《2020版高考生物一輪復(fù)習(xí) 生物技術(shù)與工程 第3講 基因工程教學(xué)案 新人教版》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《2020版高考生物一輪復(fù)習(xí) 生物技術(shù)與工程 第3講 基因工程教學(xué)案 新人教版（16頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、 第3講　基因工程 [考綱展示]　1.基因工程的誕生(Ⅰ)　2.基因工程的原理及技術(shù)(含PCR技術(shù))(Ⅱ)　3.基因工程的應(yīng)用(Ⅱ)　4.蛋白質(zhì)工程(Ⅰ) 考點(diǎn)一| 基因工程的基本工具 1．基因工程的概念 (1)概念：按照人們的愿望，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，并通過(guò)體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類(lèi)型和生物產(chǎn)品。 (2)優(yōu)點(diǎn) ①與雜交育種相比：克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。 ②與誘變育種相比：定向改造生物的遺傳性狀。 2．基因工程的基本工具 (1)限制性核酸內(nèi)切酶(簡(jiǎn)稱(chēng)限制酶)。 ①來(lái)源：主要來(lái)自原核生物。 ②特點(diǎn)：具

2、有專(zhuān)一性，表現(xiàn)在兩個(gè)方面： 識(shí)別——雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列。 切割——特定核苷酸序列中的特定位點(diǎn)。 ③作用：斷裂特定的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵。 ④結(jié)果：產(chǎn)生黏性末端或平末端。 (2)DNA連接酶 種類(lèi) E·coli DNA連接酶 T4DNA連接酶 來(lái)源 大腸桿菌 T4噬菌體 特點(diǎn) 縫合黏性末端 縫合黏性末端和平末端 作用 縫合雙鏈DNA片段，恢復(fù)兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵 (3)載體 ①種類(lèi)：質(zhì)粒、λ噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒等。 ②質(zhì)粒的特點(diǎn) ③運(yùn)載體的作用：攜帶外源DNA片段進(jìn)入受體細(xì)胞。 1．(1)原核生物中限制酶為什么不切割

3、自身的DNA? 提示：原核生物中不存在該酶的識(shí)別序列或識(shí)別序列已被修飾等。 (2)圖甲表示EcoR Ⅰ限制酶及DNA連接酶的作用示意圖，圖乙表示Sma Ⅰ限制酶的作用示意圖。請(qǐng)據(jù)圖回答問(wèn)題： ①請(qǐng)寫(xiě)出EcoR Ⅰ限制酶和SmaⅠ限制酶識(shí)別的堿基序列以及切割位點(diǎn)。 提示：EcoR Ⅰ限制酶識(shí)別的堿基序列是GAATTC，切割位點(diǎn)在G和A之間；Sma Ⅰ限制酶識(shí)別的堿基序列是CCCGGG，切割位點(diǎn)在G和C之間。 ②限制酶和DNA連接酶的作用部位相同嗎？DNA連接酶起作用時(shí)，是否需要模板？ 提示：相同，都是磷酸二酯鍵。不需要模板。 1．基因工程技術(shù)使用限制酶需注意的四個(gè)問(wèn)題 (

4、1)獲取目的基因和切割載體時(shí)，經(jīng)常使用同一種限制酶(也可使用能切出相同末端的不同限制酶)，目的是產(chǎn)生相同的黏性末端或平末端。 (2)獲取一個(gè)目的基因需限制酶切割兩次，共產(chǎn)生4個(gè)黏性末端或平末端。 (3)限制酶切割位點(diǎn)的選擇，必須保證標(biāo)記基因的完整性，以便于檢測(cè)。 (4)為避免目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化和隨意連接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒。 2．載體上標(biāo)記基因的作用 載體上的標(biāo)記基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要轉(zhuǎn)入的受體細(xì)胞沒(méi)有抵抗相關(guān)抗生素的能力。當(dāng)含有抗生素抗性基因的載體進(jìn)入受體細(xì)胞后，抗性基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，使受體細(xì)胞能夠抵抗相應(yīng)抗生素，所以在受體細(xì)胞的培

5、養(yǎng)體系中加入該種抗生素就可以只保留轉(zhuǎn)入載體的受體細(xì)胞，原理如圖所示： 考法1　考查限制酶、DNA連接酶等酶的作用 1．(2016·全國(guó)卷Ⅲ)圖(a)中的三個(gè)DNA片段上依次表示出了EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ和Sau3A Ⅰ三種限制性?xún)?nèi)切酶的識(shí)別序列與切割位點(diǎn)，圖(b)為某種表達(dá)載體的示意圖(載體上的EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切點(diǎn)是唯一的)。 圖(a) 圖(b) 根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問(wèn)題： (1)經(jīng)BamH Ⅰ酶切后得到的目的基因可以與上述表達(dá)載體被________酶切后的產(chǎn)物連接，理由是_____________________________ __

