單擊此處編輯母版文本樣式,第二層,第三層,第四層,第五層,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,*,資料僅供參考,不當(dāng)之處，請聯(lián)系改正。,課題來源,根據(jù)國家藥典綜發(fā)200855號文及第九屆藥典,委員會微生物專業(yè)委員會第一次會議要求，由青島,所牽頭擬定了“防腐劑效力測定方法的研究”課題實,驗方案，參加單位有上海市食品藥品檢驗所、天津,市藥品檢驗所、深圳市藥品檢驗所，自2008年開展了工作至2008年10月完成了課題全部工作，課題對8個劑型27批供試品，進(jìn)行了生長環(huán)境（培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間）等試驗通過試驗確立了正確的、科學(xué)的、簡便易行的檢驗方法。,1、供試品分類：根據(jù)藥品給藥途徑及用途分類。,2、試驗使用材料：培養(yǎng)基、陽性菌株、稀釋液。,3、檢驗方法：檢驗方法包括；方法、培養(yǎng)環(huán)境、檢出率、鑒別方法（典型性）等。,一、研究目的,如果藥物本身不含有充分的抗菌力，在正常儲存和使用過程中可能發(fā)生細(xì)菌污染和大量繁殖；對患者引起污染或造成藥物變質(zhì)。在生產(chǎn)過程中添加適合的防腐劑以保證藥品的質(zhì)量。,所有防腐劑都具有一定的毒性，而且在貯存過程中其有效性有可能因藥物的活性成分提高或降低，為保證藥品的質(zhì)量和用藥安全，添加防腐劑的量應(yīng)根據(jù)制劑本身是否具抗菌活性，保持最低有效量。,防腐劑效力的測定可為生產(chǎn)過程中添加防腐劑提供指導(dǎo)，隨著科學(xué)發(fā)展，新型防腐劑大量出現(xiàn)，防腐劑效力的測定更為重要；使生產(chǎn)者正確掌握產(chǎn)品中添加防腐劑的效力，有助于選擇合適的防腐劑，也可對防腐劑使用的正確性給予評價。,二、目前國內(nèi)外防腐劑效力測定的現(xiàn)狀,目前歐洲、美國、英國等國藥典均已在附錄中收載了防腐劑效力測定，雖然方法不同，但均采用了生物測定方法。我國藥典防腐劑效力測定目前還是空白，有必要經(jīng)過研究，制訂出科學(xué)、簡便、易行的測試方法收載于藥典附錄中。防腐劑效力的測定，不但為生產(chǎn)者提供正確的使用防腐劑的指導(dǎo)，而且可對使用防腐劑的正確性給予評價。,三、研究目標(biāo),確立正確的、科學(xué)的、簡便易行的檢驗方法。,1、供試品分類：根據(jù)藥品給藥途徑及用途分類。,2、試驗使用材料：培養(yǎng)基、陽性菌株、稀釋液。,3、檢驗方法：檢驗方法包括；方法、培養(yǎng)環(huán)境、檢出率、鑒別方法（典型性）等。,防腐劑效力測定試驗方法的研究總結(jié)報告,按課題試驗方案要求，根據(jù)藥品的劑型和給藥途徑對8個劑型27批供試品；新型防腐劑（作為對照品）、針劑（不含防腐劑）、口服液、混懸劑、陰道用藥、滴耳劑、滴眼劑、抗酸劑，在供試品中接種定量活菌，采用經(jīng)驗證的檢驗方法，在指定的時間間隔下，測定活菌數(shù)，根據(jù)測得的活菌對數(shù)值變化，判斷該產(chǎn)品添加的防腐劑的有效性。,1、試驗的材料,供試品：,對照 波斯特新型防腐劑其有效成分是聚氧烯烴基胍，取本品0.51ml加入1001ml蒸餾水中，制成每1ml含50PPM的溶液，作為試驗對照品。陰性對照（不含防腐劑）氯化鈉注射液、碳酸氫鈉注射液、顛茄口服液供試品（含防腐劑）抗病毒口服液、呋麻滴鼻液、硫糖鋁混懸液、阿昔洛韋滴眼液、鯨脂滴耳液、潔而陰洗液,培養(yǎng)基,大豆酪蛋白肉湯瓊脂培養(yǎng)基,大豆酪蛋白肉湯培養(yǎng)基,沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基,沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基,改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基,稀釋液,PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液,菌種,對試驗用菌種的要求同中國藥典2005版附 錄XJ細(xì)菌，霉菌及酵母菌計數(shù)；所用菌株傳代次數(shù)均為第3代。銅綠假單胞菌 CMCC(B)10104金黃色葡萄球菌 CMCC(B)26003白色念球菌 CMCC(F)98001黑曲霉 CMCC(F)98003大腸埃希菌 CMCC(B)44102,菌液制備,同中國藥典,2005版,附錄,XJ,細(xì)菌，霉菌及酵母菌計數(shù)；銅綠假單胞菌，金黃色葡萄球菌，大腸埃希菌、白色念珠菌制成每,1ml,含菌數(shù)為,10,8,cfu,的菌懸液，黑曲霉制成每,1ml,含孢子數(shù),10,8,cfu,的孢子懸液。