《藥物分析學(xué)：總論 第6章 藥物的含量測(cè)定》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《藥物分析學(xué)：總論 第6章 藥物的含量測(cè)定（63頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、總論總論 第六章 藥物的含量測(cè)定藥物分析學(xué)藥物分析學(xué)目 錄 第一節(jié) 概述1第二節(jié) 容量分析2第三節(jié) 分光光度法3第四節(jié) 色譜法4 第五節(jié) 含量測(cè)定方法驗(yàn)證5本章學(xué)習(xí)要求1. 熟悉藥物及其制劑的含量限度表示方法2. 掌握容量分析滴定反應(yīng)原理與含量計(jì)算方法；v熟悉常用滴定劑、相應(yīng)的基準(zhǔn)物質(zhì)和指示劑3. 掌握HPLC法和GC法的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、含量計(jì)算；v熟悉常用HPLC、GC色譜柱、檢測(cè)器、條件的選擇4. 掌握UV法測(cè)定藥物含量的原理與計(jì)算方法；v熟悉紫外-可見(jiàn)分光光度儀的檢定方法；v了解熒光分光光度法和原子吸收分光光度法測(cè)定藥物含量的原理與應(yīng)用5. 熟悉藥物含量測(cè)定分析方法的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 第一節(jié) 概

2、述v藥物的含量是藥物質(zhì)量的主要指標(biāo)v含量測(cè)定（assay）理化方法測(cè)定 v效價(jià)測(cè)定（assay of potency）生物學(xué)方法或酶學(xué)方法測(cè)定 v化學(xué)原料藥的含量測(cè)定：強(qiáng)調(diào)測(cè)定結(jié)果的精密度 v制劑的含量測(cè)定：偏重方法的選擇性藥典對(duì)藥物的含量限度的表示方法v原料藥：以%表示（一般以干燥品計(jì)）凡未規(guī)定上限的，藥典凡例中規(guī)定，其含量上限不得超過(guò)101.0%按原料藥本身形式計(jì)算其含量由于藥物組成不定，需以另一種穩(wěn)定形式計(jì)算含量舉例v地塞米松磷酸鈉 按干燥品計(jì)算，含C22H28FNaO8P應(yīng)為96.0%-102.0%。v硫酸慶大霉素 按無(wú)水物計(jì)算，每1mg的效價(jià)不得少于590慶大霉素單位。v阿司匹林含C

3、9H6O4不得少于99.5% v氫氧化鋁含氫氧化鋁按Al2O3計(jì)算，不得少于48.0%。制劑的含量限度表示方法：按標(biāo)示量計(jì)算直接用%含量規(guī)定范圍以重量規(guī)定含量范圍標(biāo)示量=規(guī)格量=處方量例：維生素B1注射液含維生素B1 應(yīng)為標(biāo)示量的95.0%105.0%例：復(fù)方碘溶液 含 I 應(yīng)為4.50% 5.50% 含 KI 應(yīng)為9.5% 10.5%例：復(fù)方磺胺甲噁唑片磺胺甲噁唑 0.3600.440g /片 甲氧芐氨嘧啶72.088.0mg /片常用含量測(cè)定方法(2005年版ChP） 儀器法 容量法 其他法 HPLC 29.4%非水法 15.3% 生物學(xué) 8.1%VIS-UV 21%酸堿法 7.5%重量法

4、 0.8%旋光 0.5%銀量法 3.4%原子吸收 0.3%碘量法 3.3%GC 0.3%EDTA法 2.9%熒光 0.1%亞硝酸鈉法 2.1%其他容量法 5%一、含量計(jì)算1.原料藥及以%表示的制劑v 直接滴定法 樣品%=VFT/ W100%滴定度T與1ml規(guī)定（理論）濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)物的mg數(shù).T=（M被測(cè)物 /a ） mol/L標(biāo)準(zhǔn)液（理論）a為與1摩爾被測(cè)物相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液摩爾數(shù)。第二節(jié) 容量分析法濃度校正因子 F=N實(shí)實(shí)/N理理剩余滴定法樣品%=（V空白空白 V樣樣 ) FT/ W100%方法：樣品 + 標(biāo)準(zhǔn)液1（過(guò)量定量）剩余的標(biāo)準(zhǔn)液1 + 標(biāo)準(zhǔn)液2回滴定 V2樣空白 + 標(biāo)準(zhǔn)液

