《高二生物《土壤中分解尿素的細菌的分離與記數》》由會員分享，可在線閱讀，更多相關《高二生物《土壤中分解尿素的細菌的分離與記數》（27頁珍藏版）》請在裝配圖網上搜索。

1、兩個主要目的： (1)從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌； (2)統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細菌。,,水生耐熱細菌Taq ( Thermus aquaticus ) 耐高溫的Taq DNA聚合酶 美國微生物學科布魯克（T.Brock) 1966年發(fā)現耐熱細菌,研究思路,,（一）篩選菌株,,尿素分子的立體結構,CO(NH2)2+H2O CO2+2NH3,,脲 酶,分解尿素的細菌:,在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。,選擇培養(yǎng)基,培養(yǎng)基配方,,背景知識,測定微生物數量的方法：,1直接計數法： 最常用顯微鏡直接計數法。,測定微生物數量

2、的方法：,,背景知識,1直接計數法： 最常用顯微鏡直接計數法。 先將待測樣品制成懸液，然后取一定量的懸液放在顯微鏡下進行計數。根據在顯微鏡下觀察到的微生物數目來計算出單位體積內的微生物總數。,測定微生物數量的方法：,,背景知識,優(yōu)點：設備簡單、能觀察微生物的形態(tài)特征。,優(yōu)點：設備簡單、能觀察微生物的形態(tài)特征。 缺點：難以計數微小量多的細菌。 一般用于純培養(yǎng)懸浮液中各種單細胞菌體的計數。,2間接計數法： 最常用稀釋平板計數法。,,,（二）統(tǒng)計菌落數目,,,（二）統(tǒng)計菌落數目,統(tǒng)計菌落數目的理論依據： 當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。因此，恰當的

3、稀釋度是成功地統(tǒng)計菌落數目的關鍵。為了保證結果準確，通常將幾個稀釋度下的菌液都涂布在平板上，培養(yǎng)后再選擇菌落數在30300的平板進行計數。,,每克樣品中的菌株數 = (CV)M,C：某一稀釋度下平板上生長的平均 菌落數 V：涂布平板時所用的稀釋液的體積 (ml) M：稀釋倍數,統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數目低。這是因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。因此結果一般用菌落數而不是活菌數來表示。,注意：,兩位同學用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細菌數。在對應稀釋倍數為106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計結果。 1.第一位同學在該濃度下涂布了一個平板，統(tǒng)計的菌落數為230

4、。 2.第二位同學在該深度下涂布了三個平板，統(tǒng)計的菌落數分別為21、212和256，該同學以這三個平板菌落數的平均值163作為統(tǒng)計結果。,,實例1,,你認為哪位同學的結果更接近真實值？這兩位同學的實驗需要改進嗎？如果需要，如何改進？,?,,你認為哪位同學的結果更接近真實值？這兩位同學的實驗需要改進嗎？如果需要，如何改進？,第一位同學只涂布了一個平板，沒有設置重復組，因此結果不具有說服力。第二位同學考慮到設置重復組的問題，涂布了3個平板，但是，其中1個平板的計數結果與另2個相差太遠，說明在操作過程中可能出現了錯誤，因此，不能簡單地將3個平板的計數值用來求平均值。,?,因此，這兩位同學的實驗需要改

5、進，在設計實驗時，一定要涂布至少3個平板，作為重復組，才能增強實驗的說服力與準確性。在分析實驗結果時，一定要考慮所設置的重復組的結果是否一致，結果不一致，意味著操作有誤，需要重新實驗。,說明設置重復組的重要性。,,在做本課題的實驗時，A同學從對應106倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約150個菌落。但是，其它同學在同樣的稀釋度下只選擇出大約50個菌落。 其他同學認為A同學的結果有問題。他們分析可能是A同學的培養(yǎng)基被雜菌污染了，或者培養(yǎng)基中混入了其他含氮物質，因而導致不能分解尿素的細菌也能在該培養(yǎng)基上生長。,實例2,但是，A同學確信自己的實驗操作準確無誤，與其他同學的結果之所以不相同，是因為自己所選用的

6、土壤樣品不同。但是，A同學在設計實驗的時候并沒有設置對照，因而此時也拿不出令同學們信服的證據。 你能通過設置對照，幫助A同學排除上述兩個可能影響實驗結果的因素嗎？,一是由于土樣不同，二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。究竟是哪個原因，可以通過實驗來證明。 一種方案：可以由其他同學用與A同學一樣的土樣進行實驗，如果結果與A同學一致，則證明A無誤；如果結果不同，則證明A同學存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。,另一種方案： 將A同學配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。 通過這個事例可以看出，實驗結果要有說服力，對照的設置是必不可少的。,,實驗設計,土壤中分解尿素的細菌的分離與記數,