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1、玻璃器皿、培養(yǎng)基的滅菌技術(shù) 概念消毒：殺死物體上病原微生物的方法,并不一定 能殺死含芽胞的細(xì)菌或非病原微生物。滅菌：殺滅物體上所有微生物的方法。 無(wú)菌：不存在活菌的意思。 防腐：防止或抑制體外細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的方法。 一、消毒與滅菌的方法物理的方法：加熱、過(guò)濾、輻射化學(xué)的方法：用化學(xué)試劑抑制或殺滅微生物。主要破壞細(xì)菌代謝機(jī)能。如重金屬離子，磺胺類藥物及抗生素等。 物理方法干熱滅菌又稱熱空氣滅菌，是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性的原理。濕熱滅菌法是指用飽和水蒸氣、沸水或流通蒸汽進(jìn)行滅菌的方法，由于蒸汽潛熱大，穿透力強(qiáng)，容易使蛋白質(zhì)變性或凝固，所以該法的滅菌效率比干熱滅菌法高。 物理方法輻射：

2、利用輻射進(jìn)行滅菌消毒，可以避免高溫滅菌或化學(xué)藥劑消毒的缺點(diǎn)，所以應(yīng)用越來(lái)越廣。 物理方法 1）紫外線：波長(zhǎng)200300m的紫外線具有殺菌作用。 殺菌機(jī)理：干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄。 特點(diǎn)：穿透力不大。距照射物1.2m為宜。 應(yīng)用范圍：空氣消毒。例如，手術(shù)室、傳染病房、細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室不耐熱物品的表面消毒。 注意事項(xiàng)：對(duì)眼睛和皮膚有刺激作用。 物理方法 2）電離輻射：包括高速電子、X射線和 射線殺菌機(jī)理：產(chǎn)生游離基,破壞DNA。 應(yīng)用范圍：一次性醫(yī)用塑料制品的消毒食品的消毒不破壞其營(yíng)養(yǎng)成分 物理方法過(guò)濾：采用機(jī)械方法，設(shè)計(jì)一種濾孔比細(xì)菌還小的篩子，做成各種過(guò)濾器。通過(guò)過(guò)濾，只讓液體培養(yǎng)基從篩子中流下，而

3、把各種微生物菌體留在篩子上面，從而達(dá)到除菌的目的。這種滅菌方法適用于一些對(duì)熱不穩(wěn)定的體積小的液體培養(yǎng)基的滅菌以及氣體的滅菌。它的最大優(yōu)點(diǎn)是不破壞培養(yǎng)基中各種物質(zhì)的化學(xué)成分。但是比細(xì)菌還小的病毒仍然能留在液體培養(yǎng)基內(nèi)，有時(shí)會(huì)給實(shí)驗(yàn)帶來(lái)一定的麻煩。 過(guò)濾注意事項(xiàng)：1、壓力適當(dāng)； 2、無(wú)菌條件下進(jìn)行； 3、防止?jié)B透現(xiàn)象。 一般化學(xué)藥劑無(wú)法殺死所有的微生物，而只能殺死其中的病原微生物，所以是起消毒劑的作用，而不是滅菌劑?；瘜W(xué)方法 各種消毒劑的種類類別作用機(jī)制常用種類酚類蛋白變性，細(xì)胞膜損傷石炭酸醇類蛋白變性乙醇氧化劑氧化、蛋白沉淀高錳酸甲重金屬鹽氧化、蛋白酶變性紅汞、硫柳汞氧化劑氧化、蛋白沉淀過(guò)氧乙酸