5、1（同樣量）剩余的標(biāo)準(zhǔn)液1 + 標(biāo)準(zhǔn)液2回滴定 V2空白v 片劑：VFT/ W 100%v 針劑： VFT/ W 100%3. 以重量/片計(jì)的計(jì)算公式 VFT/ W平均片重=重量/片2.相當(dāng)于標(biāo)示量%的計(jì)算公式平均片重標(biāo)示量標(biāo)示量1片粉重注射液體積例1 異煙肼含量測(cè)定v稱取異煙肼約0.25g，置100mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取25mL，加水50 mL與鹽酸20 mL，加甲基橙指示液1滴，用溴酸鉀滴定液(0.01667mol/L)緩緩滴定至粉紅色消失。v已知：異煙肼取樣0.2545g ， 消耗溴酸鉀滴定液(F=1.005) 18.30mL，每1mL溴酸鉀滴定液（0.016

6、67 mol/L）相當(dāng)于3.429mg異煙肼。樣品%=V FT/ W100% 18.30 1.0053.429 0.2545/100251000 100% =99.1%=v取本品約0.1g, 精密稱定（0.1022g)，置250ml碘量瓶中，加水10mL，振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25 mL，再加鹽酸5 mL，立即密塞并振搖1分鐘，暗處?kù)o置15分鐘后，微開(kāi)瓶塞，加碘化鉀試液10 mL，立即密塞，搖勻，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點(diǎn)時(shí)加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。v已知：樣品消耗硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）15.

7、73 mL，空白試驗(yàn)消耗23.21 mL，每1mL溴滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于13.01mg的司可巴比妥鈉，硫代硫酸鈉滴定液F=1.038。例2 司可巴比妥鈉的含量測(cè)定：樣品%=（V空白空白 V樣樣 ) FT/ W100% (23.21-15.73) 1.03813.01 0.10221000 =98.8%100%=思考題1. 溴滴定液是如何配制的？在本方法中需要標(biāo)定嗎？在滴定反應(yīng)中，加鹽酸后溴滴定液起了怎樣的化學(xué)反應(yīng)？2. 空白試驗(yàn)在本方法中起什么作用？3. 為什么要待近終點(diǎn)時(shí)加入淀粉指示液？4. 滴定度T=13.01mg的由來(lái)？v取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于

8、葡萄糖酸鈣1g），置100ml量瓶中加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25ml，加水75ml, 加氫氧化鈉試液15ml，用EDTA滴定液（0.05mol/L）滴定。每1mLEDTA滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于22.42mg的C12H22CaO14H2O。v已知：20片重12.0640g，取片粉1.2058g，消耗EDTA滴定液(0.0501 mol/L)11.22mL，規(guī)格0.5g/片例3 葡萄糖酸鈣片含量測(cè)定規(guī)定取樣量規(guī)定取樣量/ /規(guī)格規(guī)格= =應(yīng)稱取片粉應(yīng)稱取片粉/ /平均片重平均片重可稱取范圍：可稱取范圍：應(yīng)稱取量應(yīng)稱取量 10%10%11.2222.42(0.05

9、01/0.05) 12.064/20 1.205825/100 1000 0.5 100%=100.9%13二、酸堿滴定法v滴定類型多為強(qiáng)酸強(qiáng)堿滴定弱堿弱酸藥物，以鹽酸、硫酸、氫氧化鈉為滴定劑v溶劑根據(jù)藥物的酸堿性、溶解度、穩(wěn)定性等性質(zhì)，選用水、中性乙醇等為溶劑 v應(yīng)用 以水為溶劑：枸櫞酸 以中性乙醇為溶劑：芳酸類、磺酰胺類藥物v指示劑、滴定劑酚酞，氫氧化鈉滴定液三、非水溶液滴定法v本法主要用于測(cè)定有機(jī)堿及其氫鹵酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽或有機(jī)酸鹽，以及有機(jī)酸堿金屬鹽類藥物的含量，也用于測(cè)定某些有機(jī)弱酸的含量v藥典收載了兩種方法： 第一法為測(cè)定有機(jī)弱堿及其鹽類 第二法為測(cè)定有機(jī)弱酸及其鹽類 常用非水

