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中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) ×××— ×××× 201×-××-××發(fā)布 201×-××-××實(shí)施 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑 冰結(jié)構(gòu)蛋白 （征求意見稿） 中 華 人 民 共 和 國(guó) 國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員 會(huì) 發(fā)布 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生×××— ×××× 1 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑 冰結(jié)構(gòu)蛋白 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)主要適用于 以大豆為原料，經(jīng) 酵母 （ 發(fā)酵培養(yǎng) ， 再經(jīng)分離、濃縮、精制得到 的 食品添加劑 冰結(jié)構(gòu)蛋白 （ 2 技術(shù)要求 官要求 感官要求 應(yīng)符合表 1的規(guī)定。 表 1 感官要求 項(xiàng) 目 要 求 檢驗(yàn)方法 色澤 淺棕色 將 適量 試樣 置于清潔、干燥的 白瓷點(diǎn)滴板 中 ， 在自然光線下，觀察其色澤和狀態(tài) 狀態(tài) 液體 化指標(biāo) 理化指標(biāo) 應(yīng)符合表 2的規(guī)定。 表 2 理化指標(biāo) 項(xiàng) 目 指 標(biāo) 檢驗(yàn)方法 冰結(jié)構(gòu)蛋白（ 含量 ， g/ L ≥ 5 附錄 A 中 分， w/% ≤ 2 009.4 錄 A 中 （ ≤ B ： 測(cè)定各指標(biāo)前，試樣應(yīng) 于 4oC 下解凍約 20 h， 并 攪拌均勻 。 生物 指標(biāo) 微生物指標(biāo) 應(yīng)符合表 3的規(guī)定。 表 3 微生物 指標(biāo) 項(xiàng) 目 指 標(biāo) 檢驗(yàn)方法 菌落總數(shù)， 3000 大腸菌群， 10 霉菌和酵母菌， 100 沙門氏菌， /25得檢出 單核細(xì)胞增生李斯特氏菌 ， /25得檢出 樣芽孢桿 菌 ， 100 注： 測(cè)定各指標(biāo)前，試樣應(yīng) 于 4oC 下解凍約 20 h， 并 攪拌均勻 。 ×××— ×××× 2 3 儲(chǔ)存條件 產(chǎn)品應(yīng)在 下 儲(chǔ)存 。 ×××— ×××× 3 附 錄 A 檢驗(yàn)方法 般規(guī)定 本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑和水在未注明其他要求時(shí)，均指分 析純?cè)噭┖? 6682規(guī)定的 三 級(jí)水。試驗(yàn)中所用標(biāo)準(zhǔn)溶液、雜質(zhì)測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液、制劑和制品在未注明其他要求時(shí)，均按 601、 602、 603的規(guī)定制備。試驗(yàn)中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時(shí)，均指水溶液。 別試驗(yàn) 相色譜法 在冰結(jié)構(gòu)蛋白（ 量測(cè)定試驗(yàn)中，試樣溶液色譜圖的主峰保留時(shí)間應(yīng)和 標(biāo)準(zhǔn) 溶液色譜圖的主峰保留時(shí)間相一致，參見附錄 譜法 分別配制 10 的試樣溶液和 標(biāo)準(zhǔn) 溶液， 在附錄 兩者 分子結(jié)構(gòu) 應(yīng) 一致，參見附錄 . 2。 結(jié) 構(gòu)蛋白（ 量 的 測(cè)定 劑 和材料 腈：色譜純。 氟乙酸：純度≥ 98 %。 結(jié)構(gòu)蛋白 對(duì)照 品：純度 ≥ 10 %。 器 和設(shè)備 效液相色譜儀：帶二極管陣列檢測(cè)器 。 量進(jìn)樣器： L。 考 色譜 條件 譜柱 ： Φ 4.6 5 ，填料直徑 m；或其他等效的色譜柱。 測(cè)波長(zhǎng)： 214 溫： 室溫 。 速： 1.0 mL/ 樣量： L。 動(dòng)相 A： 氟乙酸水溶液（體積分?jǐn)?shù)） ；流動(dòng)相 B： 積分?jǐn)?shù)） 。 動(dòng)相梯度洗脫參數(shù)見 表 表 動(dòng)相梯度洗脫程序表 時(shí)間 /××××— ×××× 4 分析步驟 準(zhǔn)溶液系列的制備 稱取適量 冰結(jié)構(gòu)蛋白 對(duì)照 品溶解于水，分別配制濃度為 500 、 1000 、 1500 、 2000 和 2500 的標(biāo)準(zhǔn)溶液 系列 。 樣溶液 的制備 移 取 攪拌 均勻 試樣 0.5 水定容至 25 用 m 水相濾膜過濾。 定 在 考 色譜條件下 ，分別對(duì) 標(biāo)準(zhǔn)溶液系列和 試樣溶液 進(jìn)行測(cè)定 ， 得到 冰結(jié)構(gòu)蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度和響應(yīng)值（峰高或峰面積）的曲線，在曲線上對(duì)應(yīng) 試樣溶液 色譜 圖 的響應(yīng)值（峰高或峰面積），得到試樣溶液 中冰結(jié)構(gòu)蛋白的濃度。 同時(shí)做空白試驗(yàn)。 果計(jì)算 冰結(jié)構(gòu)蛋白 （ 含 量 的質(zhì)量分?jǐn)?shù) 單位為 克每升（ g/L），按 式 （ 計(jì)算： 2011 1000 )( ???……… …………………… （ 式中： 試樣溶液的 體積， 單位為毫升（ ； 原始 試樣的 體積 ， 單位為毫升（ ； 由標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得的空白 溶 液中冰結(jié)構(gòu)蛋白的濃度， ； c—— 由標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得的試樣 溶 液中冰結(jié)構(gòu)蛋白 的 濃度， 。 試驗(yàn) 結(jié)果以平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn)。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的 絕對(duì) 差值不大于 算術(shù)平均值 的 10 %。 A.4 適量攪拌均勻 試樣 ， 用校正好的 在 室溫下 直接測(cè)定。 ×××— ×××× 5 附 錄 B 照 品參考譜圖 i n u t e 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5 1 6 1 7 1 8 1 9 圖 參考 液相 色譜圖 圖 參考 質(zhì)譜圖 T: B ××××— ×××× 6 附 錄 C 參考質(zhì)譜條件 考質(zhì)譜條件 a) 毛細(xì)管電壓 ： 3000 V b) 錐孔 電壓： 30 V c) 提取 電壓： 1 V d) 透鏡電壓： e) 源溫： 100 ℃ f) 脫溶劑溫度： 300 ℃ g) 脫溶劑 氣流速度： 350 L/h h) 錐孔 氣流速度： 20 L/h i) 低頻分辨率 ： 14.0 j) 高 頻分辨率 ： 14.0 k) 離子能量： 1.0 l) 檢測(cè)器倍數(shù) ： 650 m) 低質(zhì)量區(qū)： 500 n) 高質(zhì)量區(qū) ： 2000