6、__________________________________________________________。 (2)若某人利用圖(b)所示的表達(dá)載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子，如圖(c)所示。這三種重組子中，不能在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的基因產(chǎn)物的有________，不能表達(dá)的原因是___________________ _____________________________________________________________ ____________________________________________________________。

7、 圖(c) (3)DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有______________和______________，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是________。 解析：(1)由題圖可知，BamH Ⅰ 和Sau3A Ⅰ 兩種限制性?xún)?nèi)切酶的共同識(shí)別序列是，二者切割可以形成相同的黏性末端，因此經(jīng)BamH Ⅰ酶切得到的目的基因可以與圖(b)所示表達(dá)載體被Sau3A Ⅰ酶切后的產(chǎn)物連接。(2)在基因表達(dá)載體中，啟動(dòng)子應(yīng)位于目的基因的首端，終止子應(yīng)位于目的基因的尾端，這樣基因才能順利地轉(zhuǎn)錄，再完成翻譯過(guò)程，即順利表達(dá)。圖中甲所示的目的基因插入在啟動(dòng)子的上游，丙所示目的基因插入

8、在終止子的下游，二者的目的基因均不能被轉(zhuǎn)錄，因此目的基因不能表達(dá)。(3)常見(jiàn)的DNA連接酶有E·coliDNA連接酶和T4DNA連接酶，其中T4DNA連接酶既能連接黏性末端又能連接平末端。 答案：(1)Sau3A Ⅰ　兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端　(2)甲和丙　甲中目的基因插入在啟動(dòng)子的上游，丙中目的基因插入在終止子的下游，二者的目的基因均不能被轉(zhuǎn)錄 (3)E·coliDNA連接酶　T4DNA連接酶　T4DNA連接酶 考法2　考查載體的作用及特點(diǎn)等 2．(2016·全國(guó)卷Ⅰ)某一質(zhì)粒載體如圖所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活(Ampr表示氨芐青

9、霉素抗性基因，Tetr表示四環(huán)素抗性基因)。有人將此質(zhì)粒載體用BamH Ⅰ酶切后，與用BamH Ⅰ酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)，用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌。結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化，有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種，分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌?；卮鹣铝袉?wèn)題： (1)質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有________ ________(答出兩點(diǎn)即可)，而作為基因表達(dá)載體，除滿(mǎn)足上述基本條件外，還需具有啟動(dòng)子和終止子。 (2)如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在上述四種大腸桿菌細(xì)胞中，未被轉(zhuǎn)化的

10、和僅含環(huán)狀目的基因的細(xì)胞是不能區(qū)分的，其原因是______________________；并且________________和_______________的細(xì)胞也是不能區(qū)分的，其原因是_______________________________。在上述篩選的基礎(chǔ)上，若要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌單菌落，還需使用含有________的固體培養(yǎng)基。 (3)基因工程中，某些噬菌體經(jīng)改造后可以作為載體，其DNA復(fù)制所需的原料來(lái)自于________。 解析：(1)質(zhì)粒作為載體，應(yīng)具備的基本條件有：有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)，供外源DNA片段(基因)插入其中；在受體細(xì)胞中能自我

11、復(fù)制，或能整合到染色體DNA上，隨染色體DNA進(jìn)行同步復(fù)制；有特殊的標(biāo)記基因，供重組DNA的鑒定和選擇等等。(2)在培養(yǎng)基中加入氨芐青霉素進(jìn)行篩選，其中未被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌和僅含環(huán)狀目的基因的大腸桿菌，因不含氨芐青霉素抗性基因而都不能在此培養(yǎng)基上存活，二者不能區(qū)分。含有質(zhì)粒載體的大腸桿菌和含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌中都含有氨芐青霉素抗性基因，都能在此培養(yǎng)基上存活，二者也不能區(qū)分。若要將含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌進(jìn)一步篩選出來(lái)，還需要使用含有四環(huán)素的固體培養(yǎng)基。(3)某些噬菌體經(jīng)改造后作為載體，導(dǎo)入受體細(xì)胞后，其DNA復(fù)制所需的原料來(lái)自于受體細(xì)胞。 答案：(1)能自我復(fù)制

12、、具有標(biāo)記基因、具有一至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)(答出兩點(diǎn)即可) (2)二者均不含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均不生長(zhǎng)　含有質(zhì)粒載體　含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒(或答含有重組質(zhì)粒)　二者均含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)　四環(huán)素　(3)受體細(xì)胞 考點(diǎn)二| 基因工程的基本操作及其應(yīng)用 1．基因工程的基本程序 (1)目的基因的獲取 ①?gòu)幕蛭膸?kù)中獲取 ②人工合成 ③利用PCR技術(shù)擴(kuò)增 (2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建——基因工程的核心 ①目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。 ②基因表達(dá)載體的組成 (3

