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1、單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級(jí),第三級(jí),第四級(jí),第五級(jí),二輪復(fù)習(xí),基因工程,提醒：,判斷正誤并找到課本原話,1,切割質(zhì)粒的限制性內(nèi)切核酸酶均能特異性地識(shí)別,6,個(gè)核苷酸序列。,(,選擇性必修,3 P,71,),(,),2,DNA,連接酶和,DNA,聚合酶是一回事。,(,選擇性必修,3 P,72,“,旁欄思考,”,),(,),3,載體質(zhì)粒通常采用抗生素合成基因作為篩選的標(biāo)記基因。,(,選擇性必修,3 P,72,正文,),(,),4,目的基因就是指編碼蛋白質(zhì)的基因。,(,選擇性必修,3 P,76,正文,),(,),5,人畜食用,Bt,抗蟲蛋白會(huì)中毒。,(,選擇性必修,3

2、 P,77,“,相關(guān)信息,”,),(,),6,用,PCR,方法擴(kuò)增目的基因時(shí)不必知道基因的全部序列。,(,選擇性必修,3 P,77,“,相關(guān)信息,”,),(,),7,基因表達(dá)載體中含有啟動(dòng)子和密碼子。,(,選擇性必修,3 P,80,正文和圖,36),(,),8,干擾素是我國(guó)批準(zhǔn)生產(chǎn)的第一個(gè)基因工程藥物。,(,選擇性必修,3 P,90,“,資料卡,”,),(,),9,對(duì)蛋白質(zhì)的改造是通過(guò)直接改造相應(yīng)的,mRNA,來(lái)實(shí)現(xiàn)的。,(,選擇性必修,3 P,93,正文,),(,),10,轉(zhuǎn)基因作為一項(xiàng)技術(shù)本身是中性的。,(,選擇性必修,3 P,103,正文,),(,),11,治療性克隆是指利用克隆技術(shù)獲得

3、胚胎，并將胚胎孕育成為個(gè)體的克隆性技術(shù)。,(,選擇性必修,3 P,106,正文,),(,),基因工程,按照,人們的愿望,，通過(guò)轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予,生物新的遺傳特性,，創(chuàng)造出,更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品,。從技術(shù)操作層面看，由于基因工程是在,DNA,分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，因此又叫作,重組,DNA,技術(shù),。,操作對(duì)象及環(huán)境,操作水平,操作原理,結(jié)果,生物體外,基因,DNA,分子水平,按照人類的需要定向改造生物的遺傳特性,基因重組,優(yōu)點(diǎn)：,能克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙；,定向改造生物的遺傳特性。,基因工程,的工具,限制酶,主要存在于原核生物中,具有專一性,(,識(shí)別序列,),切開,DN

4、A,分子的磷酸二酯鍵,DNA,連,接酶,連接磷酸二酯鍵,種類,E,coli,DNA,連接酶,T,4,DNA,連接酶,運(yùn)載,工具,具備的,條件,結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，大小適中,能在宿主細(xì)胞中自我復(fù)制并穩(wěn)定存在,具一個(gè)或多個(gè)限制酶切位點(diǎn),具標(biāo)記基因,質(zhì)粒、噬菌體,、動(dòng)植物病毒,DNA,連接,酶、,限制酶、,DNA,聚合酶、解旋酶、,DNA,酶的比較,項(xiàng)目,DNA連,接酶,限制酶,DNA聚,合酶,解旋酶,DNA,酶,作用部位,作用對(duì)象,作用結(jié)果,磷酸二酯鍵,將,DNA,片段水解為單個(gè)脫氧核苷酸,磷酸二酯鍵,磷酸二酯鍵,磷酸二酯鍵,氫鍵,DNA,片段,DNA,單個(gè)的脫氧,核苷酸,DNA,DNA,將兩個(gè),DNA,片

5、段連接成完整的,DNA,分子,切割雙鏈,DNA,分子,將單個(gè)的脫氧核苷酸連接到,DNA,單鏈末端,將雙鏈,DNA,分子局部解旋為單鏈,DNA,的粗提取與鑒定,DNA,片段的擴(kuò)增及電泳鑒定,抗蟲棉的培育過(guò)程,基因工程的基本操作程序,目的基因的 篩選與獲取,基因表達(dá)載體的構(gòu)建,將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞,目的基因的檢測(cè)與鑒定,目的基因的篩選與獲取,特別提醒,從,cDNA,文庫(kù)獲取的目的基因不含啟動(dòng)子和終止子。,利用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)藥物時(shí),應(yīng)將目的基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子連接到一起。,耐高溫的,DNA,聚合酶,（,Taq,酶）,DNA,模板,引物,（,2,種,）,穩(wěn)定的,緩沖溶液,（一般添加,Mg,

