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目錄,博暉維生素D試劑盒介紹,,1,,2,,3,,,,維生素D檢測臨床意義,維生素D檢測指南與方法,一、維生素D檢測臨床意義,1、維生素D簡介 2、維生素D生理功能 3、維生素D與疾病,（1）理化性質(zhì) （2）代謝過程,3,1、維生素D簡介,維生素D是一種脂溶性維生素，維生素D與動物骨骼的鈣化有關(guān),故又稱為鈣化醇。也被看作是一種作用于鈣、磷代謝的激素前體，它與陽光有密切關(guān)系，所以又叫“陽光維生素”。維生素D是一族A、B、C、D環(huán)結(jié)構(gòu)相同，但側(cè)鏈不同的一類復(fù)合物的總稱，目前已知的維生素D至少有10種，但最重要的是維生素D2（麥角骨化醇）和維生素D3（膽鈣化醇）。 維生素D易被紫外光破壞，因此，含維生素D的試劑均應(yīng)避光保存。,（1）理化性質(zhì),維生素D2是紫外線照射植物中的麥角固醇產(chǎn)生，在自然界存在較少。 維生素D3則由大多數(shù)高級動物的表皮和真皮內(nèi)含有的7-脫氫膽固醇經(jīng)紫外線照射轉(zhuǎn)變而成。,維生素D2,維生素D3,（1）理化性質(zhì),含量較多的食物有魚肝油、含油脂的魚類如（三文魚、沙丁魚 ,魚肝油）、奶油、雞蛋黃、雞鴨肝等動物肝臟以及牛奶。另外，維生素D可由人體經(jīng)紫外線照射后生成，所以日光浴是取得維生素D的可靠來源，所以提倡多做戶外活動。,Vit D主要來源,（2）代謝過程,（2）代謝過程,機(jī)體主要的調(diào)節(jié)因子： 1,25(OH)2D3本身 甲狀旁腺激素 血清鈣和磷的濃度 維生素D的分解代謝主要在肝臟，代謝物進(jìn)入膽汁入腸，隨糞便排出。 在體內(nèi)，維生素D主要儲存在脂肪組織與骨骼肌中，肝臟、大腦、肺、脾、骨骼和皮膚中也存在少量。,（2）代謝過程,(+),（2）代謝過程,（1）調(diào)節(jié)鈣磷代謝 （2）調(diào)節(jié)細(xì)胞分化 （3）調(diào)節(jié)免疫力,10,2、生理功能,調(diào)節(jié)鈣磷代謝： 維生素D與甲狀旁腺素共同作用，維持血鈣水平穩(wěn)定。這對正常骨骼的礦化、肌肉收縮、神經(jīng)傳導(dǎo)以及體內(nèi)所有細(xì)胞的功能都是必需的。 生理循環(huán)圈起點(diǎn)為甲狀旁腺內(nèi)鈣受體對鈣的識別。當(dāng)血鈣水平下降時(shí)，甲狀旁腺分泌PTH，刺激腎25-OH-D-12-氧化酶從25-OH-D3儲存池中轉(zhuǎn)化更多的1,25-(OH)2D3。 隨PTH水平的升高， 1,25-(OH)2D3增加，導(dǎo)致腸、骨和腎中鈣轉(zhuǎn)運(yùn)增多，促進(jìn)鈣在腎小管的重吸收，將鈣從骨骼中動員出來，在小腸促進(jìn)結(jié)合蛋白質(zhì)的合成，增加鈣吸收，最終使血鈣恢復(fù)正常水平。,（1）調(diào)節(jié)鈣磷代謝,調(diào)節(jié)鈣磷代謝： 這個(gè)過程均由甲狀旁腺的鈣受體進(jìn)行識別。PTH分泌減少不僅是由鈣活性反饋，也可由與1,25-(OH)2D3有關(guān)短反饋環(huán)路直接抑制甲狀旁腺分泌PTH。 當(dāng)血鈣過高時(shí)，促進(jìn)甲狀旁腺產(chǎn)生降鈣素，阻止鈣從骨髓中的動員，增加鈣磷經(jīng)尿中排出。 維生素D缺乏將導(dǎo)致25-(OH)D3和1,25-(OH)2D3的合成減少，鈣內(nèi)環(huán)境出現(xiàn)失衡,并且要不斷地提高PTH的水平，表現(xiàn)為繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)。,（1）調(diào)節(jié)鈣磷代謝,與細(xì)胞生長和分化的關(guān)系： 近年來的研究資料表明，正常皮膚成纖維細(xì)胞和表皮細(xì)胞都有VD受體， VD缺乏大鼠的皮膚顆粒細(xì)胞層變薄，角蛋白改變和細(xì)胞內(nèi)酸性磷酸酶活性降低等。 VD3可抑制培養(yǎng)的小鼠角化細(xì)胞和正常人表皮細(xì)胞的增殖，并誘導(dǎo)其分化。也有資料表明VD3有抑制白血病細(xì)胞株M1增殖并誘導(dǎo)使之分化為成熟的單核細(xì)胞，延長動物存活時(shí)間的作用。 VD3對其他腫瘤細(xì)胞也有明顯的抗增殖和誘導(dǎo)分化的作用。