4、、碘酒表面活性劑蛋白變性，細(xì)胞膜損傷新潔而滅染料干擾氧化、抑制繁殖龍膽紫 各種消毒劑的應(yīng)用種類使用濃度用途石炭酸3%5%地面、器具表面、皮膚消毒乙醇3%5%皮膚、體溫計(jì)消毒高錳酸甲3%5%皮膚、尿道、蔬菜、水果消毒紅汞3%5%皮膚、粘膜、小創(chuàng)傷消毒硫柳汞3%5%皮膚消毒、手術(shù)部位消毒過(guò)氧乙酸3%5%塑料、玻璃器材消毒碘酒3%5%皮膚消毒新潔而滅3%5%手術(shù)洗手、浸泡手術(shù)器械 干熱滅菌l適用范圍： 用于高溫下不損壞、不變質(zhì)、不蒸發(fā)物品的滅菌；用于不耐濕熱的器械的滅菌；用于蒸汽或氣體不能穿透物品的滅菌，如玻璃、油脂、粉劑（遇水結(jié)塊）和金屬等制品的消毒。 干熱滅菌l干熱滅菌法又分為燒灼和焚燒、干烤、

5、紅外線、微波等幾種方法。 干熱滅菌l（1）燒灼和焚燒：燒灼是直接用火焰殺死微生物，適用于實(shí)驗(yàn)室的金屬器械（鑷、剪、接種環(huán)、接種針等）、玻璃試管口和瓶口等不怕熱的器材滅菌。l焚燒是徹底的消毒方法，但只限于處理廢棄的污染物品，如無(wú)用的衣物、紙張、垃圾等。焚燒應(yīng)在專用的焚燒爐內(nèi)進(jìn)行。 干熱滅菌l（2）干烤：在干烤箱內(nèi)進(jìn)行，加熱至160170維持2小時(shí)，可殺滅包括芽胞在內(nèi)的所有微生物。l此方法適用于耐高溫的玻璃器皿、瓷器、玻質(zhì)注射器等。 干熱滅菌l（3）紅外線：是波長(zhǎng)為770nm1000m的電磁波，以1m10m波長(zhǎng)的熱效應(yīng)最強(qiáng)。亦被認(rèn)為一種干熱滅菌。紅外線由紅外線燈泡產(chǎn)生,不需要經(jīng)空氣傳導(dǎo)，所以加熱速

6、度快，但熱效應(yīng)只能在照射到的表面產(chǎn)生，因此不能使一個(gè)物體的前后左右均勻加熱。紅外線的殺菌作用與干熱相似，利用紅外線烤箱滅菌的所需溫度和時(shí)間亦同于干烤。多用于醫(yī)療器械的滅菌。 干熱滅菌l紅外線滅菌注意事項(xiàng)：l人受紅外線照射較長(zhǎng)會(huì)感覺(jué)眼睛疲勞及頭疼；長(zhǎng)期照射會(huì)造成眼內(nèi)損傷。因此，工作人至少應(yīng)戴能防紅外線傷害的防護(hù)鏡。 干熱滅菌l（4）微波：波長(zhǎng)為1mm1000mm的電磁波統(tǒng)稱為微波，可穿透玻璃、塑料薄膜與陶瓷等物質(zhì)，但不能穿透金屬表面。微波能使介質(zhì)內(nèi)雜亂無(wú)章的極性分子在微波場(chǎng)的作用下，按波的頻率往返運(yùn)動(dòng)，互相沖撞和磨擦而產(chǎn)生熱，介質(zhì)的溫度可隨之升高，因而在較低的溫度下能起到消毒作用。 干熱滅菌l一

7、般認(rèn)為其殺菌機(jī)理除熱效應(yīng)以外，還有電磁共振效應(yīng)，磁場(chǎng)致力效應(yīng)等的作用。消毒中常用的微波有2450MHZ與915MHZ兩種。微波照射多用于食品加工。在醫(yī)院中可用于檢驗(yàn)室用品、非金屬器械、無(wú)菌病室的食品食具、藥杯及其它用品的消毒。 干熱滅菌l微波長(zhǎng)期照射可引起眼睛的晶狀混濁、睪丸損傷和神經(jīng)功能紊亂等全身性反應(yīng)，因此必須關(guān)好門(mén)后再開(kāi)始操作。 干熱滅菌l干熱滅菌的注意事項(xiàng)：l待滅菌的物品在干熱滅菌前應(yīng)先洗凈，防止造成滅菌失敗或污物炭化；l玻璃器皿滅菌前應(yīng)洗凈并干燥；l滅菌時(shí)勿與烤箱底部及四壁接觸，滅菌后要待溫度降到40以下再開(kāi)箱，以防止爆裂； l物品包裝不能過(guò)大，不超過(guò)10厘米10厘米20厘米，物品不