6、2+,）,四種脫氧核苷酸,(dNTP),激活,真核細(xì)胞和細(xì)菌的,DNA,聚合酶,體外,PCR的條件,：,dATP,dGTP,dCTP,dTTP,3,5,子鏈的,延伸方向,是,5,3,DNA,聚合酶,3,5,模板鏈,子鏈,因?yàn)?DNA,聚合酶,不能,直接將單個(gè)的核苷酸,聚合成鏈,DNA,聚合酶,只能,將單個(gè)核苷酸加到,已有鏈,的,3-,端,子鏈,合成,需要引物,引物是一小段能與,DNA,母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì)的短單鏈核酸,。用于,PCR,的引物通常為,2030,個(gè)核苷酸。,在細(xì)胞中為一段單鏈,RNA,，,在,PCR,中為一段人工合成的單鏈,DNA,。,a.,什么是引物,在DNA復(fù)制時(shí)，DNA

7、聚合酶,不能直接,從模板鏈的一端直接開始臺(tái)成子鏈，必須由,引物提供3,端,之后,才能開始連接,脫氧核苷酸。,3,3,3,3,5,5,5,5,3,3,5,5,5,5,3,3,DNA,解鏈為單鏈,高溫,(,95,),變性,低溫,(50),復(fù)性,中溫,(72),延伸,引物結(jié)合到互補(bǔ),DNA,鏈,Taq,酶從引物起始進(jìn)行,子,鏈的合成,PCR,過(guò)程可以在,PCR,擴(kuò)增儀,(PCR,儀,),中自動(dòng)完成。,PCR擴(kuò)增目的基因的過(guò)程,：,如果循環(huán),n,次,，則,共需,消耗,個(gè),引物。,則,共需,消耗,對(duì),引物。,2,n,1,2,n+1,2,兩種引物都結(jié)合在,DNA,模板鏈的,端；脫氧核苷酸連接在引物的,端進(jìn)

8、行延伸。,3,設(shè)計(jì)引物的依據(jù)是,？,已知,目的基因,兩端,（,3,端）,的,部分,核苷酸序列,，以便根據(jù)該序列,合成,引物,。,3,3,5,DNA,母鏈,1,3,5,DNA,母鏈,2,3,5,引物,1,3,5,引物,2,呈,指數(shù)形式擴(kuò)增,（,n,次擴(kuò)增后，,DNA,數(shù)量約為,2,n,）,PCR,結(jié)果：,n,代后，,DNA,分子有,_,個(gè),n,代后，,DNA,鏈有,_,條,第,_,代出現(xiàn)完整的目的基因,n,代后，含引物的,DNA,分子有,_ _,個(gè),n,代后，共消耗,_ _,個(gè)引物,第,n,代復(fù)制，消耗了,_,個(gè)引物,n,代后，完整的目的基因有,_ _,個(gè),2,n,2,n+1,3,2,n,2,n

9、+1,-2,2,n,2,n,-,2n,基因表達(dá)載體的組成,【,說(shuō)明,】,有時(shí)為了滿足應(yīng)用需要，會(huì)在載體上,人工構(gòu)建,誘導(dǎo)型啟動(dòng)子,，當(dāng),誘導(dǎo)物存在,時(shí)，可以,激活或抑制,目的基因的表達(dá)。,特別提醒,啟動(dòng)子、終止子、起始密碼子和終止密碼子的關(guān)系,啟動(dòng)子,(DNA,片段,),起始密碼子,(,位于,mRNA,上,),。,終止子,(DNA,片段,),終止密碼子,(,位于,mRNA,上,),。,轉(zhuǎn)化,：,目的基因進(jìn)入,_,內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持,_,和,_,的過(guò)程,受體細(xì)胞,穩(wěn)定,表達(dá),方法：,植物細(xì)胞：,動(dòng)物細(xì)胞：,微生物細(xì)胞：,花粉管通道法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、,顯微注射技術(shù),Ca,2+,處理法(感受態(tài)

