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1、 課題3分解纖維素的微生物的分離 1.纖維素酶是一種復(fù)合酶，包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶等組分。 2．纖維素酶的作用： 3．剛果紅可與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。 4．以纖維素為主要碳源的選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)可以增加纖維素分解菌的濃度。 5．分離后，為確定得到的是纖維素分解菌，還需進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)。 一、纖維素與纖維素酶 1.纖維素 (1)化學(xué)組成： (2)含量：是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。 (3)分布：棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物，此外，木材、作物秸稈等也富含纖

2、維素。 2.纖維素酶 (1)組成：纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括三種組分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。 (2)作用： 二、纖維素分解菌的篩選 1.原理：纖維素分解菌產(chǎn)生的纖維素酶能分解剛果紅和纖維素形成的紅色復(fù)合物，使培養(yǎng)基上出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。 2.方法：剛果紅染色法 三、實(shí)驗(yàn)流程 四、纖維素分解菌的進(jìn)一步鑒定 1.為確定得到的透明圈中的菌落是纖維素分解菌，需要進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)，發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。 2.纖維素酶的測定方法，一般是采用對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量測定。 1．尋

3、找纖維素分解菌應(yīng)到(　　) A．濕潤的環(huán)境中 B．富含纖維素的環(huán)境中 C．富含無機(jī)鹽的環(huán)境中 D．池塘中 解析：選B　在尋找目的菌株時(shí)，要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找，因此尋找纖維素分解菌應(yīng)到富含纖維素的環(huán)境中尋找。 2．在加入剛果紅的培養(yǎng)基中出現(xiàn)透明圈的菌落是(　　) A．分解尿素的細(xì)菌　　　 B．硝化細(xì)菌 C．分解纖維素的細(xì)菌 D．乳酸菌 解析：選C　分解纖維素的細(xì)菌能將纖維素分解，剛果紅—纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。 3．微生物體內(nèi)能夠使纖維素分解成纖維二糖的酶是(　　) A．C1酶和CX酶 B．C1酶和

4、葡萄糖苷酶 C．CX酶和葡萄糖苷酶 D．C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶 解析：選A　纖維素酶屬于復(fù)合酶，至少包含C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶三種組分。其中C1酶和CX酶能將纖維素分解成纖維二糖，葡萄糖苷酶則將纖維二糖分解成葡萄糖。 4．篩選出纖維素分解菌后還需要用下列哪項(xiàng)實(shí)驗(yàn)來確定(　　) A．發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶 B．發(fā)酵產(chǎn)纖維素 C．纖維素酶分解濾紙 D．纖維素分解產(chǎn)生葡萄糖 解析：選A　為確定得到的透明圈中的菌落是否是纖維素分解菌，需要進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。 5．下列關(guān)于從土壤中篩選纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)步驟的排列順序，正確的是(　

5、　) A．土壤取樣→梯度稀釋→稀釋涂布平板→挑選菌落 B．土壤取樣→選擇培養(yǎng)→稀釋涂布平板→挑選菌落 C．土壤取樣→梯度稀釋→選擇培養(yǎng)→挑選菌落 D．土壤取樣→梯度稀釋→稀釋涂布平板→選擇培養(yǎng) 解析：選B　從土壤中篩選纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)流程是“土壤取樣→選擇培養(yǎng)→稀釋涂布平板→挑選菌落”，其中選擇培養(yǎng)的目的是增加纖維素分解菌的濃度，因此需要在稀釋涂布平板之前進(jìn)行，最后根據(jù)菌落的特征挑選纖維素分解菌的菌落。 1．纖維素酶 (1)纖維素酶的組成及作用： (2)纖維素酶作用的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證： 試管 1 2 濾紙條 1 cm×6 cm 1 cm×6 cm 緩沖

6、液(pH＝4.8) 10 mL 11 mL 纖維素酶(70～80 u/mL) 1 mL — 條件 將試管固定在50 mL的錐形瓶中，在揺床上以140 r/min的轉(zhuǎn)速振蕩反應(yīng)1 h 結(jié)果 濾紙條被完全分解 濾紙條基本無變化 2．纖維素分解菌的篩選——剛果紅染色法 (1)原理： (2)染色方法： 方法一：培養(yǎng)基經(jīng)涂布培養(yǎng)長出菌落→覆蓋質(zhì)量濃度為1 mg/mL的CR溶液倒去CR溶液→加入物質(zhì)的量濃度為1 mol/L的NaCl溶液倒掉NaCl溶液→出現(xiàn)透明圈。 方法二：配制質(zhì)量濃度為10 mg/mL的CR溶液→滅菌→按照每200 mL培養(yǎng)基加入1 mL的比例加

7、入CR溶液→混勻→倒平板→接種后培養(yǎng)→出現(xiàn)透明圈。 (3)兩種剛果紅染色法的比較： 方法一 方法二 區(qū)別 先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng) 倒平板時(shí)就加入剛果紅 優(yōu)點(diǎn) 顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用 操作簡便，不存在菌落混雜問題 缺點(diǎn) 操作繁瑣，加入剛果紅溶液會使菌落之間發(fā)生混雜 容易出現(xiàn)假陽性反應(yīng) [名師點(diǎn)撥]　在倒平板時(shí)就加入剛果紅容易出現(xiàn)假陽性反應(yīng)的原因 (1)由于在纖維素粉、瓊脂和土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì)，可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。 (2)有些微生物具有降解色素的能力，長時(shí)間培養(yǎng)會降解剛果紅，從而形成明顯的透明圈

8、，這些微生物與纖維素分解菌不易區(qū)分。 [題組沖關(guān)] 1．下列關(guān)于纖維素酶的敘述，錯(cuò)誤的是(　　) A．牛、羊等草食動物可以合成纖維素酶，從而利用纖維素 B．纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶三種組分 C．纖維素可被纖維素酶水解成葡萄糖，為微生物提供營養(yǎng)物質(zhì) D．分解纖維素的細(xì)菌、真菌、放線菌，都是通過產(chǎn)生纖維素酶來分解纖維素的 解析：選A　牛、羊等草食動物不能合成纖維素酶，它們之所以能利用纖維素是因?yàn)樗鼈兊牧鑫钢杏性S多微生物可分泌纖維素酶；纖維素被纖維素酶分解后的產(chǎn)物是葡萄糖，葡萄糖可作為微生物的營養(yǎng)物質(zhì)；能分解纖維素的微生物都能產(chǎn)生纖維素酶，它們通過纖維

9、素酶來分解纖維素。 2．下列有關(guān)剛果紅染色法的敘述，不正確的是(　　) A．剛果紅可以在倒平板時(shí)加入 B．剛果紅可以在菌落形成后加入 C．剛果紅在菌落形成前倒平板時(shí)加入，加入的剛果紅不需要滅菌 D．在菌落形成后加入剛果紅時(shí)，剛果紅不需要滅菌 解析：選C　在細(xì)菌菌落形成前倒平板時(shí)加入剛果紅，則所加剛果紅要進(jìn)行滅菌，以防雜菌污染，影響纖維素分解菌菌落的形成；若在菌落形成后加入，則剛果紅不需要滅菌。 1．實(shí)驗(yàn)流程 [名師點(diǎn)撥]　纖維素分解菌的篩選與鑒別所用的培養(yǎng)基 (1)纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，利用液體培養(yǎng)基能使?fàn)I養(yǎng)成分充分消耗，以增加纖維素分解菌的濃度

