《藥物分析 第十四章 維生素類藥物的分析》由會員分享，可在線閱讀，更多相關《藥物分析 第十四章 維生素類藥物的分析（175頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。

1、 維 生 素 維 持 正 常 生 理 功 能 所 必 需 的 、 微 量 營 養(yǎng)物 質(zhì) ， 人 體 不 能 合 成 維 生 素 。 必 須 從 外 界 食 物 中 攝取 。 Christiaan Eijkman1929 諾 貝 爾 生 物 醫(yī) 學 獎 公 元 前 3500年 -古 埃 及 人 發(fā) 現(xiàn) 能 防 治 夜 盲 癥 的 物 質(zhì) ， 也 就 是 后 來 的 維 A。 1747年 -蘇 格 蘭 醫(yī) 生 林 德 發(fā) 現(xiàn) 檸 檬 能 治 壞 血 病 ， 也 就 是 后 來 的 維 C。1831年 -胡 蘿 卜 素 被 發(fā) 現(xiàn) 。195年 -科 學 家 認 糙 皮 病 是 由 于 缺 乏 某 種

2、 維 生 素 而 造 成 的 1916年 -維 生 素 B被 分 離 出 來 。 1917年 -英 國 醫(yī) 生 發(fā) 現(xiàn) 魚 肝 油 可 治 愈 佝 僂 病 ， 隨 后 斷 定 這 種 病 是 缺 乏 維 D引 起 的 。1922年 -維 E被 發(fā) 現(xiàn) 1933年 -維 E首 次 用 于 治 療 分 類水 溶 性VitB族 (B 1、 B2、 B6、B12) VitC、 葉 酸（ VitM） 、 煙 酸 、煙 酰 胺 （ VitPP） 脂 溶 性VitA、 D2、D3、 E、 K1 等 AB1CDE 維 生 素 A的 簡 介 是 魚 類 肝 臟 中 提 取 的 一 種 不 飽 和 脂肪 醇 ，

3、又 稱 魚 肝 油 。 目 前 主 要 采 用人 工 合 成 。在 體 內(nèi) 以 視 黃 醇 的 形 式 儲 存 ， 缺 乏 會影 響 視 色 素 的 合 成 ， 導 致 夜 盲 癥 ， 視力 減 退 。 結 構共 軛 多 烯 醇 側 鏈 的 環(huán) 己 烯 黃 色 棱 形 ， 62-64 淡 黃 色 棱 形 ， 57-58無 定 型 ， 28-29 去 氫 維 生 素VitA2去 水 維 生 素VitA3易 發(fā) 生 脫 氫 、 脫 水 、 聚 合 反 應CH3 CH2OHCH3H3C CH3 CH3 123456789 123456789CH3H3C CH3 CH3 CH3 CH2 溶 解 性 :

4、與 三 氯 甲 烷 、 乙 醚 、 環(huán) 已 烷 或 石 油 醚 能 任 意 混 合 ，在 乙 醇 中 微 溶 ， 在 水 中 不 溶 。 不 穩(wěn) 定 性 ： 含 有 多 個 不 飽 和 鍵 ， 性 質(zhì) 不 穩(wěn) 定 ， 易 被 空 氣 中 氧或 氧 化 劑 氧 化 ， 易 被 紫 外 光 裂 解 ， 特 別 是 在 加 熱 和 金 屬 離 子 存在 時 更 易 氧 化 變 質(zhì) 從 而 失 活 。酸醛環(huán) 氧 化 物 、 氧 化 劑紫 外 線 、 VitAVitAVitA OO 2 性 質(zhì) 紫 外 吸 收 ： 共 軛 多 烯 醇 側 鏈 結 構 ， 在 325-328nm之 間 有 最 大 吸收 ，

5、 可 用 于 鑒 別 。 CH3 CH2ORCH3H3C CH3 CH3 123456789 max 相 對 生 物 效 價 順 反 異 構維 生 素 A 325.5 100% 全 反 式新 維 生 素 Aa 328 75% 2 順新 維 生 素 Ab 320.5 24% 4 順新 維 生 素 Ac 310.5 15% 2， 4 順異 維 生 素 Aa 323 21% 6 順異 維 生 素 Ab 324 24% 2， 6 順v天 然 維 生 素 A主 要 是 反 式 紫 紅藍 色 3SbClVitA CHCl3可 用 于 鑒 別 和 含 量 測 定 與 三 氯 化 銻 呈 色 :三 氯 甲 烷

6、 +三 氯 化 銻 =不 穩(wěn) 定 的 藍 色 與 三 氯 化 銻 呈 色 反 應鑒 別 實 驗Vit A SbCl3CHCl3(無 水 無 醇 ) 藍 色 紫 紅 色（ 一 ） Carr-Price反 應 -RCOOSbCl5+CH2 藍 色紫 紅 + CH2 -RCOOSbCl5 條 件 ： 無 水 、 無 醇SbCl3 水 SbOCl乙 醇 可 使 碳 正 離 子 的 正 電 荷 消 失要 求 儀 器 和 試 劑 必 須 干 燥 無 水 ，三 氯 甲 烷 必 須 無 醇 VitAVitA HCl 去 水無 水 乙 醇 max為 326nm一 個 吸 收 峰 max為 350 390nm三

7、個 吸 收 峰 CH3 CH2ORCH3H3C CH3 CH3 123456789 CH2五 個 共 軛 雙 鍵 六 個 共 軛雙 鍵最 大 吸 收 峰 紅 移 （ 二 ） UV法 維 生 素 A在 無 水 乙 醇 溶液 中 溶 解 ,立 即 進 行 UV掃 描 ,在 360nm處 有 一最 大 吸 收 峰 .當 鹽 酸 水 浴 加 熱 30s,迅速 冷 卻 ,此 過 程 發(fā) 生 脫水 反 應 ,掃 描 時 出 現(xiàn) 三個 吸 收 峰 USP 顯 色 劑 磷 鉬 酸 規(guī) 定 斑 點 顏 色 和 Rf值BP 對 照 品 法 顯 色 劑 三 氯 化 銻（ 三 ） TLC法展 開 劑 ： 環(huán) 己 烷