,（2）調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和分化,對免疫系統(tǒng)功能的調(diào)節(jié)： 單核/巨噬細(xì)胞是非特異性免疫反應(yīng)的主要防御機(jī)制。體外實(shí)驗(yàn)證明VD3可促使白血病細(xì)胞、骨髓干細(xì)胞和外周血單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化，并增強(qiáng)單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的吞噬活性及殺菌能力。 VD缺乏的人和動物對非特異性炎癥刺激的反應(yīng)能力有明顯的降低，而且有吞噬活性和趨化功能障礙。,（3）調(diào)節(jié)免疫,維生素D的各種功效都是由其受體調(diào)節(jié)的。維生素D受體除了在腸和骨中表達(dá)外，還在腦、前列腺、乳房、結(jié)腸、免疫細(xì)胞、血管平滑肌和心肌細(xì)胞中表達(dá)。,參考文獻(xiàn) 1)Holick MF . Vitamin D deficiency. N Engl J Med 2007;357;266-81 2)Wang T J et al .Vitamin D deficiency and risk of cardiovascular disease.circulation 2008 ;117;503-511,體內(nèi)維生素D水平不足與非骨骼性疾病的風(fēng)險(xiǎn)增加有相關(guān)性，包括：心血管疾病、高血壓、癌癥、糖尿病、多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、傳染性疾病等。,參考文獻(xiàn) 1)Holick MF . Vitamin D deficiency. N Engl J Med 2007;357;266-81 2)Wang T J et al .Vitamin D deficiency and risk of cardiovascular disease.circulation 2008 ;117;503-511,3、維生素D與疾病,（1）佝僂病、手足搐搦癥 （2）骨軟化病 （3）骨質(zhì)疏松 （4）維生素D中毒,病 因,1、日光照射不足—主要病因,2、VitD攝入不足,3、生長速度快,4、藥物等,5藥物影響,（1）佝僂病、手足抽搐癥,,19,VitD → Ca×P →骨樣組織鈣化障礙且繼續(xù)增殖,,,骨骺端鈣化障礙,骺線參差不齊→鈣化帶增厚或毛刷樣、 杯口樣改變,骨樣組織堆積→骨骺端膨出,肋骨串珠,手鐲、腳鐲,骨干鈣化障礙→骨質(zhì)疏松→彎曲變形（郝氏溝、“O”、 “X”腿）病理性骨折,扁平骨鈣化障礙→顱骨軟化,,骨樣組織堆積→方顱,,,,,,,,病 理,（1）佝僂病、手足抽搐癥,胸部：多見于1歲左右小兒.,肋骨串珠,雞胸,郝氏溝,漏斗胸,上述畸形均使胸腔變小，影響呼吸功能.,臨床表現(xiàn),（1）佝僂病、手足抽搐癥,四 肢,,腕踝,,6個(gè)月以上小兒,手鐲、腳鐲,下肢,,1歲以上小兒,“O”“X ”型腿,（1）佝僂病、手足抽搐癥,（1）佝僂病、手足抽搐癥,全身肌張力下降，骨骼?。海ㄗ?、站、走晚） 腹肌肌張力下降，呈蛙腹,（1）佝僂病、手足抽搐癥,神經(jīng)興奮性改變：,腦皮層功能減低的表現(xiàn),條件反射形成慢,表情淡漠,語言發(fā)育落后,,免疫力低下：易合并感染、且易遷延、反復(fù),（1）佝僂病、手足抽搐癥,血生化改變明顯,,血Ca稍下降,血P明顯下降,25（OH）D3 1，25（OH)2D3,X線改變：[長骨],骨骺軟骨明顯增寬→ >2mm,干骺端鈣化帶消失，呈毛刷樣、杯口樣改變,骨質(zhì)普遍稀疏，密度減低,骨干可有彎曲或骨折,,,Ca×P明顯下降,AKP明顯升高,輔 助 檢 查,（1）佝僂病、手足抽搐癥,輔助檢查,（1）佝僂病、手足抽搐癥,治 療,（一）維生素D制劑：,口服法,,維生素D 2000~4000 IU/d （50~100 ug/d),1,25(OH)2D3(羅鈣全) 0.5~2.0 ug/d （20~80 IU/d ）,一個(gè)月后改為預(yù)防量(400 IU/d ),肌注法：適合重癥、不能口服者,VitD3：20~30萬IU,初期：1次,激期：2~3次，間隔2~4周,2~3月后給預(yù)防量。