(jīng)母細(xì)胞瘤有,N-myc,擴(kuò)增，其中大多數(shù)是侵襲性腫瘤,71,ppt課件,myc 癌基因與人類腫瘤Casares等：發(fā)現(xiàn)定位在8號染色,myc,癌基因與人類腫瘤,Seeger,等報告，,myc,基因拷貝數(shù)的多少預(yù)示疾病的進(jìn)程,c-myc,與小細(xì)胞肺癌,30%,的病例,c

41、-myc,擴(kuò)增，復(fù)發(fā)病人中,myc,擴(kuò)增者的生存期短于沒有擴(kuò)增的病例,接受化療的腫瘤病人易引起,myc,擴(kuò)增,myc,基因擴(kuò)增與其它腫瘤的關(guān)系也有許多報道,目前認(rèn)為胃癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、宮頸癌、何杰金氏病及頭部腫瘤等都有,myc,基因的擴(kuò)增或過度表達(dá),72,ppt課件,myc 癌基因與人類腫瘤Seeger等報告，myc基因拷貝數(shù),nm23,基因,nm23,基因是腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因,nm23,編碼的產(chǎn)物具有抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的功能,nm23,在分化良好的腫瘤中呈高水平表達(dá)，且,nm23,基因表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，與無病生存期，整個生存期呈正相關(guān),檢測,nm23,基因的表達(dá)高低，可以作為判斷腫瘤有無轉(zhuǎn)

42、移的一個重要指標(biāo),73,ppt課件,nm23 基因nm23基因是腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因73ppt課件,nm23,基因及表達(dá),nm23,基因：,Steeg,（美國國立癌癥研究所，,1988,）等，從,7,個轉(zhuǎn)移潛力不同的,K-1735,鼠黑色素瘤細(xì)胞株中用消減雜交分離克隆獲得,nm23,基因：在低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株中的表達(dá)強(qiáng)度是高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株內(nèi)的,10,倍，表明,nm23,基因在高轉(zhuǎn)移腫瘤中表達(dá)降低,人基因組中存在著兩個,nm23,基因，即,nm23-H1,，和,nm23-H2,，定位于,17q32.1,、,3,74,ppt課件,nm23 基因及表達(dá)nm23基因：Steeg（美國國立癌癥研,nm23,基因及表達(dá)

43、,nm23-H1 mRNA,、,nm23-H2 mRNA,：由兩個完全不同的基因轉(zhuǎn)錄,nm23-H1,、,nm23-H2,：受兩個獨(dú)立的調(diào)控系統(tǒng)調(diào)節(jié),nm23-H1,的,mRNA,的水平與癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移關(guān)系更密切,75,ppt課件,nm23 基因及表達(dá)nm23-H1 mRNA 、nm23-H,nm23,基因及表達(dá),nm23-H2,基因與,myc,基因之間功能性連接,nm23,蛋白：轉(zhuǎn)錄因子,Postel,等研究：多肽,PUF,，是,myc,轉(zhuǎn)錄的重要調(diào)節(jié)物，,PUF,可與,c-myc,啟動子特異區(qū)域相結(jié)合,Postel,等，從,Hela,細(xì)胞克隆了,PUF cDNA,，發(fā)現(xiàn)它的核苷酸序列實(shí)際上與人

44、,nm23-H2,序列一致,一系列的生化及免疫學(xué)研究證明：,PUF,與,nm23-H2,蛋白的一致性，該蛋白通過與啟動子序列特異地結(jié)合使,myc DNA,序列在體外轉(zhuǎn)錄,76,ppt課件,nm23 基因及表達(dá)nm23-H2基因與myc基因之間功能性,nm23,基因及表達(dá),目前認(rèn)為，,nm23,雖然不一定是,myc,的轉(zhuǎn)錄刺激物，但至少是,myc,的一個重要調(diào)節(jié)基因,細(xì)胞死亡時，,nm23,可以誘導(dǎo),myc,的表達(dá),nm23-H1,喪失，有助于細(xì)胞永生化,,77,ppt課件,nm23 基因及表達(dá)目前認(rèn)為，nm23 雖然不一定是myc的,nm23,表達(dá)產(chǎn)物及功能,nm23-H1,和,nm23-H2

