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1、1.食品檢驗為什么要測定細(xì)菌菌落總數(shù)? 答:測定細(xì)菌菌落總數(shù)是檢驗食品純度程度的指標(biāo)，也是判斷其保存能力的指標(biāo)。 2.食品中檢出的菌落總數(shù)是否代表該食品上的所有細(xì)菌數(shù)?為什么？ 答: 不能代表該食品上所有細(xì)菌菌數(shù)。因為在實驗過程中會造成細(xì)菌的損失或死亡，食品上的細(xì)菌包括了各種各樣的微生物。 3.為什么營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基在使用前要保持(48士2)℃的溫度? 答：因為營養(yǎng)瓊脂溫度，若溫度高于(48士1)℃ 容易將驗樣中的菌燙死；若溫度低于(48士1) ℃則營養(yǎng)瓊脂會凝固，影響培養(yǎng)效果。 4.大腸菌群檢驗中為什么首先要用乳糖膽鹽發(fā)酵管? 答: 因為乳糖膽鹽發(fā)酵管

2、中的成分有溴甲酚紫，中性時呈藍(lán)紫色，酸性時呈黃色。如果顏色不變(量藍(lán)紫色)，說明無產(chǎn)酸的大腸菌群；如果顏色變黃色，說明可能出現(xiàn)能分解乳糖產(chǎn)酸的大腸菌群；膽鹽可以抑制其它細(xì)菌生長繁殖；看杜氏小管中是否有氣體，判斷是否為分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的大腸自群。 5.做空白對照實驗的目的? 答:目的是檢驗培養(yǎng)基是否受到污染，驗證無菌操作。 6.為什么大腸菌群的檢驗要經(jīng)過復(fù)發(fā)酵才能證實？ 答:初發(fā)酵是樣品的發(fā)酵結(jié)果，不是大腸菌群純菌的發(fā)酵試驗，有可能受其它雜菌影響判斷結(jié)果。進(jìn)行證實實驗避免假陽性結(jié)果。 7.復(fù)發(fā)酵為什么使用乳糖發(fā)酵管但不需加膽鹽? 答: 膽鹽能抑制革蘭氏陽性菌等

3、雜菌生長，在初發(fā)酵培養(yǎng)基已經(jīng)加入膽鹽抑制革蘭氏陽性菌生長，并在EMB培養(yǎng)基上進(jìn)行分離培養(yǎng)，因此復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)時無需乳糖發(fā)酵管，以免大腸菌群受到抑制。 8.用油鏡觀察時應(yīng)注意哪些問題?在載玻片和鏡頭之間加滴什么油?起什么作用? 答:應(yīng)要擦掉油加香柏油，作用是增加折光率,也就是增加了顯微鏡的分辨率。油的折光率和分辨率成反比(有公式),同時與波長成正比。 9.比較低倍鏡、高倍鏡及油鏡各方面的差異。為什么在使用高倍鏡及油鏡時應(yīng)特別注意避免粗調(diào)節(jié)器的誤操作？ 答:使用高倍鏡和油鏡時鏡頭距高標(biāo)本較近，而粗調(diào)節(jié)器的調(diào)節(jié)幅度較大，粗調(diào)節(jié)器的誤操作會使鏡頭大幅度向標(biāo)本移動，很容易損壞標(biāo)本和鏡

4、頭。一般先用低倍鏡找到物象后換到高倍鏡，就只需要用細(xì)調(diào)節(jié)器了。 10.什么是物鏡的同焦現(xiàn)象?它在顯微鏡觀察中有什么意義? 答:在一般情況下，當(dāng)物像在一種物鏡中已清晰聚焦后轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn)到工作位置進(jìn)行觀察時，物像將保持基本準(zhǔn)焦的狀態(tài)。這種現(xiàn)象稱為物鏡的同焦。利用這種同焦現(xiàn)象，可以保證在使用高倍鏡或油鏡等放大倍數(shù)高、工作距離短的物鏡時僅用細(xì)調(diào)節(jié)器即可對物像清晰聚焦，從而避免由于使用粗調(diào)節(jié)器時可能的誤操作而損壞鏡頭或載玻片。 11.影響顯微鏡分辨率的因素有那些? 答:物鏡的NA值（物鏡的數(shù)值孔徑)與照明光源的波長。 12.應(yīng)如何根據(jù)所觀察微生物的大小，選擇不

5、同的物鏡進(jìn)行有效地觀察？ 答:細(xì)菌用油鏡，真菌用高倍鏡。都是先用低倍鏡找到目標(biāo)后，再用高倍鏡太調(diào)到合適的視野和合適的清晰度。 如：放線菌、酵母菌、多細(xì)胞真菌相對較大，用放大40倍的物鏡就可以看了；細(xì)菌小，要用放大1000倍的物鏡看，感覺還很??；病毒那就要用電子顯微鏡看了。 13.那些環(huán)節(jié)會影響革蘭色染色結(jié)果的正確性?其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是什么? 答:涂片環(huán)節(jié)、加熱固定環(huán)節(jié)、脫色環(huán)節(jié)，其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是脫色環(huán)節(jié)。 14.進(jìn)行革蘭氏染色時。為什么特別強(qiáng)調(diào)菌齡不能太老。用老齡細(xì)菌染色會出現(xiàn)什么問題? 答:著色不均，染色效果不好；陰性陽性不明顯，分不太清楚，問題是不便于