10、溶劑種類 溶劑種類溶劑種類最常用溶劑最常用溶劑特性特性v 酸性溶劑酸性溶劑 v 冰醋酸冰醋酸，醋酐，醋酐，甲酸，甲酸v 可增強(qiáng)有機(jī)弱堿的相對(duì)可增強(qiáng)有機(jī)弱堿的相對(duì)堿度堿度v 堿性溶劑堿性溶劑 v 乙二胺、乙醇乙二胺、乙醇胺、胺、二甲基甲二甲基甲酰胺酰胺v 可增強(qiáng)有機(jī)弱酸的相對(duì)可增強(qiáng)有機(jī)弱酸的相對(duì)酸度酸度v 兩性溶劑兩性溶劑 v 甲醇、乙醇甲醇、乙醇v 兼有酸堿兩性，用作不兼有酸堿兩性，用作不太弱的酸堿物質(zhì)的介質(zhì)太弱的酸堿物質(zhì)的介質(zhì)v 惰性溶劑惰性溶劑 v 苯，三氯甲烷苯，三氯甲烷，二氧六環(huán)二氧六環(huán)v 無(wú)酸堿性，常與上述溶無(wú)酸堿性，常與上述溶劑混合使用，增加滴定劑混合使用，增加滴定突躍和試樣的溶解

11、性突躍和試樣的溶解性第一法（非水堿量法）v精密稱取供試品適量約消耗高氯酸滴定液（0.1mol/L）8mL，加冰醋酸1030mL使溶解，加各藥品項(xiàng)下規(guī)定的指示液12滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定。終點(diǎn)顏色應(yīng)以電位滴定時(shí)的突躍點(diǎn)為準(zhǔn)，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正 v影響因素： 溫度、水分、溶劑的選擇、指示終點(diǎn)方法以及被測(cè)物酸根等溫度影響v滴定與標(biāo)定時(shí)的溫度差別： 超過(guò)10，則應(yīng)重新標(biāo)定 若未超過(guò)10，根據(jù)公式校正)(0011.010101ttNN冰醋酸的膨脹系數(shù)t1為滴定時(shí)溫度t0為標(biāo)定時(shí)溫度N0為t0時(shí)高氯酸滴定液的濃度N1為t1時(shí)高氯酸滴定液的濃度水分影響v反應(yīng)體系中不應(yīng)有水，因?yàn)?/p>

12、水既是質(zhì)子的受體，又是質(zhì)子的供體，可與弱酸弱堿發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)，影響終點(diǎn)判斷 H2O H3O+RHN2 + H+RNH3+H2O OHROH + BRO_+ BH+_+BH+溶劑選擇v對(duì)于不同堿性的雜環(huán)類藥物只有選擇合適的溶劑和指示終點(diǎn)方法才能獲得滿意的滴定結(jié)果 雜環(huán)類藥物 Kb10-8 10-1010-1010-1210-12合適的溶劑 冰醋酸冰醋酸-醋酐醋酐冰醋酸中加入不同量甲酸也能增大突躍范圍 常用指示劑（結(jié)晶紫）v結(jié)晶紫為多元弱堿，在不同pH中顯示不同的顏色變化，滴定不同強(qiáng)度的堿性藥物時(shí)終點(diǎn)顏色不同v滴定堿性較強(qiáng)的藥物時(shí)，終點(diǎn)以藍(lán)色或藍(lán)綠色為主v滴定堿性較弱的藥物時(shí)，一般以綠色為終點(diǎn)v滴定更弱

13、的堿性藥物時(shí)，終點(diǎn)顏色為黃色v在確定指示劑的終點(diǎn)顏色變化時(shí)應(yīng)以電位法為對(duì)照 黃 黃綠 綠 藍(lán)綠藍(lán) 藍(lán)紫 紫pH 低-高堿式色酸式色各種酸根的影響 l 冰醋酸溶液中各酸根的酸性強(qiáng)弱如下： 高氯酸 氫溴酸硫酸鹽酸 硫酸氫根硝酸 磷酸、有機(jī)酸采取措施：HX加 HgAc2 HgX2 H2SO4生物堿的硫酸鹽通常為2分子生物堿與1分 子硫酸成鹽,可直接滴定至HSO-4 （注意摩爾比）HNO3 可氧化指示劑，改用電位法磷酸、有機(jī)酸無(wú)需處理，直接滴定應(yīng)用v胺類藥物： 鹽酸利多卡因，重酒石酸去甲腎上腺素，鹽酸克侖特羅、硫酸沙丁胺醇等v含氮雜環(huán)類藥物： 氫溴酸東莨菪堿、硫酸奎寧、硝酸毛果蕓香堿、馬來(lái)酸氯苯那敏等

