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1、室內(nèi)空氣中細(xì)菌的測(cè)定,——平皿暴露沉降法,,目的:學(xué)習(xí)和掌握平皿暴露沉降法測(cè)定公共場(chǎng)所空氣中細(xì)菌的總數(shù)。評(píng)價(jià)居室的衛(wèi)生狀況,理論依據(jù)和實(shí)際應(yīng)用:室內(nèi)空氣中的微生物主要來源是人們?cè)谑覂?nèi)的生活和活動(dòng),使微生物隨飛沫與懸浮顆粒物飛揚(yáng)于空氣中。所以室內(nèi)空氣中的微生物數(shù)量的多少取決于室內(nèi)衛(wèi)生狀況、居住密度、居民健康情況、人們的活動(dòng)情況、室內(nèi)通風(fēng)效果等。居住密度大、活動(dòng)頻繁、通風(fēng)不良時(shí),細(xì)菌總數(shù)就多。所以它可以代表居室一般衛(wèi)生狀況的意義;,理論依據(jù)和實(shí)際應(yīng)用:附著于室內(nèi)懸浮顆粒物和唾液與痰液飛沫的微生物中含有一定數(shù)量的致病微生物(溶血性鏈球菌、結(jié)核桿菌、白喉?xiàng)U菌、肺炎球菌、金黃色葡萄球菌、流感病菌等),可
2、對(duì)人致病(在空氣濕度大、通風(fēng)不良、陽光不足的情況下,可保持較長的生存時(shí)間和致病性),因此,有必要對(duì)室內(nèi)空氣中的微生物數(shù)量作出限制。以病原體作為直接的評(píng)價(jià)指標(biāo),在技術(shù)上還有一定難度,所以目前仍多用細(xì)菌總數(shù)作為居室空氣細(xì)菌學(xué)的評(píng)價(jià)指標(biāo)。,三、原理:空氣中附著于塵埃或飛沫小滴上的細(xì)菌,經(jīng)過一段時(shí)間,可自然沉降于培養(yǎng)基的表面上,經(jīng)培養(yǎng)后,計(jì)數(shù)其生長的菌落數(shù),再按公式推算出每立方米空氣中的細(xì)菌數(shù)。,四、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備:(一)儀器與設(shè)備:高壓蒸汽滅菌器電熱恒溫干燥箱恒溫培養(yǎng)箱電冰箱玻璃平皿及制備培養(yǎng)基用的一般設(shè)備,(二)試劑與材料:營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基:(1)成份:蛋白胨10克牛肉浸膏3克氯化鈉5克磷酸二氫鈉1克瓊脂
3、15~20克蒸餾水1000毫升,,(二)試劑與材料:營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基:(2)制法:將上述成分混合后,加熱溶解。調(diào)節(jié)PH值7.8~8.0。過濾除去沉渣,分裝于三角燒瓶中,經(jīng)121℃(103kPa)高壓蒸氣滅菌20分鐘,然后傾注適量(15~20毫升)于已滅菌處理的平皿內(nèi),制成營養(yǎng)瓊脂平板備用。若當(dāng)天不用,應(yīng)置冰箱內(nèi)保存。,五、操作步驟:(一)制作營養(yǎng)瓊脂平板(無菌操作)操作者面前點(diǎn)燃酒精燈打開已滅菌處理的平皿傾注適量營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(15~20毫升)冷凝(大約15分鐘),(二)選擇采樣點(diǎn)的要求:1.采樣點(diǎn)的數(shù)量根據(jù)監(jiān)測(cè)室內(nèi)面積大小和現(xiàn)場(chǎng)情況而確定,以期能正確反映室內(nèi)空氣污染物的水平。原則上小于50㎡的
4、房間應(yīng)設(shè)(1~3)個(gè)點(diǎn);50㎡~100㎡設(shè)(3~5)個(gè)點(diǎn);100㎡以上至少設(shè)5個(gè)點(diǎn)。在對(duì)角線上或梅花式均勻分布。2.采樣點(diǎn)應(yīng)避開通風(fēng)口,離墻壁距離應(yīng)大于0.5m。3.采樣點(diǎn)的高度:原則上與人的呼吸帶高度相一致。相對(duì)高度0.5m~1.5m之間。,(三)采樣方法1.選擇好采樣點(diǎn)后,將營養(yǎng)瓊脂平板置于這些選測(cè)的部位,并將皿蓋揭開,使平皿內(nèi)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面暴露于空氣中5分鐘。蓋上皿蓋,將平板倒轉(zhuǎn),置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后計(jì)數(shù)菌落數(shù)。2.計(jì)數(shù)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面上所生長的菌落數(shù),并求出全部采樣點(diǎn)的平均菌落數(shù)。,六、結(jié)果與計(jì)算:1、奧梅梁斯基公式:100cm2的培養(yǎng)皿讓空氣沉降5分鐘,培養(yǎng)出的
