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1、2022年高中生物 專題2 課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)練習(xí) 新人教版選修1 一、培養(yǎng)基 1．概念 人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。 2．種類 按照培養(yǎng)基的物理狀態(tài)劃分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。 3．營養(yǎng)要素 各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。 二、無菌技術(shù) 1．獲得純凈培養(yǎng)物 關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵，具體操作如下： (1)對實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒。 (2)將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌。 (3)為避免周圍環(huán)

2、境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。 (4)實(shí)驗(yàn)操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。 2．消毒和滅菌 (1)消毒是指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物(不包括芽孢和孢子)。常用的方法有煮沸消毒法和化學(xué)藥劑消毒法。 (2)滅菌是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物(包括芽孢和孢子)。常見的方法有：灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。 三、大腸桿菌的純化培養(yǎng) 1．制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 2．純化大腸桿菌 (1)純化培養(yǎng)方法：在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上純化大腸桿菌，最常用的方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。 (2)

3、純化培養(yǎng)的原理：想方設(shè)法在培養(yǎng)基上得到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的菌落，即獲得較純的菌種。 (3)平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。其具體操作是： ①將接種環(huán)放在火焰上燃燒，直到接種環(huán)燒紅。 ②在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開棉塞。 ③將試管口通過火焰。 ④將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，沾取一環(huán)菌液。 ⑤將試管口通過火焰，并塞上棉塞。 ⑥左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三到五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養(yǎng)基。 ⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以

4、上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。 ⑧將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 (4)稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。其操作步驟是： ①系列稀釋(梯度稀釋)操作： ②涂布平板操作： a．將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。 b．取少量菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。 c．將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8 ～10 s。 d．用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。 3．菌種保藏的兩種方法 一、選擇題 1．下列有關(guān)培養(yǎng)基的敘述正確的是(A) A

5、．培養(yǎng)基是為微生物的生長繁殖提供營養(yǎng)的基質(zhì) B．培養(yǎng)基只有兩類：液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基 C．固體培養(yǎng)基中加入少量水即可制成液體培養(yǎng)基 D．微生物在固體培養(yǎng)基上生長時，可以形成肉眼可見的單個細(xì)菌 解析：培養(yǎng)基除固體、液體培養(yǎng)基外，還有半固體培養(yǎng)基，B錯誤；固體培養(yǎng)基中加入了凝固劑，加入少量水仍為固體培養(yǎng)基，C錯誤；微生物在固體培養(yǎng)基上生長時，可以形成肉眼可見的單個菌落，D錯誤。 2．有關(guān)培養(yǎng)基配制原則表述正確的是(C) A．任何培養(yǎng)基都必須含有碳源、氮源、礦質(zhì)元素、水及生長因子 B．碳源和氮源必須具有一定比例，碳元素的含量最多，其次為氮元素 C．微生物的生長除受營養(yǎng)因素影響外，還

6、受到pH、氧、滲透壓的影響 D．營養(yǎng)物質(zhì)的濃度越高越好 解析：培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物時不需要添加碳源，培養(yǎng)固氮菌時可以不加氮源；一般來說，培養(yǎng)基中含量最多的是水；配制培養(yǎng)基時要合理控制營養(yǎng)物質(zhì)的濃度，必須考慮微生物對滲透壓的耐受能力。 3．下面對微生物培養(yǎng)中滅菌的理解不正確的是(B) A．防止雜菌污染 B．滅菌就是殺死培養(yǎng)基中的雜菌 C．培養(yǎng)基和培養(yǎng)設(shè)備都必須進(jìn)行滅菌 D．滅菌必須在接種前 解析：滅菌的目的是防止雜菌污染，但實(shí)際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生物。 4．自養(yǎng)型微生物與異養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基的主要差別在于(A) A．碳源 B．氮源 C．無機(jī)鹽 D．生長

7、因子 解析：自養(yǎng)型微生物主要包括進(jìn)行光合作用或進(jìn)行化能合成作用的微生物，他們能夠利用CO2來合成自身所需的有機(jī)物；而異養(yǎng)型微生物主要是直接利用外界的有機(jī)物來合成自生所需的有機(jī)物，所以他們培養(yǎng)基的主要差別就在于自養(yǎng)型微生物主要是利用無機(jī)物中的碳，而異養(yǎng)型微生物主要是利用有機(jī)物中的碳。 5．下列制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述，錯誤的是(A) A．操作順序?yàn)橛?jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌 B．將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯 C．將培養(yǎng)基冷卻至50 ℃左右時進(jìn)行倒平板 D．將平板冷卻凝固約5～10 min后將平板倒過來放置 解析：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是計(jì)算、稱量、溶化

8、、滅菌、倒平板，順序不能顛倒。牛肉膏容易吸潮，所以當(dāng)牛肉膏融化并與稱量紙分離后，用玻璃棒取出稱量紙。將培養(yǎng)基冷卻至50 ℃，用手觸摸錐形瓶感覺剛剛不燙手時倒平板，平板冷卻后還需倒置。 6．平板冷卻凝固后要將平板倒置，其意義是(D) A．利于大腸桿菌的接種 B．有利于大腸桿菌培養(yǎng) C．利于培養(yǎng)基的冷卻 D．防止皿蓋冷卻水倒流入培養(yǎng)基，防止雜菌污染 解析：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好的揮發(fā)，又可以防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 7．純化大腸桿菌的步驟正確的是(A) A．樣品稀釋→劃線或涂布法分離→培養(yǎng)