8、-乙 醚 （ 80： 20）均 顯 藍 色 斑 點 ， 維 生 素 醇 （ Rf= 0.1） 維 生 素 醋 酸 酯 （ Rf= 0.45） 維 生 素 棕 櫚 酸 酯 （ Rf= 0.7） 酸 值 取 乙 醇 與 乙 醚 各 15ml， 置 錐 形 瓶 中 ，加 酚 酞 指 示 劑 5滴 ， 滴 加 氫 氧 化 鈉 滴 定液 （ 0.1mol/L） 至 顯 粉 紅 色 ， 再 加 本品 2.0g， 振 搖 使 溶 解 ， 用 氫 氧 化 鈉 滴定 液 （ 0.1mol/L） 滴 定 ， 酸 值 應 不 大于 2.0（ 附 錄 VIIH）雜 質(zhì) 檢 查 過 氧 化 值取 本 品 1.0g， 加

9、 冰 醋 酸 -三 氯 甲 烷 （ 6:4） 30ml， 振搖 使 溶 解 ， 加 碘 化 鉀 的 飽 和 溶 液 1ml， 振 搖 1分 鐘 ，加 水 100ml與 淀 粉 指 示 液 1ml， 用 硫 代 硫 酸 鈉 滴 定 液（ 0.01mol/L） 滴 定 至 紫 藍 色 消 失 ， 并 將 滴 定 的 結 果用 空 白 試 驗 校 正 。 消 耗 硫 代 硫 酸 鈉 滴 定 液（ 0.01mol/L） 不 得 過 1.5ml。雜 質(zhì) 檢 查 維 生 素 A的 測 定CHP收 載 三 種UV HPLC 三 氯 化 銻 法含 量 測 定 （ 一 ） UV法 （ 三 點 校 正 法 ）維

10、生 素 A在 325328nm的 波 長 范 圍 內(nèi) 有 最 大 吸 收 ， 可 用 紫 外法 進 行 含 量 測 定 但 維 生 素 A原 料 常 混 有 雜 質(zhì) 如 ： 對 維 生 素 A有 影 響 的 雜 質(zhì) 主 要 有 以 下 幾 種 ： (1)VA2 (345350nm)和 VA3 (2)維 生 素 A的 氧 化 產(chǎn) 物 (3)維 生 素 A在 光 照 下 產(chǎn) 生 的 無 活 性 的 聚 合 物 (4)維 生 素 A的 異 構 體 等 。 以 上 這 些 雜 質(zhì) 在 310nm-340nm的 波 長 范 圍 內(nèi) 有 吸 收 ，干 擾 維 生 素 A的 測 定 。 維 生 素 A的 氧

11、 化 產(chǎn) 物 維 生 素 A在 光 照 下 產(chǎn) 生 的 無 活 性 的 聚 合 物 3. 波 長 的 選 擇 1 VitA的 max（ 如 VitA酯 328nm） 2 3 分 別 在 1的 兩 側 各 選 一 點 測 定 對 象 ： VitA醋 酸 酯 時 ， ChP2015規(guī) 定nm nmnmnm12 340,316,328 321 2113 132 76 AAA 測 定 對 象 ： VitA醇 時 ， ChP2015規(guī) 定nmnmnm 334,310,325 321 求求 效 價)(%cm1 樣 lC Acm (%)% )(1 樣（ 1） 基 本 步 驟 換 算 因 數(shù)）效 價 （ 樣樣

12、 % )(cm1)( Eg/IU4. 測 定 方 法A選 擇 ， A328測 定 或 A328校 正求 標 示 百 分 含 量 （ 1） 第 一 法 （ 直 接 測 定 法 ， 適 用 于 純 度 高 的 維 生 素A醋 酸 酯 的 測 定 ）1） 方 法 取 樣 品 適 量 ， 精 密 稱 定 ， 加 環(huán) 己 烷 溶 解在 300、 316、 328、 340、 360nm測 吸 收 度 ， 以 確 定 最大 吸 收 波 長 （ A328或 A328校 正 ） 。 b.判 斷 法 最 大 吸 收 波 長 在 326-329nm之 間 ， 且 5個 波 長 下 的 絕 對 值差 值 均 不 超

13、 過 0.02時 ， 可 直 接 用 328nm波 長 處 的 測 得 的 吸收 度 值 求 得 吸 收 系 數(shù) 。 a.計 算 吸 收 度 比 值 （ Ai/A328） ： 與 中 國 藥 典 的 吸 收 度 比 值 相比 較 ， 判 斷 每 個 差 值 的 絕 對 值 是 否 超 過 0.02。 最 大 吸 收 波 長 在 326-329nm之 間 ， 計 算 5個 波長 下 的 絕 對 差 值 ， 如 果 有 一 個 或 幾 個 超 過 0.02， 應按 以 下 的 方 法 進 行 判 斷 ： A328校 正 =3.52（ 2 A328 A316-A340） （ 1） 第 一 法 （ 直

14、 接 測 定 法 ， 適 用 于 純 度 高 的 維 生 素A醋 酸 酯 的 測 定 ）1） 方 法 取 樣 品 適 量 ， 精 密 稱 定 ， 加 環(huán) 己 烷 溶 解在 300、 316、 328、 340、 360nm測 吸 收 度 ， 確 定 A2） 計 算 a.吸 光 系 數(shù) E1%1cm b.求 效 價 （ IU/g） ： 效 價 指 每 g供 試 品 所 含 維 生 素的 A的 國 際 單 位 數(shù) 。 1IU=0.344g全 反 式 維 生 素 A醋 酸 酯換 算 因 子1% 1cmE IU/g= % ),(1 max/純 ）效 價 （換 算 因 子 cmE gIU每 克 純 品

15、相 當 多 少 個 單 位 （ IU） ?1IU=0.344g全 反 式 維 生 素 A醋 酸 酯 2907000g344.0 g101g/IU 6 ）效 價 （ 15302907000/% )(1 純 ）效 價 （換 算 因 子 cmE gIU 1900 醇維 生 素 Ag300.0IU1 3330000g300.0 g101g/IU 6 ）效 價 （ 18203330000/ % )(1 純 ）效 價 （換 算 因 子 cmE gIU 1830 c.求 維 生 素 A占 標 示 量 的 百 分 含 量 100%L100W WDA% 標 示 量換 算 因 子）標 示 量 （ AA328或 A