10、細(xì)胞法),由于受體細(xì)胞有植物、動(dòng)物、微生物之分，以及目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法不同，因此，基因表達(dá)載體的構(gòu)建也會(huì)有差別；,將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞,將目的基因,插入,Ti,質(zhì)粒的,T-DNA,中,，通過(guò)農(nóng)桿菌的,轉(zhuǎn)化,作用，就可以使目的基因,進(jìn)入植物細(xì)胞,。,農(nóng)桿菌特點(diǎn)：,a.,能在自然條件下,侵染,雙子葉植物,和,裸子植物,，而對(duì),大多數(shù),單子葉植物,沒有,侵染能力；,b.,農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)含有,Ti,質(zhì)粒,，當(dāng)它侵染植物細(xì)胞后，能將,Ti質(zhì)粒,上的,T-DNA,（,可轉(zhuǎn)移的DNA,）,轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞，并且將其,整合到該細(xì)胞的,染色體DNA上,；,c.,利用農(nóng)桿菌進(jìn)行轉(zhuǎn)化的,方法,：,可轉(zhuǎn)移的

11、DNA,受體細(xì)胞,植物細(xì)胞,動(dòng)物細(xì)胞,微生物細(xì)胞,常用方法,農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,、基因槍法、花粉管通道法,顯微注射技術(shù),感受態(tài)細(xì)胞法,受體細(xì)胞,體細(xì)胞,受精卵,原核細(xì)胞,轉(zhuǎn)化過(guò)程,以農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法為例：,將目的基因插入,Ti,質(zhì)粒,的,TDNA,上,轉(zhuǎn)入,農(nóng)桿菌,中,導(dǎo)入,植物細(xì)胞,整合到受體細(xì)胞的,DNA,上,提純含目的基,因的表達(dá)載體,顯微注射,受精卵發(fā)育,具有新性,狀的個(gè)體,Ca,2,處理細(xì)胞,感受態(tài)細(xì)胞,基因表達(dá)載體與,感受態(tài)細(xì)胞混合,感受態(tài)細(xì)胞,吸收,DNA,分子,在棉花細(xì)胞中，重組表達(dá)載體是否導(dǎo)入成功？是否可以穩(wěn)定維持并表達(dá)出,Bt,蛋白？表達(dá)出的,Bt,蛋白是否具有殺蟲的功效？,4.,目

12、的基因的檢測(cè)與鑒定,檢測(cè),目的基因,進(jìn)入受體細(xì)胞后，,是否穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性。,1.,目的：,2.,檢測(cè)內(nèi)容及方法：,類型,檢測(cè)內(nèi)容,方法,分子水平,的檢測(cè),個(gè)體,生物學(xué),水平,的鑒定,受體細(xì)胞的染色體,DNA,上,是否插入,了目的基因,目的基因,是否轉(zhuǎn)錄,出了mRNA,PCR等技術(shù),目的基因,是否翻譯,成蛋白質(zhì),抗原-抗體雜交技術(shù),個(gè)體是否具有,相應(yīng)性狀,抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等,基因文庫(kù),識(shí)別和結(jié)合,轉(zhuǎn)錄,農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,顯微注射技術(shù),轉(zhuǎn)基因抗蟲植物,基因工程的應(yīng)用,農(nóng)牧業(yè)方面,醫(yī)藥衛(wèi)生方面,轉(zhuǎn)基因抗病植物,轉(zhuǎn)基因抗除草劑植物,改善畜產(chǎn)品的品質(zhì),提高動(dòng)物的生長(zhǎng)速率,改良植物的品質(zhì)

13、,讓哺乳動(dòng)物批量生產(chǎn)藥物,建立移植器官工廠,食品工業(yè)方面,生產(chǎn)食品工業(yè)用酶,構(gòu)建基因工程菌,蛋白質(zhì)工程的概念,蛋白質(zhì)工程是指以,及其與,作為,基礎(chǔ),通過(guò),或,來(lái)改造,或,蛋白質(zhì),以滿足,。,蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律,生物功能的關(guān)系,改造,合成基因,現(xiàn)有蛋白質(zhì),制造一種新的,人類生產(chǎn)和生活的需求,基礎(chǔ)：,蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系；,操作對(duì)象：,改造或合成基因,結(jié)果：,改造現(xiàn)有蛋白質(zhì)或制造一種新的蛋白質(zhì),與基因工程的關(guān)系：,目的：,以滿足人類生產(chǎn)和生活的需求,在基因工程基礎(chǔ)上延伸出來(lái)的第二代基因工程,理論和技術(shù)：,分子生物學(xué)、晶體學(xué)和計(jì)算機(jī)技術(shù),蛋白質(zhì)工程,合成,新的,蛋白質(zhì),蛋白質(zhì),