14、；v維生素類藥物： 維生素B1第二法 （酸量法）v滴定液甲醇鈉、甲醇鋰、氫氧化四丁基胺v溶劑二甲基甲酰胺 v注意滴定過(guò)程中應(yīng)防止溶劑和堿滴定液吸收大氣中的二氧化碳和水蒸氣，以及滴定液中溶劑的揮發(fā)v應(yīng)用異維A酸、芐氟噻嗪、環(huán)吡酮等 銀量法銀量法 碘量法和溴量法碘量法和溴量法 亞硝酸鈉法亞硝酸鈉法 絡(luò)合滴定法絡(luò)合滴定法直接滴定、剩余滴定、置換滴定直接滴定、剩余滴定、置換滴定費(fèi)休氏水分測(cè)定法（費(fèi)休氏水分測(cè)定法（Karl Fischer Titration） v本法為非水氧化還原滴定反應(yīng)，采用的滴定液稱費(fèi)休氏試液，由碘、二氧化硫、吡啶和無(wú)水甲醇組成。利用碘氧化二氧化硫時(shí)需要一定的水分參加反應(yīng)v反應(yīng)可逆

15、，用吡啶吸收生成的HI和SO3，形成氫碘酸吡啶和硫酸酐吡啶。但硫酸酐吡啶不穩(wěn)定，無(wú)水甲醇可使其轉(zhuǎn)變成穩(wěn)定的甲基硫酸氫吡啶 I2 + SO2 + H2O 2HI + SO3I2+SO2+3N+CH3OH+H2ONHINHSO4CH32+方法與計(jì) 算v測(cè)定方法：精密稱取供試品適量（約消耗費(fèi)休氏試液15ml），除另有規(guī)定外，溶劑為無(wú)水甲醇，用水分測(cè)定儀直接測(cè)定?；?qū)⒐┰嚻分酶稍锏木呷Ｆ恐?，加溶?5ml，在不斷振搖（或攪拌）下用費(fèi)休氏試液滴定至溶液由淺黃色變?yōu)榧t棕色，或用永停滴定法指示終點(diǎn)，另作空白試驗(yàn)，按下式計(jì)算：供試品中水分(%)=（VaVb）FW 100%本法專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確度高，適用于受熱易

16、被破壞的藥物的水分測(cè)定，如抗生素類藥物的水分測(cè)定26注意事項(xiàng)：（1）每1ml新配的費(fèi)休氏試液約相當(dāng)于5mg的水，由于試液不穩(wěn)定，逐漸變質(zhì)，因此費(fèi)休氏試液需在臨用前1h內(nèi)標(biāo)定。一般F值應(yīng)在4.0mg/ml以上，當(dāng)F值降低到3.0mg/ml以下時(shí)，滴定終點(diǎn)不敏銳，不宜再用。（2）本法測(cè)定結(jié)果的精確度取決于多種因素，如試劑成分的相對(duì)濃度、溶解樣品的溶劑性質(zhì)、操作技術(shù)、空氣濕度等，尤其是測(cè)定系統(tǒng)中的水分。因此必須嚴(yán)格規(guī)范操作，所用儀器必須干燥，并能避免空氣中水分的侵入，操作宜在干燥處進(jìn)行，并注意避光，整個(gè)操作應(yīng)迅速，不應(yīng)在陰雨天或空氣濕度太大時(shí)進(jìn)行測(cè)定。第三節(jié) 光譜分析一紫外分光光度法（一）儀器校正與