16、328校 正D供 試 品 的 稀 釋 倍 數(shù)換 算 因 子 維 生 素 A醋 酸 酯 在 環(huán) 己 烷 中 1900； 維 生 素 A醇 在 異 丙 醇 中 1830W為 平 均 內(nèi) 容 物 重 量 ； W為 稱 取 內(nèi) 容 物 重 量 （ 供 試 品 取 用 量 ）L 比 色 池 厚 度標 示 量 為 處 方 中 規(guī) 定 的 每 粒 中 所 含 的 國 際 單 位 數(shù) VitAD膠 丸 中 VitA的 含 量 測 定 精 密 稱 取 本 品 (規(guī) 格 10000VitAIU/丸 )裝 量 差 異項 下 （ 平 均 裝 量 0.08262g/丸 ） 的 內(nèi) 容 物 0.2399g 至250ml量

17、 瓶 中 ， 用 環(huán) 己 烷 稀 釋 至 刻 度 ， 搖 勻 ； 精 密量 取 2.0ml， 置 另 一 20 ml量 瓶 中 ， 用 環(huán) 己 烷 稀 釋 至刻 度 ， 搖 勻 。 以 環(huán) 己 烷 為 空 白 ， 測 定 最 大 吸 收 波 長為 328nm， 并 在 下 列 波 長 處 測 得 吸 收 度 為 A300 ： 0.354A316 ： 0.561A328 ： 0.628A340 ： 0.523A360 ： 0.216 A300 /A328 ： 0.555A316/A328 ： 0.907A328/A328 ： 1.000A340/A328 ： 0.811A360/A328 ： 0

18、.299 求 本 品 中 維 生 素 A的 含 量 ？ A300 /A328 ： 0.564A316/A328 ： 0.893A328/A328 ： 1.000A340/A328 ： 0.833A360/A328 ： 0.344 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 + 0.01 0.01 0 + 0.02 + 0.04 605.0 523.0561.0628.0252.3 252.3 340316328328 AAAA 校 正 = %)3%15(%7.3 %100328 328)(328 A AAf 校 正 %0.99 %1001000008262.0100201250

19、22399.0 1900605.0 %100)ml100/g(C 1900A% 328 標 示 量平 均 丸 重標 示 量 校 正 適 用 于 維 生 素 A醇（ 等 吸 收 比 法 ） 第 一 法 無 法 消 除 雜 質(zhì) 干 擾 時 用 此 法 皂 化 法 、 6/7A法 （ 2） 第 二 法 i KOH Anm mlIU VitAVitAS 處 測 、于稀 釋 至溶 解 異 丙 醇除 去 植 物 油 的 干 擾 甘 油 和 脂 肪 酸 鹽植 物 油 醇醋 酸 酯皂 化 液 揮 干 乙 醚乙 醚 提 取 乙 醇334 325310300/159/ 水 溶 性脂 溶 性 判 斷 max是 否

20、在 323 327nm之 間取 未 皂 化 樣 品 采 用色 譜 法 純 化 后 再 測定 計 算 325300 AA是 否 判 斷 A300 /A325 是 否 大 于 0.73是 否取 未 皂 化 樣 品 采 用 色 譜法 純 化 后 再 測 定 計 算 A325(校 正 ) 334310325325 260455528156 A.A.A.A 校 正 %100A AAf 325 325)(325 校 正 0 3% 3% 校 正325A 325A 校 正325Af 高 效 液 相 色 譜 法流 動 相 ： 正 己 烷 異 丙 醇 （ 997 3）檢 測 波 長 ： 325nm系 統(tǒng) 適 用

21、性 實 驗 考 察 分 離 度是 否 能 將 維 生 素 A醋 酸 酯 順 式 和 反 式 分 開 三 氯 化 銻 比 色 法 藍 色 3SbClVitA max 618nm 620nm標 準 曲 線 法 SbOClSbCl OH3 2缺 點 ： 呈 色 不 穩(wěn) 定 （ 5 10s內(nèi) ）水 分 干 擾與 標 準 曲 線 溫 差 1專 屬 性 差三 氯 化 銻 有 腐 蝕 性優(yōu) 點 ： 簡 便 快 速 維 生 素 A共 軛 多 烯 醇 側 鏈 的 環(huán) 乙 烯性 質(zhì) ： 脂 溶 性 ； 不 穩(wěn) 定 ， 可 與 三 氯 化 銻 呈 色鑒 別 ： 三 氯 化 銻 反 應 ； UV； TLC含 量 測

22、定 ： 紫 外 -分 光 光 度 法 （ 三 點 校 正 ） 三 氯 化 銻 比 色 法 AB1CDE N N NH2CH2 N SCH3 OHH3C 123 4 512 3 456 Cl , HCl氨 基 嘧 啶 環(huán) 噻 唑 環(huán)亞 甲 基氯 化 4-甲 基 -3(2-甲 基 -4-氨 基 -5-嘧 啶 基 )甲 基 -5-（ 2-羥 基 乙 基 ） 噻 唑 鎓 鹽 酸 鹽結 構 與 性 質(zhì) 維 生 素 B1（ 鹽 酸 硫 胺 ） 第 二 節(jié) 維 生 素 B1的 分 析結 構 與 性 質(zhì) 維 生 素 B1為 白 色 結 晶 或 結 晶 性 粉 末易 溶 于 水 ， 微 溶 于 乙 醇 ， 不

23、溶 于 乙 醚水 溶 液 呈 酸 性 1. 溶 解 性性 質(zhì) 噻 唑 環(huán) 、 嘧 啶 環(huán) 共 軛 雙 鍵12.5g/ml鹽 酸 溶 液 （ 9 1000）max = 246nm 藍 色 熒 光硫 色 素 環(huán) 合開 環(huán) 并 與 嘧 啶 環(huán) 上 氨 基噻 唑 環(huán) 正 丁 醇鐵 氰 化 鉀 氧 化 OH 1%1cmE 406 4362.硫 色 素 熒 光 反 應3.UV 雜 原 子 的 反 應 ， 能 與 某 些 生 物 堿 沉 淀 試 劑 反 應 ，生 成 組 成 恒 定 的 沉 淀 ， 可 用 于 鑒 別 和 含 量 測 定 。4.與 生 物 堿 沉 淀 試 劑 反 應5.氯 化 物 的 特 性