,注意同時(shí)用鈣劑,,,（1）佝僂病、手足抽搐癥,（二）鈣劑治療,肌注VitD時(shí) 有搐搦者 食物中鈣量不足者,適應(yīng)癥,,（三）矯形治療,治 療,（1）佝僂病、手足抽搐癥,（一）多做戶外活動,（二）合理膳食,母乳喂養(yǎng)及配方奶喂養(yǎng) 及時(shí)添加輔食—含維生素D的食物 防止偏食,,,,,（三）疾病的預(yù)防,預(yù) 防,（1）佝僂病、手足抽搐癥,（四）預(yù)防時(shí)間：從圍生期開始，1歲 以內(nèi)嬰兒為重點(diǎn)， 持續(xù)到3歲,1、圍生期：從妊娠28周開始,補(bǔ)充VitD,800 IU/d 口服,10~20萬IU 肌注,適當(dāng)補(bǔ)鈣,2、新生兒期：,生后1~2周開始,,口服400~800 IU/d,肌注10~20萬IU（可維持1~2月）,（1）佝僂病、手足抽搐癥,,3、嬰兒期：,口服400~800 IU/d （不可間斷）,4、幼兒期：,夏季增加戶外活動，可不用VitD,冬季（10月中旬）,南方：10~20萬IU（肌注 ）,北方：20~40萬IU （肌注 ）,,（1）佝僂病、手足抽搐癥,32,（2）骨軟化病,骨軟化病由于成人缺乏維生素D及鈣質(zhì)引起骨基質(zhì)礦化障礙，以骨質(zhì)軟化和骨骼畸形為特征。病人多為女性。,骨痛 活動常受限，步態(tài)搖擺、步行困難， 病理性骨折，長骨、肋骨、骨盆和脊柱骨均可發(fā)生 胸廓兩側(cè)內(nèi)陷，胸腔縮小 兩側(cè)肋緣可及髂嵴或其間距明顯縮短。 骨盆三葉畸形， 身高縮短，可達(dá)１０cm以上。,臨床表現(xiàn),（2）骨軟化病,骨質(zhì)軟化癥X線表現(xiàn),早期普遍性骨質(zhì)疏松，密度減低，骨皮質(zhì)變薄，嚴(yán)重者呈線條狀。髓腔透亮度增加。骨小梁先是模糊，最終消失，可出現(xiàn)多個(gè)囊狀透光區(qū)。,（2）骨軟化病,2.假骨折是骨質(zhì)軟化癥的X線特點(diǎn)（稱為Looser帶）。表現(xiàn)為橫越骨皮質(zhì)的透明線，其邊緣密度略高，常呈對稱而多發(fā)。多見于肩胛骨、肋骨、坐骨、恥骨等。骨折處無骨痂形成和錯(cuò)位，日久可出現(xiàn)骨骼彎曲畸形。,（2）骨軟化病,骨質(zhì)軟化癥X線表現(xiàn),骨質(zhì)軟化癥X線表現(xiàn),,,假骨折，Looser帶,（2）骨軟化病,,雙凹征,骨質(zhì)軟化癥X線表現(xiàn),（2）骨軟化病,維生素D缺乏 補(bǔ)充維生素D 維生素D3400—800IU 一般不超過每日4000IU 增加鈣磷攝入,治療,（2）骨軟化病,VDDRI 1,25雙羥維生素D3（羅鈣全）1.0μg/日 維生素D220,000-100,000U/日或25羥維生素D（0.1-1.0mg/日） 增加鈣磷攝入： 鈣劑1-1.5克/日,（2）骨軟化病,,,,正常骨 骨質(zhì)疏松骨,以骨強(qiáng)度受損 導(dǎo)致骨折危險(xiǎn)性升高為特征的骨骼疾病。骨強(qiáng)度主要反映了骨密度和骨質(zhì)量兩個(gè)方面的綜合特征。,NIH Consensus Development Panel on Osteoporosis. JAMA 285 (2001): 785-95,（3）骨質(zhì)疏松,41,（3）骨質(zhì)疏松,（3）骨質(zhì)疏松,臨床表現(xiàn),骨痛（腰背酸疼痛） 骨折 身高縮短，骨骼畸形 功能障礙（活動受限）,（3）骨質(zhì)疏松,椎體骨折 橈骨遠(yuǎn)端骨折 髖部骨折 肱骨外科頸骨折,骨質(zhì)疏松常見骨折,（3）骨質(zhì)疏松,防治藥物,骨吸收抑制劑 骨形成促進(jìn)劑 鈣劑 氟化物 維生素D 甲狀旁腺素 二膦酸鹽 維生素D 降鈣素 合成類固醇 雌激素 選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑,,,,（3）骨質(zhì)疏松,發(fā)病機(jī)理：血漿中25（OH）D3水平過高，而不是1,25（OH）2D3水平升高造成。高維生素D血癥病人血中25（OH）D濃度可比正常個(gè)體高15倍，但是他們的1,25（OH）2D3水平?jīng)]有顯著變化。 