45、,基因：編碼由,152,個氨基酸所組成的,17kD,蛋白，,nm23-H1,和,nm23-H2,的氨基酸序列同源性達(dá),88%,其氨基酸序列在,疏水性,和,電荷性,上高度保守，有,94%,的氨基酸組成是相同的,nm23,蛋白（,p17,）與核苷二磷酸激酶（,NDPK,）的氨基酸序列高度同源,nm23-H1,蛋白 與,NDPK,的同源性達(dá),89%,nm23-H2,蛋白 與,NDPK,的同源性達(dá),97%,,78,ppt課件,nm23 表達(dá)產(chǎn)物及功能nm23-H1和nm23-H2基因：,NDPK,是一類廣泛存在的酶,將,5’NTP,的一個磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到,5’NDP,上，使蛋白變?yōu)榛钚誀顟B(tài),功能：在腫瘤

46、的發(fā)生和發(fā)育上，至少參與兩個重要作用,79,ppt課件,NDPK是一類廣泛存在的酶79ppt課件,NDPK,功能之一：,,——,微管的聚合,一方面可能使微管聚合異常而引起減數(shù)分裂時紡綞體的異常，從而導(dǎo)致癌細(xì)胞染色體非整倍體的形成，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)展,另一方面它可能通過影響細(xì)胞骨架而引起細(xì)胞運(yùn)動，從而參與浸潤轉(zhuǎn)移過程和發(fā)育過程,80,ppt課件,NDPK 功能之一：——微管的聚合一方面可能使微管聚合異常,NDPK,功能之二：,,——,G,蛋白介導(dǎo)的信號傳導(dǎo),在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中，使,GDP,還原為,GTP,，從而使,G,蛋白激活,Nm23,蛋白以這種方式能調(diào)節(jié)大量的,G,蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞信號傳導(dǎo)反應(yīng)

47、，進(jìn)而參與發(fā)育和腫瘤的發(fā)展,,81,ppt課件,NDPK 功能之二： ——G蛋白介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過,nm23,基因與腫瘤轉(zhuǎn)移,Steeg PS,，等,——,nm23,基因表達(dá)與乳原癌轉(zhuǎn)移和預(yù)后的關(guān)系,17,份腫瘤標(biāo)本，原位雜交技術(shù)檢測,nm 23 mRNA,含量,結(jié)果：,瘤細(xì)胞（來自有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人）：均含有低水平的,nm23 mRNA,瘤細(xì)胞（來自無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人）：含有較高水平的,nm23 mRNA,82,ppt課件,nm23基因與腫瘤轉(zhuǎn)移Steeg PS，等82ppt課件,nm23,基因與腫瘤轉(zhuǎn)移,進(jìn)一步，對,71,例原發(fā)性乳腺癌患者進(jìn)行研究 （,nm23,基因的表達(dá)）,方

48、法,Northern blot,免疫細(xì)胞化學(xué)的方法,結(jié)果表明：,nm23,在分化良好的腫瘤呈高水平表達(dá)，,nm23,表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，與無病生存期，整個生存期呈正相關(guān),目前認(rèn)為,nm23,基因產(chǎn)物，在抑制表型中起重要作用,83,ppt課件,nm23基因與腫瘤轉(zhuǎn)移進(jìn)一步，對71例原發(fā)性乳腺癌患者進(jìn)行研,nm23,基因與腫瘤轉(zhuǎn)移,nm23,低表達(dá)與人胃癌的轉(zhuǎn)移密切相關(guān),到目前為止，,nm23,已在胃癌、骨肉瘤、膀胱癌、乳腺癌、腸癌等具有轉(zhuǎn)移潛能的腫瘤細(xì)胞中呈低表達(dá),在大腸癌中,nm23,在低表達(dá)與腫瘤狀態(tài)和遠(yuǎn)距離轉(zhuǎn)移緊密相關(guān),檢測,nm23,表達(dá)程度可以判斷腫瘤有無轉(zhuǎn)移，對臨床治療具有普遍意

49、義，國外已在,91,年開展這項常見檢查。國內(nèi)？,84,ppt課件,nm23基因與腫瘤轉(zhuǎn)移nm23低表達(dá)與人胃癌的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)8,mdm2,癌基因,1992,年，從一個含有雙微體（,murine double mimut,，,DM,）的自發(fā)轉(zhuǎn)化的,BALB 3T3DM,細(xì)胞中克隆出來的一個高度擴(kuò)增的基因,位于小鼠的第,10,號染色體的,C1-C3,區(qū),已在多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)其突變與擴(kuò)增，而且,mdm2,突變與,p53,突變不共存,mdm2,擴(kuò)增與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān),目前研究表明，,mdm2,參與細(xì)胞基本生理過程。因此，,mdm2,癌基因的變化對闡明腫瘤發(fā)病機(jī)理以及轉(zhuǎn)移機(jī)理具有重大意義，對臨床也具有指導(dǎo)