8、能超過(guò)烤箱的高度的2/3，物品間應(yīng)留有充分的空間（可放入一只手）；油劑、粉劑的厚度不得超過(guò)0.6厘米；凡士林布條厚度不得超過(guò)1.3厘米。l溫度高于170時(shí)，有機(jī)物會(huì)炭化，故有機(jī)物品滅菌時(shí)，溫度不可過(guò)高。 干熱滅菌l電熱恒溫干燥箱（俗稱“烤箱”）的使用l 1.裝料：將帶滅菌的物品包扎好放入電熱恒溫干燥箱。l注意物品不能擺得太擠，以免影響熱空氣流通。用紙包扎的物品不能接觸內(nèi)壁。l 2.升溫：接通電源，打開(kāi)排氣孔，排除箱內(nèi)濕空氣；旋動(dòng)恒溫調(diào)節(jié)器，讓溫度逐漸上升。當(dāng)溫度升至100攝氏度，關(guān)閉排氣孔。 干熱滅菌l 3.恒溫：當(dāng)溫度升到160攝氏度時(shí)，利用恒溫調(diào)節(jié)器的自動(dòng)控制，保持溫度1h。滅菌物品用紙包

9、扎或帶有棉塞時(shí)溫度不能超過(guò)170攝氏度。l 4.降溫：達(dá)到規(guī)定的時(shí)間后，切斷電源，自然降溫。l 5.取料：待箱內(nèi)溫度降到60攝氏度，打開(kāi)箱門(mén)，取出滅菌物品。箱內(nèi)溫度未降到70攝氏度，切勿打開(kāi)箱門(mén)，以免驟然降溫導(dǎo)致玻璃器皿破裂。 濕熱滅菌 濕熱滅菌l適用范圍： 用于耐高溫、耐高濕的醫(yī)療器械和物品的滅菌。 濕熱滅菌l濕熱滅菌法分為煮沸法、流通蒸汽滅菌法、間隙滅菌法、巴氏消毒法、高壓蒸汽滅菌法等幾種滅菌方法。 濕熱滅菌l（1）煮沸法：煮沸100，5分鐘，能殺死一般細(xì)菌的繁殖體。許多芽胞需經(jīng)煮潮56小時(shí)才死亡。水中加入2%碳酸鈉，可提高其沸點(diǎn)達(dá)105。既可促進(jìn)芽胞的殺滅，又能防止金屬器皿生銹。煮沸法可

10、用于飲水和一般器械（刀剪、注射器等）的消毒。 濕熱滅菌l（2）流通蒸汽滅菌法：利用100左右的水蒸汽進(jìn)行消毒，一般采用流通蒸汽滅菌器（其原理相當(dāng)于我國(guó)的蒸籠），加熱15到39分鐘，可殺死細(xì)菌繁殖體。消毒物品的包裝不宜過(guò)大、過(guò)緊，這樣以利于蒸汽穿透。l凡不耐高溫的物質(zhì)，如糖類、明膠、血清、牛乳及雞蛋等可用此方法滅菌。 濕熱滅菌l（3）間歇滅菌法：又稱分段滅菌法。適用于不耐熱培養(yǎng)基的滅菌。l方法是：將待滅菌的培養(yǎng)基在100下蒸煮30-60min，以殺死其中所有微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞，然后置室溫或20-30下保溫過(guò)夜，誘導(dǎo)殘留的芽胞萌發(fā)，第二天再以同法蒸煮和保溫過(guò)夜，如此連續(xù)重復(fù)3天，即可在較低溫度下達(dá)到