14、結(jié)構(gòu),脫氧核苷酸序列,(,基因,),1,、蛋白質(zhì)工程的起點(diǎn)是什么,？產(chǎn)物,是什么,？,起點(diǎn)是從預(yù)期蛋白質(zhì)的功能出發(fā)，設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，產(chǎn)物是改造后的蛋白質(zhì)或新的蛋白質(zhì),。（,由于蛋白質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜，因此蛋白質(zhì)工程是一項(xiàng)難度很高的工程,）,常見的設(shè)計(jì)改造蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的方法：,（,1,）對(duì)已知的蛋白質(zhì)進(jìn)行少數(shù)氨基酸的替換,（,2,）對(duì)不同來(lái)源的蛋白質(zhì)進(jìn)行拼接,（,3,）從氨基酸排列順序開始設(shè)計(jì)全新的蛋白質(zhì),2,、蛋白質(zhì)工程的原理是什么？,中心法則，體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成過(guò)程。,DNA-mRNA-,蛋白質(zhì),3,、蛋白質(zhì)工程為什么可以根據(jù)功能推測(cè)結(jié)構(gòu)？,結(jié)構(gòu)決定功能，功能反映結(jié)構(gòu),4,、為什么可以根據(jù)氨基

15、酸序列推測(cè),DNA,的脫氧核苷酸序列？由此得到的,結(jié)果是否具有,唯一性？為什么？,氨基酸與堿基存在對(duì)應(yīng)關(guān)系：密碼子表,不唯一，因?yàn)槊艽a子表具有,簡(jiǎn)并性,5,、蛋白質(zhì)真正開始操作的第一步是先對(duì)什么東西進(jìn)行改造，改造后,，又需要,進(jìn)行什么樣的操作？,真正操作的第一步：對(duì)原基因進(jìn)行改造（如用基因的定點(diǎn)突變技術(shù)進(jìn)行堿基的替換），或根據(jù)氨基酸序列推導(dǎo)出來(lái)的核苷酸序列直接合成新的基因。,后續(xù)操作：以上述手段獲取的基因作為目的基因，進(jìn)行基因工程的操作。,蛋白質(zhì)工程是在基因工程的基礎(chǔ)上，延伸出來(lái)的第二代基因工程。,長(zhǎng)句專練,1.,深挖教材類,(1)(,選擇性必修,3 P,71,“,旁欄思考,”,),你能根據(jù)所

16、掌握的知識(shí)，推測(cè)限制酶存在于原核生物中的主要,作用,？,(,2)(,選擇性必修,3 P,74,“,拓展應(yīng)用,1,”,),限制酶不切割細(xì)菌本身的,DNA,分子的原因,可能,？,(,3)(,選擇性必修,3 P,77,“,相關(guān)信息,”,)PCR,反應(yīng)緩沖溶液中一般要添加,Mg,2,，其,原因,？,當(dāng)外源,DNA,入侵時(shí)，它會(huì)利用限制酶來(lái)切割外源,DNA,，使之失效，以保證自身的安全,含有某種限制酶的細(xì)胞的,DNA,分子或者不具備這種限制酶的識(shí)別序列，或者通過(guò)甲基化酶將甲基轉(zhuǎn)移到了限制酶所識(shí)別序列的堿基上，使限制酶不能將其切開,真核細(xì)胞和細(xì)菌的,DNA,聚合酶都需要,Mg,2,激活,2.,事實(shí)概述類,(1),全國(guó)卷,，,38(2),以,mRNA,為材料可以獲得,cDNA,，其,原理,？,(,2),全國(guó)卷,，,40(1),質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有,_(,答出兩點(diǎn)即可,),，而作為基因表達(dá)載體，除滿足上述基本條件外，還需具有啟動(dòng)子和終止子,。,(3),全國(guó)卷,，,40(1),在培育某些轉(zhuǎn)基因植物時(shí)，常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，農(nóng)桿菌的作用,？,(4),全國(guó)卷，,40(2),質(zhì)粒運(yùn)載體用