24、 與 NaOH共 熱 ， 形 成 硫 化 鈉 ， 硝 酸 鉛 生 成 黑色 沉 淀 ；6.硫 元 素 反 應7.紅 外 光 譜 特 征 二 、 鑒 別 試 驗（ 一 ） 硫 色 素 熒 光 反 應 為 維 生 素 B1所 特 有 N N NH2CH3 CH2 N S CH2CH2OHCH3Cl- HClNaOH N N NH2CH3 CH2 S CH2CH2OHCH3NCO H Na H2ON NCH3 NN S CH2CH2OHCH 3Na N NCH3 NN S CH2CH2OHCH3H 環(huán) 合 N NCH3 NN S CH2CH2OHCH3Na N NCH3 NN S CH2CH2OHC

25、H3O 2H 硫 色 素Thiochtome溶 于 丁 醇 ， 顯 藍 色 熒 光 維 生 素 B1 VitB1 4242 HgIHBHgIK 淡 黃H+ 白 色硅 鎢 酸 H+ OH4WO12 OHSiOB 23 222 白 色 扇 形苦 酮 酸 H+ 沉 淀 反 應 2KII IHIB2 紅 色H+ PbSNaSVitB AcPbNaOH OHNHAgNO AgCl 白3HNO 3HNO 藍淀 粉 試 紙 KIMnO Cl S元 素 反 應Cl-反 應硫 元 素 反 應 和 氯 化 物 反 應H+ Company Logo 三 、 含 量 測 定非 水 溶 液 滴定 法Non-aqueo

26、us Titrimetry 紫 外 分 光 光度 法UV 硫 色 素 熒 光法Thiochrone Fluoremetry 高 氯 酸 滴 定 液 （ 0.1mol/L） 的 滴 定 度 (T)為 16.86mg/ml。喹 那 啶 紅 亞 甲 藍(紫 紅 天 藍 )N N NH2CH3 CH2 N S CH2CH2OHCH3Cl- HCl 維 生 素 B1分 子 中 具 有 共 軛 雙 鍵 ， 在 紫 外 區(qū) 有 吸 收10.1M HCl2H203H3PO4 buffer4alcohol246232 255 維 生 素 1的 紫 外 吸 收 峰 隨 溶 液 的 pH變 化 而 不 同 ： pH

27、2.0時 ， 最 大 吸 收 波 長 在 246nm處 ； pH7.0時 ， 2個 吸 收 峰 ： 232 233和 266；可 采 用 差 示 分 光 光 度 法 ， 消 除 背 景 和輔 料 的 干 擾 ， 測 定 其 含 量 ； 片 劑 、 注 射 劑= 421%cmE11（ 每 片 ） 相 當 于 標 示 量 的 %=A = ECLChP11 標 示 量 % WE A %cm 100D 100 平 均 片 重（ 每 ml） 相 當 于 標 示 量 的 標 示 量 % VE A %cm 100D 100 熒 光 硫 色 素異 丁 醇 鐵 氰 化 鉀 VitB NaOH 硫 色 素 熒 光

28、 法 ： 維 生 素 B1的 專 屬 性 反 應1、 2. 方 法VitB1 鐵 氰 化 鉀NaOH 硫 色 素 異 丁 醇 熒 光 ex-365nmem-435nm+ NaOH + 鐵 氰 化 鉀 + 異 丁 醇+ NaOH + 異 丁 醇對 照 液 + NaOH + 鐵 氰 化 鉀 + 異 丁 醇+ NaOH + 異 丁 醇供 試 液 SdAb 52.0dS bAml5 數(shù)的供試品溶液中維生素gB1 3、（ 1） 靈 敏 度 高 ， 線 性 范 圍 寬 。（ 2） 專 屬 性 強 ， 氧 化 產(chǎn) 物 及 代 謝 產(chǎn) 物 不 干 擾 ， 可 用 于 制 劑分 析 ， 體 液 分 析 等 ，

29、但 操 作 比 較 復 雜 ， 受 干 擾 因 素 多 。（ 3） 本 法 中 使 用 的 氧 化 劑 ， 除 鐵 氰 化 鉀 ， 尚 可 用 氯 化 汞 或溴 化 氰 小 結 AB1CDE 維 生 素 C是 膠 原 蛋 白 形 成 所 必 需 的 ，有 助 于 保 持 間 質(zhì) 的 完 整 ， 維 生 素 C 缺 乏 可導 致 齒 齦 腫 脹 ， 出 血 ， 皮 下 瘀 點 ， 關 節(jié) 及肌 肉 疼 痛 ， 毛 囊 角 化 ， 嚴 重 缺 乏 可 引 起 壞血 病 。 所 以 維 生 素 C又 稱 為 抗 壞 血 酸 。 L-抗 壞 血 酸 (有 生 物 活 性 ) L-二 酮 古 羅糖 酸L

30、-去 氫 抗 壞 血 酸 無 生 物 活 性結 構 與 性 質(zhì) O OHHO O C OHH CH2OH123456C3 OH的pKa = 4.17C2 OH的pKa = 11.572.酸 性 一 元 酸1. 溶 解 性易 溶 于 水 ， 水 中 呈 酸 性 ； 略 溶 于 乙 醇 ， 不 溶于 三 氯 甲 烷 或 乙 醚 O OHHO O C OHH CH2OH123456L(+) 抗 壞 血 酸活 性 最 強比 旋 度+20.5 +21.5手 性 C（ C4、 C5）3. 旋 光 性 *含 有 四 個 光 學 異 構 體 CH2OH OO O O C OHH CH2OHCHHO CHOHC