短期多次大劑量維生素D治療 維生素D預(yù)防劑量過大 誤診佝僂病錯(cuò)誤治療,46,（4）維生素D中毒,診斷： 維生素D過量病史 早期血鈣升高：高于3mmol/L X線檢查：軟組織鈣化,47,（4）維生素D中毒,二、維生素D檢測指南與方法,1、維生素D檢測指南 2、維生素D檢測方法,1、維生素D檢測指南,（1）維生素D缺乏診斷程序 （2）建議維生素D缺乏危險(xiǎn)人群飲食補(bǔ)充維生素D （3）維生素D治療和預(yù)防策略,內(nèi)分泌學(xué)會2011年6月6日發(fā)表 《維生素D缺乏評估、治療和預(yù)防的臨床實(shí)踐指南》,,,,全文見《Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism》與《內(nèi)分泌學(xué)》,該指南針對不同年齡段、不同疾病背景的維生素D缺乏高危、低危人群，進(jìn)一步明確了維生素D缺乏的有效評估、飲食補(bǔ)充和藥物預(yù)防治療的具體實(shí)施方法，指明了維生素D在非血鈣受益上的不確定性，旨在達(dá)到維生素D缺乏防治的最優(yōu)化,內(nèi)分泌學(xué)會2011年6月6日發(fā)表 《維生素D缺乏評估、治療和預(yù)防的臨床實(shí)踐指南》,,,,指南認(rèn)為。維生素D缺乏的高危人群（例如西班牙裔、黑種人、妊娠婦女和肥胖個(gè)體等）應(yīng)當(dāng)接受維生素D水平篩查。外周血血清25-羥基維生素D水平低于20ng/ml者應(yīng)被診斷為維生素D 缺乏。,全文見《Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism》與《內(nèi)分泌學(xué)》,內(nèi)分泌學(xué)會2011年6月6日發(fā)表 《維生素D缺乏評估、治療和預(yù)防的臨床實(shí)踐指南》,,,,全文見《Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism》與《內(nèi)分泌學(xué)》,指南中寫道，現(xiàn)有的所有證據(jù)均表明，兒童和成人預(yù)防佝僂病或骨軟化的最低血25-羥維生素D水平應(yīng)為20 ng/ml，但為了增強(qiáng)維生素D對鈣、骨骼以及肌肉代謝的積極影響，血25-羥維生素D的水平應(yīng)高于30 ng/ml。,《指南》推薦的維生素D缺乏的診斷程序： 推薦對于有維生素D缺乏危險(xiǎn)者，采用可靠方法檢測其血清循環(huán)25-羥維生素D[25（OH）D]水平，以評價(jià)患者體內(nèi)的維生素D狀況。 維生素D缺乏定義為25（OH）D水平低于20 ng/ml（50nmol/L）。 不推薦使用血清1，25二羥維生素D [1，25（OH）2D]檢測評價(jià)維生素D缺乏，僅在監(jiān)測特定情況如獲得性和遺傳性維生素D和磷酸鹽代謝紊亂時(shí)應(yīng)用,53,（1）維生素D缺乏診斷程序,25（OH）D是血液循環(huán)中維生素D最主要的存在形式，半衰期2~3周，是監(jiān)測維生素D狀態(tài)的最佳指標(biāo)。 1,25（OH）2D在血液中濃度比25（OH）D低1000倍，半衰期約4小時(shí)，且對PTH、鈣、磷的調(diào)控非常敏感，1,25（OH）2D不能反映維生素D的儲備水平，血清1,25（OH）2D在維生素D缺乏時(shí)經(jīng)常是正常的甚至升高，因此檢測其濃度對于監(jiān)測病人的維生素D的狀態(tài)沒有幫助。,（1）維生素D缺乏診斷程序,《維生素D缺乏評估、治療和預(yù)防的臨床實(shí)踐指南》,,,建議維生素D缺乏危險(xiǎn)人群飲食補(bǔ)充維生素D,（2）建議補(bǔ)充維生素D,《維生素D缺乏評估、治療和預(yù)防的臨床實(shí)踐指南》,,,建議維生素D缺乏危險(xiǎn)人群飲食補(bǔ)充維生素D,（2）建議補(bǔ)充維生素D,《維生素D缺乏評估、治療和預(yù)防的臨床實(shí)踐指南》,,,建議維生素D缺乏危險(xiǎn)人群飲食補(bǔ)充維生素D,（2）建議補(bǔ)充維生素D,《維生素D缺乏評估、治療和預(yù)防的臨床實(shí)踐指南》,,,治療和預(yù)防策略,（3）治療和預(yù)防策略,《維生素D缺乏評估、治療和預(yù)防的臨床實(shí)踐指南》,,,治療和預(yù)防策略,（3）治療和預(yù)防策略,《維生素D缺乏評估、治療和預(yù)防的臨床實(shí)踐指南》,,,治療和預(yù)防策略,（3）治療和預(yù)防策略,2、維生素D檢測方法,（1）體內(nèi)維D水平含量與意義 （2）檢測維生素D的方法,62,體內(nèi)血中25-羥維生素D水平 含量與意義,據(jù)估計(jì)，全世界大約10億人未達(dá)到維生素D足量濃度的最低限30ng/ml,（1）體內(nèi)維D水平含量與意義,臨床常見方法 幾種方法學(xué)對比 ELISA的兩種產(chǎn)品對比,檢測維生素D的方法,63,（2）檢測維生素D的方法,（1）酶聯(lián)免疫法（ELISA）：博暉、IDS （2）化學(xué)放光免疫法（CLIA）：雅培、索靈、貝克曼等 （3）電化學(xué)發(fā)光法（ECLI）：羅氏,1、臨床常見方法,64,（2）檢測維生素D的方法,酶聯(lián)免疫法 使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。 使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。 用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。 加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。 由于酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應(yīng)效果，從而使測定方法達(dá)到很高的敏感度。,2、幾種方法學(xué)對比,65,（2）檢測維生素D的方法,化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析：又稱化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA ) , 是用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體的免疫分析方法。常用于標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光物質(zhì)有吖啶酯類化合物——acridinium ester (AE) , 其通過起動發(fā)光試劑作用而發(fā)光, 強(qiáng)烈的直接發(fā)光在一秒鐘內(nèi)完成, 為快速的閃爍發(fā)光。 靈敏度和精確度比酶免法、熒光法高幾個(gè)數(shù)量級，可以完全替代放射免疫分析、徹底淘汰酶聯(lián)免疫分析。主要具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、試劑價(jià)格低廉、試劑穩(wěn)定且有效期（6-18個(gè)月）、方法穩(wěn)定快速、檢測范圍寬、操作簡單自動化程度高等優(yōu)點(diǎn)。,2、幾種方法學(xué)對比,66,（2）檢測維生素D的方法,電化學(xué)發(fā)光技術(shù)：在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，用電化學(xué)發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕[Ru(bpy)3]2+標(biāo)記Ab，通過Ag-Ab反應(yīng)和磁珠分離技術(shù)，根據(jù)三聯(lián)吡啶釕在電極上發(fā)出的光強(qiáng)度對待測的Ag或Ab進(jìn)行定量/定性。 高度敏感，可達(dá)pg／ml或pmol水平； 特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，CV＜5％。 測定范圍寬，可達(dá)7個(gè)數(shù)量級。 試劑穩(wěn)定，無毒害，無污染，有效期長，達(dá)數(shù)月至數(shù)年。 操作簡單，耗時(shí)短，易于自動化。 在對環(huán)保很重視的國家，CLIA成了取代RIA的首選方法。,2、幾種方法學(xué)對比,67,（2）檢測維生素D的方法,免疫標(biāo)記檢測技術(shù)對比,68,（2）檢測維生素D的方法,IDSvsBH：.exl 重復(fù)性：批內(nèi)、批間 時(shí)間：,3、ELISA的兩種產(chǎn)品對比,69,（2）檢測維生素D的方法,三、博暉維生素D試劑盒介紹,博暉公司維生素D3檢測原理 維生素D3檢測試驗(yàn)準(zhǔn)備與流程 維生素D3檢測試驗(yàn)步驟與數(shù)據(jù)分析 維生素D3檢測操作規(guī)范及注意事項(xiàng),