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稍難
纖維素分解菌的篩選
1、2、3、7
5、6
剛果紅染色法及實(shí)驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)
4
8
一、選擇題(每小題4分,共20分)
1.從土壤中篩選纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),下列流程正確的是
( )。
A.土壤取樣→梯度稀釋→稀釋涂布平板→挑選菌落
B.土壤取樣→選擇培養(yǎng)→稀釋涂布平板→挑選菌落
C.土壤取樣→梯度稀釋→選擇培養(yǎng)→挑選菌落
D.土壤取樣→梯度稀釋→稀釋涂布平板→選擇培養(yǎng)→挑選菌落
解析 本題考查纖維素分解菌的分離過程的有關(guān)
2、知識(shí)。正確的流程是“土壤取樣→選擇培養(yǎng)→稀釋涂布平板→挑選菌落”,其中選擇培養(yǎng)的目的是增加纖維素分解菌的濃度,因此需要在稀釋涂布平板之前進(jìn)行,最后根據(jù)菌落的特征挑選纖維素分解菌。
答案 B
2.在對(duì)纖維素分解菌進(jìn)行選擇培養(yǎng)用液體培養(yǎng)基的目的是
( )。
A.用液體培養(yǎng)基可獲得大量菌體
B.纖維素分解菌適宜在液體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)
C.用液體培養(yǎng)基可以使菌體充分利用培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)
D.用液體培養(yǎng)基可獲得高純度的纖維素分解菌
解析 使用液體選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌,一方面可以獲得大量纖維素分解菌,另一方面便于稀釋涂布平板。
答案 A
3.在將樣品稀釋涂布到鑒別纖維素分解菌的培
3、養(yǎng)基之前,一般先進(jìn)行選擇培養(yǎng),其主要目的是
( )。
A.完全除去其他微生物
B.沒有意義,去掉這一步更好
C.增加纖維素分解菌的濃度
D.使纖維素分解菌充分長(zhǎng)大
解析 如果在所采集的土樣中纖維素分解菌含量較少,稀釋涂布到鑒別培養(yǎng)基上后形成的菌落數(shù)就更少,不利于挑選所需菌落。通過選擇培養(yǎng)可以增加纖維素分解菌的濃度,以確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物。這種培養(yǎng)不能純種分離,故A錯(cuò)。
答案 C
4.兩種剛果紅染色法的結(jié)果是
( )。
A.均會(huì)出現(xiàn)透明圈
B.均不會(huì)出現(xiàn)透明圈
C.方法一出現(xiàn),方法二不出現(xiàn)
D.方法一不出現(xiàn),方法二出現(xiàn)
解析 兩種剛果紅染色法都會(huì)出
4、現(xiàn)透明圈,但方法一在加入剛果紅溶液時(shí)會(huì)造成菌落混雜,而先加入剛果紅的方法則可能出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。
答案 A
5.下列有關(guān)分解纖維素微生物的分離的敘述,不正確的是
( )。
A.纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵
B.對(duì)分解纖維素的微生物進(jìn)行了初步篩選后,無需再進(jìn)行其他實(shí)驗(yàn)
C.纖維素酶的測(cè)定方法,一般是對(duì)所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量的測(cè)定
D.纖維素酶是一種復(fù)合酶
解析 初步篩選只是分離純化的第一步。為確定得到的是纖維素分解菌,還需要進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)生纖維素酶的實(shí)驗(yàn)。
答案 B
二、非選擇題(共30分)
6.(10分)某研究性學(xué)習(xí)小組的同學(xué)為了從土壤中篩選纖維素分解菌,利用下列材
5、料和用具進(jìn)行了實(shí)驗(yàn),請(qǐng)完善下列實(shí)驗(yàn)步驟。
材料用具:采集的土樣、研缽、配制纖維素分解菌培養(yǎng)基的各種原料、瓊脂、纖維素粉、剛果紅溶液、培養(yǎng)箱、無菌水。
實(shí)驗(yàn)步驟:
(1)利用纖維素分解菌培養(yǎng)基的各種原料、瓊脂及______,配制固體培養(yǎng)基,滅菌。
(2)將采集的土壤樣品在研缽中研碎后______,制成土壤勻漿。
(3)利用無菌操作方法把土壤勻漿______到培養(yǎng)基上,放在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)一段時(shí)間。
(4)用顯微鏡觀察纖維素分解菌時(shí),要從______中挑取材料制成臨時(shí)裝片。
解析 分離纖維素分解菌的培養(yǎng)基中要加入纖維素粉作碳源,加入剛果紅溶液加以檢測(cè),剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物,纖維
6、素分解菌在含有剛果紅和纖維素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng),其產(chǎn)生的纖維素酶能分解纖維素,在菌落周圍產(chǎn)生透明圈。挑取周圍有透明圈的菌落制成臨時(shí)裝片可觀察到纖維素分解菌。
答案 (1)纖維素粉和剛果紅溶液
(2)加入無菌水 (3)接種 (4)周圍有透明圈的菌落
7.(10分)某同學(xué)為了從土壤中分離得到纖維素分解菌,進(jìn)行了以下操作。
第一步:土壤取樣。用小鐵鏟和普通信封將土取回,然后倒入一燒瓶中,加蒸餾水稀釋,塞好棉塞。
第二步:制備培養(yǎng)基。
纖維素粉 5 g
NaNO3 1 g
Na2HPO4·7H2O 1.2 g
KH2PO4 0.9 g
M
7、gSO4·7H2O 0.5 g
KCl 0.5 g
酵母膏 0.5 g
水解酪素 0.5 g
待其他物質(zhì)溶解后加水定容到1 000 mL。
第三步:菌懸液涂布平板。用接種環(huán)取少量土壤稀釋溶液在以上培養(yǎng)基表層涂布。
第四步:培養(yǎng)觀察。把接種好的培養(yǎng)皿放到35 ℃的恒溫箱中培養(yǎng)1~2 d,觀察并記錄菌落的生長(zhǎng)情況。
根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)操作,完成下列題目:
(1)找出該同學(xué)明顯的操作錯(cuò)誤。
___________________________________________________________
_________
8、____________________________________________________。
(2)要想增加該實(shí)驗(yàn)的說服力,還應(yīng)該怎么做?