13、)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 ①轉(zhuǎn)化含義：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)遺傳和表達(dá)的過(guò)程。 ②轉(zhuǎn)化方法 生物類(lèi)型 植物 動(dòng)物 微生物 受體細(xì)胞 體細(xì)胞 受精卵 大腸桿菌或酵母菌等 常用方法 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法 顯微注射法 感受態(tài)細(xì)胞法 (4)目的基因的檢測(cè)與鑒定 方法 檢測(cè)或鑒定目的 水平 DNA分子雜交技術(shù) 檢測(cè)目的基因的有無(wú) 分子水平 分子雜交技術(shù) 目的基因是否轉(zhuǎn)錄 抗原—抗體雜交 目的基因是否翻譯 抗蟲(chóng)或抗病接種實(shí)驗(yàn) 是否具有抗蟲(chóng)抗病特性 個(gè)體水平 2．PCR技術(shù) (1)原理：DNA雙鏈復(fù)制。 (2

14、)條件 (3)過(guò)程 (4)結(jié)果：上述三步反應(yīng)完成后，一個(gè)DNA分子就變成了兩個(gè)DNA分子，隨著重復(fù)次數(shù)的增多，DNA分子就以2n的形式增加。PCR的反應(yīng)過(guò)程都是在PCR擴(kuò)增儀中完成的。 3．基因工程的應(yīng)用 (1)植物基因工程 培育抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物、抗病轉(zhuǎn)基因植物、抗逆轉(zhuǎn)基因植物、利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì)。 (2)動(dòng)物基因工程 ①提高動(dòng)物生長(zhǎng)速度、改善畜產(chǎn)品的品質(zhì)、用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物、用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物作器官移植的供體。 ②乳腺生物反應(yīng)器：藥用蛋白基因和乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起。 (3)基因工程藥品 ①受體細(xì)胞：多為原核細(xì)胞。原因是其繁殖快，多為單細(xì)胞，遺傳

15、物質(zhì)相對(duì)較少。 ②成果：生產(chǎn)出細(xì)胞因子、抗體、疫苗、激素等。 (4)基因治療 ①方法：基因置換、基因修復(fù)、基因增補(bǔ)、基因失活等。 ②類(lèi)型：體內(nèi)基因治療和體外基因治療。 1．將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞整合到線粒體DNA或葉綠體DNA上，能否穩(wěn)定遺傳？說(shuō)明理由。 提示：一般不能。因?yàn)閮H把目的基因整合到線粒體DNA或葉綠體DNA上，細(xì)胞分裂可能導(dǎo)致目的基因丟失，因此無(wú)法穩(wěn)定遺傳。 2．用箭頭及必要的文字簡(jiǎn)述基因組文庫(kù)和部分基因文庫(kù)構(gòu)建過(guò)程。 提示：①基因組文庫(kù)的構(gòu)建過(guò)程為：某種生物全部DNA許多DNA片段受體菌群體。 ②部分基因文庫(kù)的構(gòu)建過(guò)程為：某種生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的mRNAcD

16、NA受體菌群 基因工程操作的四個(gè)易錯(cuò)點(diǎn) (1)目的基因的插入位點(diǎn)不是隨意的，基因表達(dá)需要啟動(dòng)子與終止子的調(diào)控，所以目的基因應(yīng)插入啟動(dòng)子與終止子之間的部位。 (2)基因工程操作過(guò)程中只有第三步(將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞)沒(méi)有堿基互補(bǔ)配對(duì)現(xiàn)象。 (3)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法原理：農(nóng)桿菌易感染植物細(xì)胞，并將其Ti質(zhì)粒上的T-DNA轉(zhuǎn)移并整合到受體細(xì)胞染色體DNA上。 (4)啟動(dòng)子≠起始密碼子，終止子≠終止密碼子 啟動(dòng)子和終止子位于DNA片段上，分別控制轉(zhuǎn)錄過(guò)程的啟動(dòng)和終止；起始密碼子和終止密碼子位于mRNA上，分別控制翻譯過(guò)程的啟動(dòng)和終止。 考法1　基因工程的基本操作程序分析 1．(2

17、018·全國(guó)卷Ⅰ)回答下列問(wèn)題： (1)博耶(H.Boyer)和科恩(S.Cohen)將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中進(jìn)行了表達(dá)。該研究除證明了質(zhì)?？梢宰鳛檩d體外，還證明了_____________________________________________ ______________________________________________________________ ________________________________________________(答出兩點(diǎn)即可)。 (2)體外重組的質(zhì)粒可通過(guò)Ca2＋參與的________方法導(dǎo)入