17、檢定 1.波長(zhǎng)校正：用汞燈中的較強(qiáng)譜線或儀器中氚燈的486.02nm、656.10nm譜線進(jìn)行校正2.吸收度的準(zhǔn)確度檢定：測(cè)定重鉻酸鉀的硫酸溶液在規(guī)定波長(zhǎng)處的吸收系數(shù)進(jìn)行檢定 3.雜散光的檢查：用碘化鈉，亞硝酸鈉溶液測(cè)定規(guī)定波長(zhǎng)處的透光率（二）對(duì)溶劑的要求 以空氣為空白（空白光路中不置任何物質(zhì)）測(cè)定溶劑的吸光度（使用波長(zhǎng)附近應(yīng)符合規(guī)定）%1cm%1cm%1cm%1cm（三）測(cè)定法1.測(cè)定波長(zhǎng)核對(duì) （規(guī)定波長(zhǎng) 2 nm內(nèi)），并以吸光度最大波長(zhǎng)為測(cè)定波長(zhǎng)2.吸收度讀數(shù)范圍（0.30.7） 3.同批溶劑為空白試驗(yàn)（校正比色皿和空白溶劑的吸收）4.測(cè)定方法吸收系數(shù)法對(duì)照品比較法計(jì)算分光光度法比色法1.

18、百分吸收系數(shù)法A= E1%cmCLC（%） = A / E1%cm 樣品% =F = 稀釋倍數(shù)和濃度換算因子，W = 取樣量A FE1%cm WE值的大小反映了藥物對(duì)某一波長(zhǎng)光的吸收能力，也反映了測(cè)定反應(yīng)的靈敏度。采用E法測(cè)定含量時(shí)，一般取三位有效數(shù)字表示，E值小于100的一般不宜采用0.390 10100393 0.0105= 含量%100例1 己酸孕酮稱取己酸孕酮0.0105g, 加無(wú)水乙醇溶解后,置10ml容量瓶中,稀釋至刻度,搖勻。吸取1.00ml, 置100ml容量瓶中, 加無(wú)水乙醇稀釋至刻度, 置1cm吸收池內(nèi)進(jìn)行測(cè)定, 根據(jù)下列已知條件, 求出按干燥品計(jì)算的己酸孕酮百分含量。A=

19、0.390, E1%1cm=393100%吸收系數(shù)（E1%cm）測(cè)定方法 v精密稱取被測(cè)物對(duì)照品適量（雙份），加溶劑制成一定濃度的溶液，使吸光度在0.60.8之間v精密吸取適量，用同批溶劑將溶液稀釋一倍v在規(guī)定波長(zhǎng)分別測(cè)定高低濃度的溶液，v計(jì)算吸收系數(shù)（E）值，v要求： 在五種不同型號(hào)的紫外儀上測(cè)定 同一臺(tái)儀器測(cè)定二份間結(jié)果的偏差應(yīng)不超過(guò)1.0% 各臺(tái)儀器測(cè)得的E值，RSD應(yīng)不超過(guò)1.5% 取平均值為該藥物的吸收系數(shù)（注明測(cè)定時(shí)溫度）2.對(duì)照品比較法A樣/A對(duì) = C樣/C對(duì)樣品%= A樣/A對(duì) C對(duì)F/ W100%F=稀釋倍數(shù)，W=取樣量雙波長(zhǎng)法，差示法，熒光法，均可應(yīng)用此公式，以A，熒光強(qiáng)

20、度代替吸收度A例2 鹽酸嗎啡片與注射液v本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于鹽酸嗎啡10mg)置100ml量瓶中，加水溶解至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液15ml，置50ml量瓶中，加0.2mol/L氫氧化鈉25ml，用水稀釋至刻度，搖勻，UV法測(cè)定。另取嗎啡對(duì)照品適量，精密稱定，用0.2mol/L氫氧化鈉稀釋至每ml中約含20ug的溶液，同法測(cè)定。計(jì)算，結(jié)果乘以1.317，即得C17H19NO3HCl3H2O的含量.(規(guī)格5mg)A樣C對(duì)50 100 1.317 片重 A對(duì)15 取樣1000 5100%1.317=M3H2O/M=375.85/285.34方法的特點(diǎn)與影響因素

