單擊此處編輯母版標題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,2018/9/7,,?#?,藥物非臨床藥代動力學研究技術指導原則,,1,參考,2014,年,5,月,13,日起草且已頒布的,《,藥物非臨床藥代動力學研究技術指導原則,》,。,給出與,《,藥品注冊工作指南,》,（,2005,年,3,月頒布的指導原則）的區(qū)別之處。,,2,主要內(nèi)容,（一）,概述,,（二）試驗設計,總體,要求,生物,樣品的分析,方法,研究項目,,3,概述,定義：,通過,體外和動物體內(nèi)的研究方法,，揭示藥物在體內(nèi)的動態(tài)變化規(guī)律，獲得藥物的,基本藥代動力學參數(shù),，闡明,藥物的吸收、分布、代謝和排泄,（,ADME,）的,過程,和,特征,。,,研究意義：,評價,藥物制劑,特性和質(zhì)量的重要依據(jù),。,闡明,藥物作用機制,，是,藥效和毒理研究,動物選擇的依據(jù),之一,。,藥物,或活性代謝產(chǎn)物濃度數(shù)據(jù),及藥,代動力學參數(shù)是產(chǎn)生、決定或闡明,藥效或毒性,大小的基礎，可提供藥物對,靶器官效應（藥效或,毒性,）,。,為,設計和優(yōu)化,臨床試驗,給藥方案,提供參考,信息。,,,4,（一）總體,要求,1,受試物：,采用,工藝相對穩(wěn)定、純度和雜質(zhì)含量能,反映臨床試驗擬用樣品和,/,或上市樣品質(zhì)量和安全性的樣品,。名稱、來源、批號、含量（或規(guī)格）、保存條件、有效期及配制方法等，并提供質(zhì)量檢驗報告,。,2,試驗動物：,成年,和,健康,。,常用動物有小鼠、大鼠、兔、豚鼠、犬、小型豬和猴等,。,動物選擇原則：,（,1,）,首選動物：在考慮與人體藥代動力學性質(zhì)相關性的前提下，盡可能選擇,與毒理學和藥效學研究相同的動物,。,（,體外模型比較動物與人代謝的種屬差異性,）,（,2,）,盡量在動物清醒狀態(tài)下進行試驗，,最好從同一動物多次采樣獲取藥代動力學參數(shù),。,（,3,）,創(chuàng)新性藥物應選用兩種或兩種以上的,動物,（嚙齒類,+,非嚙齒類）,。,其他,藥物,，可選用一種動物，建議首選非嚙齒類動物,。,（,4,）,經(jīng)口給藥不宜選用兔等食草類,動物,。,3,劑量選擇,：,動物體內(nèi)藥代動力學研究應設置至少,三個劑量組,，,低劑量與動物最低有效劑量基本一致，中、高劑量按一定比例增加,。,（書：高劑量最好接近最大耐受劑量，中小劑量根據(jù)動物有效劑量的上下限范圍選?。?4,給藥途徑,：,盡可能,與臨床用藥一致，,也要兼顧藥效學研究和毒理研究的給藥途徑,。,,,,,5,（二）,生物樣品的分析方法,色譜法、放射性同位素標記法、微生物 學方法、,免疫學,方法。,方法,學,驗證是,生物樣品分析的基礎,。,包括,準確度,、精密度、特異性、靈敏度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性,等,研究,；,制備,隨行,標準曲線,并對質(zhì)控樣品進行測定，確保生物樣品分析的可靠性,。,,6,指導原則對“,生物樣品的分析,”修改部分,基本概念,1.,靈敏度：,主要通過測定定量下限樣品的準確度和精密度來表征。,（書：通過標準曲線表征，主要包括定量下限和濃度,-,響應函數(shù)）,2.,介質(zhì)改成為,基質(zhì)：基質(zhì)組分、生物基質(zhì)、基質(zhì)效應。,分析方法驗證,1.,特異性：,對于色譜法至少要考察,6,個不同個體空白生物樣品色譜圖、空白生物樣品外加對照物質(zhì)色譜圖（注明濃度）及用藥后的生物樣品,（注明樣品來源基質(zhì)、用藥后的時間）,色譜圖,。,2.,精密度,：,為獲得批間精密度，應,至少,3,個分析批,合格,。（書：連續(xù),3,個分析批）,3.,稀釋可靠性：,樣品稀釋不應影響準確度和精密度,。