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2019-2020年高中生物 2.2.2動物細胞融合與單克隆抗體教案 新人教版選修3 教學建議 在“動物細胞融合”部分,由于考慮到其基本原理與植物的原生質(zhì)體融合相同,方法也類似,所以教師可先啟發(fā)學生回顧植物體細胞雜交技術(shù)的過程,再通過動植物細胞異同點的對比,引導學生大膽推測出動物細胞融合與植物原生質(zhì)體融合的原理及方法基本相同,以培養(yǎng)學生的知識遷移能力。隨后通過教材上的用滅活病毒誘導動物細胞融合過程的示意圖,重點講解為什么滅活的病毒可作為誘導物,并指出動物細胞的融合也需要把多個兩種細胞放在一起,讓它們隨機融合后,再從中篩選雜交細胞。最后教師要講明動物細胞融合技術(shù)的意義和應(yīng)用,以便自然過渡到單克隆抗體。 單克隆抗體是動物細胞工程的新技術(shù),也是本節(jié)的重點、難點內(nèi)容。教師要利用好教材提供的材料,從傳統(tǒng)抗體生產(chǎn)存在的問題入手,一步一步啟發(fā)學生討論怎樣解決這個問題,引出單克隆抗體的概念。隨后又提出問題——怎樣才能獲得單克隆抗體?由此自然過渡到單克隆抗體的制備。關(guān)于單克隆抗體的制備,要把科學家在研制單克隆抗體過程中,通過大膽的想象,創(chuàng)造性地解決問題的過程作為本節(jié)教學的重點和亮點。 參考資料 目前常用的細胞融合方法的融合率都不能達到100%,如果僅兩個細胞融合不一定能得到融合細胞,那就需要多個細胞。即使兩個細胞融合,也不一定就是研究者所需要的雜交細胞。如在單克隆抗體的制備過程中,B淋巴細胞與B淋巴細胞融合,骨髓瘤細胞與骨髓瘤細胞融合就不是研究者所需要的細胞。研究者需要的細胞是已免疫的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合的細胞,即雜交瘤細胞。要想獲得雜交瘤細胞可以從融合細胞中篩選出能分泌所需要抗體的雜交瘤細胞。 雜交瘤細胞的抗體檢測及克隆化培養(yǎng) 融合后的細胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后,能存活的細胞就是雜交瘤細胞。但這些雜交瘤細胞并非都是能分泌所需抗體的細胞,通常用“有限稀釋法”來選擇。將雜交瘤細胞稀釋,用多孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng),使每孔細胞不超過一個,通過培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測各孔上清液中細胞分泌的抗體(常用酶聯(lián)免疫吸附試驗法),那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。陽性孔中的細胞還不能保證是來自單個細胞,挑選陽性孔的細胞繼續(xù)進行有限稀釋,一般需進行3~4次,直至確信每個孔中增殖的細胞為單克隆細胞。該過程即為雜交瘤細胞的克隆化培養(yǎng)。