《2019-2020年高考生物大一輪復習 第十單元 第37講 基因工程教案.DOC》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《2019-2020年高考生物大一輪復習 第十單元 第37講 基因工程教案.DOC（16頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。

2019-2020年高考生物大一輪復習 第十單元 第37講 基因工程教案 1． 涵蓋范圍 本單元包括選修3全部內(nèi)容——基因工程、細胞工程、胚胎工程、生物技術(shù)的安全性和倫理問題以及生態(tài)工程。 2． 考情分析 (1)考查力度：占分比重相對穩(wěn)定，如山東理綜只出一個8分的簡答題。 (2)考查內(nèi)容 ①基因工程中三種工具。 ②基因工程操作四步曲。 ③基因工程成果——轉(zhuǎn)基因生物實例及安全性討論。 ④細胞工程中植物組織培養(yǎng)、植物體細胞雜交。 ⑤動物細胞培養(yǎng)和單克隆抗體的制備及應(yīng)用。 ⑥核移植技術(shù)。 ⑦胚胎工程中胚胎移植和胚胎分割。 ⑧干細胞的研究。 (3)考查形式 ①有的省將選修與必修有機結(jié)合，既可出簡答題也可出選擇題。 ②有的省如山東省全部以簡答題形式呈現(xiàn)，且不與必修聯(lián)系。 3． 復習指導 (1)復習線索 ①以基因工程的具體成果(如抗蟲棉)為主線，系統(tǒng)復習基因工程的操作工具和操作步驟等知識點。 ②以植物的組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)為基礎(chǔ)，系統(tǒng)復習其他細胞工程技術(shù)手段。 ③以體內(nèi)受精作用和個體發(fā)育過程為基礎(chǔ)，系統(tǒng)復習胚胎工程的流程。 (2)復習方法 ①圖解法復習基因工程和胚胎工程。 ②比較法復習植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)；植物體細胞雜交和動物細胞融合及單克隆抗體制備。 ③關(guān)注熱點科研成果，注意知識的實踐應(yīng)用。 第37講　基因工程 [考綱要求]　1.基因工程的誕生(Ⅰ)。2.基因工程的原理及技術(shù)(Ⅱ)。3.基因工程的應(yīng)用(Ⅱ)。4.蛋白質(zhì)工程(Ⅰ)。 考點一　聚焦基因工程的概念及基本工具 1． 分析基因工程的概念 (1)供體：提供目的基因。 (2)操作環(huán)境：體外。 (3)操作水平：分子水平。 (4)原理：基因重組。 (5)受體：表達目的基因。 (6)本質(zhì)：性狀在受體體內(nèi)表達。 (7)優(yōu)點：克服遠緣雜交不親和的障礙，定向改造生物的遺傳性狀。 2． 基因工程的基本工具(判一判) (1)限制酶只能用于切割目的基因 (　　) (2)限制酶切割DNA分子具有特異性 (　√　) (3)限制酶切割DNA分子后可產(chǎn)生黏性末端和平末端兩種類型 (　√　) (4)DNA連接酶能將兩堿基間通過形成氫鍵連接起來 (　　) (5)Ecoli DNA連接酶既可連接平末端，又可連接黏性末端 (　　) (6)質(zhì)粒是小型環(huán)狀DNA分子，是基因工程常用的載體 (　√　) (7)載體的作用是攜帶目的基因?qū)胧荏w細胞中，使之穩(wěn)定存在并表達 (　√　) 易錯警示　巧辨基因工程操作工具的8個易錯點 (1)限制酶是一類酶，而不是一種酶。 (2)限制酶的成分為蛋白質(zhì)，其作用的發(fā)揮需要適宜的理化條件，高溫、強酸或強堿均易使之變性失活。 (3)在切割目的基因和載體時要求用同一種限制酶，目的是產(chǎn)生相同的黏性末端。 (4)將一個基因從DNA分子上切割下來，需要切兩處，同時產(chǎn)生4個黏性末端。 (5)不同DNA分子用同一種限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端都相同，同一個DNA分子用不同的限制酶切割，產(chǎn)生的黏性末端一般不相同。 (6)限制酶切割位點應(yīng)位于標記基因之外，不能破壞標記基因，以便于進行檢測。 (7)基因工程中的載體與細胞膜上物質(zhì)運輸?shù)妮d體不同。基因工程中的載體是DNA分子，能將目的基因?qū)胧荏w細胞內(nèi)；膜載體是蛋白質(zhì)，與細胞膜的通透性有關(guān)。 (8)基因工程中有3種工具，但工具酶只有2種。 1． 如圖所示為部分雙鏈DNA片段，下列有關(guān)基因工程中工具酶功能的敘述錯誤的是 (　　) A．切斷a處的酶為限制酶 B．連接a處的酶為DNA連接酶 C．切斷b處的酶為DNA解旋酶 D．連接b處的酶為RNA聚合酶 答案　D 解析　限制酶能識別特定的核苷酸序列，并且能在特定的切點上切割DNA分子，通常形成黏性末端，即能切割DNA鏈外側(cè)的磷酸二酯鍵(圖中的a處)，內(nèi)側(cè)堿基對之間的氫鍵(b處)可通過DNA解旋酶水解。DNA連接酶將切斷的磷酸二酯鍵進行連接，即圖中的a處。RNA聚合酶的作用是催化DNA的轉(zhuǎn)錄。 2． 限制酶MunⅠ和限制酶EcoRⅠ的識別序列及切割位點分別是—C↓AATTG—和—G↓AATTC—。如圖表示四種質(zhì)粒和目的基因，其中，箭頭所指部位為限制酶的識別位點，質(zhì)粒的陰影部分表示標記基因。適于作為圖示目的基因載體的質(zhì)粒是 (　　) 答案　A 解析　由圖可知，質(zhì)粒B上無標記基因，不適合作為載體；質(zhì)粒C和D的標記基因上都有限制酶的識別位點；只有質(zhì)粒A上既有標記基因，且MunⅠ的切割位點不在標記基因上。 1． 與DNA有關(guān)的酶 (1)五種相關(guān)酶的比較 作用底物 作用部位 形成產(chǎn)物 限制酶 DNA分子 磷酸二酯鍵 黏性末端或平末端 DNA連接酶 DNA片段 磷酸二酯鍵 重組DNA分子 DNA聚合酶 脫氧核苷酸 磷酸二酯鍵 子代DNA DNA解旋酶 DNA分子 堿基對間 的氫鍵 形成脫氧核苷酸單鏈 DNA(水解)酶 DNA分子 磷酸二酯鍵 游離的脫氧核苷酸 (2)限制酶和DNA連接酶之間的關(guān)系圖示 2． 對載體的分析 條　件 目　的 穩(wěn)定并能復制 目的基因穩(wěn)定存在且數(shù)量可擴大 有一個至多個限制酶切割位點 可攜帶多個或多種外源基因 具有特殊的標記基因 便于重組DNA的鑒定和選擇 考點二　基因工程的操作步驟 觀察基因工程的操作過程，分析每一步驟的操作程序 (1) 獲取目的基因— 　 (2) 基因表達載體的構(gòu)建—組成 　 (3) 將目的基因?qū)胧荏w細胞—方法 (4) 目的基因的檢測與鑒定 易錯警示　基因工程操作的8個易錯點 (1)目的基因的插入位點不是隨意的 基因表達需要啟動子與終止子的調(diào)控，所以目的基因應(yīng)插入到啟動子與終止子之間的部位。 (2)基因工程操作過程中只有第三步(將目的基因?qū)胧荏w細胞)沒有堿基互補配對現(xiàn)象 第一步存在逆轉(zhuǎn)錄法獲得DNA，第二步存在黏性末端連接現(xiàn)象，第四步檢測存在分子水平雜交方法。 (3)原核生物作為受體細胞的優(yōu)點：繁殖快、多為單細胞、遺傳物質(zhì)相對較少。 (4)一般情況下，用同一種限制酶切割質(zhì)粒和含有目的基因的片段，但有時可用兩種限制酶分別切割質(zhì)粒和目的基因，這樣可避免質(zhì)粒和質(zhì)粒之間、目的基因和目的基因之間的連接。 (5)目的基因進入受體細胞內(nèi)，并且在受體細胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達的過程，稱為轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化的實質(zhì)是目的基因整合到受體細胞染色體基因組中。 (6)不熟悉標記基因的種類和作用：標記基因的作用——篩選、檢測目的基因是否導入受體細胞，常見的有抗生素抗性基因、發(fā)光基因(表達產(chǎn)物為帶顏色的物質(zhì))等。 (7)對受體細胞模糊不清：受體細胞常用植物受精卵或體細胞(經(jīng)組織培養(yǎng))、動物受精卵(一般不用體細胞)、微生物(大腸桿菌、酵母菌)等。要合成糖蛋白、有生物活性的胰島素則必須用真核生物酵母菌(需內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的加工、分泌)；一般不用支原體，原因是它營寄生生活；一定不能用哺乳動物成熟的紅細胞，原因是它無細胞核，不能合成蛋白質(zhì)。 (8)還應(yīng)注意的問題有：①基因表達載體中，啟動子(DNA片段)≠起始密碼子(RNA)；終止子(DNA片段)≠終止密碼子(RNA)。②基因表達載體的構(gòu)建是最核心、最關(guān)鍵的一步，在體外進行。 3． 下列有關(guān)基因工程操作的敘述中，正確的是 (　　) A．用同種限制酶切割載體與目的基因可獲得相同的黏性末端 B．以蛋白質(zhì)的氨基酸序列為依據(jù)合成的目的基因與原基因的堿基序列相同 C．檢測到受體細胞含有目的基因就標志著基因工程操作的成功 D．用含抗生素抗性基因的質(zhì)粒作為載體是因為其抗性基因便于與外源基因連接 答案　A 解析　一種氨基酸可以由多種密碼子控制，因此以蛋白質(zhì)的氨基酸序列為依據(jù)合成的目的基因與原基因通常不同；只有目的基因表達，使受體表現(xiàn)出目標性狀或獲得目標產(chǎn)物才標志著基因工程操作的成功；抗生素抗性基因作為標記基因，用于檢測目的基因是否導入受體細胞。 4． 浙江大學農(nóng)學院喻景權(quán)教授課題組研究發(fā)現(xiàn)，一種植物激素——油菜素內(nèi)酯能促進農(nóng)藥在植物體內(nèi)的降解和代謝。用油菜素內(nèi)酯處理后，許多參與農(nóng)藥降解的基因(如P450基因和紅霉素抗性基因)的表達和酶活性都得到提高，在這些基因“指導”下合成的蛋白酶能把農(nóng)藥逐漸轉(zhuǎn)化為水溶性物質(zhì)或低毒甚至無毒物質(zhì)，有的則被直接排出體外。某課題組進一步進行了如下的實驗操作，請回答下列問題： (1)獲得油菜素內(nèi)酯合成酶基因的方法有____________________________________。步驟①用PCR技術(shù)擴增基因時用到的耐高溫酶通常是指______________________________；步驟②用到的酶有___________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (2)圖中導入重組質(zhì)粒的方法是____________，在導入之前應(yīng)用一定濃度的__________________處理受體細菌。 (3)導入重組質(zhì)粒2以后，往往還需要進行檢測和篩選，可用____________________制成探針，檢測是否導入了重組基因，在培養(yǎng)基中加入________________可將含有目的基因的細胞篩選出來。 (4)請你為該課題命名：____________________________________________________。 答案　(1)從cDNA文庫中獲取、從基因組文庫中獲取、人工合成目的基因或PCR擴增技術(shù)(任選其中兩項即可)　TaqDNA聚合酶　限制酶和DNA連接酶 (2)轉(zhuǎn)化法　氯化鈣溶液 (3)紅霉素抗性基因　紅霉素 (4)探究油菜素內(nèi)酯能否促進土壤中農(nóng)藥的分解 解析　進行基因工程操作時，首先要獲取目的基因，其方法有多種：從cDNA文庫中獲取、從基因組文庫中獲取、人工合成目的基因或PCR擴增技術(shù)等。在構(gòu)建基因表達載體的過程中，用到的工具酶有限制酶和DNA連接酶。圖中的受體細胞是細菌，故用轉(zhuǎn)化法導入基因表達載體，導入后，需檢驗和篩選。從圖中可以看出，最終是通過對照實驗來檢驗轉(zhuǎn)基因細菌對土壤中殘留農(nóng)藥的分解能力。 1． 獲取目的基因 (1)直接分離 (2)人工化學合成：適用于分子較小的基因。 2． 