10、。纖維素分解菌的鑒別培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，因?yàn)樾枰谂囵B(yǎng)基上形成我們?nèi)庋劭梢姷木洹? (2)在上述選擇培養(yǎng)基中能以纖維素作為碳源和能源的微生物可以正常生長，而其他絕大多數(shù)微生物不能正常生長；而在上述鑒別培養(yǎng)基中，絕大多數(shù)微生物都可以正常生長。 (3)選擇培養(yǎng)基的目的是選擇出某種微生物并通過培養(yǎng)增加數(shù)量，而鑒別培養(yǎng)基的目的是鑒別微生物種類。 (4)在使用順序上，一般先使用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，梯度稀釋后再用鑒別培養(yǎng)基鑒別。 3．纖維素分解菌與尿素分解菌的分離及鑒定比較 尿素分解菌的分離與鑒定 纖維素分解菌的分離與鑒定 分離條件 尿素作為唯一氮源 纖維素為主要碳源 鑒定方法 培養(yǎng)

11、基中加入酚紅指示劑，變紅色 在以纖維素為主要碳源的培養(yǎng)基上，利用剛果紅染色法，出現(xiàn)透明圈 鑒定原理 分解尿素的微生物合成脲酶，將尿素分解產(chǎn)生NH3，使pH升高，加入酚紅變紅色 分解纖維素的微生物產(chǎn)生纖維素酶，將纖維素分解為纖維二糖或葡萄糖，使纖維素—剛果紅復(fù)合物降解而出現(xiàn)透明圈 步驟 土壤取樣→制備培養(yǎng)基→樣品梯度稀釋→涂布平板→培養(yǎng)觀察→進(jìn)一步鑒定 土壤取樣→制備培養(yǎng)基→選擇培養(yǎng)→富集培養(yǎng)→梯度稀釋→涂布培養(yǎng)→剛果紅染色法→挑取菌落→進(jìn)一步鑒定 [題組沖關(guān)] 3．下列關(guān)于分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)操作的敘述，錯(cuò)誤的是(　　) A．經(jīng)選擇培養(yǎng)后將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的

12、培養(yǎng)基上 B．選擇培養(yǎng)這一步可省略，但得到的纖維素分解菌會較少 C．可通過定時(shí)測定葡萄糖產(chǎn)量的變化來衡量纖維素分解菌培養(yǎng)液中的纖維素酶產(chǎn)量 D．對照組可用等量的纖維素分解菌培養(yǎng)液涂布到不含纖維素的培養(yǎng)基上 解析：選A　經(jīng)選擇培養(yǎng)后，需經(jīng)稀釋后才能將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng) 基上。 4．使用液體選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌的目的是(　　) ①用液體選擇培養(yǎng)基可獲得大量纖維素分解菌 ②用液體培養(yǎng)基便于稀釋涂布平板 ③纖維素分解菌只能在液體培養(yǎng)基中生長 ④用液體培養(yǎng)基可鑒別纖維素分解菌 A．①②　　 B．①③　　　C．②④　　　D．③④ 解析：選A　使用

13、液體選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌，一方面可以獲得大量纖維素分解菌，另一方面便于稀釋涂布平板。纖維素分解菌也可以在固體培養(yǎng)基上生長；鑒別纖維素分解菌使用的是固體培養(yǎng)基。 1．培養(yǎng)基的類型及應(yīng)用 劃分標(biāo)準(zhǔn) 培養(yǎng)基種類 特點(diǎn) 用途 物理性質(zhì) 液體培養(yǎng)基 不加凝固劑 工業(yè)生產(chǎn)，連續(xù)培養(yǎng) 半固體培養(yǎng)基 加凝固劑，如瓊脂 觀察微生物的運(yùn)動、對微生物進(jìn)行分類及鑒定 固體培養(yǎng)基 對微生物進(jìn)行分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種 化學(xué)成分 天然培養(yǎng)基 含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì) 工業(yè)生產(chǎn) 合成培養(yǎng)基 培養(yǎng)基成分明確(用化學(xué)成分已知的化學(xué)物質(zhì)配成) 對微生物進(jìn)行分類、鑒別

14、 用途 選擇培養(yǎng)基 添加(或缺少)某種化學(xué)成分 培養(yǎng)、分離出特定微生物 鑒別培養(yǎng)基 在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品 鑒別不同種類的微生物 2．選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的應(yīng)用實(shí)例 類型 實(shí)例 選擇培養(yǎng)基 培養(yǎng)基中加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌 培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽用于分離得到金黃色葡萄球菌 以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基用于分離分解尿素的細(xì)菌 不添加氮源的培養(yǎng)基用于分離固氮微生物 石油是唯一碳源時(shí)，可以抑制不能利用石油的微生物的生長，使能夠利用石油的微生物生存，達(dá)到分離能消除石油污染的微生物的目的 培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)可得到耐高溫的微生物 鑒別培養(yǎng)基

15、 添加伊紅和美藍(lán)的培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌(菌落呈深紫色并帶金屬光澤) [題組沖關(guān)] 5．下列有關(guān)細(xì)菌培養(yǎng)的敘述，正確的是(　　) A．在瓊脂固體培養(yǎng)基上長出的單個(gè)菌落含有多種細(xì)菌 B．在培養(yǎng)基中加入青霉素可抑制真菌而促進(jìn)細(xì)菌生長 C．向液體培養(yǎng)基中通入氧氣能促進(jìn)破傷風(fēng)桿菌的生長 D．在半固體培養(yǎng)基中接種細(xì)菌培養(yǎng)后可以觀察其運(yùn)動 解析：選D　菌落是指單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，形成的一個(gè)肉眼可見的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，所以單個(gè)菌落中通常只有一種細(xì)菌；青霉素培養(yǎng)基往往是真菌選擇培養(yǎng)基，加青霉素的培養(yǎng)基能抑制細(xì)菌生長而促進(jìn)真菌生長；破傷風(fēng)桿菌的代謝類

16、型屬于異養(yǎng)厭氧型，向培養(yǎng)基中通入氧氣會抑制其生長。 6．下表是某微生物培養(yǎng)基成分，據(jù)表回答下列問題： 編號 成分 含量 編號 成分 含量 ① 粉狀硫 10 g ② (NH4)2SO4 0.4 g ③ K2HPO4 4 g ④ MgSO4 9.25 g ⑤ FeSO4 0.5 g ⑥ CaCl2 0.5 g ⑦ H2O 100 mL — — — (1)表中培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分共有________類，該培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物同化作用類型是__________，判斷依據(jù)是________________。 (2)若要培養(yǎng)從土壤中分離出來的自