18、大腸桿菌細(xì)胞；而體外重組的噬菌體DNA通常需與________組裝成完整噬菌體后，才能通過(guò)侵染的方法將重組的噬菌體DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞。在細(xì)菌、心肌細(xì)胞、葉肉細(xì)胞中，可作為重組噬菌體宿主細(xì)胞的是________。 (3)真核生物基因(目的基因)在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時(shí)，表達(dá)出的蛋白質(zhì)可能會(huì)被降解。為防止蛋白質(zhì)被降解，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)選用____________的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，在蛋白質(zhì)純化的過(guò)程中應(yīng)添加________的抑制劑。 解析：(1)兩位科學(xué)家將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中并進(jìn)行了表達(dá)，因此，該研究可以證明：質(zhì)粒可以作為載體，真核細(xì)胞的基因在原核細(xì)胞中也可以表達(dá)

19、(不同生物共用一套密碼子)、體外重組的質(zhì)?？梢赃M(jìn)入受體細(xì)胞等。(2)目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程稱(chēng)為轉(zhuǎn)化，將質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌時(shí)，常用的轉(zhuǎn)化方法是：首先用Ca2＋處理大腸桿菌細(xì)胞，使其成為感受態(tài)。噬菌體DNA沒(méi)有侵染能力，體外重組的噬菌體DNA通常需與外 殼蛋白組裝成完整噬菌體才能完成侵染過(guò)程。噬菌體多寄生在細(xì)菌中，但不能寄生在心肌細(xì)胞和葉肉細(xì)胞中。(3)若要使蛋白質(zhì)不被降解，則大腸桿菌體內(nèi)不能存在蛋白酶，因此，實(shí)驗(yàn)中應(yīng)選用蛋白酶缺陷型的大腸桿菌作為受體細(xì)胞。同理，在蛋白質(zhì)純化過(guò)程中，也不能使蛋白質(zhì)降解，因此，應(yīng)添加蛋白酶抑制劑。 答案：(1)體外重組的質(zhì)?？?/p>

20、以進(jìn)入受體細(xì)胞；真核生物基因可在原核細(xì)胞中表達(dá) (2)轉(zhuǎn)化　外殼蛋白(或答噬菌體蛋白)　細(xì)菌 (3)蛋白酶缺陷型　蛋白酶 考法2　基因工程技術(shù)的應(yīng)用 2．(2017·全國(guó)卷Ⅱ)幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題： (1)在進(jìn)行基因工程操作時(shí)，若要從植物體中提取幾丁質(zhì)酶的mRNA，常選用嫩葉而不選用老葉作為實(shí)驗(yàn)材料，原因是__________________。提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是_____________________________________

21、________________。 (2)以mRNA為材料可以獲得cDNA，其原理是_________________ ______________________________________________________________ _____________________________________________________________。 (3)若要使目的基因在受體細(xì)胞中表達(dá)，需要通過(guò)質(zhì)粒載體而不能直接將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，原因是_____________________________ ________________________________

22、______________(答出兩點(diǎn)即可)。 (4)當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是________________________________________________________。 (5)若獲得的轉(zhuǎn)基因植株(幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中)抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是______________________________________________________________ __________________________________________________________

23、__。 解析：(1)與老葉相比，嫩葉組織細(xì)胞易破碎，容易提取到幾丁質(zhì)酶的mRNA。提取RNA時(shí)，提取液中添加RNA酶抑制劑可防止RNA被RNA酶催化降解。 (2)以mRNA為模板，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄(反轉(zhuǎn)錄)可以獲得cDNA。 (3)因該目的基因是通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄形成的，無(wú)表達(dá)所需的啟動(dòng)子，也無(wú)在受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制所需的復(fù)制原點(diǎn)等，所以在受體細(xì)胞內(nèi)不能穩(wěn)定存在和表達(dá)，也不能遺傳下去。 (4)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，DNA連接酶能催化目的基因和質(zhì)粒載體這兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵。 (5)轉(zhuǎn)基因植株的基因組中含有幾丁質(zhì)酶基因，但該植株抗真菌的能力并沒(méi)有提高

24、，可能是由于轉(zhuǎn)錄或翻譯異常，即幾丁質(zhì)酶基因未能正常表達(dá)。 答案：(1)嫩葉組織細(xì)胞易破碎　防止RNA降解　(2)在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以mRNA為模板按照堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則可以合成cDNA　(3)目的基因無(wú)復(fù)制原點(diǎn)；目的基因無(wú)表達(dá)所需啟動(dòng)子　(4)磷酸二酯鍵　(5)目的基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯異常 3．(2019·福建高三質(zhì)檢)苜蓿是目前我國(guó)種植最廣的豆科牧草，但是病菌往往威脅著苜蓿的生長(zhǎng)。為提高產(chǎn)量，研究人員將溶菌酶基因(LYZ基因)和綠色熒光蛋白基因(GFP基因)連接為L(zhǎng)YZ-GFP基因，利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將其導(dǎo)入苜蓿細(xì)胞中，并通過(guò)組織培養(yǎng)成功獲得了抗病植株。 圖1表示Ti質(zhì)粒，其中Vir區(qū)的基