50、意義,85,ppt課件,mdm2 癌基因1992年，從一個含有雙微體（murine,mdm2,癌基因,mdm2,基因在進(jìn)化上比較保守，在許多動物細(xì)胞的染色體上都有同源序列,核苷酸序列己測定，由,2372,個堿基組成，在,3’,端和,5’,端各有數(shù)百個堿基組成的非編碼區(qū),起始密碼,AUG,從第,311,個堿基處開始，編碼區(qū)全長,1473,個堿基，編碼一個長度為,491,個氨基酸的蛋白質(zhì),86,ppt課件,mdm2 癌基因mdm2基因在進(jìn)化上比較保守，在許多動物細(xì)胞,,mdm2,基因,1992,年，,Momand,等人，首次分離和證明了大鼠的,mdm2,基因產(chǎn)物是一種分子為,90 kD,的蛋白質(zhì),

51、同年,Baraby,等人測定的分子量約,95kD,該蛋白質(zhì)的分子量是,90kD,或,95kD,，故稱為,p90,或,p95,p90,是一種高度酸性的蛋白質(zhì)，等電點(diǎn)非常低,p90,結(jié)構(gòu)：一級結(jié)構(gòu)己根據(jù),mdm2,基因的核苷酸序列推測出來，高級結(jié)構(gòu)的研究目前尚未見報道,氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)：具有,1,個核定位信號和,2,個鋅指蛋白，提示著它是一種,DNA,結(jié)合蛋白，可能具有轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用,87,ppt課件,mdm2 基因1992年，Momand等人，首次分離和證明,人,mdm2,基因,Oliner,等人，對人,mdm2,基因進(jìn)行了克隆，并定位于,12q13-4,正常情況下，人體許多器官都有,mdm2

52、mRNA,（,5.5kb,）的表達(dá)，以骨胳肌最高,在小鼠的許多器官組織中也有,mdm2 mRNA,的表達(dá)，以睪丸、胸腺和腦中最高,mdm2,在哺乳動物中有如此廣泛的表達(dá)，說明它在細(xì)胞的基本生理過程中有一定作用，根據(jù)對,mdm2,癌基因產(chǎn)物分析也提示：,mdm2,癌基因在控制細(xì)胞生長上有一定作用,88,ppt課件,人 mdm2 基因Oliner等人，對人mdm2基因進(jìn)行了克,mdm2,癌基因的成瘤性研究,mdm2,癌基因在自發(fā)轉(zhuǎn)化的,BALB/3T3DM,細(xì)胞系有高度擴(kuò)增，其擴(kuò)增程度是正常的,50,倍以上，而且這些轉(zhuǎn)化的細(xì)胞在軟瓊脂上可以生長，并在裸鼠皮下可以成瘤，成瘤速度非?？欤?1-2,周

53、內(nèi)就可以出現(xiàn)一個快速生長的腫瘤,89,ppt課件,mdm2 癌基因的成瘤性研究mdm2 癌基因在自發(fā)轉(zhuǎn)化的 B,mdm2,癌基因的成瘤性研究,用,mdm2,基因，轉(zhuǎn)染,NIH3T3,細(xì)胞和大鼠的,Rat,細(xì)胞，可以使轉(zhuǎn)染細(xì)胞的,mdm2 mRNA,水平增高,10-15,倍,過度表達(dá)的程度與,mdm2,在這些細(xì)胞內(nèi)的擴(kuò)增程度有直接關(guān)系,將轉(zhuǎn)染的細(xì)胞接種到,16,只裸鼠皮下，裸鼠均發(fā)生了腫瘤，但出現(xiàn)腫瘤的時間要晚于,3T3DM,細(xì)胞，這可能與,3T3DM,細(xì)胞的,mdm2,的表達(dá)程度較高有關(guān),動物實(shí)驗說明：,mdm2,癌基因，可以使細(xì)胞轉(zhuǎn)化和具有成瘤性，并可以促進(jìn)移植瘤的快速出現(xiàn),90,ppt課件