17、生固氮菌，該培養(yǎng)基成分應(yīng)如何調(diào)整？________________________________________________________________________， 依據(jù)是___________________________________________________________________。 (3)若上述培養(yǎng)基用于觀察菌落形態(tài)，應(yīng)增加的成分是____________。 (4)檢測大腸桿菌可在牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基中加入________________，菌落具有_________________________________________________

18、_______________________ 特征的可以認(rèn)定為大腸桿菌。 解析：(1)題表中的營養(yǎng)物質(zhì)有水、無機(jī)鹽、氮源3類，缺乏碳源和特殊營養(yǎng)物質(zhì)。該培養(yǎng)基中沒有碳源，說明培養(yǎng)的微生物是從空氣中獲得碳源的，即可判斷培養(yǎng)的是自養(yǎng)型微生物。(2)固氮微生物可以固定空氣中的氮?dú)?，因此?yīng)除去培養(yǎng)基中的氮源，但固氮菌是異養(yǎng)生物，因此應(yīng)加入有機(jī)碳源。(3)觀察菌落形態(tài)要在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，故需要加入瓊脂。(4)在培養(yǎng)基中加入伊紅和美藍(lán)可使大腸桿菌菌落呈深紫色并帶金屬光澤。 答案：(1)3　自養(yǎng)型　培養(yǎng)基中無有機(jī)碳源　(2)去除培養(yǎng)基中的②成分，加入有機(jī)碳源　自生固氮菌能利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈矗?/p>

19、但由于自生固氮菌是異養(yǎng)微生物，培養(yǎng)基中還需要加入有機(jī)碳源　(3)瓊脂　(4)伊紅和美藍(lán)　深紫色并帶有金屬光澤 7．(全國卷Ⅰ)空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實(shí)驗(yàn)步驟如下： ①配制培養(yǎng)基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)； ②制作無菌平板； ③設(shè)置空白對照組和若干實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行相關(guān)操作； ④將各組平板置于37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)。 回答下列問題： (1)該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來源于______________。若要完成步驟②，該培養(yǎng)基

20、中的成分X通常是____________________________________________________________。 (2)步驟③中，實(shí)驗(yàn)組的操作是______________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)若在某次調(diào)查中，某一實(shí)驗(yàn)組平板上菌落平均數(shù)為36個(gè)/平板，而空白對照組的一個(gè)平板上出現(xiàn)了6個(gè)菌落，這種結(jié)果說明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了________現(xiàn)象。若將30(即36－6)個(gè)/

21、平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法____________(填“正確”或“不正確”)。 解析：(1)牛肉膏和蛋白胨中均含有氮元素，因此微生物所需的氮來源于牛肉膏和蛋白胨。若要完成步驟②，需要進(jìn)行倒平板操作，用到的是固體培養(yǎng)基，所以培養(yǎng)基中要有瓊脂。(2)該實(shí)驗(yàn)的空白對照組為不進(jìn)行處理的無菌平板，實(shí)驗(yàn)組的操作為將各無菌平板分別放置在教室不同高度的位置上，開蓋暴露相同時(shí)間。(3)若空白對照組的平板上出現(xiàn)了菌落，說明實(shí)驗(yàn)過程中出現(xiàn)了污染現(xiàn)象?？瞻讓φ战M的一個(gè)平板上出現(xiàn)了6個(gè)菌落，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)變量不唯一，不能確定實(shí)驗(yàn)組平板上的菌落是否僅由教室內(nèi)不同高度空氣中的微生物形成，因此不能求出實(shí)驗(yàn)組的菌落平均值。

22、 答案：(1)牛肉膏、蛋白胨　瓊脂　(2)將各實(shí)驗(yàn)組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開蓋暴露一段時(shí)間　(3)污染　不正確 8．(全國卷Ⅲ)某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為實(shí)驗(yàn)材料分離純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣?；卮鹣铝袉栴}： (1)分離純化乳酸菌時(shí)，首先需要用________對泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋，進(jìn)行梯度稀釋的理由是________________________________________________________________________ ______________________________

23、__________________________________________。 (2)推測在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有____________________和________________________________________________________________________。 分離純化時(shí)應(yīng)挑選出________________的菌落作為候 選菌。 (3)乳酸菌在－20 ℃長期保存時(shí)，菌液中常需要加入一定量的____________(填“蒸餾水”“甘油”或“碳酸鈣”)。 解析：(1)分離純化乳酸菌時(shí)，首先需要用無菌水對泡菜濾液進(jìn)行梯度

24、稀釋，這樣既可避免雜菌污染，又可將乳酸菌分散成單個(gè)細(xì)胞，以便在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。 (2)乳酸的積累影響乳酸菌的增殖，加入碳酸鈣可以中和乳酸菌代謝(無氧呼吸)過程中產(chǎn)生的乳酸，另外，乳酸和碳酸鈣反應(yīng)，進(jìn)而導(dǎo)致碳酸鈣分解形成透明圈，有利于乳酸菌的鑒別和分離。 (3)對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。在3 mL的甘油瓶中，裝入1 mL甘油后滅菌。將1 mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在－20 ℃的冷凍箱中保存。 答案：(1)無菌水　泡菜濾液中菌的濃度高，直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落　(2)鑒別乳酸菌　中和產(chǎn)生的乳酸(或酸)　具有透明圈　(3)甘油 [隨

25、堂基礎(chǔ)鞏固] 1．下列關(guān)于纖維素的敘述，不正確的是(　　) A．纖維素是由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物 B．纖維素能被土壤中某些微生物分解利用，是因?yàn)檫@些微生物能產(chǎn)生纖維素酶 C．植物的根、莖、葉等器官都含有大量的纖維素 D．自然界中的各種生物均能把纖維素分解成葡萄糖，從而作為生物體的能量來源 解析：選D　自然界中許多生物都不能分解纖維素，只有能合成纖維素酶的生物才能分解纖維素。 2．下列關(guān)于纖維素酶的說法，錯(cuò)誤的是(　　) A．纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括三種組分 B．纖維素酶可以把纖維素分解成葡萄糖 C．纖維素酶可用于去掉植物細(xì)胞的細(xì)胞壁 D．葡萄糖苷酶可把纖維

26、素分解成葡萄糖 解析：選D　纖維素酶是一種可以把纖維素分解為葡萄糖的酶，它是一種復(fù)合酶，至少包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶三種組分。前兩種酶將纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。 3．要將能分解纖維素的細(xì)菌從土壤中分離出來，應(yīng)將它們接種在(　　) A．含有蛋白胨的固體培養(yǎng)基上 B．加入指示劑的鑒別培養(yǎng)基上 C．只含纖維素粉而無其他碳源的選擇培養(yǎng)基上 D．含四大營養(yǎng)要素的培養(yǎng)基上 解析：選C　將細(xì)菌接種在以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基上，據(jù)此可將能分解纖維素的細(xì)菌分離出來。能產(chǎn)生纖維素酶的細(xì)菌能夠以纖維素作為碳源和能源，不能分解纖維素的細(xì)菌由于缺乏碳源而不能正常生長繁