11、徹底滅菌的效果。例如，培養(yǎng)硫細(xì)菌的含硫培養(yǎng)基就是應(yīng)用間歇滅菌法滅菌，因?yàn)槠渲械脑亓蚪?jīng)常規(guī)的高壓滅菌(12l )后會(huì)發(fā)生熔化，而在100的溫度下則呈結(jié)晶狀。 l間歇滅菌法的注意事項(xiàng)：l使用間歇法滅菌時(shí)必須在滅菌物里外都達(dá)到100后開(kāi)始計(jì)算滅菌時(shí)間。l間歇法滅菌時(shí)應(yīng)在每次加熱后，迅速降溫，然后在室溫放置24h，再第二次加熱。如果降溫慢，往往使未殺死的雜菌大量滋長(zhǎng)，反面導(dǎo)致滅菌物變質(zhì)，特別是包裝過(guò)大時(shí)，靠近中心部分更易發(fā)生這種情況。 濕熱滅菌l（4）巴氏消毒法（Pasteurization）：有些食物會(huì)因高溫破壞營(yíng)養(yǎng)成分或影響質(zhì)量，如牛奶、醬油、啤酒等，所以只能用較低的溫度來(lái)殺死其中的病原微生物，

12、這樣既保持食物的營(yíng)養(yǎng)和風(fēng)味，又進(jìn)行了消毒，保證了食品衛(wèi)生。該法一般在62C，30分鐘既可達(dá)到消毒目的。此法為法國(guó)微生物學(xué)家巴斯德首創(chuàng)，故名為巴氏消毒法。 l巴氏消毒法是一種低溫消毒法，具體的處理溫度和時(shí)間各有不同，一般在60-85下處理15-30min。具體的方法可分兩類，第一類是較老式的，稱為低溫維持法，例如在63下保持30min可進(jìn)行牛奶消毒；另一類是較新式的，稱為高溫快速法，用于牛奶消毒時(shí)只要在85下保持5min即可。但是巴氏消毒法不能殺滅引起Q熱的病原體-伯氏考克斯氏體(一種立克次氏體)。 濕熱滅菌l（5）高壓蒸汽滅菌法：壓力蒸汽滅菌是在專門(mén)的壓力蒸汽滅菌器中進(jìn)行的，是熱力滅菌中使用最

13、普遍、效果最可靠的一種方法。其優(yōu)點(diǎn)是穿透力強(qiáng)，滅菌效果可靠，能殺滅所有微生物。 濕熱滅菌l壓力蒸汽滅菌器分類：l根據(jù)排放冷空氣的方式和程度不同，分為下排氣壓力蒸汽滅菌器和預(yù)真空壓力蒸汽滅菌器。 干熱和濕熱兩者比較l在同樣的溫度下，溫?zé)岬臍⒕Ч雀蔁岷茫湓蛴校簂蛋白質(zhì)凝固所需的溫度與其含水量有關(guān)，含水量愈大，發(fā)生凝固所需的溫度愈低。濕熱滅菌的菌體蛋白質(zhì)吸收水分，因較同一溫度的干熱空氣中易于凝固。 兩者比較l溫?zé)釡缇^(guò)程中蒸氣放出大量潛熱，加速提高濕度。因而濕熱滅菌比干熱所要溫度低，如在同一溫度下，則濕熱滅菌所需時(shí)間比干熱短。濕熱的穿透力比干熱大，使深部也能達(dá)到滅菌溫度，故濕熱比干熱收效好。