準確度,和精密度應在,±,15%,之內(nèi)。稀釋的可靠性應該覆蓋試驗樣品所用的稀釋倍數(shù),。,4.,殘留,：,方法開發(fā)期間應使殘留最小化。方法驗證期間應通過檢測標準曲線定量上限濃度后測定空白樣品來確定其殘留，通常殘留應,不大于定量下限的,20%,。生物樣品分析期間也應進行殘留檢測，如在測定高濃度樣品后和分析下一個樣品之前測定空白樣品,。,5.,組織分布,樣品,：,組織分布樣品由于每種組織樣本數(shù)目少，所以其分析方法只需驗證選擇性、日內(nèi)精密度和準確度等。,通常選擇一兩種代表性組織進行分析方法驗證,。,,,,,7,生物樣品分析方法的,應用,每個分析批應建立標準曲線，隨行測定高、中、低,3,個濃度的質(zhì)控樣品，每個濃度至少雙樣本，并應均勻分布在未知樣品測試順序中。當一個分析批中未知樣品數(shù)目較多時，應增加各濃度質(zhì)控樣品數(shù)，使,質(zhì)控樣品數(shù)大于未知樣品總數(shù)的,5%,。質(zhì)控樣品測定結果的偏差一般應小于,15,%,（書：低濃度點偏差一般應小于,20%,）,，,最多允許,1/3,質(zhì)控樣品的結果超限，但不能在同一濃度中出現(xiàn),。,同,一天內(nèi)進行不同組織樣品測試時，用代表性組織作為基質(zhì)建立標準曲線，但質(zhì)控樣品應采用目標空白組織制備。根據(jù)當日標準曲線計算質(zhì)控樣品的濃度，若相對偏差在,?,15%,之內(nèi)，則可共用一條標準曲線，否則采用與待測組織樣品相同的空白組織建立標準曲線。,,8,,指導原則對“,生物樣品的分析,”修改部分,（三）,研究項目,血藥濃度,-,時,間曲線,吸收,分布,排泄,與血漿蛋白的,結合,生物轉(zhuǎn)化,藥物代謝酶及轉(zhuǎn)運體,研究,物質(zhì)平衡,,,,,,9,,創(chuàng)新型藥物,,（三）,研究項目,血藥濃度,-,時,間曲線,1.1,受試動物數(shù)：,以藥,-,時曲線,的每個,采樣點,不,少于,5,個,數(shù)據(jù),計算,所需動物數(shù),。受,試動物采用,雌雄各半,。,（,書：最好從同一受試動物個體取樣，如由多只動物的數(shù)據(jù)共同構成一條血藥濃度,-,時間曲線，需增加動物數(shù)，以反映個體差異對結果的影響,）,,1.2,采樣點,*,：,（,1,）,給,藥前,需采血,作為空白樣品,。,（,2,）,采樣時間,點的設計應兼顧藥物的,吸收相、平衡相（,峰濃度,C,max,附近,）和消除相,。,一般在,吸收相至少需要,2~3,個采樣點,，,對于,吸收快的血管外給藥藥物,，避免,第一個點,是,C,max,；,在,C,max,附近需要,3,個時間,點,；,消除相需要,4~6,個采樣點,。,（,3,）,整個,采樣時間應持續(xù)到,3~5,個半衰期，或持續(xù)到血藥濃度為,C,max,的,1/10~1/20,。,（,4,）,注意,采血途徑和整個試驗周期的采血總量不影響動物的正常生理功能和血液動力學，一般不超過動物總血量的,15,％,~20%,。例如，每只大鼠,24 h,內(nèi)采血總量不宜超過,2 mL,。在采血方式上，同時也要兼顧動物,福利。,10,（三）,研究項目,1.3,口服,給藥,：給,藥前應,禁食,12,小時以上,，以排除食物對藥物吸收的影響,。,1.4,,多次,（重復）給藥,對于臨床需長期給藥或有蓄積傾向的藥物，應考慮進行多次（重復）給藥的藥代動力學研究。,多次給藥試驗時,,,一般可選用一個劑量,(,有效劑量,),。,1.5,血藥濃度測定,1.6,,藥代動力學參數(shù),靜脈注射,給,藥,：,消除,半衰期（,t,1/2,）、表觀分布容積（,Vd,）,、藥,-,時曲線,下面積（,AUC,）、清除率（,CL,）等參數(shù),值,。,血管,外給,藥,：,上述參數(shù),、,峰濃度,（,C,max,）和達峰時間（,T,max,）,等，,以反映藥物吸收、消除的規(guī)律,。