27、殖。 4．在加入剛果紅的培養(yǎng)基中會出現(xiàn)透明圈，產(chǎn)生的透明圈是(　　) A．剛果紅與纖維素形成的復(fù)合物 B．剛果紅與纖維二糖形成的復(fù)合物 C．纖維素分解后形成的葡萄糖導(dǎo)致的 D．以纖維素分解菌為中心形成的 解析：選D　剛果紅可以與纖維素結(jié)合形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅與纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透 明圈。 5．使用剛果紅染色時(shí)，加入剛果紅應(yīng)在(　　) ①制備培養(yǎng)基時(shí)?、谔荻认♂寱r(shí)?、鄣蛊桨鍟r(shí)?、芡坎紩r(shí) ⑤長出菌落時(shí) A．①③　　　　　　　　　　 B．②⑤ C．③⑤ D．

28、④⑤ 解析：選C　常用的剛果紅染色法有兩種：一種是先培養(yǎng)微生物，長出菌落后再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)，另一種是在倒平板時(shí)就加入剛果紅，最終，兩種染色法都可以在 培養(yǎng)基上觀察到以纖維素分解菌為中心的透明圈。 6．分離出的微生物還要進(jìn)行鑒定，而微生物的鑒定需要鑒別培養(yǎng)基，下列不是鑒別培養(yǎng)基的是(　　) A．加入酚紅的培養(yǎng)基 B．加入剛果紅的培養(yǎng)基 C．加入伊紅和美藍(lán)的培養(yǎng)基 D．加入纖維素粉的培養(yǎng)基 解析：選D　鑒別培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)在培養(yǎng)基中加入一些指示劑配制而成的，如酚紅、伊紅和美藍(lán)、剛果紅等，而纖維素粉不是指示劑，由其配制而成的培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基。 7．分析下面纖維

29、素分解菌的鑒別培養(yǎng)基的配方，回答問題： 成分 含量 CMC-Na 5～10 g 酵母膏 1 g KH2PO4 0.25 g 瓊脂 15 g 土豆汁 100 mL 將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL (1)此培養(yǎng)基配方中為微生物提供碳源的是________________。 (2)此配方為________培養(yǎng)基(根據(jù)物理狀態(tài)劃分)。 (3)若用此培養(yǎng)基鑒別纖維素分解菌，還應(yīng)加入________染料。 (4)纖維素分解菌能否在不含纖維素但富含其他有機(jī)質(zhì)的環(huán)境中生存？________。 (5)若通過實(shí)驗(yàn)測定該培養(yǎng)基用于鑒定纖維素分解菌的最適pH，

30、僅憑一次實(shí)驗(yàn)?zāi)芊駵?zhǔn)確測出？________。原因是________________________________________________________。 解析：(1)培養(yǎng)基中能夠提供碳元素的物質(zhì)稱為碳源，該培養(yǎng)基中含有碳元素的物質(zhì)有CMC-Na、酵母膏、土豆汁。(2)該培養(yǎng)基含有凝固劑成分，因此根據(jù)物理狀態(tài)劃分屬于固體培養(yǎng)基。(3)該培養(yǎng)基含有CMC，可以與剛果紅結(jié)合形成紅色復(fù)合物，若培養(yǎng)基中含有纖維素分解菌，則會形成以其為中心的透明圈。(4)纖維素分解菌為異養(yǎng)型生物，也可生活在其他富含有機(jī)質(zhì)的環(huán)境中，只是數(shù)量不如富含纖維素的環(huán)境中多。(5)由于所控制的pH不是連續(xù)的，實(shí)驗(yàn)中也可

31、能存在誤差等，因此僅憑一次實(shí)驗(yàn)是不能準(zhǔn)確測出其最適pH的。 答案：(1)CMC-Na、酵母膏、土豆汁　(2)固體　(3)剛果紅　(4)能　(5)不能　所控制的pH不是連續(xù)的，實(shí)驗(yàn)存在誤差 [課時(shí)跟蹤檢測] 一、選擇題 1．剛果紅是一種酸性染料，能將下列哪些物質(zhì)染色(　　) ①纖維二糖?、谄咸烟恰、劾w維素?、軓椥岳w維 A．①③ B．①② C．②③ D．③④ 解析：選D　剛果紅是一種酸性染料，可與纖維素類的多糖反應(yīng)形成紅色復(fù)合物。 2．下列有關(guān)纖維素酶作用的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的敘述，不正確的是(　　) A．可用報(bào)紙、復(fù)印紙來代替濾紙條 B．兩支試管中所加緩沖液的量相等 C．在一

32、定范圍內(nèi)，濾紙條的分解速度會隨著纖維素酶含量的增加而加快 D．振蕩會加快濾紙條的分解 解析：選B　在驗(yàn)證纖維素酶作用的實(shí)驗(yàn)中，兩支試管所加緩沖液的量分別為10 mL和11 mL，加入10 mL緩沖液的試管中還需滴加1 mL的纖維素酶，而另一支試管則不加。 3．下列對剛果紅染色法的敘述，不正確的是(　　) A．可以先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng) B．可以在倒平板時(shí)就加入剛果紅 C．既可以先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)，也可以在倒平板時(shí)就加入剛 果紅 D．可以將剛果紅與培養(yǎng)基中的其他物質(zhì)混合后再滅菌倒平板 解析：選D　剛果紅染色法一般有兩種，一種是先培養(yǎng)微生物

33、長出菌落后，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)；一種是配制好培養(yǎng)基滅菌后，倒平板時(shí)加入經(jīng)滅菌處理的剛果紅，再接種微生物培養(yǎng)，直至產(chǎn)生透明圈。 4．加工橘子罐頭時(shí)采用酸堿處理脫去中果皮(橘絡(luò))會產(chǎn)生嚴(yán)重污染。目前使用酶解法去除橘絡(luò)可減少污染。下列生長在特定環(huán)境中的4類微生物，不能產(chǎn)生所用酶的是(　　) A．生長在麥麩上的黑曲霉 B．生長在酸奶中的乳酸菌 C．生長在棉籽殼上的平菇 D．生長在木屑上的木霉 解析：選B　根據(jù)題目分析可知需要的酶為纖維素酶，黑曲霉、平菇、木霉分別以分解麥麩、棉籽殼、木屑為生，故能產(chǎn)生纖維素酶，生長在酸奶中的乳酸菌不能合成纖維素酶。 5．若大腸桿菌和圓褐固氮菌混合在一