14、 高壓蒸汽滅菌器的基本構(gòu)造 1.外鍋 或稱“套層”，供貯存蒸汽用，連有用電加熱的蒸汽發(fā)生器，并有水位玻管以標(biāo)志盛水量。外鍋的外側(cè)一般包有石棉或玻璃棉絕緣層以防止散熱。如直接使用由鍋爐接入的高壓蒸汽，則外鍋在使用時(shí)充滿蒸汽，作為內(nèi)鍋保溫。 2.內(nèi)鍋 或稱滅菌室，是放置滅菌物的空間可配制鐵蓖架以分放滅菌物。 l 3.壓力表 內(nèi)外鍋各裝一只，老式的壓力表上標(biāo)明三種單位：公斤壓力單位(kg/cm2)，英制壓力單位(1b/in2)和溫度單位( )，便于滅菌時(shí)參照?，F(xiàn)在的壓力表用MPa表示。l 4.溫度計(jì) 可分為兩種，一種是直接插入式的水銀溫度計(jì)，裝在密閉的銅管內(nèi)，焊插在內(nèi)鍋中另一種是感應(yīng)式儀表溫度計(jì)，其

15、感應(yīng)部分安裝在內(nèi)鍋的排氣管內(nèi)，儀表安裝于鍋外頂部便于觀察。 l 5.排氣閥 一般外鍋、內(nèi)鍋各一個(gè)，用于排除空氣。新型的滅菌器多在排氣閥外裝有汽液分離器(或稱疏水閥)內(nèi)有由膨脹盒控制的活塞。利用空氣、冷凝水與蒸汽之間的溫差控制開(kāi)關(guān)，在滅菌過(guò)程中，可不斷地自動(dòng)排出空氣和冷凝水。l 6.安全閥 或稱保險(xiǎn)閥利用可調(diào)彈簧控制活塞，超過(guò)額定壓力即自動(dòng)放氣減壓。通常調(diào)在額定壓力之下，略高于使用壓力。安全閥只供超壓時(shí)安全報(bào)警之用，不可在保溫時(shí)用作自動(dòng)減壓裝置。 l 7.熱源 除直接引入鍋爐蒸汽滅菌外，都具有加熱裝置。近年來(lái)的產(chǎn)品以電熱為主，即底部裝有調(diào)控電熱管，使用比較方便。有些產(chǎn)品無(wú)電熱裝置，則附有打氣煤油

16、爐等。手提式滅菌器也可用煤炭爐作為熱源。 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膌了解濕熱滅菌的原理，學(xué)習(xí)并掌握蒸汽滅菌的操作方法與注意事項(xiàng)。 二、實(shí)驗(yàn)原理l高壓蒸汽滅菌是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)、以及外科手術(shù)器械等方面常用的一種滅菌方法，屬于濕熱滅菌。l一般培養(yǎng)基、玻璃器皿、無(wú)菌水、無(wú)菌緩沖液、金屬用具、接種室的實(shí)驗(yàn)服及傳染性標(biāo)本都可采用此法滅菌。 l將待滅菌的物體放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)。把鍋內(nèi)的水加熱煮沸，并把其中原有的冷空氣徹底驅(qū)盡后將鍋密閉。再繼續(xù)加熱就會(huì)使鍋內(nèi)的蒸汽壓逐漸上升，從而溫度也隨之上升到100以上。為達(dá)到良好的滅菌效果，一般要求溫度應(yīng)達(dá)到121(壓力為0.1MPa)，

17、時(shí)間維持15-30min。也可采用在較低的溫度(115，即0.075MPa)下維持35min的方法。 l高壓蒸汽滅菌是依據(jù)水的沸點(diǎn)隨水蒸汽壓的增加而上升，加壓是為了提高水蒸汽的溫度。 高壓蒸汽滅菌時(shí)常用的滅菌壓力、溫度與時(shí)間蒸 汽 壓 力蒸汽溫度(C)滅菌時(shí)間（min）MPa Kgf/cm2 Lbf/in20.055 0.56 8.00 112.6 300.069 0.70 10.00 115.2 200.103 1.00 15.00 121.0 20 l高壓蒸汽滅菌器是一個(gè)能耐壓、同時(shí)可以密閉的金屬鍋，有立式、臥式、手提式三種。熱源可以用蒸汽、煤氣或電源。滅菌器上裝有表示鍋內(nèi)溫度和壓力的溫度