基因表達載體的構(gòu)建——基因工程的核心 (1)目的：使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。 (2) 基因表達載體組成 (3)構(gòu)建過程 3． 將目的基因?qū)胧荏w細胞 生物種類 植物 動物 微生物 常用方法 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 顯微注射技術(shù) 感受態(tài)細胞法 受體細胞 體細胞 受精卵 原核細胞 轉(zhuǎn)化過程 將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的TDNA上→農(nóng)桿菌→導入植物細胞→整合到受體細胞的DNA上→表達 將含有目的基因的表達載體提純→取卵(受精卵)→顯微注射→受精卵發(fā)育→獲得具有新性狀的動物 Ca2＋處理細胞→感受態(tài)細胞→重組表達載體DNA分子與感受態(tài)細胞混合→感受態(tài)細胞吸收DNA分子 4． 目的基因的檢測與鑒定 考點三　關(guān)注基因工程的應(yīng)用和蛋白質(zhì)工程 1． 基因工程的應(yīng)用(判一判) (1)我國的轉(zhuǎn)基因抗蟲棉轉(zhuǎn)入的抗蟲基因是Bt毒蛋白基因 (　√　) (2)利用乳腺生物反應(yīng)器能夠獲得一些重要的醫(yī)藥產(chǎn)品，如人的血清白蛋白，這是因為將人的血清白蛋白基因?qū)肓藙游锏娜橄偌毎? (　　) (3)由大腸桿菌工程菌獲得人的干擾素后可直接應(yīng)用 (　　) (4)為培育抗除草劑的作物新品種，導入抗除草劑基因時只能以受精卵為受體 (　　) (5)目前，植物基因工程技術(shù)主要應(yīng)用于提高農(nóng)作物的抗逆性、生產(chǎn)某些天然藥物、改良農(nóng)作物的品質(zhì)、作器官移植的供體 (　　) (6)基因工程藥物主要來源于轉(zhuǎn)基因動物生產(chǎn) (　　) (7)基因治療是把正?；?qū)氩∪梭w內(nèi)，使該基因的表達產(chǎn)物發(fā)揮功能，從而達到治療疾病的目的 (　√　) 2． 蛋白質(zhì)工程 (1)概念理解 ①基礎(chǔ)：蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系。 ②操作：基因修飾或基因合成。 ③結(jié)果：改造了現(xiàn)有蛋白質(zhì)或制造出新的蛋白質(zhì)。 ④目的：滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。 (2)操作過程：從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因)→基因表達→產(chǎn)生需要的蛋白質(zhì)。 易錯警示　(1)有關(guān)基因工程應(yīng)用的易錯點：①動物基因工程主要是為了改善畜產(chǎn)品的品質(zhì)，而不是為了產(chǎn)生體型巨大的個體。②DNA分子作探針進行檢測時應(yīng)檢測單鏈，即將待測雙鏈DNA分子打開。③Bt毒蛋白基因控制合成的Bt毒蛋白并無毒性，進入昆蟲消化道被分解成多肽后產(chǎn)生毒性。④青霉素是青霉菌產(chǎn)生的，不是通過基因工程產(chǎn)生的。⑤并非所有個體都可作為乳腺生物反應(yīng)器。操作成功的應(yīng)該是雌性個體，個體本身的繁殖速度較高，泌乳量、蛋白含量等都是應(yīng)該考慮的因素。⑥基因治療后，缺陷基因沒有改變?；蛑委熓前颜；?qū)胧荏w細胞中，以表達正常產(chǎn)物從而治療疾病，對原來細胞中存在缺陷的基因沒有清除或改變。(2)有關(guān)蛋白質(zhì)工程的易錯點：①對蛋白質(zhì)分子進行改造，其本質(zhì)是改變其基因組成。如果對蛋白質(zhì)直接改造，即使改造成功，被改造的蛋白質(zhì)分子還是無法遺傳。