34、起采用下列哪組培養(yǎng) 基可將它們分離(　　) A．加食鹽的培養(yǎng)基和蛋白胨培養(yǎng)基 B．伊紅和美藍(lán)培養(yǎng)基和無氮培養(yǎng)基 C．斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基 D．加青霉素的培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基 解析：選B　大腸桿菌的代謝產(chǎn)物可與伊紅和美藍(lán)結(jié)合，使菌落呈深紫色并帶金屬光澤；圓褐固氮菌能自行固氮，可用無氮培養(yǎng)基選擇。 6．下列關(guān)于纖維素分解菌分離實(shí)驗(yàn)的說法，不正確的是(　　) A．通常采用剛果紅染色法篩選纖維素分解菌 B．從土壤中分離含量較多的微生物時(shí)，選擇培養(yǎng)可以省略 C．該實(shí)驗(yàn)用到選擇和鑒別培養(yǎng)基 D．在用剛果紅染色法中，若將微生物培養(yǎng)在事先加入剛果紅的培養(yǎng)基上，出現(xiàn)透明圈的菌落肯定為所需菌

35、種 解析：選D　剛果紅能鑒別纖維素，可采用剛果紅染色法篩選纖維素分解菌；從土壤中分離含量較多的微生物時(shí)，選擇培養(yǎng)可以省略，但需要進(jìn)行鑒別培養(yǎng)；有些微生物具有降解色素的能力，它們在長時(shí)間培養(yǎng)過程中會降解剛果紅而形成明顯的透明圈，故出現(xiàn)透明圈的菌落不一定為所需菌種。 7．在從土壤中分離出分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)中，先進(jìn)行選擇培養(yǎng)，再進(jìn)行剛果紅染色法篩選。先進(jìn)行選擇培養(yǎng)的目的是(　　) A．增加纖維素分解菌的濃度 B．除去雜菌，獲得能分解纖維素的純菌種 C．殺滅不需要的微生物 D．在形成的菌落上獲得纖維素分解菌種 解析：選A　在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物得

36、到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此選擇培養(yǎng)可以起到增加纖維素分解菌的濃度作用，但是不能得到單一菌種；該實(shí)驗(yàn)所用的選擇培養(yǎng)基中的化學(xué)成分不能起到殺滅不需要的微生物的作用；該實(shí)驗(yàn)的選擇培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基，微生物在培養(yǎng)液中繁殖，不能獲得目標(biāo)菌落。 8．纖維素酶的測定方法一般是(　　) A．對纖維素進(jìn)行定量測定 B．對纖維素酶分解纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量測定 C．對纖維素酶分解纖維素后所產(chǎn)生的纖維二糖進(jìn)行定量測定 D．對纖維素分解菌進(jìn)行定量測定 解析：選B　測定纖維素酶的方法一般是對纖維素酶分 解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量測定。 9．下列有關(guān)

37、培養(yǎng)基和菌種鑒定的敘述，不正確的是(　　) A．在培養(yǎng)基中加入較高濃度的氯化鈉，可篩選出抗鹽突變體植物 B．可利用固體培養(yǎng)基上菌落的特征來判斷和鑒別細(xì)菌的類型 C．利用剛果紅培養(yǎng)基上是否形成透明圈來篩選纖維素分解菌 D．在無氮培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑鑒定尿素分解菌 解析：選D　在只含有尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑鑒定尿素分解菌。 10．實(shí)驗(yàn)測定鏈霉素對3種細(xì)菌的抗生素效應(yīng)，用3種細(xì)菌在事先準(zhǔn)備好的瓊脂塊平板上劃3條等長的平行線(3條線均與圖中的鏈霉素帶接觸)，將平板置于37 ℃條件下恒溫培養(yǎng)3 d，結(jié)果如下圖所示。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，下列敘述不正確的是(　　) A．鏈

38、霉素能抑制結(jié)核桿菌的生長 B．鏈霉素對結(jié)核桿菌比對霍亂弧菌更有效 C．鏈霉素對結(jié)核桿菌比對傷寒桿菌更有效 D．鏈霉素可以用于治療傷寒 解析：選D　根據(jù)圖示對實(shí)驗(yàn)過程和結(jié)果進(jìn)行分析，鏈霉素對霍亂弧菌和結(jié)核桿菌均有抑制作用，且對結(jié)核桿菌更有效，而對傷寒桿菌則不起作用。 二、非選擇題 11．當(dāng)今世界，能源和資源危機(jī)日趨嚴(yán)重，人們希望能借助纖維素酶將地球上最豐富(占全球總生物量80%)、最廉價(jià)的可再生資源纖維素轉(zhuǎn)化為能直接利用的能源和資源。纖維素酶可以從能分解纖維素的細(xì)菌培養(yǎng)液中提取。某同學(xué)設(shè)計(jì)了如下分離土壤中纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)流程： 土壤取樣→選擇培養(yǎng)→(　　　　)→鑒別培養(yǎng) (

39、1)請補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)流程：_______________________________________________________； 找不到合適的取樣環(huán)境，可采取的辦法是____________________________________ ________________________________________________________________________。 (2)選擇培養(yǎng)的目的是________________________________________________； 研究人員用化合物A、硝酸鹽、磷酸鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基進(jìn)行選擇

40、培養(yǎng)，該培養(yǎng)基為________(填“液體”或“固體”)培養(yǎng)基，其中加入的化合物A是______，為微生物的生長提供________。 (3)為了鑒別纖維素分解菌和進(jìn)一步純化菌種，可以在鑒別培養(yǎng)基上加入________染液，將篩選獲得的菌液稀釋后用____________法接種到鑒別培養(yǎng)基上，然后挑選產(chǎn)生____________的菌落作為菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。 解析：(1)經(jīng)選擇培養(yǎng)后，需經(jīng)稀釋后才能將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上。(2)可用含纖維素的液體培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)來增加纖維素分解菌的濃度。(3)剛果紅是一種染料，可與纖維素反應(yīng)形成紅色復(fù)合物；培養(yǎng)基中有分解纖維素微生物存在

41、的區(qū)域，纖維素會被分解，將出現(xiàn)透明圈。 答案：(1)梯度稀釋　將富含纖維素的物質(zhì)埋在土壤中　(2)增加纖維素分解菌的濃度　液體　纖維素　碳源　(3)剛果紅　涂布平板　透明圈 12．某污水池中含有一種有害的、難于降解的有機(jī)化合物 A。現(xiàn)有研究人員欲探究污水凈化處理的方案，進(jìn)行了 如圖所示的實(shí)驗(yàn)，請據(jù)圖回答下列問題： (1)在進(jìn)行初選時(shí)，將污泥樣品接種于以________________________________________ 為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上；在利用錐形瓶進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，需要振蕩培養(yǎng)，因此可推測“目的菌”的細(xì)胞呼吸方式為____________。 (2)在接種前

42、需要對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理，常用的滅菌方法是____________________；而在接種時(shí)利用的無菌技術(shù)要求實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在________________附近進(jìn)行，以避免周圍環(huán)境中微生物的污染。 (3)純化菌種時(shí)，為了獲得單菌落，常采用的接種方法有________________和________________；接種后應(yīng)將培養(yǎng)基進(jìn)行________(填“正放”或“倒置”)培養(yǎng)。 (4)培養(yǎng)若干天后，應(yīng)將有機(jī)化合物A含量較______的培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)液中進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)；轉(zhuǎn)移至新培養(yǎng)液中培養(yǎng)的目的是使“目的菌”的數(shù)量________；在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將使用過的培養(yǎng)基進(jìn)行_________