18、計(jì)、壓力表。滅菌鍋還有排氣口、安全活塞。如壓力超過(guò)一定限度，活塞的閥門(mén)便自動(dòng)打開(kāi)，放出過(guò)多的蒸汽。 l高壓蒸汽滅菌技術(shù)關(guān)鍵是在壓力上升之前需將鍋內(nèi)冷空氣排盡。若鍋內(nèi)未排除的冷空氣滯留在鍋中，壓力表雖指示0.1MPa，但鍋內(nèi)溫度實(shí)際只有100攝氏度，高壓結(jié)束會(huì)造成滅菌不徹底。 空氣排除程度與溫度關(guān)系壓力表讀數(shù)MPa滅菌器內(nèi)溫度/C未排除空 氣排 除1/3空氣排 除1/2空氣排 除2/3空氣完全排除空氣0.034 72 90 94 100 1090.069 90 100 105 109 1150.103 100 109 112 115 1210.138 109 115 118 121 1260.1

19、72 115 121 124 126 1300.206 121 126 128 130 135 影響滅菌的因素l a.不同的微生物或同種微生物的不同菌齡對(duì)高溫的敏感性不同。多數(shù)微生物的營(yíng)養(yǎng)體和病毒在5065C，10分鐘就會(huì)被殺死；但各種孢子、特別是芽孢最能抗熱，其中抗熱性最強(qiáng)的是嗜熱脂肪芽孢桿菌，要在121C，12分鐘才被殺死。對(duì)同種微生物來(lái)講，幼齡菌比老齡菌對(duì)熱更敏感； 影響滅菌的因素b.微生物的數(shù)量多少顯然會(huì)影響滅菌的效果，數(shù)量越多，熱死時(shí)間越長(zhǎng)；c.培養(yǎng)基的成分與組成也會(huì)影響滅菌效果。一般地講，蛋白質(zhì)、糖或脂肪存在，則提高抗熱性，pH在7附近，抗熱性最強(qiáng)，偏向兩極，則抗熱能力下降，而不同

20、的鹽類可能對(duì)滅菌產(chǎn)生不同的影響；固體培養(yǎng)基要比液體培養(yǎng)基滅菌時(shí)間長(zhǎng)。 l滅菌時(shí)的過(guò)高溫度常對(duì)培養(yǎng)基造成的主要不良影響如下：l（1）出現(xiàn)混濁、沉淀(天然培養(yǎng)基成分加熱可以沉淀出大分子多聚合物；培養(yǎng)基中Ca、Mg、Fe、Zn等陽(yáng)性離子與培養(yǎng)基中的可溶性磷酸鹽共熱沉淀)。 l（2）營(yíng)養(yǎng)成分破壞或改變（酸度較高時(shí)淀粉、蔗糖、乳糖或瓊脂滅菌過(guò)程易水解；pH7.5、0.1MPa滅菌20min，葡萄糖破壞20%、麥芽糖破壞50%，若培養(yǎng)基中有磷酸鹽共存，葡萄糖轉(zhuǎn)變成酮糖類物質(zhì)，培養(yǎng)液由淡黃色變?yōu)榧t褐色，破壞更為嚴(yán)重）。 l（3）pH7.2時(shí)培養(yǎng)基中的葡萄糖、蛋白胨、磷酸鹽在0.1MPa滅菌15min以上可產(chǎn)