②蛋白質(zhì)工程的實質(zhì)是根據(jù)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，創(chuàng)造新基因或者改造老基因，是基因工程的發(fā)展與延續(xù)。③蛋白質(zhì)工程與DNA分子重組技術(shù)是分不開的，常用到基因工程工具酶，如限制酶和DNA連接酶。 5． 科學家利用基因工程技術(shù)可以使哺乳動物本身變成“批量生產(chǎn)藥物的工廠”。目前科學家已在牛和羊等動物的乳腺生物反應(yīng)器中表達出了抗凝血酶、血清白蛋白、生長激素等重要藥品。請回答有關(guān)問題： (1)將藥用蛋白基因和乳腺蛋白基因的啟動子、終止子和______________等重組在一起，就可構(gòu)建基因表達載體，再通過____________技術(shù)即可導入受精卵中。 (2)制備乳腺生物反應(yīng)器的過程中，目的基因的受體細胞為____________，性染色體組成為________。 (3)為確定受體細胞中染色體的DNA上是否插入了目的基因，可利用____________技術(shù)進行檢測，一般是用放射性同位素標記________________________________作探針。 (4)轉(zhuǎn)化成功的受精卵發(fā)育成胚胎需要進行體外培養(yǎng)，在培養(yǎng)液中要加入____________等天然成分。 答案　(1)標記基因　顯微注射　(2)受精卵　XX　(3)DNA分子雜交　含有目的基因的DNA片段　(4)血清 解析　基因表達載體的組成，除了目的基因，還必須有啟動子、終止子及標記基因。顯微注射技術(shù)是轉(zhuǎn)基因動物操作中采用最多、也最有效的方法。制備乳腺生物反應(yīng)器的過程中，子代個體須有乳房，所以受體為雌性，其性染色體組成為XX。將含有目的基因的DNA片段用放射性同位素標記作探針，用DNA分子雜交技術(shù)可檢測目的基因是否成功插入了受體細胞染色體的DNA上。 6． 胰島素可以用于治療糖尿病，但是胰島素被注射到人體后，會堆積在皮下，要經(jīng)過較長的時間才能進入血液，而進入血液的胰島素又容易分解，因此，治療效果受到影響。如圖是用蛋白質(zhì)工程設(shè)計速效胰島素的生產(chǎn)過程，請據(jù)圖回答有關(guān)問題： (1)構(gòu)建新的蛋白質(zhì)模型是蛋白質(zhì)工程的關(guān)鍵，圖中構(gòu)建新的胰島素模型的主要依據(jù)是________________。 (2)通過DNA合成形成的新基因應(yīng)與____________結(jié)合后轉(zhuǎn)移到______________________中才能得到準確表達。 (3)若要利用大腸桿菌生產(chǎn)速效胰島素，需用到的生物工程有____________、____________和發(fā)酵工程。 (4)圖中從胰島素模型到新的胰島素基因合成的基本思路是什么？___________________ _____________________________________________________________________________________________________________________________。 答案　(1)蛋白質(zhì)的預(yù)期功能　(2)載體　大腸桿菌等受體細胞　(3)蛋白質(zhì)工程　基因工程　(4)根據(jù)新的胰島素中氨基酸的序列，推測出控制其合成的基因中的脫氧核苷酸序列，然后利用DNA合成儀合成出新的胰島素基因 解析　(1)蛋白質(zhì)工程首先要根據(jù)人們對蛋白質(zhì)功能的特定需求，對蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)進行分子設(shè)計，因此，圖中構(gòu)建新的胰島素模型的主要依據(jù)是預(yù)期胰島素的功能，即速效胰島素。(2)合成的目的基因應(yīng)與載體結(jié)合，構(gòu)建基因表達載體后導入受體細胞中才能表達。