43、___處理后才能倒掉。 解析：在初選時(shí)，選擇培養(yǎng)基中的唯一碳源應(yīng)該是有機(jī)化合物A；在培養(yǎng)時(shí)需進(jìn)行振蕩處理，說明“目的菌”應(yīng)該是需氧型，其細(xì)胞呼吸方式為有氧呼吸。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)選擇有機(jī)化合物A含量少的錐形瓶，該錐形瓶中分解有機(jī)化合物A的微生物應(yīng)多于其他瓶中的；轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)液中，是為了給“目的菌”提供更多的營養(yǎng)、更好的生存環(huán)境，從而增加“目的菌”的數(shù)量；在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基中仍有少量的微生物殘留，因此需要進(jìn)行滅菌處理。 答案：(1)有機(jī)化合物A　有氧呼吸　(2)高壓蒸汽滅菌法　酒精燈火焰　(3)平板劃線法　稀釋涂布平板法　倒置　(4)少　增加　滅菌 13．(江蘇高考)人工瘤胃模仿了牛羊等

44、反芻動物的胃，可用 來發(fā)酵處理秸稈，提高秸稈的營養(yǎng)價(jià)值。為了增強(qiáng)發(fā)酵 效果，研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產(chǎn)菌株，并對 其降解纖維素能力進(jìn)行了研究。請回答下列問題： (1)在樣品稀釋和涂布平板步驟中，下列選項(xiàng)不需要的 是______(填序號)。 ①酒精燈?、谂囵B(yǎng)皿?、埏@微鏡　④無菌水 (2)在涂布平板時(shí)，滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量不宜過多的原因是__________ ________________________。 (3)向試管內(nèi)分裝含瓊脂的培養(yǎng)基時(shí)，若試管口粘附有培養(yǎng)基，需要用酒精棉球擦凈的原因是________________________________

45、__________________________________。 (4)剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不與纖維素降解產(chǎn)物纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上，篩到了幾株有透明降解圈的菌落(如圖)。圖中降解圈大小與纖維素酶的__________________有關(guān)。圖中降解纖維素能力最強(qiáng)的菌株是____________(填圖中序號)。 (5)研究人員用篩選到的纖維素酶高產(chǎn)菌株J1和J4，在不同溫度和pH條件下進(jìn)行發(fā)酵，測得發(fā)酵液中酶活性的結(jié)果見下圖，推測菌株______更適合用于人工瘤胃發(fā)酵，理由是_____________________________

46、_____________________________ ________________________________________________________________________。 解析：(1)在樣品稀釋和涂布平板過程中，需要在酒精燈火焰附近進(jìn)行操作，培養(yǎng)皿用于盛放培養(yǎng)基并培養(yǎng)細(xì)菌，無菌水作稀釋的溶劑，此處唯一用不到的是顯微鏡。(2)在涂布平板時(shí)，要取少量菌懸液滴加到培養(yǎng)基表面，如果滴加菌懸液量過多，菌懸液就會堆積在培養(yǎng)基表面影響分離效果。(3)在向試管內(nèi)分裝含瓊脂的培養(yǎng)基時(shí)，如果試管口粘附有培養(yǎng)基，就很容易使棉塞受到污染，因此，需要用無菌的酒精棉球?qū)⒃嚬芸诓?/p>

47、拭干凈。(4)因?yàn)閯偣t可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，且不與纖維素降解產(chǎn)物反應(yīng)。所以在剛果紅培養(yǎng)基平板上，菌落周圍有透明降解圈是纖維素被降解的結(jié)果，降解圈大小由纖維素酶的活性和量決定。圖中菌落①周圍的降解圈最大，因此其降解纖維素的能力最強(qiáng)。(5)考慮到人工瘤胃的發(fā)酵過程會使發(fā)酵液酸性增加，溫度升高，在這個(gè)前提下觀察在不同溫度和pH條件下測得的發(fā)酵液中酶活性的結(jié)果圖，從圖中可以看出，在高溫和低pH條件下都是J4菌株中的纖維素酶的活性較高，因而該菌株更適合用于人工瘤胃發(fā)酵。 答案：(1)③　(2)培養(yǎng)基表面的菌懸液會出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積，影響分離效果　(3)避免培養(yǎng)基污染棉塞　(4)量與活性　①

48、　(5)J4　發(fā)酵過程會產(chǎn)熱和產(chǎn)酸，J4菌株在較高溫度和酸性環(huán)境下酶的活性更高 一、選擇題(每小題4分，共48分) 1．下列關(guān)于配制培養(yǎng)基的敘述，正確的是(　　) A．配制固體培養(yǎng)基必須加入瓊脂 B．pH調(diào)至6.5～7.5的培養(yǎng)基可培養(yǎng)放線菌 C．培養(yǎng)自生固氮菌的培養(yǎng)基中不需添加氮源 D．發(fā)酵工程一般用半固體培養(yǎng)基或液體培養(yǎng)基 解析：選C　在配制固體培養(yǎng)基時(shí)，可加入瓊脂作為凝固劑，但瓊脂并不是唯一的凝固劑；放線菌生長適宜的pH為7.5～8.5，細(xì)菌生長適宜的pH為6.5～7.5；發(fā)酵工程應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐一般用液體發(fā)酵，可以連續(xù)培養(yǎng)，提高產(chǎn)量；自生固氮菌能夠?qū)⒖諝庵械腘2還原為N

49、H3，因此培養(yǎng)基中不需加氮源。 2．某同學(xué)用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌純化培養(yǎng)，下列說法錯(cuò)誤的是(　　) A．蛋白胨可為大腸桿菌的生長提供氮源和維生素等營養(yǎng) B．牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基需經(jīng)高壓蒸汽滅菌后調(diào)節(jié)pH C．倒平板操作中，待平板冷卻凝固后將平板倒過來放置 D．大腸桿菌純化培養(yǎng)可以采用平板劃線法或稀釋涂布平板法 解析：選B　培養(yǎng)基應(yīng)先調(diào)節(jié)pH后滅菌，若先滅菌后調(diào)節(jié)pH，調(diào)節(jié)pH時(shí)會污染培 養(yǎng)基。 3．微生物培養(yǎng)是微生物工程中的基礎(chǔ)技術(shù)，下列相關(guān)敘述正確的是(　　) A．病毒和細(xì)菌的培養(yǎng)基成分相同 B．平板劃線法中的“線”是連續(xù)的、不分區(qū)域的 C．微生物培養(yǎng)基中并