31、 O C OCOONa HH+ OH-有 活 性 有 活 性 無 活 性OH O O C OHH CH2OHHO O 4.還 原 性 二 烯 醇 結 構 與 堿 反 應單 鈉 鹽 32CONa 酮 酸 鹽水 解 NaOH5. 水 解 反 應弱 堿 中 生 成 單 鈉 鹽 ，強 堿 中 水 解 NaOH 顯 色糠 醛 衍 生 物糠 醛 吡 咯脫 水 H 糖 類 的 顯 色 反 應 藍 色糠 醛 吡 咯脫 水 HVitC 50結 構 與 糖 類 相 似6. 具 糖 的 性 質(zhì) 五 碳糖 維 生 素 C 7. UV特 征維 生 素 C具 有 共 軛 雙 鍵560 265243 %11 maxmax

32、cmOHHE nmnm 去 氫 抗 壞 血 酸 OVitC利 用 還 原 性 ： 與 氧 化 劑 的 反 應鑒 別 試 驗 OHO O C OHH CH2OH HO CH2OH OO O O C OHH O （ 一 ） 與 AgNO3反 應去 氫 抗 壞 血 酸 黑 色 （ 二 ） 與 2， 6 - 二 氯 靛 酚 反 應 無 色二 氯 靛 酚， VitC62 氧 化 型 玫 瑰 紅 色（ 酸 性 ） 還 原 型藍 色(堿 性 ) 無 色 紅堿 性 酒 石 酸 銅 OCuVitC與 堿 性 酒 石 酸 銅 反 應與 KMnO4反 應 MnKMnO VitC（ 三 ） 與 其 他 氧 化 劑 反

33、 應 磚 紅 色 沉 淀試 劑 褪 色磷 鉬 酸 鉬 藍與 磷 鉬 酸 反 應 VitC （ 四 ） 薄 層 色 譜 法 （ 五 ） 糖 類 反 應 OHO OHOCCH2OHH OH OHO H O OCCH2OHOHH CH2OHCHOH (CHOH)2 C C OHO OH2O CH 2OHCH (CHOH)2 C HOOH -CO2戊 糖O CHO-3H2O糠 醛NO CHH2O+ 50藍 色 NH N 維 生 素 C可 在 三 氯 醋 酸 或 鹽 酸 存 在 下 水 解 、 脫 羧 、 生 成 戊 糖 ，再 失 水 ， 轉(zhuǎn) 化 為 糠 醛 ， 加 入 吡 咯 ， 加 熱 至 50 產(chǎn)

34、 生 藍 色 0.01mol/L HClnmmax 243 58554511 E %cm （ 五 ） 紫 外 光 譜 法BP2010 雜 質(zhì) 檢 查（ 一 ） 溶 液 的 澄 清 度 與 顏 色 檢 查內(nèi) 酯 環(huán) 水 解糠 醛 縮 合 呈 色高 于 或 低 于 pH.0-6.0空 氣 、 光 線 、 溫 度維 生 素 C脫 羧控 制 有 色 雜 質(zhì) 維 生 素 C （ 二 ） 鐵 、 銅 離 子（ 三 ） 草 酸 的 檢 查p 草 酸 與 金 屬 離 子 作 用 形 成 沉 淀 ； 所 以 對 Vc的 原料 ， 尤 其 是 注 射 液 ， 要 進 行 草 酸 檢 查 ；p 加 入 CaCl2，

35、 比 濁 法 ；原 子 吸 收 分 光 光 度 法 （ 二 ） 鐵 、 銅 離 子原 子 吸 收 分 光 光 度 法 四 、 含 量 測 定維 生 素 C維 生 素 C制 劑 碘 量 法二 氯 靛 酚 法紫 外 分 光 光 度 法高 效 液 相 色 譜 法 指 示 劑 淀 粉 指 示 液（ 一 ） 碘 量 法原 理 ： 利 用 Vc強 的 還 原 性I HAc 取 本 品 約 0.2g， 精 密 稱 定 ， 加 新 沸 過 的 冷水 100ml與 稀 醋 酸 10ml使 溶 解 ， 加 淀 粉 指 示 液1ml， 立 即 用 碘 滴 定 液 （ 0.05mol/L） 滴 定 ， 至溶 液 顯

36、藍 色 ， 在 30秒 內(nèi) 不 褪 。 每 1ml碘 滴 定 液(0.05mol/L)相 當 于 8.806mg的 C6H8O6。2、 方 法原 料 藥 （ 2） 酸 性 環(huán) 境 稀 醋 酸 （ 1） 新 沸 冷 H2O減 慢 VitC被 O2氧 化 速 度（ 3） 立 即 滴 定 趕 走 水 中 O2， 減 少 O2的 干 擾3、 注 意 事 項 （ 4） 附 加 劑 干 擾 的 排 除片 劑 過 濾注 射 劑 抗 氧 劑 丙 酮甲 醛Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5 （ 二 ） 2， 6 - 二 氯 靛 酚 滴 定 法 OHClClNHO H無色還原型酚亞胺Vit

37、 C H+ 去氫Vit C快 速 滴 定 ， 專 屬 性 強 ， 用 于 含 Vit C的 制 劑 與 食 品 分 析O N OHClCl玫瑰紅有氧化性自 身 指 示 終 點1. 原 理 空樣二 氯 靛 酚 液空 白樣 品 VVHAcHPO 32. 方 法 （ 2） 快 速 滴 定 2min內(nèi) （ 1） 酸 性 環(huán) 境 HPO3-HAc 穩(wěn) 定 VitC防 止 其 他 還 原 性 物 質(zhì) 干 擾（ 3） 亦 可 剩 余 比 色 測 定 AVitC 測二 氯 靛 酚 （ 定 量 過 量 ） （ 測 剩 余 染 料 ）3.注 意 事 項 （ 4） 二 氯 靛 酚 不 穩(wěn) 定 ， 須 臨 用 前 配

38、 制 并 標 定專 屬 性 強 ， 多 用 于 含 Vc的 制 劑 和 食 品 的 分 析配 制 方 法 ： NaHCO3 42mg+水 50 ml， 加 二 氯 靛酚 鈉 二 水 合 物 0.5g +水 200 ml,過 濾 ， 即 得 。標 定 方 法 ： 用 干 燥 的 維 生 素 C對 照 品 進 行 標 定 （ 三 ） 高 效 液 相 色 譜 法1、 色 譜 條 件2、 標 準 溶 液 的 制 備3、 血 漿 樣 品 的 處 理 ： 酸 性 溶 液 沉 淀 蛋 白 法4、 方 法 學 考 察5、 測 定 標 準 溶 液 制 備 ： 取 V C對 照 品 約 25mg， 精 密 稱 定