,統(tǒng)計,矩參數(shù)，如,:,平均滯留時間（,MRT,）、,AUC,(0-t),和,AUC,(0-∞),等,，,以,描述,藥物藥代動力學,特征,。,,11,（三）,研究項目,1.7,應提供的,數(shù)據(jù),,1.7.1,單次給藥,各個受試動物,的藥,-,時數(shù)據(jù),及曲線和各組平均值、標準差及曲線。,各個受試動物的主要藥代,動力學參數(shù)及各組平均值、標準差。,對受試物單次給藥非臨床藥代動力學的規(guī)律和特點進行討論和評價。,,1.7.2,多次（重復）給藥,各個,受試動物首次給藥后,的藥,-,時數(shù)據(jù),及曲線和主要藥代動力學參數(shù)及,各組平均值、標準差和曲線,。,各個受試動物的,3,次穩(wěn)態(tài)谷濃度數(shù)據(jù)及各組平均值、標準差,。,各個受試動物血藥濃度達穩(wěn)態(tài)后末次給藥,的藥,-,時數(shù)據(jù),和曲線和主要藥代動力學參數(shù)，及各組平均值、標準差和曲線。,比較首次與末次給藥,的藥,-,時曲線,和有關參數(shù)。,對受試物多次給藥非臨床藥代動力學的規(guī)律和特點進行討論和評價。,,12,（三,）,研究項目,2.,吸收,經(jīng)口,給藥,的新藥，進行整體動物試驗時應盡可能同時進行血管內(nèi)給藥的試驗，提供,絕對生物利用度,。,如,有必要，,可進行體外細胞試驗,、在體或離體腸道吸收試驗等以闡述藥物的吸收特性。,對于,其他血管外給藥,的藥物及,某些改變劑型的藥物,，應根據(jù)立題目的，,提供絕對生物利用度或相對生物利用度,。,建議采用非嚙齒類,動物自身,交叉試驗設計，用同一受試動物比較生物利用度,。,,生物利用度,：指藥物制劑被機體吸收的速率和吸收程度的一種度量,。,絕對生物利用度：用非血管途徑給藥的藥時曲線下面積與該藥參比制劑靜注給藥的,AUC,的比值，以百分率,表示,。,相對生物利用度：用相同途徑給藥的試驗制劑與參比制劑的藥時曲線下面積的比值。,13,（三）,研究項目,3.,分布,大,鼠或,小鼠,，,必要時可,選擇,非,嚙齒類,動物,（書：選用大鼠或小鼠做組織分布試驗較為方便）,選擇,一個劑量,（有效劑量）,給,藥后，至少測定藥物及,主要代謝產(chǎn)物,在心、肝、脾、肺、腎、胃腸道、生殖腺、腦、體脂、骨骼肌等組織的,濃度,。,必要時建立和說明血藥濃度與靶組織藥物濃度的關系。,參考藥,-,時曲線的變化趨勢，選擇至少,3,個時間點,分別代表吸收相、平衡相和消除相的藥物分布。若某組織的藥物或,代謝產(chǎn)物濃度較高,，應增加觀測點，進一步研究該組織中藥物消除的情況。每個時間點，一般應有,6,個動物,（雌雄各半）,的數(shù)據(jù)。,可,考慮進行多次給藥后特定組織的藥物濃度研究：,進行,組織分布試驗，必須注意取樣的代表性和一致性。,14,（三）,研究項目,4.,排泄,同時,提供嚙齒類和非嚙齒類動物的排泄數(shù)據(jù)，嚙齒,類每個,性別,3,只動物，非嚙齒,類每個,性別,2~3,只,動物,。（書：大鼠或小鼠）,4.1,尿和糞的藥物排泄：將動物放入代謝籠內(nèi)，選定一個有效劑量給藥后，按一定的時間間隔分段收集尿或糞的全部樣品，直至收集到的樣品中藥物和,主要代謝產(chǎn)物,低于,定量下限或小于給藥量的,1%,。糞樣品收集后按一定比例制成勻漿，記錄,總重量,或體積，取部分尿或糞樣品進行藥物和,主要代謝產(chǎn)物濃度,測定或,代謝產(chǎn)物,譜分析,，計算藥物和,主要代謝產(chǎn)物,經(jīng)此途徑排泄的速率及排泄量,。每個時間段至少有,5,只,動物的試驗數(shù)據(jù)。,采樣時間點：采取給藥前尿及糞樣，參考預實驗的結果，設計給藥后收集樣品的時間點，包括藥從尿或糞中開始排泄、排泄高峰及排泄結束的全過程）,4.2,膽汁排泄：一般在動物麻醉下作膽管插管引流，待動物清醒,且手術完全恢復后,給藥，并以合適的時間間隔分段收集膽汁，進行藥物和,主要代謝產(chǎn)物,測定,。