50、不是都必須添加碳源或氮源 D．在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行消毒 解析：選C　病毒必須寄生在活細(xì)胞內(nèi)才能進(jìn)行生命活動，如可用活雞胚培養(yǎng)病毒；平板劃線法每次劃線前都要灼燒接種環(huán)，劃線是分區(qū)域的；微生物種類不同，對營養(yǎng)物質(zhì)的需求不同，應(yīng)根據(jù)所培養(yǎng)微生物的需要確定培養(yǎng)基的成分；對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿要進(jìn)行滅菌，而不是消毒。 4．稀釋涂布平板法是微生物培養(yǎng)中的一種常用的接種方法。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　　) A．操作中需要將菌液進(jìn)行一系列的濃度梯度稀釋 B．需將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基表面 C．不同濃度的菌液均可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落 D．對培養(yǎng)

51、基和涂布器等均需進(jìn)行嚴(yán)格滅菌處理 解析：選C　只有菌液稀釋到一定程度后，在固體培養(yǎng)基表面才能形成單個(gè)的菌落，否則可能會出現(xiàn)兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)菌共同形成一個(gè)菌落，或菌落出現(xiàn)重疊。 5．某學(xué)者欲研究被石油污染過的土壤中細(xì)菌的數(shù)量，并從中篩選出能分解石油的細(xì)菌。下列操作錯(cuò)誤的是(　　) A．利用平板劃線法對細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù) B．用以石油為唯一碳源的培養(yǎng)基篩選 C．采用稀釋涂布平板法分離菌種 D．稱取和稀釋土壤樣品時(shí)應(yīng)在酒精燈火焰旁 解析：選A　分離細(xì)菌常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，但平板劃線法不能對細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)；篩選能分解石油的細(xì)菌，要以石油作為培養(yǎng)基中唯一的碳源；篩選細(xì)菌的整個(gè)

52、操作過程都需要在無菌條件下進(jìn)行，所以 稱取、稀釋土壤樣品應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行。 6．下表為某培養(yǎng)基的配方，有關(guān)敘述正確的是(　　) 成分 蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4 伊紅 美藍(lán) 蒸餾水 含量 10 g 10 g 2 g 0.4 g 0.065 g 1 000 mL A.從物理性質(zhì)看該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，從用途看該 培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基 B．培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的 物質(zhì)是蛋白胨 C．該培養(yǎng)基缺少提供生長因子的物質(zhì) D．該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的pH后就可以用于接種菌種 解析：選B　此培養(yǎng)基中沒有瓊脂等凝固劑，因此為液體培養(yǎng)基；

53、伊紅、美藍(lán)能對大腸桿菌起鑒別作用。糖類(尤其是葡萄糖)是最常用的碳源；蛋白胨主要用作氮源，也提供生長因子，或作為異養(yǎng)型微生物的碳源。該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)pH并滅菌后才能接種使用。 7．下列關(guān)于微生物培養(yǎng)和利用的敘述，不正確的是(　　) A．利用稀釋涂布平板法既能分離微生物也能對微生物進(jìn)行計(jì)數(shù) B．接種時(shí)連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌種逐步分散獲得單個(gè)菌落 C．以尿素為唯一氮源且含酚紅的培養(yǎng)基可選擇和鑒別尿素分解菌 D．選擇培養(yǎng)基作用的原理是顯現(xiàn)某微生物的特征，以區(qū)別于其他微生物 解析：選D　稀釋涂布平板法能分離純化微生物也能對微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)；連續(xù)劃線是將聚集的菌種逐步分散，以獲得單菌落；尿素分

54、解菌的分離可以選用以尿素為唯一氮源，且含酚紅的培養(yǎng)基；選擇培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入某一化學(xué)物質(zhì)或改變某一理化性質(zhì)，使某一微生物正常生長，而其他微生物則被殺滅或生長受到抑制，從而選出所需要的微生物。 8．下列有關(guān)分解纖維素的微生物分離的敘述，不正確的是(　　) A．在加入剛果紅的培養(yǎng)基中，當(dāng)纖維素被纖維素分解菌釋放的纖維素酶分解后會出現(xiàn)透明圈 B．在用剛果紅染色時(shí)只能先培養(yǎng)微生物再加入剛果紅，不能在倒平板時(shí)加入 C．纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵法和固體發(fā)酵法 D．纖維素酶的測定方法，一般是對所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量的測定 解析：選B　剛果紅染色有兩種方法，一種是先培養(yǎng)微生物再加入剛果紅，

55、另一種是在倒平板時(shí)就將剛果紅染液加入培養(yǎng)基中，然后再培養(yǎng)微生物，兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，但都可以應(yīng)用。 9．微生物(除病毒外)需要從外界吸收營養(yǎng)物質(zhì)并通過代謝來維持正常的生長和繁殖。下列有關(guān)微生物營養(yǎng)的說法，正確的是(　　) A．乳酸菌與硝化細(xì)菌所利用的碳源物質(zhì)是相同的 B．微生物生長中不可缺少的一些微量的無機(jī)物稱為生長因子 C．培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)濃度越高對微生物的增殖越有利 D．生長因子一般是酶或核酸的組成成分，微生物本身合成這些生長因子的能力往往 不足 解析：選D　微生物的營養(yǎng)物質(zhì)包括碳源、氮源、水、無機(jī)鹽和生長因子。乳酸菌的碳源是有機(jī)物，而硝化細(xì)菌可以利用無機(jī)物作為碳源；生長因

56、子是微生物體內(nèi)不能合成的，需要量很小的一些有機(jī)物；培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)濃度過高會造成微生物細(xì)胞失水，不利于微生物的生長、繁殖。 10．農(nóng)田土壤的表層，自生固氮菌的含量比較多，將用表層土制成的稀泥漿，接種到特制的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，可將自生固氮菌與其他細(xì)菌分開，對培養(yǎng)基的要求是(　　) ①加抗生素?、诓患涌股亍、奂拥亍、懿患拥? ⑤加葡萄糖　⑥不加葡萄糖?、?7 ℃恒溫箱培養(yǎng) ⑧28～30 ℃溫度下培養(yǎng) A．①③⑤⑦　　　　　　　 B．②④⑥⑧ C．②④⑤⑧ D．①④⑥⑦ 解析：選C　自生固氮菌是異養(yǎng)菌，生長繁殖需要有機(jī)碳源；自生固氮菌能利用空氣中的氮?dú)猓囵B(yǎng)基中不加氮源，固氮菌能生長

57、繁殖，不能固氮的菌不能生長繁殖；自生固氮菌的生長繁殖的最適宜溫度是28～30 ℃；自生固氮菌對青霉素敏感，培養(yǎng)基中不能加青霉素，所以從土壤浸出液中分離出自生固氮菌對培養(yǎng)基的要求是 ②不加抗生素、④不加氮素、⑤加葡萄糖、⑧28～30 ℃溫度下培養(yǎng)。 11．下表表示在不同培養(yǎng)基中細(xì)菌的生長繁殖情況(A、B、C、H、I、J、K、M為培養(yǎng)基的成分，“＋”表示生長，“－”表示不生長)，請分析細(xì)菌不能合成下列哪種物質(zhì)(　　) 培養(yǎng)基 成分 A、B、C A、B、C I、M A、B、C H、K A、B、C M、J A、B、C I、K A、B、C H、J A、B、C K、M 生長