39、 ， 置 25ml量 瓶 中 ， 加10%偏 磷 酸 稀 釋 至 刻 度 ， 得 維 生 素 C儲 備 液 濃 度 為1mg/ml， 置 冰 箱 中 2 保 存 ， 3日 內(nèi) 可 用 。血 漿 樣 品 預 處 理 ： 取 受 試 者 靜 脈 血 ， 立 即 置 肝 素 化 的 離 心 試 管 中 ，3000rpm離 心 5min； 取 血 漿 0.5ml， 加 入 0.5ml 10%偏磷 酸 溶 液 ， 渦 旋 混 合 0.5min， 離 心 ， 分 取 上 清 液 ， 置冰 箱 2 貯 存 ， 直 至 測 定 。 穩(wěn) 定 性 考 察 ： VC在 血 漿 中 不 穩(wěn) 定 ， 在 5%偏 磷 酸

40、 溶 液 中 也 難以 保 持 長 期 穩(wěn) 定 ， 應 盡 可 能 縮 短 藥 物 分 離 和 處理 時 間 。樣 品 測 定 ： 每 天 抽 取 的 血 樣 應 當 日 測 定 ， 每 天 建 立 一 條 標準 曲 線 ， 并 隨 行 測 定 高 、 中 、 低 濃 度 的 雙 樣 本質(zhì) 控 樣 品 。 小 結維 生 素 C（ L抗 壞 血 酸 ） 烯 二 醇 結 構性 質(zhì) ： 水 溶 性 ； 酸 性 ； 旋 光 性 ； 還 原 性 ； 水 解 性 糖 類 性 質(zhì) ； 紫 外 吸 收 特 性鑒 別 ： 硝 酸 銀 反 應 ； 二 氯 靛 酚 鈉 反 應 ； 氧 化 反 應 ； TLC； 糖

41、類 反 應 ； 紫 外雜 質(zhì) 檢 查 ： 澄 清 度 與 顏 色 檢 查 鐵 、 銅 離 子 檢 查 草 酸 檢 查含 量 測 定 ： 碘 量 法 ； 二 氯 靛 酚 滴 定 法 ； 高 效 液 相 色 譜 AB1CDE SourcesvSunlightvFoodsvFortified MilkvFish Oils Deficiencyv佝 僂 病v牙 齒 松 動v雞 胸v骨 質(zhì) 疏 松v腳 成 弓 形 Function v促進鈣、磷的吸收；v促進骨骼和牙齒的正常生長；v調(diào)節(jié)檸檬酸的代謝第 四 節(jié) 維 生 素 D的 分 析 HO -2H HO B UV HO HO B UV HO 膽 甾 醇

42、7-脫 氫 膽 甾 醇 維 生 素 D3 (膽 骨 化 醇 ) 維 生 素 D2(麥 角 骨 化 醇 )麥 角 甾 醇 維 生 素 D是 一 類 抗 佝 僂 病 維 生 素 的 總 稱 ， 目 前 有 10多 種 ， 都 是 甾 醇 衍 生 物 。 HOH CH2 H HHH CH3CH3CH3CH3CH3 HOH CH2 H HH CH3CH3CH3CH3 維 生 素 D2 維 生 素 D3維 生 素 D2、 D3無 色 針 狀 結 晶 或 白 色 結 晶 性 粉 末 ；無 臭 ， 無 味 ； 遇 光 或 空 氣 均 易 變 質(zhì) 。 溶 解 性 :維 生 素 D2在 三 氯 甲 烷 中 極

43、易 溶 解 ,在 丙 酮 乙 醇 乙 醚中 易 溶 ； 維 生 素 D3在 乙 醇 、 丙 酮 、 三 氯 甲 烷 或 乙 醚 極 易 溶解 ； 二 者 均 在 植 物 油 中 略 溶 ， 在 水 中 不 溶 。不 穩(wěn) 定 性 :毒 性 增 強 .含 有 多 個 烯 鍵 ， 所 以 極 不 穩(wěn) 定 ， 宜 氧化 變 質(zhì) ， 效 價 降 低 ， 毒 性 增 強 。 旋 光 性 :有 五 到 六 個 手 性 碳 原 子 ,均 具 有 旋 光 性 . 維 生 素 D2 6個 手 性 碳 原 子 維 生 素 D3 5個 手 性 碳 原 子 HOH CH2 H HHH CH3CH3CH3CH3CH3 H

44、OH CH2 H HH CH3CH3CH3CH3 顯 色 反 應 甾 類 化 合 物氯 仿 溶 液 黃 色 紅 色 紫 色 綠 色紫 外 吸 收 特 性 無 水 乙 醇 265nm 維 生 素 D2 為 460 490 維 生 素 D3 為 465 495醋 酐硫 酸 E1cm1%E1%1cm 二 、 鑒 別 試 驗 （ 一 ） 顯 色 反 應1 與 醋 酐 -濃 硫 酸 反 應 氯 仿 溶 液 黃 色 紅 色 紫 色 綠 色醋 酐硫 酸2 與 三 氯 化 銻 反 應 本 品 1,2-二 氯 乙 烷 三 氯 化 銻 試 液 橙 紅 色 粉 紅 色 3 其 它 顯 色 反 應 維 生 素 D 三

45、 氯 化 鐵 橙 黃 色 二 氯 丙 醇 乙 酰 氯 綠 色 （ 二 ） 比 旋 度 鑒 別無 水 乙 醇 溶 液 維 生 素 D2 比 旋 度 為 102.5 至 107.5 維 生 素 D3 比 旋 度 為 105 至 112 （ 三 ） 其 它 鑒 別 方 法 薄 層 色 譜 法 、 HPLC法制 備 衍 生 物 測 熔 點 紫 外 、 紅 外 吸 收 光 譜 （ 四 ） 維 生 素 D2、 D3的 區(qū) 別 反 應維 生 素 D2 維 生 素 D3 96%乙 醇 10ml 取 0.1ml 乙 醇 1ml和 85%硫 酸 5ml 紅 色 max570nm 黃 色 max495nm 三 、