25、因產(chǎn)物是T-DNA轉(zhuǎn)移的必備條件；圖2表示含有LYZ-GFP基因的DNA片段。圖中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)?；卮鹣铝袉?wèn)題： (1)構(gòu)建含有LYZ-GFP基因的重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用限制酶________進(jìn)行切割，原因是______________________________________________ ____________________________________________________________。 (2)據(jù)圖分析，在培育轉(zhuǎn)基因苜蓿植株過(guò)程中，應(yīng)選擇LYZ-GFP基因中的GFP基因?yàn)闃?biāo)記基因，而不選擇質(zhì)粒中原有的卡那霉素抗性基因?yàn)闃?biāo)記基因，這種做法的優(yōu)

26、點(diǎn)是________________________。 (3)在組織培養(yǎng)過(guò)程中，對(duì)愈傷組織進(jìn)行顯微檢測(cè)，若________，則表明細(xì)胞中GFP基因存在并表達(dá)。 (4)選擇含有GFP基因的愈傷組織為材料，用PCR技術(shù)擴(kuò)增并檢測(cè)LYZ基因，需選用一段____________________合成引物，該過(guò)程所用到的酶必須具有________的特性。 (5)對(duì)該苜蓿植株進(jìn)行病菌接種實(shí)驗(yàn)，通過(guò)觀察其抗病程度可以進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定，原因是__________________________________ ___________________________________________

27、__________________。 解析：(1)據(jù)圖2可知，構(gòu)建含有LYZ-GFP基因的重組質(zhì)粒時(shí)，含有LYZ-GFP基因的片段有三個(gè)酶切位點(diǎn)，基因兩側(cè)沒(méi)有相同限制酶，應(yīng)該使用雙酶切法，限制酶Ⅲ為必選。根據(jù)圖1結(jié)合農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的原理，所用限制酶切割位點(diǎn)必須在T-DNA片段上，限制酶Ⅰ會(huì)切斷Ti質(zhì)粒本身的四環(huán)素抗性基因，但GFP基因、卡那霉素抗性基因都可以作為標(biāo)記基因。所以應(yīng)選擇限制酶Ⅰ和Ⅲ。限制酶Ⅱ會(huì)破壞質(zhì)粒中的Vir區(qū)的基因，不可選用。 (2)據(jù)圖1可知，若LYZ-GFP基因在T-DNA片段上，就能整合到苜蓿細(xì)胞染色體的DNA上，便于追蹤檢測(cè)LYZ基因的表達(dá)情況，這是選用GFP基因?yàn)?/p>

28、標(biāo)記基因的優(yōu)點(diǎn)。而卡那霉素抗性基因不在T-DNA片段上，不能整合到苜蓿細(xì)胞染色體的DNA上，所以相對(duì)不宜選用。 (3)GFP基因的表達(dá)產(chǎn)物是綠色熒光蛋白，對(duì)愈傷組織進(jìn)行顯微檢測(cè)時(shí)，若觀察到綠色熒光，則表明細(xì)胞中的GFP基因存在并表達(dá)。 (4)進(jìn)行PCR技術(shù)擴(kuò)增并檢測(cè)LYZ基因的前提，要有一段已知的LYZ基因的核苷酸序列以便合成引物。PCR擴(kuò)增過(guò)程使用的DNA聚合酶具有耐高溫或熱穩(wěn)定的特性。 (5)LYZ基因能夠表達(dá)出溶菌酶，根據(jù)免疫學(xué)知識(shí)得知：溶菌酶是免疫活性物質(zhì)，能夠殺滅病菌。因此轉(zhuǎn)基因成功的苜蓿植株會(huì)表現(xiàn)出抗病特性。 答案：(1)Ⅰ和Ⅲ(對(duì)Ti質(zhì)粒和含有LYZ-GFP基因的片段)　

29、選擇限制酶Ⅰ和限制酶Ⅲ能獲取LYZ-GFP基因，不會(huì)破壞質(zhì)粒中的Vir區(qū)的基因，使目的基因的插入位點(diǎn)位于T-DNA片段上　(2)LYZ-GFP基因在T-DNA片段上，能整合到苜蓿細(xì)胞染色體的DNA上，便于追蹤檢測(cè)LYZ基因的表達(dá)情況　(3)觀察到綠色熒光　(4)LYZ基因的核苷酸序列　耐高溫(或“熱穩(wěn)定”) 　(5)LYZ基因能夠表達(dá)出溶菌酶，溶菌酶能夠殺滅病菌，表現(xiàn)出抗病特性 考點(diǎn)三| 蛋白質(zhì)工程及應(yīng)用 1．蛋白質(zhì)工程 (1)概念 以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過(guò)基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新蛋白質(zhì)，以滿(mǎn)足人類(lèi)的生產(chǎn)和生活的需求。