(3)利用蛋白質(zhì)工程生產(chǎn)速效胰島素，需合成新的胰島素基因，改造好的目的基因需要通過基因工程轉(zhuǎn)入受體細胞，并在生產(chǎn)中要借助工程菌，所以還需要發(fā)酵過程，因此，此過程涉及蛋白質(zhì)工程、基因工程、發(fā)酵工程。(4)由新的蛋白質(zhì)模型到構(gòu)建新的基因，其基本思路是根據(jù)新的胰島素中氨基酸的序列，推測出控制其合成的基因中的脫氧核苷酸序列，然后利用DNA合成儀來合成出新的胰島素基因。 1． 乳腺生物反應(yīng)器與工程菌生產(chǎn)藥物的比較 比較項目 乳腺生物反應(yīng)器 工程菌 基因結(jié)構(gòu) 動物基因的結(jié)構(gòu)與人類基因的結(jié)構(gòu)基本相同 細菌或酵母菌等生物基因的結(jié)構(gòu)與人類基因的結(jié)構(gòu)有較大差異 基因表達 合成的藥物蛋白與天然蛋白質(zhì)相同 細菌細胞內(nèi)沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等，產(chǎn)生的藥物蛋白可能沒有活性 受體細胞 哺乳動物的受精卵 微生物細胞 生產(chǎn)條件 不需嚴格滅菌，溫度等條件對其影響不大 需嚴格滅菌，需嚴格控制工程菌所需的外界條件 藥物提取 從動物乳汁中提取 從微生物細胞中提取 2．基因治療與基因診斷 原理 操作過程 進展 基因 治療 基因表達 把正?；?qū)胗谢蛉毕莸募毎?，以表達出正常性狀來治療 臨床實驗 基因 診斷 堿基互補配對 制作特定DNA探針與病人樣品DNA混合，分析雜交帶情況 臨床應(yīng)用 3． 基因工程與蛋白質(zhì)工程的比較 項目 蛋白質(zhì)工程 基因工程 區(qū)別 過程 預(yù)期蛋白質(zhì)的功能→設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有的氨基酸序列→推測相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列→合成DNA→表達出蛋白質(zhì) 獲取目的基因→構(gòu)建基因表達載體→將目的基因?qū)胧荏w細胞→目的基因的檢測與鑒定 實質(zhì) 定向改造或生產(chǎn)人類所需蛋白質(zhì) 定向改造生物的遺傳特性，以獲得人類所需的生物類型或生物產(chǎn)品 結(jié)果 生產(chǎn)自然界中沒有的蛋白質(zhì) 一般是生產(chǎn)自然界中已有的蛋白質(zhì) 聯(lián)系 蛋白質(zhì)工程是在基因工程的基礎(chǔ)上延伸出來的第二代基因工程，因為對現(xiàn)有蛋白質(zhì)的改造或制造新的蛋白質(zhì)，都必須通過基因修飾或基因合成實現(xiàn) 1． (xx浙江卷，6)天然的玫瑰沒有藍色花，這是由于缺少控制藍色色素合成的基因B，而開藍色花的矮牽牛中存在序列已知的基因B?，F(xiàn)用基因工程技術(shù)培育藍玫瑰，下列操作正確的是 (　　) A．提取矮牽牛藍色花的mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補的DNA，再擴增基因B B．利用限制性核酸內(nèi)切酶從開藍色花矮牽牛的基因文庫中獲取基因B C．利用DNA聚合酶將基因B與質(zhì)粒連接后導入玫瑰細胞 D．將基因B直接導入大腸桿菌，然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細胞 答案　A 解析　獲取目的基因B，可先提取矮牽牛藍色花的mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補的DNA，再經(jīng)PCR技術(shù)擴增，A正確；基因文庫構(gòu)建時是將目的基因與載體連接起來，形成重組載體，再導入受體菌中儲存和擴增，提取目的基因時不需使用限制酶，B錯誤；連接目的基因與質(zhì)粒的酶是DNA連接酶，C錯誤；將目的基因?qū)胫参锛毎?