解析 從土壤中分離微生物一般的流程是:土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→菌懸液涂布平板→挑選出單個(gè)菌落。該實(shí)驗(yàn)步驟不完整,且在前三步操作中都沒有進(jìn)行無菌操作,因而無法說明分解纖維素的微生物一定來自土壤。要想增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力,設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)必不可少。
答案 (1)第一步:取樣工具應(yīng)提前滅菌;不能用蒸餾水,應(yīng)用無菌水;土壤取回后的操作應(yīng)在火焰旁進(jìn)行。第二步:培養(yǎng)基制備好后應(yīng)滅菌。第三步:接種應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行,應(yīng)用滅菌的吸管或移液器取樣品。
(
9、2)一是設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn),再配制一組無纖維素粉的培養(yǎng)基,接種該土壤樣品培養(yǎng)觀察。二是最后要對(duì)該微生物進(jìn)行鑒定,用剛果紅染色法鑒定該微生物的菌落,看周圍是否出現(xiàn)透明圈。
8.(10分)現(xiàn)在大力提倡無紙化辦公,但是仍然不可避免的每年要產(chǎn)生大量的廢紙,其主要成分是木質(zhì)纖維,人類正努力將其轉(zhuǎn)化為一種新的資源——乙醇。下圖是工業(yè)上利用微生物由纖維素生產(chǎn)乙醇的基本工作流程,請(qǐng)回答相關(guān)問題。
(1)自然界中①環(huán)節(jié)需要的微生物大多分布在______的環(huán)境中。將從土壤中獲得的微生物培養(yǎng)在以______為碳源,并加入______的培養(yǎng)基上篩選周圍有______的菌落。
(2)如上所述的篩選中獲得了三個(gè)菌落,
10、對(duì)它們分別培養(yǎng),并完成環(huán)節(jié)②,且三種等量酶液中酶蛋白濃度相同,則你認(rèn)為三種酶液的活性______(“一定相同”“不一定相同”“一定不同”),可以通過______進(jìn)行定量測(cè)定。
(3)根據(jù)測(cè)定結(jié)果:①環(huán)節(jié)常選擇木霉,則②中獲得的酶是______酶。該酶至少包括______三個(gè)組分。
(4)生產(chǎn)中可以滿足④環(huán)節(jié)的常見菌種是______,為了確保獲得產(chǎn)物乙醇,⑤環(huán)節(jié)要注意______,④過程要注意避免______。
解析 (1)廢紙的主要成分是木質(zhì)纖維,因而使其糖化的酶應(yīng)為纖維素酶,由此得知①中的產(chǎn)酶微生物應(yīng)該大多分布在富含纖維素的環(huán)境中。能分解纖維素的微生物的分離篩選需要用到以纖維素為唯一碳
11、源的培養(yǎng)基,若想直接從此選擇培養(yǎng)基中篩選出分解纖維素的微生物,則可以利用直接在培養(yǎng)基中加入剛果紅的方法,挑選周圍有透明圈的菌落。(2)由于個(gè)體差異,不同菌的產(chǎn)酶量不一定相同,因此可以通過對(duì)纖維素酶分解纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量測(cè)定來確定。(3)分解纖維素的酶是一種復(fù)合酶,包括C1酶、Cx酶、葡萄糖苷酶等組分。(4)在工業(yè)生產(chǎn)上通常利用酵母菌將葡萄糖液發(fā)酵產(chǎn)生酒精。發(fā)酵過程中要注意保證無氧條件,避免染上雜菌,使發(fā)酵失敗。
答案 (1)富含纖維素(或落葉較多等) 纖維素 剛果紅 透明圈
(2)不一定相同 對(duì)纖維素酶分解纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖
(3)纖維素 C1酶、Cx酶、葡萄糖苷酶
(4)酵母菌 發(fā)酵裝置密閉(或保證無氧條件等) 污染雜菌
專心---專注---專業(yè)