30、(2)流程圖 寫(xiě)出流程圖中字母代表的含義： A．轉(zhuǎn)錄，B.翻譯，C.分子設(shè)計(jì)，D.多肽鏈，E.預(yù)期功能。 2．蛋白質(zhì)工程與基因工程的比較 (1)區(qū)別 項(xiàng)目 蛋白質(zhì)工程 基因工程 過(guò)程 預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列 獲取目的基因→基因表達(dá)載體的構(gòu)建→將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞→目的基因的檢測(cè)與鑒定 實(shí)質(zhì) 定向改造或生產(chǎn)人類(lèi)所需的蛋白質(zhì) 定向改造生物的遺傳特性，以獲得人類(lèi)所需的生物類(lèi)型和生物產(chǎn)品 結(jié)果 可生產(chǎn)自然界沒(méi)有的蛋白質(zhì) 只能生產(chǎn)自然界已有的蛋白質(zhì) (2)聯(lián)系 ①蛋白質(zhì)工程是在基因工程的基礎(chǔ)上，延伸

31、出來(lái)的第二代基因工程。 ②基因工程中所利用的某些酶需要通過(guò)蛋白質(zhì)工程進(jìn)行修飾、改造。 1．對(duì)天然蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，應(yīng)該通過(guò)對(duì)基因的操作來(lái)實(shí)現(xiàn)，為什么不能直接對(duì)蛋白質(zhì)分子進(jìn)行操作？ 提示：如果對(duì)蛋白質(zhì)直接進(jìn)行改造，即使改造成功了，被改造過(guò)的蛋白質(zhì)分子還是無(wú)法遺傳。 2．絕大多數(shù)酶都是蛋白質(zhì)，簡(jiǎn)要表述酶工程與蛋白質(zhì)工程有何區(qū)別和聯(lián)系？ 提示：酶工程的重點(diǎn)在于對(duì)已存在的酶的合成充分利用，而蛋白質(zhì)工程則是對(duì)已存在的蛋白質(zhì)進(jìn)行修飾改造或制造出自然界不存在的蛋白質(zhì)。酶工程是蛋白質(zhì)工程的一部分。 考法　考查蛋白質(zhì)工程的原理及應(yīng)用 (2015·全國(guó)卷Ⅱ)已知生物體內(nèi)有一種蛋白質(zhì)(P)，該

32、蛋白質(zhì)是一種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，由305個(gè)氨基酸組成。如果將P分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸，240位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸，改變后的蛋白質(zhì)(P1)不但保留P的功能，而且具有了酶的催化活性。回答下列問(wèn)題： (1)從上述資料可知，若要改變蛋白質(zhì)的功能，可以考慮對(duì)蛋白質(zhì)的________進(jìn)行改造。 (2)以P基因序列為基礎(chǔ)，獲得P1基因的途徑有修飾________基因或合成________基因。所獲得的基因表達(dá)時(shí)是遵循中心法則的，中心法則的全部?jī)?nèi)容包括________的復(fù)制，以及遺傳信息在不同分子之間的流動(dòng)，即：_____________________________________________

33、_____________ ____________________________________________________________。 (3)蛋白質(zhì)工程也被稱(chēng)為第二代基因工程，其基本途徑是從預(yù)期蛋白質(zhì)功能出發(fā)，通過(guò)__________________和__________________，進(jìn)而確定相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列，據(jù)此獲得基因，再經(jīng)表達(dá)、純化獲得蛋白質(zhì)，之后還需要對(duì)蛋白質(zhì)的生物________進(jìn)行鑒定。 解析：(1)從題中所述資料可知，將P分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸，240位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸后，該蛋白質(zhì)的功能發(fā)生了改變，此過(guò)程是通過(guò)對(duì)構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸

34、的排列順序進(jìn)行改造，進(jìn)而改變了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，從而改變了蛋白質(zhì)的功能。 (2)在蛋白質(zhì)工程中，目的基因可以以P基因序列為基礎(chǔ)，對(duì)生物體內(nèi)原有P基因進(jìn)行修飾，也可以通過(guò)人工合成法合成新的P1基因。 中心法則的內(nèi)容如圖所示： 由圖可知，中心法則的全部?jī)?nèi)容包括：DNA以自身為模板進(jìn)行的復(fù)制，DNA通過(guò)轉(zhuǎn)錄將遺傳信息傳遞給RNA，最后RNA通過(guò)翻譯將遺傳信息表達(dá)成蛋白質(zhì)；在某些病毒中RNA可自我復(fù)制(如煙草花葉病毒等)，在某些病毒中能以RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄合成DNA(如HIV)，這是對(duì)中心法則的補(bǔ)充。 (3)蛋白質(zhì)工程的基本途徑是預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→合成

