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1、優(yōu)選精品文檔 歡迎下載選用 DNA的粗提取和鑒定 知識要點(diǎn)：1.DNA的物理化學(xué)性質(zhì)，尤其是DNA的溶解性; 2.二苯胺法鑒定DNA的方法和原理。 一、DNA的粗提取的原理 思考1:DNA存在于真核生物細(xì)胞的哪些部位？ 思考2:提取生物大分子的一般思路是什么？ 1、DNA的性質(zhì): ①DNA和蛋白質(zhì)的溶解性、對酶、高溫和洗滌劑的耐受性 在NaCl溶液中的溶解度 對蛋白酶的耐受性 對高溫的耐受性 對洗滌劑的耐受性 DNA 蛋白質(zhì) ?溶解度 ②DNA粗提取的原理有些哪些？ i、DNA在mol/LNaCl溶液中溶解度最小 ii

2、、DNA不溶于溶液，而蛋白質(zhì)等能夠溶解 2、DNA鑒定的原理： 在的條件下，DNA遇會被染成。 二、DNA粗提取的主要步驟： 1、材料選擇： 適于作實(shí)驗(yàn)材的材料：選用的生物材料；如雞（紅）血，其適宜作為實(shí)驗(yàn)材料的 原因：①雞血（紅）細(xì)胞核的DNA含量豐富，材料易得；②雞血細(xì)胞極易吸水脹破。 哺乳動物紅細(xì)胞呢？ 2、主要實(shí)驗(yàn)步驟（以雞血紅細(xì)胞為例）： 「方法：將5?10mL雞血細(xì)胞液加入20mL中；用玻棒同方 1*向攪拌5min;用3?4紗布過濾，以除去顆粒較大的雜質(zhì)過濾； :①破碎細(xì)胞，釋放J西徉 ；,收集° i*?CNA.?（格物質(zhì)？??.?*:目的：破壞細(xì)胞，釋放

3、核物質(zhì) I注意：攪拌不能用力過大，以防止打碎DNA分子； 「方法：向?yàn)V液中加入2倍體積的mol/LNaCl溶液，攪拌1min; ：②溶解細(xì)胞核;過濾獲取 ：內(nèi)DNAX目的：使與DNA結(jié)合的解聚，釋放出;DNA溶解于高溶液 N"NaCl溶液中 、注意：按同一方向攪拌 「方法：沿?zé)谙驗(yàn)V液中緩慢加入蒸儲水，并輕輕按同一方向攪拌，使DNA析 ③ DNA : 析出： 出，直到;可以在玻棒上收集到黏稠物（或過濾或離心收集黏稠物） 目的：降低NaCl溶液濃度達(dá)到mol/L左右，使DNA析出 k注意：加入的蒸儲水不能過多，使NaCl溶液濃度過低，DN取會 尸方法：向20mL2m

4、ol/LNaCl溶液中加入黏稠物，并按同一方向攪拌3min,使 DNA充分溶解；過濾，收集濾液；向?yàn)V液中貼壁緩慢加入50mL冷凍的 95%乙醇，并用玻棒按同一方向緩慢、均勻地?cái)嚢?，在玻棒上收集白色絲狀物（DNA） L原理：DNA不溶于中，而蛋白質(zhì)能溶于史二 歸納：①本實(shí)驗(yàn)中幾次過濾？過濾的目的是什么？ 過濾一： 過濾二： 過濾三： ②本實(shí)驗(yàn)中幾次加入蒸儲水的目的各是什么？ 第一次：向雞血細(xì)胞液中加入蒸儲水，目的： 第二次：向溶解DNA的2mol/LNaCl溶液中加入蒸儲水，目的: 拓展：1、以菜花為材料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，如何獲得核物質(zhì)？ 取材、剪碎一加入洗滌劑、食鹽一研磨、過

5、濾 ▲加洗滌劑的目的： ▲加入食鹽的目的： 2、分析教材中方案一、二、三的原理。 萬案一： 萬案一： 方案二： 3、探究不同方法、洗滌劑、食鹽用量對DNA粗提取量的影響（說說實(shí)驗(yàn)思路） 三、DNA的鑒定： 1、方法：①取甲、乙兩支試管，并向其中加入5mL（等量）的2mol/LNaCl溶液； ②向甲試管中加入粗提取的DNA,并攪拌使DNA溶解；③向兩支試管中各加入4mL （等量）二苯胺試劑，混勻，沸水中加熱5min,待試管冷卻后，比較兩支試管的顏色 （藍(lán)色）變化。 2、注意點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)中需要對照，目的：證明 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評價(jià) 1、實(shí)驗(yàn)結(jié)果評價(jià)：是否提取到DNA?

6、 ①觀察提取的DNA顏色：如果不是白色絲狀物，說明DNA中的雜質(zhì)較多；②二苯胺鑒定：出現(xiàn)藍(lán)色說明實(shí)驗(yàn)基本成功，如果不呈現(xiàn)藍(lán)色，可能所提取的DNA含量低，或 是實(shí)驗(yàn)操作中出現(xiàn)錯(cuò)誤，需要重新制備。 2、粗提取得到的絲狀物為什么略帶黃色？ 實(shí)驗(yàn)提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)。 3、影響絲狀物總量的因素有哪些？實(shí)驗(yàn)材料種類和數(shù)量、溶解核DNA時(shí)的NaCl 溶液濃度、實(shí)驗(yàn)方法、攪拌方法（攪拌不當(dāng)可能破壞DNA） 五、案例：（快速閱讀、理解步驟原理） 以菜花為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行DNA的粗提取 【實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備】將新鮮菜花和體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液放入冰箱冷凍室24h【提取DN