21、生對(duì)微生物生長(zhǎng)的某種抑制物。l（4）高壓蒸汽滅菌后培養(yǎng)基pH下降0.1-0.2。 l（5）高壓蒸汽滅菌過(guò)程會(huì)增加冷凝水，降低培養(yǎng)基成分濃度。對(duì)于前三種不良影響，可采用低壓滅菌（如在0.056MPa、30min滅菌葡萄糖溶液），或?qū)⑴囵B(yǎng)基幾種成分分別滅菌，臨用前無(wú)菌混合（如磷酸鹽與Ca、Mg、Zn、Cu等陽(yáng)性離子溶液）的方法，特殊情況時(shí)可采用間歇滅菌、過(guò)濾除菌（如維生素溶液）。工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)中常采用連續(xù)加壓滅菌法（135-140 C ，5-15秒）和連續(xù)蒸煮法。 三、實(shí)驗(yàn)材料l高壓滅菌器l待滅菌的培養(yǎng)基、無(wú)菌水、已包好的培養(yǎng)皿、移液管、玻璃涂抹棒等及待滅菌空試管、錐形瓶等玻璃器皿。 四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容l

22、（一）滅菌操作l 1.向鍋內(nèi)加水l打開(kāi)滅菌鍋蓋，向鍋內(nèi)加適量水。水量不足，滅菌鍋易蒸干。l 2.放入待滅菌物品l將帶滅菌物品放入滅菌桶內(nèi)，物品不要放得太緊和緊靠鍋壁，以免影響蒸汽流通和冷凝水順壁流入滅菌物品。 l 3.蓋好鍋蓋l將蓋上的軟管插入滅菌桶的槽內(nèi)，有利于罐內(nèi)冷空氣自下而上排出，然后加蓋，上下螺栓口對(duì)齊，采用對(duì)角方式均勻旋緊螺栓，使鍋密閉。 l 4.排放鍋內(nèi)冷空氣及升溫滅菌l打開(kāi)放氣閥，加熱，自鍋內(nèi)開(kāi)始產(chǎn)生蒸汽后3min再關(guān)緊放氣閥（或噴出氣體不形成水霧），此時(shí)蒸汽已將鍋內(nèi)的冷空氣由排氣孔排盡，控制熱源，維持所需壓力和溫度，并開(kāi)始計(jì)時(shí)，一般培養(yǎng)基控制在0.1MPa滅菌20min；含糖等

23、成分培養(yǎng)基控制在0.056MPa滅菌30min或0.07MPa滅菌20min，然后關(guān)閉熱源，停止加熱，壓力隨之逐漸降低。 5.滅菌完畢降溫及后處理l待壓力降至0時(shí)，慢慢打開(kāi)放氣閥，開(kāi)蓋，立即取出滅菌物品，但在壓力未完全降至0處前，不能打開(kāi)鍋蓋，以免培養(yǎng)基沸騰將棉塞沖出；也不可用冷水沖淋滅菌鍋迫使溫度迅速下降。所滅物品開(kāi)蓋后立即取出，以免凝結(jié)在鍋蓋和容器上的水滴弄濕包裝紙或落到被滅菌物品上，增加染菌率。斜面培養(yǎng)基自鍋內(nèi)取出后要趁熱擺成斜面，滅菌后的空培養(yǎng)皿、試管、移液管等需烘干或晾干。若連續(xù)使用高壓鍋，每次需補(bǔ)足水分，滅菌完畢，除去鍋內(nèi)剩余水分，保持滅菌鍋干燥。 6、注意事項(xiàng)l 6.1滅菌前 清