58、狀態(tài) － － ＋ － ＋ － ＋ A．H　　　B．I　　　　C．K　　　　D．M 解析：選C　凡添加了物質(zhì)K的培養(yǎng)基，細(xì)菌都能生長，反之則不能生長，說明物質(zhì)K是細(xì)菌不能合成的。 12．現(xiàn)有兩種固體培養(yǎng)基，已知其配制時(shí)所加的成分和含量如下表，用這兩種培養(yǎng)基分別去分離土壤中的兩種微生 物，你認(rèn)為它們適于分離(　　) 成分 KH2PO4 MgSO4·7H2O NaCl CaSO4·2H2O CaCO3 葡萄糖 純淀粉 甲培養(yǎng)基 0.02% 0.02% 0.02% 0.01% 0.5% 0.5% 2% 乙培養(yǎng)基 0.02% 0.02%

59、 0.02% 0.01% 0.5% — — A.甲培養(yǎng)基適于分離自養(yǎng)型自生固氮菌；乙培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型自生固氮菌 B．甲培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型自生固氮菌；乙培養(yǎng)基適于分離自養(yǎng)型自生固氮菌 C．甲培養(yǎng)基適于分離酵母菌；乙培養(yǎng)基適于分離真菌 D．甲培養(yǎng)基適于分離自養(yǎng)型共生細(xì)菌；乙培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型共生固氮菌 解析：選B　固氮菌中能獨(dú)立生存的是自生固氮菌，需和其他生物結(jié)合在一起才能生存的是共生固氮菌，甲培養(yǎng)基中含有的葡萄糖和淀粉是有機(jī)物，由此推出該培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型的自生固氮菌；乙培養(yǎng)基中不含有機(jī)碳源，所以可用來分離培養(yǎng)自養(yǎng)型的自生固氮菌。 二、非選擇題(共52分) 13

60、．(17分)為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌分離等工作?；卮鹣铝袉栴}： (1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是________________________；然后，將1 mL水樣稀釋100倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為________。 (2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌，操作時(shí)，接種環(huán)通過________滅菌，在第二次及以后的劃線時(shí)，總是從

61、上一次劃線的末端開始劃線，這樣做的目的是________________________________________________________________________。 (3)示意圖A和B中，________表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。 (4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中____________的含量，同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高_(dá)_______的利用率。 解析：(1)為了檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格

62、，可在涂布接種前，隨機(jī)取滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時(shí)間。0.1 mL稀釋液中平均有(39＋38＋37)/3＝38個(gè)活菌，則每毫升稀釋液中活菌的數(shù)目為38/0.1＝380，則稀釋前每毫升水樣中活菌數(shù)目為380×100＝3.8×104，則每升水樣中活菌數(shù)目為3.8×104×1 000＝3.8×107。(2)接種環(huán)、接種針等金屬用具可直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，以達(dá)到迅速徹底滅菌的目的。在第二次及以后的劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線，其目的是將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落。(3)比較圖A和圖B可以看出：A培養(yǎng)基中細(xì)菌的分布呈線性，是用平板劃線法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果；B培養(yǎng)基中細(xì)

63、菌均勻分布，是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。(4)振蕩培養(yǎng)可以提高培養(yǎng)液中溶解氧的含量，還可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高了營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，因此振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長速度快。 答案：(除標(biāo)明外，每空2分，共17分)(1)檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格(3分)　3.8×107(3分)　(2)灼燒　將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落(3分)　 (3)B　(4)溶解氧　營養(yǎng)物質(zhì) 14．(17分)細(xì)菌莢膜的觀察是微生物形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察的基本內(nèi)容之一。硅酸鹽細(xì)菌在無氮培養(yǎng)基、鉀細(xì)菌培養(yǎng)基及硅酸鹽細(xì)菌培養(yǎng)基上均能生長，形成較厚的莢膜。下表1為無氮培養(yǎng)基的配方，表2是每種培養(yǎng)基上每個(gè)稀

64、釋度的菌落數(shù)及菌落直徑情況。請回答下列問題： 表1　無氮培養(yǎng)基的配方 葡萄糖 10.0 g K2SO4 0.2 g K2HPO4 0.2 g CaCO3 5.0 g MgSO4·7H2O 0.2 g 瓊脂 20.0 g NaCl 0.2 g — — 將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容至1 000 mL 表2　各稀釋度平板上菌落數(shù)及菌落直徑 培養(yǎng)基種類 各稀釋度對應(yīng)的平均菌落數(shù) 菌落直徑(mm) 103 104 105 106 無氮培養(yǎng)基 32 3 2 0 1.0～2.0 鉀細(xì)菌培養(yǎng)基 36 6 4 0.6 多數(shù)小于1.

65、5 硅酸鹽細(xì)菌培養(yǎng)基 50 8 5 1.2 多數(shù)大于2.0 (1)根據(jù)無氮培養(yǎng)基的配方可知，從物理性質(zhì)上看該培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基；從功能上看，該培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基，理由是_______________________________。 (2)硅酸鹽細(xì)菌能在無氮培養(yǎng)基中生長，推測該細(xì)菌具有________________功能。 (3)為統(tǒng)計(jì)硅酸鹽細(xì)菌的數(shù)目，應(yīng)采用_______________________________________ 法進(jìn)行接種，該方法的所有操作都應(yīng)在____________________________________

66、_ 附近進(jìn)行。 (4)進(jìn)行上述實(shí)驗(yàn)的同時(shí)也設(shè)置了空白對照，空白對照的培養(yǎng)基中____________，說明培養(yǎng)基滅菌合格。根據(jù)表2中的數(shù)據(jù)可以得出，用____________培養(yǎng)基篩選硅酸鹽細(xì)菌的效果最好。 解析：(1)培養(yǎng)基中添加了一定的瓊脂，且該培養(yǎng)基是用來觀察菌落與測定菌落直徑的，因此該培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基。無氮培養(yǎng)基里不含氮源，故從功能上看，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。(2)硅酸鹽細(xì)菌能在無氮培養(yǎng)基中生長，推測該細(xì)菌具有固氮功能。(3)從“稀釋度”以及“菌落數(shù)”等信息可以分析出，硅酸鹽細(xì)菌的接種方法應(yīng)是稀釋涂布平板法，所有操作都應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。(4)為檢測培養(yǎng)基滅菌是否合格，需設(shè)置空白對照：空白對照的培養(yǎng)基中無菌落長出，說明培養(yǎng)基滅菌合格。從“平均菌落數(shù)”以及“菌落直徑”可以看出，硅酸鹽細(xì)菌培養(yǎng)基篩選硅酸鹽細(xì)菌的效果最好。 答案：(除標(biāo)明外，每空2分，共17分)(1)固體　選擇　配制的培養(yǎng)基中無氮源(3分)　(2)固定空氣中氮?dú)獾?或固氮)　(3)稀釋涂布平板　酒精燈火焰　(4)無菌落長出　硅酸鹽細(xì)菌 15．(18分)植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解，回答下列問