54、,mdm2 癌基因的成瘤性研究用mdm2基因，轉(zhuǎn)染NIH3T3,mdm2,癌基因在人類腫瘤的擴(kuò)增和表達(dá),1992,年,Oliner,等首次報道,mdm2,癌基因在人體的軟組織和骨的肉瘤中有擴(kuò)增,47,例肉瘤中有,17,例擴(kuò)增（,7,例脂肪肉瘤、,7,例惡性纖組織細(xì)胞瘤、,3,例骨肉瘤）,擴(kuò)增程度從,5-50,倍不等，在有高度擴(kuò)增的肉瘤細(xì)胞中有高水平的,mdm2,癌基因產(chǎn)物,p90,的表達(dá),91,ppt課件,mdm2癌基因在人類腫瘤的擴(kuò)增和表達(dá)1992年Oliner等,mdm2,癌基因在人類腫瘤的擴(kuò)增和表達(dá),Ladanyi,等人，研究了,28,例骨肉瘤（,16,例原發(fā)、,11,例轉(zhuǎn)移、,1,例局

55、部復(fù)發(fā)）的,mdm2,癌基因的擴(kuò)增情況，結(jié)果：,4,例（,3,例轉(zhuǎn)移和,1,例復(fù)發(fā)）有,mdm2,癌基因擴(kuò)增,在原發(fā)性骨肉瘤中未見有,mdm2,癌基因的擴(kuò)增,Ladanyi,認(rèn)為,mdm2,癌基因的擴(kuò)增可能與骨肉瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移有關(guān),92,ppt課件,mdm2癌基因在人類腫瘤的擴(kuò)增和表達(dá)Ladanyi等人，研究,mdm2,癌基因在人類腫瘤的擴(kuò)增和表達(dá),Reifenferger,等，最近發(fā)現(xiàn)：,mdm2,癌基因在人腦腫瘤中有擴(kuò)增,對,157,例人腦腫瘤檢測發(fā)現(xiàn)：,8-10%,的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和變型星型細(xì)胞瘤有,mdm2,癌基因擴(kuò)增,擴(kuò)增程度從,8-70,倍不等,93,ppt課件,mdm2癌基因在人類

56、腫瘤的擴(kuò)增和表達(dá)Reifenferger,mdm2,癌基因在人類腫瘤的擴(kuò)增和表達(dá),Sheikh,等發(fā)現(xiàn)：,在雌激素受體陽性的乳腺癌細(xì)胞系中，,mdm2 mRNA,表達(dá)水平是雌激素受體陰性細(xì)胞系的,30,倍,在良性軟組織腫瘤（脂肪瘤）和結(jié)腸、直腸、腎、宮頸癌中未發(fā)現(xiàn)有,mdm2,癌基因的擴(kuò)增,94,ppt課件,mdm2癌基因在人類腫瘤的擴(kuò)增和表達(dá)Sheikh等發(fā)現(xiàn)：94,mdm2,癌基因研究的展望,mdm2,癌基因的研究才剛剛起步，初步的研究結(jié)果己顯出來，在膠質(zhì)瘤、骨肉瘤和軟組織肉瘤中有一定關(guān)系,在骨肉瘤中檢測,mdm2,的擴(kuò)增有可能成為一個估計預(yù)后的指標(biāo),mdm2,在乳腺癌細(xì)胞系中的擴(kuò)增，但在

57、胃腸道和宮頸癌中未發(fā)現(xiàn)有擴(kuò)增,在其它腫瘤的表達(dá)情況及與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系有待進(jìn)一步探討,95,ppt課件,mdm2 癌基因研究的展望mdm2癌基因的研究才剛剛起步，初,mdm2,癌基因研究的展望,,mdm2,癌基因表達(dá)產(chǎn)物在人類為,p90,p90,可以與,p53,蛋白形成復(fù)合物（,p90-p53,），使,p53,失活,mdm2,的精確功能尚不清楚，因此它的過度表達(dá)是否可以通過其它機(jī)理，而不是通過滅活,p53,而促進(jìn)腫瘤生長,?,對其表達(dá)產(chǎn)物的氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)，具有與,DNA,結(jié)合特定模序,96,ppt課件,mdm2 癌基因研究的展望mdm2癌基因表達(dá)產(chǎn)物在人類為p,mdm2,癌基因研究的

58、展望,mdm2,基因位于,12q,，在這個區(qū)域還有其它兩個基因,sas,和,gil,，這兩個基因在一些惡腫瘤中也有擴(kuò)增,在膠質(zhì)瘤、軟組織和骨肉瘤中位于染色體同一區(qū)域的,mdm2,、,sas,和,gil,會不會同時擴(kuò)增，擴(kuò)增程度等仍是值得探討的問題,97,ppt課件,mdm2 癌基因研究的展望mdm2 基因位于12q，在這個區(qū),p16,基因,1994,年（美國冷泉實(shí)驗室,Kamb,等）新發(fā)現(xiàn)的抗癌基因,又叫,MTS,（,multiple tumor suppressor 1,）基因,是一種細(xì)胞周期中的基本基因，直接參與細(xì)胞周期的調(diào)控，負(fù)調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖及分裂,在人類,50%,腫瘤細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)有純合子