35、DNA→表達(dá)出蛋白質(zhì)，經(jīng)過(guò)該過(guò)程得到的蛋白質(zhì)，需要對(duì)其生物功能進(jìn)行鑒定，以保證其發(fā)揮正常作用。 答案：(1)氨基酸序列(或結(jié)構(gòu)) (2)P　P1　DNA和RNA(或遺傳物質(zhì))　DNA→RNA、RNA→DNA、RNA→蛋白質(zhì)(或轉(zhuǎn)錄、逆轉(zhuǎn)錄、翻譯) (3)設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)　推測(cè)氨基酸序列　功能 真題體驗(yàn)| 感悟高考　淬煉考能 1．(2017·北京高考)為了增加菊花花色類(lèi)型，研究者從其他植物中克隆出花色基因C(圖1)，擬將其與質(zhì)粒(圖2)重組，再借助農(nóng)桿菌導(dǎo)入菊花中。 下列操作與實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟环氖?　　) A．用限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ和連接酶構(gòu)建重組質(zhì)粒 B．用含C基因的農(nóng)桿

36、菌侵染菊花愈傷組織，將C基因?qū)爰?xì)胞 C．在培養(yǎng)基中添加卡那霉素，篩選被轉(zhuǎn)化的菊花細(xì)胞 D．用分子雜交方法檢測(cè)C基因是否整合到菊花染色體上 C　[A對(duì)：C基因兩端有EcoR Ⅰ酶切位點(diǎn)，可用限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ和(DNA)連接酶構(gòu)建重組質(zhì)粒。 B對(duì)：一般用農(nóng)桿菌等作為媒介去侵染植物的愈傷組織等，將含有目的基因的質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞。 C錯(cuò)：據(jù)圖可知，質(zhì)粒中含有潮霉素抗性基因，不含卡那霉素抗性基因，故無(wú)法用卡那霉素來(lái)篩選被轉(zhuǎn)化的菊花細(xì)胞。 D對(duì)：檢測(cè)C基因是否整合到菊花染色體上，常采用DNA分子雜交技術(shù)，即在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等作為標(biāo)記，以此作為探針，使探針與C基

37、因雜交，若顯示出雜交帶，則表明目的基因已插入染色體DNA中。] 2．(2015·重慶高考)下列有關(guān)人胰島素基因表達(dá)載體的敘述，正確的是(　　) A．表達(dá)載體中的胰島素基因可通過(guò)人肝細(xì)胞mRNA反轉(zhuǎn)錄獲得 B．表達(dá)載體的復(fù)制和胰島素基因的表達(dá)均啟動(dòng)于復(fù)制原(起)點(diǎn) C．借助抗生素抗性基因可將含胰島素基因的受體細(xì)胞篩選出來(lái) D．啟動(dòng)子和終止密碼子均在胰島素基因的轉(zhuǎn)錄中起作用 答案：C 3．(多選)(2014·江蘇高考)下列關(guān)于基因工程技術(shù)的敘述，錯(cuò)誤的是(　　) A．切割質(zhì)粒的限制性核酸內(nèi)切酶均特異性地識(shí)別6個(gè)核苷酸序列 B．PCR反應(yīng)中溫度的周期性改變是為了DNA聚合酶催化不同

38、的反應(yīng) C．載體質(zhì)粒通常采用抗生素合成基因作為篩選標(biāo)記基因 D．抗蟲(chóng)基因即使成功地插入到植物細(xì)胞染色體上也未必能正常表達(dá) 答案：ABC 4．(2018·全國(guó)卷Ⅱ)某種熒光蛋白(GFP)在紫外光或藍(lán)光激發(fā)下會(huì)發(fā)出綠色熒光，這一特性可用于檢測(cè)細(xì)胞中目的基因的表達(dá)。某科研團(tuán)隊(duì)將某種病毒的外殼蛋白(L1)基因連接在GFP基因的5′末端，獲得了L1-GFP融合基因(簡(jiǎn)稱(chēng)為甲)，并將其插入質(zhì)粒P0，構(gòu)建了真核表達(dá)載體P1，其部分結(jié)構(gòu)和酶切位點(diǎn)的示意圖如下，圖中E1～E4四種限制酶產(chǎn)生的黏性末端各不相同。 回答下列問(wèn)題： (1)據(jù)圖推斷，該團(tuán)隊(duì)在將甲插入質(zhì)粒P0時(shí)，使用了兩種限制酶，這兩種酶

39、是________。使用這兩種酶進(jìn)行酶切是為了保證________，也是為了保證________________。 (2)將P1轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)的牛皮膚細(xì)胞后，若在該細(xì)胞中觀察到了綠色熒光，則說(shuō)明L1基因在牛的皮膚細(xì)胞中完成了________和________過(guò)程。 (3)為了獲得含有甲的牛，該團(tuán)隊(duì)需要做的工作包括：將能夠產(chǎn)生綠色熒光細(xì)胞的________移入牛的______________中、體外培養(yǎng)、胚胎移植等。 (4)為了檢測(cè)甲是否存在于克隆牛的不同組織細(xì)胞中，某同學(xué)用PCR方法進(jìn)行鑒定，在鑒定時(shí)應(yīng)分別以該牛不同組織細(xì)胞中的________(填“mRNA”“總RNA”或“核DNA”)作