21、v特點(diǎn)：簡(jiǎn)便、快速、靈敏（10-410-7 g/ml）、有一定專屬性和準(zhǔn)確度（相對(duì)誤差2%左右），應(yīng)用范圍廣（制劑含量、溶出度、含量均勻度測(cè)定），儀器價(jià)廉易普及v影響因素：溶劑、溶液pH值 普魯卡因 去氧腎上腺素 （三）計(jì)算分光光度法v雙波長(zhǎng)分光光度法（復(fù)方磺胺類藥物的測(cè)定）v三點(diǎn)校正法（維生素A的）v解線性方程組法等v使用時(shí)應(yīng)注意，當(dāng)在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測(cè)定吸光度時(shí)，波長(zhǎng)的微小變化可對(duì)測(cè)定結(jié)果造成顯著影響 （四）比色法v在藥物分析中應(yīng)用的比色法：v酸性染料比色法（含氮堿性藥物如：硫酸阿托品片、氫溴酸東莨菪堿片的測(cè)定）v四氮唑比色法、異煙肼比色法和Kober反應(yīng)法（甾體激素類藥物）

22、v蛋白質(zhì)的雙縮脲反應(yīng)（硫酸軟骨素的測(cè)定）v總黃酮、總生物堿的測(cè)定（中藥制劑）二、熒光分光光度法（Fluorescence Spectrophotometry） v熒光法測(cè)定的是物質(zhì)分子的發(fā)射光譜。在一定條件下，物質(zhì)的濃度與其熒光（也稱發(fā)射光）強(qiáng)度成正比關(guān)系，可用于定量分析 v測(cè)定方法 對(duì)照品對(duì)照法 Cx= RxRxbRrRrbCr 熒光分析法的特點(diǎn) v靈敏（檢測(cè)限可達(dá)10-1010-12g/ml）v專屬（ex和em）v適于低濃度溶液分析。濃度過(guò)大，熒光會(huì)發(fā)生“自熄滅”現(xiàn)象，導(dǎo)致熒光強(qiáng)度與溶液濃度不成正比 v干擾因素多，如溶劑種類與純度、溶液pH、溫度，共存物質(zhì)、溶液中的懸浮物、玻璃儀器的潔凈度

23、等，因此必須做空白試驗(yàn)v常用基準(zhǔn)溶液校正儀器，如： 硫酸奎寧的稀硫酸溶液（藍(lán)色熒光） 熒光素鈉水溶液（黃綠色熒光） 羅丹明B水溶液（紅色熒光） 三、原子吸收分光光度法（Atomic Absorption Spectrophotometry，AAS） v原理由待測(cè)元素作為陰極的空心陰極燈發(fā)出的特征譜線，通過(guò)供試品經(jīng)原子化產(chǎn)生的原子蒸氣時(shí)，被蒸氣中待測(cè)元素的基態(tài)原子所吸收，測(cè)定該特征譜線輻射光強(qiáng)度減弱的程度，求出供試品中待測(cè)元素的含量v遵循一般分光光度法的吸收定律。用于呈原子狀態(tài)的金屬元素和部分非金屬元素的測(cè)定v含量測(cè)定方法采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法和標(biāo)準(zhǔn)加入法標(biāo)準(zhǔn)曲線法v制備含待測(cè)元素的對(duì)照品溶液至少3份，

24、濃度依次遞增，并分別加入各品種項(xiàng)下制備供試品溶液的相應(yīng)試劑，同時(shí)以相應(yīng)試劑制備空白對(duì)照液v依次測(cè)定空白對(duì)照液和各濃度對(duì)照品溶液的吸光度，記錄讀數(shù)（3次），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線v制備供試品溶液，測(cè)定吸光度，取3次讀數(shù)的平均值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的濃度，計(jì)算元素的含量 標(biāo)準(zhǔn)加入法v取同體積按規(guī)定制備的供試品溶液4份，分別置4個(gè)同體積的量瓶中v除1號(hào)量瓶外，其他量瓶分別精密加入不同濃度的待測(cè)元素對(duì)照品溶液,分別用去離子水稀釋至刻度v制成從零開(kāi)始遞增的一系列溶液供試液取用量中待測(cè)元素的含量AAS法的局限性v主要是工作曲線的線性范圍較窄，一般為1個(gè)數(shù)量級(jí)；每測(cè)一種元素需要更換1個(gè)燈，對(duì)于多種元素同時(shí)測(cè)定時(shí)非常