,菌液稀釋先用比濁管比濁，再用平板法確定含菌濃度,cfu/m,l。,試驗方法,供試液的制備,：在無菌條件下進(jìn)行，取供試品20ml(g)5份，分別加入5個帶蓋的試管中，抗酸劑加入上述制備的5種菌液0.1 ml,（約含,10,3,10,4,cfu），其余分別加入菌液0.1 ml（約含10,5,10,6,cfu）搖勻。,供試品的分類,為了實驗結(jié)果的判斷,根據(jù)供試品的給藥途徑和用途,將被測試的供試品分為四類.見表1,放置,：將上述接種后供試液，搖勻，立即取樣檢測，剩余供試液，,置室內(nèi)2025，陰涼處保存。,時間,：分別在0、6h、24h、72 h、7d、14d、21d、28d按下述方法測定存活的細(xì)菌數(shù)。供試品中加入試驗菌立即進(jìn)行試驗為0時。,方法：,采用經(jīng)驗證的試驗方法，驗證方法同中國藥典2005版附錄XI J細(xì)菌，霉菌及酵母菌計數(shù)驗證方法。結(jié)果見表1,銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌接種大豆-酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基，于3035培養(yǎng)1824小時、白色念球菌接種沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，于2025培養(yǎng)2448小時、黑曲霉接種改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基平板上，于2025培養(yǎng)57天，取出計數(shù)。,分別在0、6h、24h、72 h 7d、14d、21d、28d按下述方法測定活菌數(shù)。,氯化鈉注射液、碳酸氫鈉注射液、顛茄口服液采用常規(guī)法進(jìn)行檢驗；在規(guī)定時間取制備（加入菌）的供試液1ml，加入培養(yǎng)基，檢驗方法同中國藥典2005版,附錄,XI J,微生物限度檢查；細(xì)菌，霉菌及酵母菌計數(shù)。結(jié)果見表2,抗病毒口服液、詰而陰洗液、呋麻滴鼻液、硫糖鋁混懸液、阿昔洛韋滴眼液、用采用培養(yǎng)基稀釋法，進(jìn)行檢驗；在規(guī)定時間取制備（加入菌）的供試液0.2ml，加入培養(yǎng)基，檢驗方法同中國藥典2005版,附錄XI J,微生物限度檢查；細(xì)菌，霉菌及酵母菌計數(shù)。結(jié)果見表3,波斯特防腐劑、鯨脂滴耳液采用濾膜過濾法，進(jìn)行檢驗；在規(guī)定時間取制備（加入菌）的供試液1ml，加入濾器中濾過，用PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液少量多次沖洗，檢驗方法同中國藥典2005版,附錄XI J,微生物限度檢查；細(xì)菌，霉菌及酵母菌計數(shù)。結(jié)果見表3,計數(shù)：,按上述方法接入試驗菌后，搖勻，立即檢測，此時細(xì)菌生長數(shù)量為0時結(jié)果，以后間隔6h，24h，、72h、7d，14d，21d、28d，測定每個供試液每1ml(g)活菌數(shù)。見表2、3,計數(shù)方法同中國藥典2005版,附錄XI J,細(xì)菌，霉菌及酵母菌計數(shù)。,對數(shù)值：,對測得的細(xì)菌數(shù)計算其對數(shù)值并計算出每個時間間隔測得的細(xì)菌數(shù)與0時測得的細(xì)菌數(shù)（初試值）的降低值。見表4,結(jié)果判斷：,根據(jù)接種后供試液在指定的時間間隔下測得的對數(shù)值變化，參照表5防腐劑抗菌效力標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判斷。,總 結(jié),按課題試驗方案對以上8個劑型、九個供試品在指定的時間間隔下，測得的活菌數(shù)，計算活菌對數(shù)值變化，根據(jù)表5判斷供試品防腐劑的有效性。,一、試驗方法的確立：,對試驗用供試品采用的方法進(jìn)行了驗證試驗，根據(jù)試驗結(jié)果；氯化鈉注射液、碳酸氫鈉注射液、顛茄口服液采用常規(guī)法進(jìn)行檢驗，抗病毒口服液、詰而陰洗液、呋麻滴鼻液、硫糖鋁混懸液、阿昔洛韋滴眼液、用采用了培養(yǎng)基稀釋法進(jìn)行檢驗，波斯特、鯨脂滴耳液采用濾膜過濾法，進(jìn)行檢驗，驗證試驗5株菌回收率均在80%以上，符合中國藥典2005版規(guī)定。