46、雜 質(zhì) 檢 查（ 一 ） 麥 角 甾 醇 的 檢 查維 生 素 D290%乙 醇 溶 液 洋 地 黃 皂 苷 溶 液 不 得 發(fā) 生 渾 濁 或 沉 淀 （ 二 ） 前 維 生 素 D的 光 照 產(chǎn) 物 （ 三 ） 有 關 物 質(zhì) 檢 查 Ch.P 2010 NP-HPLC含 量 測 定USP34-NF29化 學 法 色 譜 法 微 生 物法 BP2010化 學 法 色 譜 法 光 譜 法四 、 含 量 測 定 正 相 高 效 液 相 色 譜 法 （ 一 ） 維 生 素 D測 定 法 含 量 以 單 位 表 示每 單 位 相 當 于 維 生 素 D 0.025 g 注 意 ： 計 算 的 是

47、維 生 素 D及 前 維 生 素 D經(jīng) 折 算 成 維 生 素 D的 總 量 u 固 定 相 ： 硅 膠u 流 動 相 ： 正 己 烷 正 戊 醇 （ 997： 3）u 檢 測 波 長 ： 254nm第 一 法 ： 用 于 無 維 生 素 A醇 及 其 他 干 擾 的 供 試 品第 二 法 ： (1)皂 化 提 取 ;(2)凈 化 用 色 譜 柱 系 統(tǒng) 分 離 收 集 維 生素 D， 得 供 試 品 溶 液 B;(3)按 第 一 法 進 行 測 定 。第 三 法 ： 當 樣 品 經(jīng) 皂 化 提 取 及 凈 化 用 色 譜 系 統(tǒng) 分 離 收 集 后 ，前 維 生 素 D峰 仍 受 干 擾 時

48、 ， 采 用 此 法 。 小 結維 生 素 D抗 佝 僂 病 維 生 素 的 總 稱性 質(zhì) ： 脂 溶 性 ； 不 穩(wěn) 定 ； 旋 光 性 ； 顯 色 反 應 ； 紫 外鑒 別 ： 顯 色 反 應 ； 比 旋 度 ； VD2、 VD3區(qū) 別雜 質(zhì) 檢 查 ： 麥 角 甾 醇 ； 前 維 生 素 D光 照 產(chǎn) 物 ； 有 關 物 質(zhì)含 量 測 定 ： 三 法 AB1CDE主 要 講 解 第 五 節(jié) 維 生 素 E的 分 析維 生 素 E早 在 20世 紀 20年 代 就 被 人 們發(fā) 現(xiàn) ， Evans和 他 的 同 事 在 研 究 生 殖過 程 中 發(fā) 現(xiàn) ， 酸 敗 的 豬 油 可 以 引

49、起 大鼠 的 不 孕 癥 。是 與 生 育 有 關 的 維 生 素 的 總 稱1936 年 分 離 出 結 晶 體1938 年 被 瑞 士 化 學 家 人 工 合 成 維 生 素 E的 顯 微 照 片 維生素 E膠囊 名 稱 R1 R2 烴 鏈 相 對 活 性-生 育 酚 CH3 CH3 C16H33 1.0-生 育 酚 CH3 H C16H33 0.5-生 育 酚 H CH3 C16H33 0.2-生 育 酚 H H C16H33 0.1-生 育 酚 CH3 H C16H27 0.5 2R*(4R*,8R*)-3,4-二 氫 -2,5,7,8-四 甲 基-2-(4,8,12-三 甲 基 十

50、三 烷 基 )-2H-苯 并 吡 喃-6-醇 醋 酸 酯 -生 育 酚 醋 酸 酯 生 物 效 價 右 旋 體 ： 消 旋 體 = 1.4 ：10（ 天 然 品 ） （ 合 成 品 ） l 性 狀 :黃 色 或 金 黃 色 粘 稠 狀 透 明 液 體l 脂 溶 性 :溶 于 丙 酮 、 乙 醇 、 乙 醚 或 植 物 油 等 有 機 溶 劑 中l(wèi) 水 溶 性 :不 溶 于 水l 穩(wěn) 定 性 :無 氧 時 對 熱 、 酸 穩(wěn) 定 ， 對 堿 不 穩(wěn) 定 ， 對 氧 敏 感 ， 遇 光 可 被 氧 化 ， 色 漸 變 深 ， OorOHHVitE 醌 型 化 合 物 生 育 酚l UV： 乙 醇

51、溶 液 中 max284nm （ 一 ） 硝 酸 反 應二 、 鑒 別 試 驗 CH3HO O CH3C16H33CH3H3C 生 育 酚 HNO3 O O CH3C16H33H3C CH3O （ 橙 紅 色 ）生 育 紅 維 生 素 E在 硝 酸 酸 性 條 件 下 ， 水 解 生 成 生 育 酚OCH 3 CH3 CH3 CH3CH3-COO C16H33 HO OCH3 CH3 CH3 CH3 C16H33水 解 三 氯 化 鐵 聯(lián) 吡 啶 反 應紅 色生 育 醌對 生 育 酚 聯(lián) 吡 啶 2 FeKOHFeVitE 3 O （ 二 ） OOH3C CH3 OHCH3C16H33 CH3

52、 CH3 HO O CH3C16H33CH3H3C 生 育 酚 對 -生 育 醌 +23F e3+2F e N N NN 紅 色 Fe3+O max = 284nmmin = 254nm0.01%無 水 乙 醇 中UV法（ 三 ） 薄 層 板 硅 膠 G展 開 劑 環(huán) 己 烷 -乙 醚 （ 4 ： 1）顯 色 劑 硫 酸 （ 105 5） TLC法（ 四 ） VitE Rf = 0.7-生 育 酚 Rf = 0.5-生 育 醌 Rf = 0.9 2,3,5-三 甲 基 對 二 苯 酚 植 醇+ -生 育 酚-生 育 酚 醋 酸 酯 三 、 雜 質(zhì) 檢 查 三 、 雜 質(zhì) 檢 查 （ 一 ） 酸

