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液相色譜法測奶制品中的防腐劑含量

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液相色譜法測奶制品中的防腐劑含量

單擊此處編輯母版標題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,*,單擊此處編輯母版標題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,*,主講人:馬靜,班級:食品,2,班,學(xué)號:,02,奶制品中防腐劑山梨酸和苯甲酸的測定,高效液相色譜法,主要內(nèi)容,實驗背景,食品防腐劑可以抑制食品中的微生物的繁殖或殺滅食品中的微生物,苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鈉鹽是常用的食品防腐劑。但如果添加過量,會破壞食品中的營養(yǎng)成分,不僅能破壞維生素,B1,還能使鈣形成不溶性物質(zhì),影響人體對鈣的吸收,同時對人的胃腸有刺激作用,過量食用還可引發(fā)癌癥。苯甲酸的毒性遠遠大于山梨酸,但因苯甲酸在酸性條件下抑菌范圍廣,以及價格低廉,仍作為主要防腐劑加入到食品中。但是苯甲酸是不允許在乳制品中添加的。然而近年來中國奶制品大多被檢出苯甲酸,雖然含量不高,但足以影響嬰兒等特殊人群的健康。,性狀與性能,山梨酸,苯甲酸,無色晶體粉末,相對分子質(zhì)量為:,112.13,,熔點,132,135,,沸點,228,,耐光耐熱性好,難溶于水,溶于乙醇,乙醚,花生油和丙酮。,白色晶體,相對分子質(zhì)量為,144.11,,熔點,121.7,,沸點,249.2,,常溫下難溶于水,溶于熱水,乙醇,氯仿,乙醚,丙酮,二硫化碳等。,食品中測定防腐劑方法的比較,食品中測定防腐劑方法的選擇,檢測苯甲酸和山梨酸一般采用薄層色譜法、氣相色譜法和液相色譜法。薄層色譜法是一種定性半定量的測定方法,雖然靈敏度高但重現(xiàn)性差。氣相色譜樣品處理工作量大、試劑毒性強,且該方法由于填充柱的吸附及柱效能差別較大,使標準系列線性差,最低檢出限較高。對于含量低或稀釋倍數(shù)大的樣品無法檢測,而液相色譜法樣品處理相對簡單。另外,高效液相色譜因采用高壓輸液泵和小顆粒的填料,與經(jīng)典的液相色譜相比具有很高的柱效和分離能力。故本實驗采用高效液相色譜法測定防腐劑的含量。,高效液相法的測定過程,儀器及試劑,儀器:高效液相色譜儀(紫外檢測器)微量進樣器(,100um,),超聲波發(fā)生器,;,溶劑過濾器,;,0.45,m,濾膜,;,容量瓶,;,恒溫水浴鍋,試劑:液態(tài)奶飲料;奶粉;甲醇(色譜純);稀氨水(,1:1,),氫氧化鈉溶液(,0.1mol/L,),;,亞鐵氰化鉀溶液(,0.2mol/L,),醋酸鋅溶液;磷酸鹽緩沖溶液;標準貯備液:苯甲酸,(1mg/mL),山梨酸(,1mg/mL,),;,混合標準工作液(苯甲酸,+,山梨酸),0.2mg/mL,山梨酸、苯甲酸的提取,置于,加入,溶解,加入,加入,靜置,液相色譜條件,柱子,:Eclipse XD13-C18,柱,(4.6mm150mm,,,5m);,流動相,:,磷酸鹽緩沖溶液,-,甲醇,(V/V90:10);,等梯度洗脫,;,流速,0.3ml/min;,保留時間,15min;,柱溫,35;,進樣量,20 ul;,紫外檢測波長,227nm,;,實驗步驟,1.,混合標準液的配置,分別移取混合標準工作,0.00ml,1.00ml,2.00ml,3.00ml,4.00ml,5.00ml,5.00ml,于,6,個容量瓶(,10ml,),稀釋定容。,2.,流動相處理,流動相用,0.45 um,水相濾膜進行減壓過濾和超聲脫氣處理,3.,開機 出現(xiàn)平直基線 進樣,4.,定性分析,分別進苯甲酸,山梨酸標準溶液,10uL,確定各個峰保留時間,5.,標準曲線測定,分別吸取,60uL,的苯甲酸和山梨酸混合標準液進樣,建立定量分析表,6.,樣品分析,取樣品,60uL,進樣,記錄保留時間和峰面積,標準色譜圖,液相色譜儀使用注意事項,(1),使用高效液相色譜級的溶劑與試劑,溶劑和水必須進行過濾。,(2),必須對含有緩沖鹽的流動相進行過濾(,0.45um,)。,(3),流動相使用前必須脫氣。,(4),改變流動相時防止交叉污染。,(5),不要使用陳舊的流動相,定期清洗流動相儲液瓶。,(6),定期清洗燒結(jié)不銹鋼吸濾頭。,(7),防止過高壓力沖擊色譜柱。,(8),每次使用后要沖洗干凈進樣閥中殘留的樣品和緩沖鹽,防止無機鹽沉積和樣品微粒磨損閥轉(zhuǎn)子。,(9),嚴禁使用氣相色譜那樣的尖頭針進樣。,(10),在注射針前加裝針式過濾器,防止樣品中的微粒進入進樣閥,(11),色譜柱不用卸下前,:a.,必須洗去緩沖液;,b.,防止產(chǎn)生微生物;,c.,用大于,10%,的有機溶劑充滿整個色譜柱;,d.,柱卸下后用柱堵頭將色譜柱首尾密封。,參考文獻,1.,祝偉霞,魏蔚,楊冀州,劉亞風(fēng),高效液相色譜法測定乳飲料和奶制品中苯甲酸和山梨酸,中國國境衛(wèi)生檢疫雜志,2005,年,10,月第,28,卷第,5,期,2.,周毅剛,龍?zhí)K,王曉春,等,.,高效液相法測定食品中苯甲酸和山梨酸含量,.,中國醫(yī)師雜志,2001,13(3):184-188,3.,全國標準化委員會,.GB/T5009.29-2003,食品中山梨酸、蘋甲酸測測定方法,.,北京,:,中國標準出版社,2003,The End,

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