,二、防腐劑效力的判斷：,根據(jù)接種后供試液在指定的時間間隔下測得的細(xì)菌數(shù)計算其平均對數(shù)值與0時測得的細(xì)菌數(shù)（初試值）的降低值見表4,氯化鈉注射液、碳酸氫鈉注射液不含防腐劑加入菌從6h就開始無限增加，不具防腐力，抗病毒口服液從初始到24 h對數(shù)值無變化，72h后明顯降低，具一定的防腐力，呋麻滴鼻液、硫糖鋁混懸液、阿昔洛韋滴眼液、鯨脂滴耳液、潔爾陰洗液從初始值到7天后計算值大于于1.0log降低量，從初始值到14天后計算值大于3.0log,，具較強(qiáng)的防腐效力，抗病毒口服液和呋麻滴鼻液對真菌防腐效力較差7天.0log降低量大于3.0log波斯特是特效防腐劑具極強(qiáng)的防腐效力，72h防腐效力達(dá)100%。,表1方法驗證,供試品,試驗方法,試 驗 菌,大腸埃希菌,金黃色葡萄球菌,銅綠假單胞菌,白色念球菌,黑曲霉,平均加入菌數(shù),（cfu）,平均檢出菌數(shù),（cfu）,平均回收率（%）,平均加入菌數(shù),（cfu）,平均檢出菌數(shù),（cfu）,平均回收率（%）,平均加入菌數(shù),（cfu）,平均檢出菌數(shù),（cfu）,平均回收率（%）,平均加入菌數(shù),（cfu）,平均檢出菌數(shù),（cfu）,平均回收率（%）,平均加入菌數(shù),（cfu）,平均檢出菌數(shù),（cfu）,平均回收率（%）,氯化鈉注射液,常規(guī)法,54,44.5,82.4,48,37,77.1,82,75,91.5,82,78,95.1,73,71,92.3,碳酸氫鈉注射液,常規(guī)法,77,73,94.8,93,95,100,73,73,100,79.5,70.5,88.7,69,56.5,81.9,顛茄口服液,常規(guī)法,55,49.5,90,59,55,86.6,52.5,45.5,93.2,64,59,92.2,52,47,90.4,抗病毒口服液,稀釋法,77,77,100,73,70.5,96.6,93,93,100,79.5,72.5,91.2,69,69,100,呋麻滴鼻液,稀釋法,50,42,84,95,83.5,88,50,42,84,52,49,94,31,30,97,阿昔洛韋滴眼液,薄膜法,91,91,100,69,58.5,84.8,73.5,73,99.3,47.5,45.5,95.8,82,78.5,95.7,硫糖鋁混懸液,薄膜法,88.5,68,76.8,33.5,24,71.6,79,69,87.3,47.5,43.5,91.5,69,61,88.4,詰而陰洗液,薄膜法,88.5,64.5,72.9,79,64,81,33.5,29,86.6,47.5,37,77.9,69,58,84.1,波斯特防腐劑,薄膜法,91,81,89,69,69,100,73.5,59,80.3,52.5,51,97.1,82,81,98.8,鯨脂滴耳液,薄膜法,91,76,83.5,69,52.5,76.1,73.5,56,76.2,42,30,71.4,76,57,75,注：平均加入菌數(shù)：兩次測定菌數(shù)的平均值,平均檢出菌數(shù)：兩次測定菌數(shù)的平均值,表2 供試品（含防腐劑）放置不同時間細(xì)菌計數(shù),供試品,試驗菌,加入菌數(shù)（cfu/ml（g）,活 菌 計 數(shù),試驗方法,0,6h,24h,72d,7d,14d,28d,波斯特防腐劑,s,銅綠假單胞菌,2.610,4,0,1.2510,3,0,4,0,0,0,薄膜法,金黃色葡萄球菌,1.110,4,2.510,3,2.510,2,0,1,0,0,0,白色念球菌,3.410,4,4.410,3,1.2210,3,25,0,0,0,黑曲霉,大腸埃希菌,3.410,4,7.510,2,1.010,3,0,2,0,0,0,鯨脂滴耳液,7,銅綠假單胞菌,1.510,7,510,3,1.110,4,0,0,0,0,0,薄膜法,金黃色葡萄球菌,0.3310,6,0,2.110,5,0,0,0,0,0,白色念球菌,1.310,6,1.410,5,1.2510,5,0,0,0,0,0,黑曲霉,大腸埃希菌,1.610,7,0,7.510,2,0,0,0,0,0,抗病毒口服液,1,銅綠假單胞菌,2.610,4,1.9710,3,1.9510,3,3.2510,2,90,0,0,0,稀釋法,金黃色葡萄球菌,1.110,4,6.2510,3,6.1710,3,2.1210,3,17.5,0,0,0,白色念球菌,3.410,4,2.5710,4,3.2210,4,2.7510,4,1.2510,4,810,2,0,0,黑曲霉,大腸埃希菌,3.410,4,1.4510,4,4.110,3,4.910,69,0,0,0,呋麻滴鼻液,3,銅綠假單胞菌,2.610,4,2.1710,3,2.0710,3,10,0,0,0,0,稀釋法,金黃色葡萄球菌,1.110,4,8.610,3,6.2510,3,120,2.0510,2,4,0,0,白色念球菌,3.410,4,2.8510,4