6、顯微鏡下觀察是陽性茵還是陰性菌。 15.革蘭氏染色時，初染前能加碘液嗎?乙醇脫色后復(fù)染之前，革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性茵應(yīng)分別是什么顏色? 答:不可以。因為碘與染料會結(jié)合成大分子，使得染料分子不能穿過細(xì)胞的細(xì)胞壁，對實驗結(jié)果造成影響。脫色后、復(fù)染前，革蘭氏陽性菌呈紫色，陰性菌無色。 16.不經(jīng)過復(fù)染這一步，能否區(qū)別革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌? 答:不行。在復(fù)染之前，革蘭氏陰性菌是無色透明的。在顯微鏡下很難觀察到或者脫色過度，也會造成陽性菌脫色。不經(jīng)過復(fù)染，無法進(jìn)一步區(qū)別。 17.為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀察? 答：1.若未完全干燥載玻片上的液體會污染

7、油鏡鏡頭，鏡頭非常精密被污染后不利于下次觀察。2.若未完全干燥，水滴會影響油與玻璃之間折光率，造成視野不夠清晰。 18.如果涂片未以熱固定將會出現(xiàn)什么問題?加熱溫度過高、時間太長，又會怎么樣呢? 答：如果沒有加熱固定的話，水分蒸發(fā)太慢或者在染色時菌體會被沖洗掉；如果加熱時間過久，菌體變形或形態(tài)破壞，無法染色。 19.制各培養(yǎng)基的一般程序是什么? 答:稱量一一溶解——調(diào)pH值——融化瓊脂——過濾分裝——包扎標(biāo)記——滅菌一一倒干板。 20.做過實驗后，你認(rèn)為在制各培養(yǎng)基時應(yīng)注意些什么問題? 答:溶解配料的水要適量；pH要調(diào)節(jié)合適；要小心手提式高壓鍋的使用；倒平板

8、時要防止培養(yǎng)基被污染。 21.滅菌在微生物學(xué)實驗操作中有何重要意義? 答:防止培養(yǎng)基被污染；防止雜菌影響實驗結(jié)果。 22.試述高壓蒸汽滅菌的操作方法和原理？? 答:高壓滅菌的原理是:在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.1MPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121℃，在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢。 操作方法: 加水——裝料、加蓋一一排氣一一升壓、保壓和降壓一一取料 23.高壓蒸汽滅菌時應(yīng)注意哪些事項? 答:第一：無菌包不易過大，不易過緊，各包裹間要有間隙，使蒸汽能對流易滲透到

9、包裹中央。第二：布類物品應(yīng)放在金屬類物品上，否則蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮，阻礙蒸汽進(jìn)入包裹中央，嚴(yán)重影響滅菌效果。第三：定期檢查滅菌效果。 24.如何確定平板上某單個菌落是否為純培養(yǎng)? 答:通過觀察菌落特征；單個菌落再次劃線分離。 25.試述如何在接種中，貫徹?zé)o菌操作的原則? 答:保持操作臺的無菌狀態(tài)與在無菌室操作；操作前，要進(jìn)行手的消毒；接種環(huán)要加熱滅菌；接種物品要標(biāo)記。 ?? 26.為何要用乳酸-石炭酸溶液作霉菌水浸片? 答:用乳酸-石炭酸的優(yōu)點是可使細(xì)胞不變形，具有殺菌、防腐作用；不易干燥，能保持軟長時間；能防止孢于四處飛散。 27.比較霉菌

10、菌絲與假絲酵母菌絲的區(qū)別 答:假絲酵母是指能形成假菌絲、不產(chǎn)生子囊孢子的酵母。假菌絲沒有橫隔，各細(xì)胞間僅以狹小的面積相連，呈藕節(jié)狀，在分隔處溢縮。霉菌的菌絲大多有橫隔， 整個菌絲的直徑粗細(xì)胞直徑一致，且分枝與主于的直徑一致；菌絲頂端常呈鈍圓形，相連細(xì)胞間的橫隔面積與細(xì)胞直徑一致，是竹節(jié)狀的細(xì)胞串。假菌絲與真茵絲明顯不同處在于其兩細(xì)胞間有一細(xì)腰，而不象直正菌絲橫隔處兩細(xì)胞寬度一致。 28.細(xì)菌與酵母菌的菌落有何區(qū)別？ 答:細(xì)菌菌落光滑，易于基質(zhì)脫離；酵母菌菌落較細(xì)菌菌落大而厚且酵母菌的菌落較濕潤。 29.為什么隨著顯微鏡放大倍數(shù)的改變。目鏡測微計每格相對的長度也會改變?能

11、找出這種變化的規(guī)律嗎? 答:因為目鏡測微尺所測量的是微生物細(xì)胞經(jīng)地顯微鏡放大之后所成像的大??；規(guī)律是刻度實際代表的長度隨使用的目鏡和物鏡放大倍數(shù)及鏡簡的長度而改變。 30.根據(jù)測量結(jié)果。為什么同種酵母菌的菌體大小不完全相同? 答:菌株之間的生長期不同；受環(huán)境的影響；遺傳的基因表達(dá)不完全一致。 31.能否用血球計數(shù)板在油鏡下進(jìn)行計數(shù)?為什么? 答:不能。計數(shù)時滴在血球計數(shù)板上的是懸菌液，相當(dāng)于在鏡頭和計數(shù)板直接加了一層水。水層會降低視野的亮度和顯微鏡的分辨率，造成菌體和網(wǎng)格線不清晰. 32.血球計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自那些方面?如何減少誤差? 答:誤差主要來自試劑誤差、方法誤差、儀器誤差；減少誤差有保持樣品的純凈、細(xì)胞溶液必須震蕩均勻、樣品濃度要適中、血球計數(shù)板整潔清晰。 33.菌種保藏中，石蠟油的作用是什么? 答:作用是密封，防止空氣進(jìn)入，降低菌種的生理活性。 34.經(jīng)常使用的細(xì)菌菌株，使用哪種保藏方法比較好? 答:用甘油冷凍保藏方法保存，在液體培養(yǎng)基中加入15%的甘油，然后低溫冷凍（-7度)左右。