5、細(xì)菌數(shù)相當(dāng)于10升空氣中的細(xì)菌數(shù)。X=(N100100)/лR2式中:X——每立方米空氣中的細(xì)菌數(shù)N——平板直接計(jì)數(shù)的平均菌落數(shù)R——平皿的底面積半徑(cm):9cm,2、直接計(jì)數(shù):CFU(菌落形成單位/皿),注明(沉降法,皿徑9cm),,3、將五個(gè)采樣點(diǎn)的菌落數(shù)平均計(jì)算出室內(nèi)平均的菌落數(shù)。12345平均細(xì)菌數(shù)(CFU/皿),,,,感應(yīng)式菌落計(jì)數(shù)儀,九、評(píng)價(jià):室內(nèi)空氣中細(xì)菌總數(shù)規(guī)定撞擊法≤4000cfu/m3;沉降法≤45cfu/皿。(室內(nèi)空氣中細(xì)菌總數(shù)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T17093-1997),,旅店業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB9663-1996,醫(yī)院空氣消毒效果和污染狀況的評(píng)價(jià):空氣消毒效果的比較應(yīng)在消毒前
6、后取樣進(jìn)行培養(yǎng),如消毒后空氣中細(xì)菌數(shù)明顯下降,說明消毒效果好,下面規(guī)定適用GB15982——1995規(guī)定:Ⅰ類區(qū)域細(xì)菌總數(shù)≤10cfu/m3,且未檢出致病菌為消毒合格;Ⅱ類區(qū)域細(xì)菌總數(shù)≤200cfu/m3,且未檢出致病菌為消毒合格;Ⅲ類區(qū)域細(xì)菌總數(shù)≤500cfu/m3,且未檢出致病菌為消毒合格。,Ⅰ類環(huán)境包括層流潔凈手術(shù)室和層流潔凈病房只能采用層流通風(fēng)才能空氣中的微生物減到此標(biāo)準(zhǔn)以下。Ⅱ類環(huán)境包括普通手術(shù)室、產(chǎn)房、嬰兒室、早產(chǎn)兒室、普通保護(hù)性隔離室、供應(yīng)室潔凈區(qū)、燒傷病房、重癥監(jiān)護(hù)病房、采用循環(huán)風(fēng)紫外線空氣消毒器或靜電吸附式空氣消毒器,這類均為有人房間,必須采用對(duì)人無毒無害且可連續(xù)消毒才能使空
7、氣中的微生物減到此標(biāo)準(zhǔn)以下。Ⅲ類環(huán)境包括兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應(yīng)室清潔區(qū)、急診室、化驗(yàn)室、各類普通病房室和房間,采用紫外線消毒,化學(xué)消毒劑熏蒸或噴霧消毒。,十、注意事項(xiàng):1.若測(cè)定空氣中的溶血性鏈球菌及綠色鏈球菌,則用血瓊脂平板,其他操作及計(jì)算方法與細(xì)菌總數(shù)測(cè)定方法相同。2.平皿的底面積直徑不宜小于9cm。3.選擇采樣點(diǎn)時(shí),應(yīng)盡量避開空調(diào)、門窗等氣流變化較大處。整個(gè)采樣過程中,應(yīng)動(dòng)作輕緩,避免揚(yáng)起灰塵,并要注意無菌操作。4.采樣中打開皿蓋時(shí),可將皿蓋向下,切忌血蓋向上而暴露于空氣中,影響采樣結(jié)果。暴露5分鐘后,應(yīng)按打開皿蓋的順序,蓋上皿蓋,帶回實(shí)驗(yàn)室置培養(yǎng)箱,37℃、24小時(shí)培養(yǎng)后計(jì)數(shù)菌落。,補(bǔ)充:1.撞擊式空氣采樣法:用空氣動(dòng)力泵抽氣進(jìn)入狹縫,使氣流速度加快,撞擊于正在轉(zhuǎn)動(dòng)的平皿上。并粘附其上,培養(yǎng)。CFU/m32.吸收法:氣流經(jīng)過一定的吸收液,培養(yǎng)。3.暴露法:CFU/皿。缺點(diǎn):顆粒物質(zhì)運(yùn)動(dòng)符合stokes定律,由于人流、季節(jié)、白天細(xì)菌數(shù)>晚上,且技術(shù)定量不同等可造成誤差。,