,（書：大鼠在乙醚麻醉下）,4.3,記錄藥物及,主要代謝產(chǎn)物,自糞、尿、膽汁排出的速度及總排出量（占總給藥量的百分比），提供物質(zhì)平衡的數(shù)據(jù)。,15,（三）,研究項目,5.,與血漿蛋白的,結合,建議,根據(jù)藥理毒理研究所采用的動物種屬,，進行動物與人血漿蛋白結合率比較,試驗。,采用,方法：,平衡,透析法、超過濾法、分配平衡法、凝膠過濾法、,色譜法,等,?？?選擇使用一種方法進行,至少,3,個濃度（包括有效濃度）,的血漿蛋白結合試驗，每個濃度至少重復試驗,３次,，以了解藥物與血漿蛋白結合率以及可能存在的濃度依賴性和血漿蛋白結合率的種屬差異。,對血漿蛋白結合率高，且安全范圍窄的藥物,，,（書：對蛋白結合率高于,90%,的藥物）,建議,開展,體外藥物競爭結合,試驗，即選擇臨床上有可能合并使用的高蛋白結合率藥物，考察對所研究藥物蛋白結合率的影響,。,16,（三）,研究項目,6.,生物轉(zhuǎn)化,-,創(chuàng)新型藥物,臨床前,可先采用,色譜方法,或,放射性同位素標記方法,分析和分離可能存在的代謝產(chǎn)物，并用色譜,-,質(zhì)譜聯(lián)用等方法初步推測其結構,。,體內(nèi),藥物生物轉(zhuǎn)化可考慮,與藥,-,時曲線,和排泄試驗同時進行，應用這些試驗采集的樣品進行代謝產(chǎn)物的鑒定及濃度測定。,建議,在早期非臨床藥代動力學研究時，進行藥物,體外,代謝試驗。,盡早考察藥效和毒性試驗所用的實驗動物與人體代謝的差異?？紤]這種代謝的種屬差異是否會影響到其藥效和毒性，并以此作為藥效和毒性試驗動物選擇的依據(jù)。,,,17,（三）,研究項目,7.,藥物代謝酶及轉(zhuǎn)運體,研究,-,創(chuàng)新型藥物,體外試驗,體系,是評價藥物代謝酶和轉(zhuǎn)運體作用,機制，,結合,體內(nèi)試驗,，綜合評價藥物的處置過程,。,非臨床,ADME,研究應主要采用人源化材料（如：人肝微粒體、肝,S9,、原代肝細胞及,P450,重組酶等），鑒定藥物是否是代謝酶的底物或抑制劑,。,具有重要臨床意義的外排和攝入轉(zhuǎn)運體主要包括,P-gp,、,BCRP,、,OATP1B1,、,OATP1B3,、,OAT1,、,OAT3,和,OCT2,等,，建議針對,這些轉(zhuǎn)運體進行研究,。,考慮,代謝,酶與轉(zhuǎn)運體,之間的相互影響及潛在的相互作用、人特異性代謝產(chǎn)物的評估等。,18,（三）,研究項目,8.,物質(zhì),平衡,-,創(chuàng)新型藥物,臨床前,和臨床,早期，毒性,劑量和有效治療劑量范圍,確定,時，,運用,放射性標記化合物,，,收集,動物和人體糞、尿以及膽汁,以研究藥物的物質(zhì)平衡,。,這些,研究能夠,獲得化合物的排泄途徑和排泄速率等信息,，而且有助于,代謝產(chǎn)物的性質(zhì)鑒定,，并通過有限的數(shù)據(jù),比較它們的體內(nèi)吸收和分布特點,。,,19,研究項目：,（,1,）,血藥濃度,-,時,間曲線,：,不少于,5,個,、,雌雄,各,半,、,同一受試動物個體,取樣；,采樣點,*,；,給藥劑量。,（,2,）吸收：,提供絕對生物利用度或相對生物利用度,。,建議采用非嚙齒類動物自身交叉試驗設計，用同一受試動物比較生物利用度,。,（,3,）分布：,大鼠或小鼠,，,必要時可,選擇,非嚙齒類動物（書：選用大鼠或小鼠做組織分布試驗較為方便,）,；,主要,代謝產(chǎn)物,。,（,4,）排泄：,同時提供嚙齒類和非嚙齒類動物的排泄數(shù)據(jù)，嚙齒類每個性別,3,只動物，非嚙齒類每個性別,2~3,只,動物,（,書：大鼠或小鼠,）；,主要,代謝產(chǎn)物,。,體外,模型：動物選擇、吸收、,生物轉(zhuǎn)化,、,與血漿蛋白的,結合,、,藥物代謝酶,及轉(zhuǎn)運體,研究,。,藥理、毒理學研究：,動物選擇,、,劑量選擇,、,給藥途徑,、,分布,、,與血漿,蛋白結合,。,,,,,20,重要內(nèi)容小結,