7、A的具體步驟】 1、取材稱取30g菜花，去梗取花，切碎。 2、研磨將碎菜花放入研缽中，倒入10mL研磨液，充分研磨10min。 教材中建議采用洗發(fā)香波、洗滌劑等一些去污劑，使植物細(xì)胞膜破碎，釋放DNA。 學(xué)生可以設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)，比較哪一種方法可以提取到純度更高的DNA。一般實(shí)驗(yàn)室提取 高純度的DNA都采用一種陽離子去污劑一十六烷三甲基澳化俊分離緩沖液，使細(xì)胞膜破碎，同時(shí)將DNA與植物中多糖等雜質(zhì)分開，再用氯仿一異丙醇混合液（體積比為 24：1）抽提去除雜質(zhì)蛋白，得到高純度的DNA。 3、過濾在漏斗中墊上尼龍紗布，將菜花研磨液過濾到燒杯中（有條件的學(xué)?？蓪V 液倒入塑料離心管中進(jìn)行

8、離心，用1000r/min的轉(zhuǎn)速，離心2?5min,取上清液放入燒 杯中）。在4c冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液。 4、沉淀將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分?jǐn)?shù)為95%的預(yù)冷乙醇溶液中， 并用玻璃棒緩緩、輕輕地?cái)嚢枞芤海úＡО舨灰辈宓綗撞浚?。沉??5min后，可 見白色的DNA絮狀物出現(xiàn)。用玻璃棒緩緩旋轉(zhuǎn)，將絮狀物纏繞在玻璃棒上。 六、訓(xùn)練題： 1 .在DNA粗提取的過程中，兩次向燒杯中加入蒸儲水的作用分別是 A.稀釋血液；沖洗樣品B.使血細(xì)胞破裂；降低氯化鈉的濃度 C.使血細(xì)胞破裂；增大DNA的溶解度D.使血細(xì)胞破裂；沖洗樣品 2 .下列實(shí)驗(yàn)中所用試劑錯(cuò)誤的是

9、 A.在觀察植物細(xì)胞有絲分裂實(shí)驗(yàn)中，使用醋酸洋紅溶液使染色體著色 B.在提取葉綠體色素實(shí)驗(yàn)中，使用丙酮提取色素 C.在DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中，使用氯化鈉溶液析出DNA D.在蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)中，使用蘇丹出染液鑒定蛋白質(zhì) 3 .NaCl的物質(zhì)量為多少mol/L時(shí)，DNA的溶解度最小 A.0.12B.0.13C,0.14D,0.15 4 .在提取的細(xì)胞核物質(zhì)的溶液中，加入2mol/L的NaCl溶液40ml目的是 A.溶解雜質(zhì)B.溶解蛋白質(zhì)C.析出DNAD.溶解DNA 5 .從細(xì)胞核中提取DNA所用的提取溶液是 A.NaCl溶液B.酒精C.蒸儲水D.檸檬酸鈉 6 .提取含雜

10、質(zhì)較少的DNA所用的溶液 A.NaCl溶液B.冷卻90%的酒精C.加熱95%的酒精D.冷卻95%的酒精 7 .DNA遇二苯胺(沸水浴)時(shí)，會染成 A.磚紅色B.紅色C.紫色D,藍(lán)色 8 .可以鑒定DNA的物質(zhì)是 A.斐林試劑B.95%的酒精C.甲基綠溶液D.二苯胺溶液 9 .破譯生物基因組DNA的遺傳信息或進(jìn)行基因操作，首先要提取細(xì)胞核DNA。下列不 適宜彳乍為DNA提取的實(shí)驗(yàn)材料是 A.雞血細(xì)胞B.蛙的紅細(xì)胞C.人的成熟紅細(xì)胞D.菜花 10 .(多選)下表是關(guān)于DNA粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中所使用的材料、操作及其作用的表 述.正確的是 試齊 操作 作用 A 檸檬酸

11、鈉溶液 與雞血混合 防止血液凝固 B 蒸儲水 與雞血細(xì)胞混合 保持細(xì)胞形狀 C 蒸儲水 加入到溶解有DNA的NaCl中 析出DNA絲狀物 D 冷卻的酒精 加入到過濾后DNA的NaCl中 產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng) 11 .(多選)下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的說法不正確的是 A.洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜，同時(shí)也能控制DNA在NaCl溶液中的溶解度 B.在探究洗滌劑對植物細(xì)胞DNA提取的影響實(shí)驗(yàn)中，需要控制的變量是洗滌劑和 植物細(xì)胞 C.常溫下，DNA遇二苯胺被染成藍(lán)色 D.將濾液放在60?75c的恒溫水浴箱中保溫10?15分鐘能去除濾液中的雜質(zhì)，其原理是利用了DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同 12 .如圖所示是關(guān)于“DNA的粗提取和物理性狀觀察”實(shí)驗(yàn): (1)實(shí)驗(yàn)材料選用雞血球液，而不用雞全血，主要原因是雞血球液中含有較高含量的。 (2)在圖A所示的實(shí)驗(yàn)步驟中加蒸儲水的目的是，通過圖B所示的步驟取得濾液，再在溶液;圖中 燕 中加入2mol/LNaCl溶液的目的是 C所示實(shí)驗(yàn)步驟中加蒸儲水的目的是 DNA ,可滴加 成 O (3)為鑒定實(shí)驗(yàn)所得絲狀物主要成分是果絲狀物被染 優(yōu)選精品文檔歡迎下載選用