59、缺失，突變，認(rèn)為,p16,是比,p53,更重要的一種新型抗癌基因,有人把它比作細(xì)胞周期中的剎車裝置，一旦失靈則會導(dǎo)致細(xì)胞惡性增殖，導(dǎo)致惡性腫瘤發(fā)生,98,ppt課件,p16 基因1994年（美國冷泉實(shí)驗室 Kamb等）新發(fā)現(xiàn)的,p16,基因,在肺癌、乳腺癌、腦腫瘤、骨腫瘤、皮膚癌、膀胱癌、腎癌、卵巢癌和淋巴瘤、黑色素瘤中發(fā)現(xiàn)：,p16,基因純合子缺失，無義、錯義移碼突變，表明,p16,基因以缺失，突變方式廣泛參與腫瘤形成,檢測,p16,基因有無改變對判斷患者腫瘤的易感性以及預(yù)測腫瘤的預(yù)后，具有十分重要的臨床意義,99,ppt課件,p16 基因在肺癌、乳腺癌、腦腫瘤、骨腫瘤、皮膚癌、膀胱癌、,p

60、16,基因結(jié)構(gòu)及表達(dá),p16,基因定位于人染色體,9p21,，由,2,個內(nèi)含子及,3,個外顯子組成,第,1,外顯子由,126bp,組成,第,2,外顯子由,307bp,組成,第,3,外顯子由,bp,組成,p16,基因是細(xì)胞周期中的一種基本基因，其表達(dá)產(chǎn)物直接參與細(xì)胞增殖的負(fù)調(diào)節(jié),p16,基因如何調(diào)整起始轉(zhuǎn)錄？其相關(guān)調(diào)節(jié)因子有哪些？如何調(diào)節(jié)？尚不清楚,100,ppt課件,p16基因結(jié)構(gòu)及表達(dá)p16基因定位于人染色體9p21，由2個,p16,基因的表達(dá)產(chǎn)物及功能,p16,基因編碼產(chǎn)物是,p16,蛋白，定位于細(xì)胞核內(nèi),David Beach,等證明：,p16,蛋白是作用于細(xì)胞分裂周期（,cell di

61、vision cycle,，,cdc,）的關(guān)鍵酶之一,是,CDK,（,cyclin-dependent kinase,）的抑制因子,101,ppt課件,p16基因的表達(dá)產(chǎn)物及功能p16基因編碼產(chǎn)物是p16蛋白，定,p16,基因的表達(dá)產(chǎn)物及功能,cdc,基因編碼產(chǎn)物是蛋白激酶，參與調(diào)控,G1-S,，,G2-M,的關(guān)鍵點(diǎn)轉(zhuǎn)換,控制細(xì)胞分化的機(jī)制涉及到多種組成成分，最重要的是細(xì)胞周期素（,cyclin,）,Cyclin,：周期性累積與分解對細(xì)胞周期時程的調(diào)控作用,CDK,與,cyclin,復(fù)合體分別在細(xì)胞周期的不同時相發(fā)揮作用，啟動,DNA,復(fù)制及誘發(fā)有絲分裂,CDK,可能是調(diào)控細(xì)胞周期裝置的核心，

62、通過對一系列關(guān)鍵底物磷酸化作用來調(diào)節(jié)細(xì)胞周期,102,ppt課件,p16基因的表達(dá)產(chǎn)物及功能cdc基因編碼產(chǎn)物是蛋白激酶，參與,Cell cycle,103,ppt課件,Cell cycle103ppt課件,p16,基因的表達(dá)產(chǎn)物及功能,CDK,與,cyclin,復(fù)合體參與,G1-S,轉(zhuǎn)換的調(diào)控,p16,蛋白抑制,CDK,活性，最終阻止細(xì)胞進(jìn)入,S,期,p16,基因（因缺失，突變等原因）功能缺失，則不能抑制,CDK,，最終導(dǎo)致細(xì)胞進(jìn)入惡性增殖，加速腫瘤發(fā)生,104,ppt課件,p16基因的表達(dá)產(chǎn)物及功能CDK與cyclin復(fù)合體參與G1,p16,基因的表達(dá)產(chǎn)物及功能,CDK-cyclin,可作