9、成單菌落 B．樣品稀釋→培養(yǎng)成單菌落→劃線或涂布法分離 C．樣品稀釋→劃線或涂布→分離→培養(yǎng)成單菌落 D．樣品稀釋→劃線→涂布→分離→培養(yǎng)成單菌落 解析：微生物的分離與純化主要包括樣品稀釋、劃線或涂布及培養(yǎng)三個基本步驟，其中劃線或涂布法是對微生物進(jìn)行分離，培養(yǎng)是將分離后的菌種培養(yǎng)成單個菌落。 8．某研究小組從有機(jī)廢水中分離微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是(B) A．培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進(jìn)行滅菌 B．轉(zhuǎn)換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進(jìn)行劃線 C．接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng) D．培養(yǎng)過程中每隔一周觀察一次 解析：在配制培養(yǎng)基的過程中要先滅菌后倒平板，A錯誤；轉(zhuǎn)換劃線角

10、度后要對接種環(huán)進(jìn)行灼燒滅菌再進(jìn)行劃線，B正確；接種后放置在恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，C錯誤；培養(yǎng)過程中一般隔12 h或24 h觀察一次，D錯誤。 9．現(xiàn)有菌液10 mL，按下圖進(jìn)行系列稀釋，在最后一個試管中測得細(xì)菌數(shù)為20個，則未稀釋前的試管中有細(xì)菌(C) A．600個　 B．1 200個 C．2×107個　 D．2×106個 解析：從本題的圖中可看出，每次都是稀釋10倍，總共稀釋6次，即稀釋106倍，最后一個試管為20個，即原來菌液中應(yīng)該有細(xì)菌2×107個。 10．為了保持菌種的純凈需要進(jìn)行菌種的保藏，下列有關(guān)敘述不正確的是(D) A．對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏

11、的方法 B．臨時保藏的菌種一般是接種到試管的斜面培養(yǎng)基上 C．臨時保藏菌種容易被污染或產(chǎn)生變異 D．對于需要長期保存的菌種，可以采用低溫4 ℃保藏的方法 解析：低溫4 ℃保藏屬于臨時保藏的方法。 二、非選擇題 11．為了獲得純度高的大腸桿菌，需要對大腸桿菌進(jìn)行培養(yǎng)和分離。培養(yǎng)大腸桿菌一般用牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基。 (1)培養(yǎng)大腸桿菌，配制固體培養(yǎng)基的基本步驟：計(jì)算→稱量→__________→__________→倒平板。 (2)稱量時，由于牛肉膏比較黏稠，可以用______挑取，放在______上稱量。由于牛肉膏和蛋白胨________，稱量時動作要迅速，稱量后要及時蓋上瓶蓋

12、。 (3)在牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基上的大腸桿菌能生長，說明培養(yǎng)基含有________________________________________________________________________ 等大腸桿菌生長所需的營養(yǎng)要素。 (4)微生物純化培養(yǎng)可以通過多種接種方法如________和________等，使大腸桿菌在固體培養(yǎng)基上形成單個________，從而獲得純菌株。 解析：配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的基本步驟：計(jì)算→稱量→溶化→滅菌→倒平板。稱量時，可用玻璃棒挑取，放在稱量紙上稱量，稱量時動作要迅速。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中含有大腸桿菌所需要的碳源、氮源、無機(jī)鹽、水等營

13、養(yǎng)要素，所以常用來培養(yǎng)大腸桿菌。微生物純化培養(yǎng)的接種方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法，可使大腸桿菌在固體培養(yǎng)基上形成單個菌落，從而獲得純菌株。 答案：(1)溶化　滅菌　(2)玻璃棒　稱量紙　容易吸潮　(3)碳源、氮源、無機(jī)鹽、水　(4)平板劃線法　稀釋涂布平板法　菌落 12．下表為牛肉膏、蛋白胨培養(yǎng)基的成分列表，據(jù)此回答： 牛肉膏 蛋白胨 NaCl H2O 瓊脂 0.5 g 1.0 g 0.5 g 100 mL 2.0 g (1)蛋白胨在培養(yǎng)基中的作用是______________________________________________________

14、__________________________________________________________________________________________。 (2)此培養(yǎng)基如要培養(yǎng)霉菌時需將培養(yǎng)基的pH值調(diào)至_______________________。 (3)從配制培養(yǎng)基直到培養(yǎng)完成，所采用的預(yù)防雜菌感染的方法有：_____________________________________________________________________________________________________________________________

15、___________________。 (4)在培養(yǎng)基凝固前要擱置斜面，其目的是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。 (5)若用此培養(yǎng)基純化大腸桿菌，最常用的方法是_____________________、___________________，最終，使大腸桿菌在固體培養(yǎng)基上形成單個__________________，從而獲得純菌株。

16、 答案：(1)提供碳源、氮源、生長因子　(2)酸性　(3)高壓蒸汽滅菌、灼燒接種環(huán)、酒精棉擦手、棉塞塞試管口、在火焰旁接種　(4)擴(kuò)大接種面積　(5)平板劃線法　稀釋涂布平板法　菌落 13．下圖是倒平板操作示意圖，請回答下列問題： (1)正確的操作順序是______________________。 (2)平板冷凝后將平板倒置原因是_____________________________________________________________________________________________________________________________

17、___________________。 (3)在倒平板過程中如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋和皿底之間的部位，這個平板還能培養(yǎng)微生物嗎？__________________，原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。 答案：(1)ACBD　(2)利于水蒸汽的散發(fā)、防止雜菌污染　(3)不能　這樣容易被雜菌污染