25、不便 42 第四節(jié) 色譜分析一、HPLC法v根據(jù)固定相與流動(dòng)相的極性大小，分為：NP-HPLC以吸附機(jī)理為主RP-HPLC以分配機(jī)理為主vRP-HPLC法適合于中等極性或非極性的弱酸、弱堿和中性化合物的分離分析v絕大部分藥物均可用RP-HPLC法進(jìn)行分析 色譜柱與流動(dòng)相1.RP-HPLC色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠（ODS或C18、C8柱、氨基柱、氰基柱等流動(dòng)相：甲醇-水（或緩沖鹽）、乙腈-水（或緩沖鹽）、四氫呋喃-水（或緩沖鹽）（過(guò)濾脫氣）l洗脫力強(qiáng)弱依次為四氫呋喃乙腈甲醇水 v化學(xué)鍵合固定相適用pH28的流動(dòng)相；C18 鏈在水相環(huán)境中不易保持伸展?fàn)顟B(tài)，故流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的比例應(yīng)不低于5%，

26、否則C18鏈的隨機(jī)卷曲將導(dǎo)致組分保留值的變化，造成色譜系統(tǒng)不穩(wěn)定 色譜條件選擇v調(diào)節(jié)流動(dòng)相中有機(jī)溶劑比例可調(diào)整被測(cè)物的保留時(shí)間，近似規(guī)則：v流動(dòng)相中有機(jī)溶劑降低10%，溶質(zhì)的容量因子約增加3倍v40%甲醇的強(qiáng)度33%乙腈23%四氫呋喃v也可用三種、四種混合溶劑作為流動(dòng)相 例如 2.NP-HPLCvNP-HPLC硅膠柱v流動(dòng)相溶劑有： 正己烷-異丙醇；正己烷-乙醇；正己烷-二氯甲烷等 洗脫力強(qiáng)弱依次為乙醇異丙醇二氯甲烷正己烷v正反相色譜相互轉(zhuǎn)換時(shí)，須用過(guò)渡溶劑依次沖洗v如由反相正相時(shí)，依次用甲醇異丙醇正己烷沖洗v而由正相反相時(shí)，則以反方向進(jìn)行沖洗 檢測(cè)器v選擇性檢測(cè)器 紫外、二極管陣列（DAD）

27、、熒光、電化學(xué) 響應(yīng)值與待測(cè)液濃度有關(guān)，還與化合物結(jié)構(gòu)有關(guān)v通用型檢測(cè)器 示差折光、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 對(duì)所有的化合物均有響應(yīng)v更專屬、更靈敏的檢測(cè)器質(zhì)譜v不同檢測(cè)器對(duì)流動(dòng)相的要求不同，如 紫外檢測(cè)器應(yīng)考慮有機(jī)溶劑的截止使用波長(zhǎng) 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器和質(zhì)譜檢測(cè)器不允許使用含不揮發(fā)鹽組分的流動(dòng)相v柱效v分離度v拖尾因子v重復(fù)性 取對(duì)照溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差RSD應(yīng)小于2.0%(T=0.951.05)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)105. 02dWTh系統(tǒng)的精密度：每次開(kāi)機(jī)后，首先要做的日常工作，不能作為分析方法學(xué)研究中的精密度試驗(yàn) )(70. 1)(22/,22/, 112hhRRWWttRWWtt

28、RRR21)(212色譜參數(shù)測(cè)量為滿足系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求，可以改變一些條件，如色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度、牌號(hào)、載體粒度、流動(dòng)相流速、組成比例、柱溫等，但不能改變固定相種類， 流動(dòng)相組成和檢測(cè)器類型測(cè)定方法與應(yīng)用v定量方法內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法vHPLC法是藥物制劑、多組分樣品分析的首選方法，是各國(guó)藥典收載的方法中應(yīng)用最廣的方法v在原料藥的含量測(cè)定中，HPLC法主要用于多組分抗生素或生化藥品，或因所含雜質(zhì)的干擾測(cè)定，而常規(guī)方法又難以分離或分離手段繁雜的化學(xué)品種。如： 慶大霉素的組分測(cè)定，-內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類等抗生素的含量測(cè)定 甾體激素類藥物的含量測(cè)定 例 醋酸氫化可的松的含量測(cè)定v取對(duì)照品適量，精密