24、洗：將物品徹底清洗干凈，物品洗滌后，應(yīng)干燥并及時(shí)包裝。包裝：包裝材料應(yīng)允許物品內(nèi)部空氣的排出和蒸汽的透入。 物品捆扎不宜過(guò)緊，外用化學(xué)指示膠帶貼封，滅菌包每大包內(nèi)和難消毒部位的包內(nèi)放置化學(xué)指示物。 裝載 ：下排氣滅菌器的裝載量不得超過(guò)柜室內(nèi)容量的80%；預(yù)真空滅菌器的裝載量不得超過(guò)柜室容積90%。應(yīng)盡量將同類物品放在一起滅菌，若必須將不同類物品裝放在一起，則以最難達(dá)到滅菌物品所需的溫度和時(shí)間為準(zhǔn)。物品裝放時(shí)，上下左右相互間均應(yīng)間隔一定距離以利蒸汽置換空氣。 金屬包應(yīng)平放，盤(pán)、碟、碗應(yīng)處于豎立的位置；纖維織物應(yīng)使折疊的方向與水平面成垂直狀態(tài)；玻璃瓶等應(yīng)開(kāi)口向下或側(cè)放以利蒸汽進(jìn)入和空氣排出。難于滅

25、菌的大包放在上層，較易滅菌的小包放在下層；金屬物品放在下層，織物包放在上層，物品裝放不能貼靠門(mén)和四壁，以防吸入較多的冷凝水。 l 6.2滅菌后 檢查包裝的完整性，若有破損不可作為無(wú)菌包使用。濕包和有明顯水漬的包不作為無(wú)菌包使用。開(kāi)包使用前應(yīng)檢查包內(nèi)指示卡是否達(dá)到已滅菌的色澤或狀態(tài)，未達(dá)到或有疑點(diǎn)者，不作為無(wú)菌包使用。 l滅菌包落地，或誤放不潔之處，或占有水液，均應(yīng)視為受到污染，不可作為無(wú)菌包使用。l運(yùn)送無(wú)菌物品的工具應(yīng)每日清洗并保持清潔、干燥；當(dāng)懷疑或發(fā)現(xiàn)有污染可能時(shí)，應(yīng)立即進(jìn)行清洗消毒；物品順序擺放，并加防塵罩，以防再污染。l已滅菌的物品，不得與未滅菌的物品混放。 每批滅菌處理完成后，應(yīng)按流

26、水號(hào)登冊(cè)，記錄滅菌物品包的種類、數(shù)量、滅菌溫度、作用時(shí)間和滅菌日期與操作者等等。滅菌物品應(yīng)放于離地高20-25厘米，離天花板50厘米，離墻遠(yuǎn)于5厘米處的載物架上，順序排放，分類放置，并加蓋防塵罩。對(duì)于棉布包裝材料和開(kāi)啟式容器，一般建議，溫度25以下10-14天，潮濕多雨季節(jié)應(yīng)縮短天數(shù)。 （二）無(wú)菌試驗(yàn)l可抽取少數(shù)滅過(guò)菌的培養(yǎng)基置37攝氏度恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，若無(wú)菌生長(zhǎng)，即視為滅菌徹底，可保存?zhèn)溆谩?五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告l說(shuō)明高壓蒸汽滅菌原理、適用范圍。用簡(jiǎn)練方法表示操作過(guò)程及操作關(guān)鍵。 六、思考題l 1.高壓蒸汽滅菌的關(guān)鍵為什么是高溫而不時(shí)高壓？高壓蒸汽滅菌前為什么要將滅菌鍋內(nèi)的冷空氣排盡？滅菌時(shí)為什么人不能離開(kāi)工作現(xiàn)場(chǎng)？滅菌完畢后什么情況下才可以打開(kāi)鍋蓋取出滅菌物品？ l 2.染菌或接種有微生物的培養(yǎng)基或培養(yǎng)皿為什么不能直接洗滌而需先經(jīng)過(guò)高壓蒸汽滅菌？培養(yǎng)皿或錐形瓶?jī)?nèi)含固體培養(yǎng)基滅菌后如何處理？ l 3.對(duì)含糖（如葡萄糖或乳糖等）培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌時(shí)，應(yīng)采用多大壓力，多長(zhǎng)時(shí)間滅菌為宜？l 4.對(duì)血清、噬菌體濃縮液、氨基酸溶液、維生素溶液能否進(jìn)行高壓蒸汽滅菌？應(yīng)采用何種方法除菌為宜？ 謝謝！