40、為PCR模板。 解析：(1)據(jù)圖示信息分析：將L1-GFP融合基因(甲)插入質(zhì)粒時(shí)使用酶E1和E4進(jìn)行酶切，既能保證L1-GFP融合基因的完整，又能保證L1-GFP融合基因與載體的正確連接。(2)目的基因在受體細(xì)胞中的表達(dá)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個(gè)過(guò)程。(3)將體外培養(yǎng)的含有目的基因的動(dòng)物體細(xì)胞核移入該動(dòng)物的去核卵母細(xì)胞中，經(jīng)過(guò)體外胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等技術(shù)可獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。(4)檢測(cè)目的基因是否存在于克隆牛的不同組織細(xì)胞中，采用PCR技術(shù)鑒定時(shí)，應(yīng)以該牛不同組織細(xì)胞中的核DNA作為PCR模板。 答案：(1)E1和E4　甲的完整　甲與載體正確連接　(2)轉(zhuǎn)錄　翻譯　(3)細(xì)胞核　去核卵母細(xì)胞　(4)

41、核DNA 5．(2017·全國(guó)卷Ⅰ)真核生物基因中通常有內(nèi)含子，而原核生物基因中沒(méi)有，原核生物沒(méi)有真核生物所具有的切除內(nèi)含子對(duì)應(yīng)的RNA序列的機(jī)制。已知在人體中基因A(有內(nèi)含子)可以表達(dá)出某種特定蛋白(簡(jiǎn)稱(chēng)蛋白A)?；卮鹣铝袉?wèn)題： (1)某同學(xué)從人的基因組文庫(kù)中獲得了基因A，以大腸桿菌作為受體細(xì)胞卻未得到蛋白A，其原因是__________________________________ ______________________________________________________________ _____________________________________

42、________________________。 (2)若用家蠶作為表達(dá)基因A的受體，在噬菌體和昆蟲(chóng)病毒兩種載體中，不選用________作為載體，其原因是____________________________ ______________________________________________________________ ____________________________________________________________。 (3)若要高效地獲得蛋白A，可選用大腸桿菌作為受體。因?yàn)榕c家蠶相比，大腸桿菌具有__________________(答出兩點(diǎn)

43、即可)等優(yōu)點(diǎn)。 (4)若要檢測(cè)基因A是否翻譯出蛋白A，可用的檢測(cè)物質(zhì)是_______ _________(填“蛋白A的基因”或“蛋白A的抗體”)。 (5)艾弗里等人的肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)為證明DNA是遺傳物質(zhì)做出了重要貢獻(xiàn)，也可以說(shuō)是基因工程的先導(dǎo)，如果說(shuō)他們的工作為基因工程理論的建立提供了啟示，那么，這一啟示是______________________ ____________________________________________________________。 解析：(1)人是真核生物，從人的基因組文庫(kù)中獲得的基因A有內(nèi)含子，而受體細(xì)胞大腸桿菌是原核生物，原核生物基因中

44、沒(méi)有內(nèi)含子，相應(yīng)的就沒(méi)有切除內(nèi)含子對(duì)應(yīng)的RNA序列的機(jī)制，故無(wú)法表達(dá)出蛋白A。 (2)噬菌體是專(zhuān)一性侵染細(xì)菌的病毒，以細(xì)菌為宿主細(xì)胞，而昆蟲(chóng)病毒侵染的是昆蟲(chóng)，以昆蟲(chóng)為宿主細(xì)胞。家蠶屬于昆蟲(chóng)，故應(yīng)選用昆蟲(chóng)病毒作為載體。 (3)與家蠶相比，大腸桿菌具有繁殖快、容易培養(yǎng)等優(yōu)點(diǎn)，故要高效地獲得蛋白A，可選用大腸桿菌作為受體。 (4)檢測(cè)基因A是否翻譯出蛋白A，可用抗原—抗體雜交法。 (5)艾弗里等人的肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中，S型細(xì)菌的DNA可以使R型細(xì)菌發(fā)生轉(zhuǎn)化，說(shuō)明可調(diào)控多糖莢膜產(chǎn)生的基因整合到了R型細(xì)菌的DNA分子中并成功得以表達(dá)。也就是說(shuō)DNA可以從一種生物個(gè)體轉(zhuǎn)移到另一種生物個(gè)體并進(jìn)行表達(dá)，這就為基因工程理論的建立提供了啟示。 答案：(1)基因A有內(nèi)含子，在大腸桿菌中，其初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中與內(nèi)含子對(duì)應(yīng)的RNA序列不能被切除，無(wú)法表達(dá)出蛋白A (2)噬菌體　噬菌體的宿主是細(xì)菌，而不是家蠶　(3)繁殖快、容易培養(yǎng)　(4)蛋白A的抗體　(5)DNA可以從一種生物個(gè)體轉(zhuǎn)移到另一種生物個(gè)體 - 16 -