29、稱定，加甲醇定量稀釋成每1mL中約含0.35mg的溶液。精密量取該溶液和內(nèi)標(biāo)溶液（0.30mg/mL炔諾酮甲醇溶液）各5mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取10L注入液相色譜儀。另取本品適量，同法測(cè)定，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算含量。v已知：對(duì)照品取樣36.2mg，樣品取樣35.5mg，測(cè)得對(duì)照液中醋酸氫化可的松和內(nèi)標(biāo)的峰面積分別為5467824和6125843，樣品液中兩者的峰面積分別為5221345和6122845，求本品含量？ 5221345/61228455467824/612584336.2mg35.5mg 100%=97.4%二、GC法 v色譜柱分為填充柱和毛細(xì)管柱 柱極性固定相非

30、極性100%二甲基聚硅氧烷弱極性5%-苯基-95%甲基聚硅氧烷5%-二苯基-95%二甲基聚硅氧烷中極性35%二苯基-65%甲基聚硅氧烷50%二苯基-50%二甲基聚硅氧烷6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷14%氰丙基苯基-86%二甲基聚硅氧烷極性PEG-20MCarbowax 20M載氣v有氮?dú)?、氦氣和氫氣v由高純度氣體發(fā)生器或高壓鋼瓶提供，經(jīng)過(guò)適當(dāng)減壓、除濕和純化后進(jìn)入進(jìn)樣器和色譜柱v根據(jù)供試品性質(zhì)和檢測(cè)器種類選擇載氣，最常用的載氣為氮?dú)鈜載氣流速：填充柱一般流速為3060ml/min毛細(xì)管柱一般流速為13ml/min檢測(cè)器 檢測(cè)器種類FID檢測(cè)器氮磷檢測(cè)器火焰光度檢測(cè)器電子捕獲檢測(cè)器質(zhì)譜檢

31、測(cè)器熱導(dǎo)檢測(cè)器特點(diǎn)對(duì)碳?xì)浠衔镉辛己庙憫?yīng)，適合大多數(shù)藥物對(duì)含氮、磷元素的化合物有很高的靈敏度對(duì)含磷、硫元素的化合物靈敏度高適合于含鹵素的化合物給出某個(gè)成分的結(jié)構(gòu)信息，用于結(jié)構(gòu)確證可用于水分等測(cè)定進(jìn)樣方式與進(jìn)樣量 1. 溶液直接進(jìn)樣v手動(dòng)進(jìn)樣時(shí)應(yīng)注意操作的一致性，以達(dá)到良好的精密度要求v填充柱進(jìn)樣量不超過(guò)數(shù)微升v毛細(xì)管柱進(jìn)樣不超過(guò)1微升，分流進(jìn)樣2. 頂空進(jìn)樣體積一般為1毫升 手動(dòng)自動(dòng)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)與測(cè)定方法 v系統(tǒng)適用性試驗(yàn)同HPLC項(xiàng)下的規(guī)定v為達(dá)到系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求，可改變色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度、載體牌號(hào)、粒度、固定液涂布濃度、載氣流速、柱溫、進(jìn)樣量、檢測(cè)器的靈敏度等。但不得改變檢測(cè)器種類、固定

32、液品種及特殊指定的色譜柱材料v一般色譜圖約于30分鐘內(nèi)記錄完畢v內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法和標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法v應(yīng)用例如：維生素E及其制劑的含量測(cè)定 第五節(jié) 藥物含量測(cè)定方法驗(yàn)證 1. 專屬性（空白、可能的雜質(zhì)、輔料、破壞試驗(yàn)、粗品），提供相應(yīng)圖譜2. 線性與范圍（至少5個(gè)濃度系列標(biāo)準(zhǔn)液）3. 精密度（重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性），用高中低濃度9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)4. 準(zhǔn)確度（回收試驗(yàn)、加樣回收試驗(yàn)），高中低濃度9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)5. 耐用性（不同牌號(hào)柱、流動(dòng)相組成比例、流速、pH、溫度、測(cè)定液穩(wěn)定性等）回收試驗(yàn)vR=C測(cè)/C標(biāo)100%vR= (C總-C底)/C標(biāo)100% v舉例：地非三唑注射液的HPLC含量測(cè)定方法學(xué)研究 v 謝謝!