63、用于多種癌基因產(chǎn)物，如：,pp60c-syc,，,c-abl,產(chǎn)物，對其進(jìn)行磷酸化修飾調(diào)節(jié)，,CDK-cyclin,亦可作用于某些抗癌基因產(chǎn)物，如：,Rb,蛋白磷酸化后則生長抑制功能喪失，在,G1/S,交界處，,CDK-G1 cyclin,，使,Rb,磷酸化而失活，細(xì)胞從靜止態(tài)進(jìn)入增殖態(tài),可見，,p16,基因是一種非常重要的抗癌基因，,p16,基因失活，則會引起細(xì)胞惡性增殖,105,ppt課件,p16基因的表達(dá)產(chǎn)物及功能CDK-cyclin可作用于多種癌,p16,基因與腫瘤,Gianic,等：,定量,PCR,檢測了,32,例惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤的,p16,外顯子,2,發(fā)現(xiàn)：,59%,惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤中

64、，,p16,基因的量有改變，根據(jù)光密度掃描，,24%,的病人是因,p16,基因純合子缺失所致,106,ppt課件,p16 基因與腫瘤Gianic等：106ppt課件,p16,基因與腫瘤,JenJ,，等：,PCR,技術(shù)檢測,57,例腦腫瘤,p16,基因,發(fā)現(xiàn),26,例出現(xiàn)純合子缺失,,107,ppt課件,p16 基因與腫瘤JenJ，等：107ppt課件,p16,基因與腫瘤,Kamb,等,從肺癌、乳腺癌、囊腫瘤、骨腫瘤、皮膚癌、膀胱癌、腎癌、卵巢癌、淋巴瘤等中檢測出,50%,以上的,p16,基因純合子缺失,在黑色素瘤中，還檢出無義錯義，移碼突變,研究表明：,p16,基因參與了各種組織的腫瘤形成,檢

65、測,p16,基因的突變與缺失，是判斷腫瘤的性質(zhì)及預(yù)后的一項重要指標(biāo),108,ppt課件,p16 基因與腫瘤Kamb等108ppt課件,p16,基因與腫瘤,p16,基因體積小，只有,p53,的,1/10,p16,基因用于基因診療、更易操作，對臨床腫瘤治療更具有現(xiàn)實(shí)意義,研究,p16,基因正是目前及今后一段時期的熱點(diǎn),109,ppt課件,p16 基因與腫瘤p16基因體積小，只有p53的1/1010,抗腫瘤基因的實(shí)驗證據(jù),,,1,．遺傳性腫瘤中某些基因的丟失,早在,70,年代已經(jīng)證明：某些遺傳性腫瘤中染色體的某些位點(diǎn)可發(fā)生專一的丟失,視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的,40,％屬先天性,這些遺傳性病例（大多為雙側(cè)性）

66、的患兒，約,5,％可見,13q14,的一個等位基因位點(diǎn)的缺失，而且腫瘤發(fā)生時，腫瘤細(xì)胞中另一個等位基因也發(fā)生了缺失，成為純合體,提示：第一次的缺陷屬先天性，第二次屬體細(xì)胞突變（,A.Kmudson,，提出了“兩次突變”學(xué)說）,110,ppt課件,抗腫瘤基因的實(shí)驗證據(jù) 1．遺傳性腫瘤中某些基因的丟失,,只有兩個等位基因同時缺失時才發(fā)生視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，因此這種抗視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的原癌基因（,Rb,基因）具有顯著性的意義,根據(jù)酯酶,D,的測定和與染色體,13,有關(guān)的限制性內(nèi)切片段長并多態(tài)性（,restriction fragment length polymorphism,，,RFLP,）證明：,至少,50,％的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞中存在純合體的,13q14,、,20,缺失,經(jīng)治療后痊愈的兒童，以后易患肉瘤，而這種瘤細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)了,13,號染色體標(biāo)志位點(diǎn)的缺失,111,ppt課件,只有兩個等位基因同時缺失時才發(fā)生視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，因此這種抗視,,另一個相似的例子是腎母細(xì)胞瘤（,Wilm,瘤），在腫瘤細(xì)胞中出現(xiàn)純合子的,11q13,的缺失,11p,標(biāo)記位點(diǎn)的缺少還與肝母細(xì)胞瘤，小兒橫紋肌肉瘤