53、 度 游 離 醋 酸 （ 二 ） 生 育 酚 硫 酸 鈰 滴 定 液 （ 0.01mol/L）二 苯 胺 （ 亮 黃 灰 紫 ）生 育 醌對生 育 酚 34 22 CeCe 利 用 游 離 生 育 酚 的 還 原 性 ，將 硫 酸 鈰 還 原 成 硫 酸 亞 鈰 三 、 雜 質(zhì) 檢 查 1.原 理2.試 劑 計 算每 ml硫 酸 鈰 滴 定 液 （ 0.01mol/L） 相 當 于0.002154g的 游 離 生 育 酚 %100WTV% 限 量 2.15%15.2 %1001.0002154.00.1% 限 量 限 量 (三 )有 關 物 質(zhì) 的 檢 查 (四 )殘 留 溶 劑 ： 環(huán) 己

54、烷 的 檢 查 四 、 含 量 測 定GC法（ 一 ）1、 選 擇 性 好靈 敏 度 高速 度 快分 離 效 能 好 揮 發(fā) 性 低 、 不 穩(wěn) 定 、極 性 強 衍 生 化 。易 受 樣 品 蒸 氣 壓 限制 載 氣 N2固 定 液 硅 酮 （ OV-17）擔 體 硅 藻 土 或 高 分 子 多 孔 小 球柱 溫 265檢 測 器 氫 火 焰 離 子 化 檢 測 器 (FID)內(nèi) 標 正 三 十 二 烷 n 500 R2內(nèi) 標 法 加 校 正 因 子 定 量2、 VitE測 定 的 色 譜 條 件 內(nèi) 標 法 供 試 液 （ 樣 品 +內(nèi) 標 ）內(nèi) 標 物 對 照 液 （ 對 照 +內(nèi) 標

55、）是 樣 品 中 不 存 在 的 物 質(zhì)與 被 測 組 分 峰 靠 近能 與 各 組 分 完 全 分 離與 被 測 組 分 的 量 接 近 樣 品 dl 生 育 酚固 定 相 十 八 烷 基 硅 烷 鍵 合 硅 膠流 動 相 甲 醇 -水 （ 49 ： 1）檢 測 波 長 292nm R 2.6 RSD0.8%（ 二 ） HPLC法 （ 外 標 法 ） （ 三 ） 熒 光 分 光 光 度 法對 照 品 dl 生 育 酚在 220400nm波 長 范 圍 內(nèi) ， 以 發(fā) 射 、 激 發(fā)波 長 間 隔 為 40nm掃 描 同 步 熒 光 光 譜 ，測 定 同 步 熒 光 峰 的 熒 光 強 度 信

56、 號 值 。 VE= F樣 品 - F空 白F標 準 - F空 白 4.0（ mg/L) 一 、 離 子 對 HPLC法 測 定 多 種 維 生 素 以 樟 腦 磺 酸 作 為 離 子 對 試 劑 ， 以 二 巰 基 丙 烷磺 酸 鈉 作 為 抗 氧 劑二 、 反 相 HPLC法 同 時 測 定 9種 水 溶 性 維 生 素三 、 非 水 反 相 HPLC法 同 時 測 定 4種 脂 溶 性 維 生 素 練 習 與 思 考A型 題 1. 維 生 素 B1的 鑒 別 方 法 是A.三 氯 化 鐵 反 應 B. 硫 色 素 反 應 C. 柯 柏 反 應 D.與 堿 性 酒 石 酸 銅 試 液 反

57、應 E. 雙 縮 脲 反 應 2. 維 生 素 E 中 國 藥 典 規(guī) 定 的 含 量 測 定 方 法 為A.非 水 溶 液 滴 定 法 B.旋 光 法 C.HPLC法 D.紫 外 分 光 法 E.GC法 B型 題 A。 亞 硝 基 鐵 氰 化 鈉 反 應 B. 硫 色 素 反 應 C.硝 酸 反 應 D. 三 氯 化 銻 反 應 E. 硝 酸 銀 試 液 的 反 應 1. 維 生 素 C 2. 維 生 素 E 3. 維 生 素 B1 4. 維 生 素 AECBD X型 題 1. 用 碘 量 法 測 定 的 藥 物 有A. 醋 酸 地 塞 米 松 B. 丙 酸 睪 酮 C. 維 生 素 C D

58、. 硫 酸 阿 托 品 E. 維 生 素 C注 射 液 返 回2. 可 用 紫 外 分 光 光 度 法 測 定 含 量 的 藥 物 有A. 維 生 素 A丸 劑 B. 丙 酸 睪 酮 C. 維 生 素 A D. 硫 酸 阿 托 品 E. 維 生 素 B1片 簡 答 題 簡 述 碘 量 法 測 維 生 素 C含 量 的 原 理 及 實驗 注 意 事 項 。 練 習 與 思 考A型 題 1. 維 生 素 B1的 鑒 別 方 法 是A.三 氯 化 鐵 反 應 B. 硫 色 素 反 應 C. 柯 柏 反 應 D.與 堿 性 酒 石 酸 銅 試 液 反 應 E. 雙 縮 脲 反 應 2. 維 生 素 E

59、 中 國 藥 典 規(guī) 定 的 含 量 測 定 方 法 為A.非 水 溶 液 滴 定 法 B.旋 光 法 C.HPLC法 D.紫 外 分 光 法 E.GC法 B型 題 A。 亞 硝 基 鐵 氰 化 鈉 反 應 B. 硫 色 素 反 應 C.硝 酸 反 應 D. 三 氯 化 銻 反 應 E. 硝 酸 銀 試 液 的 反 應 1. 維 生 素 C 2. 維 生 素 E 3. 維 生 素 B1 4. 維 生 素 AECBD X型 題 1. 用 碘 量 法 測 定 的 藥 物 有A. 醋 酸 地 塞 米 松 B. 丙 酸 睪 酮 C. 維 生 素 C D. 硫 酸 阿 托 品 E. 維 生 素 C注 射 液 返 回2. 可 用 紫 外 分 光 光 度 法 測 定 含 量 的 藥 物 有A. 維 生 素 A丸 劑 B. 丙 酸 睪 酮 C. 維 生 素 A D. 硫 酸 阿 托 品 E. 維 生 素 B1片 簡 答 題 簡 述 碘 量 法 測 維 生 素 C含 量 的 原 理 及 實驗 注 意 事 項 。