，常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，不使用大腸桿菌，D錯誤。 2． (xx浙江卷，6)將ada(腺苷酸脫氨酶基因)通過質(zhì)粒pET28b導入大腸桿菌并成功表達腺苷酸脫氨酶。下列敘述錯誤的是 (　　) A．每個大腸桿菌細胞至少含一個重組質(zhì)粒 B．每個重組質(zhì)粒至少含一個限制性核酸內(nèi)切酶識別位點 C．每個限制性核酸內(nèi)切酶識別位點至少插入一個ada D．每個插入的ada至少表達一個腺苷酸脫氨酶分子 答案　C 解析　大腸桿菌成功表達出腺苷酸脫氨酶，說明這些大腸桿菌都至少含一個重組質(zhì)粒，A項正確；作為載體的條件為至少含一個或多個酶切位點，所以作為載體的質(zhì)粒至少含一個限制性核酸內(nèi)切酶識別位點，B項正確；作為基因表達載體應(yīng)包括目的基因、啟動子、終止子、標記基因四部分，但并不是每個酶切位點都至少插入一個ada，C項錯誤；由于這些目的基因成功表達，所以每個ada至少表達一個腺苷酸脫氨酶分子，D項正確。 3． (xx新課標全國卷，40)根據(jù)基因工程的有關(guān)知識，回答下列問題： (1)限制性內(nèi)切酶切割DNA分子后產(chǎn)生的片段，其末端類型有____________和____________。 (2)質(zhì)粒運載體用EcoRⅠ切割后產(chǎn)生的片段如下： AATTC……G 　　　　　　G……CTTAA 為使運載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，還可用另一種限制性核酸內(nèi)切酶切割，該酶必須具有的特點是_________________________________ _______________________________________。 (3)按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即__________DNA連接酶和__________DNA連接酶。 (4)反轉(zhuǎn)錄作用的模板是______________，產(chǎn)物是______________________。若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，常采用____________技術(shù)。 (5)基因工程中除質(zhì)粒外，____________和____________也可作為載體。 (6)若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞，原因是_____________________________________________________________。 答案　(1)黏性末端　平末端　(2)切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產(chǎn)生的末端相同(其他合理答案也可)　(3)Ecoli　T4　(4)mRNA(或RNA)　cDNA(或DNA)　PCR　(5)噬菌體　動植物病毒(其他合理答案也可)　(6)未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒(外源DNA)的能力極弱(其他合理答案也可) 解析　(1)DNA分子經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有黏性末端和平末端兩種類型。(2)為使運載體與目的基因相連，應(yīng)使二者被切割后產(chǎn)生的末端相同，故用另一種限制酶切割產(chǎn)生的末端必須與EcoRⅠ切割產(chǎn)生的末端相同。(3)根據(jù)酶的來源不同，DNA連接酶分為EcoliDNA連接酶和T4DNA連接酶。(4)mRNA(或RNA)為模板，合成DNA的過程稱為逆轉(zhuǎn)錄，若要體外獲得大量DNA分子，可以使用RCR技術(shù)。(5)在基因工程中，通常利用質(zhì)粒作為運載體，另外噬菌體和動植物病毒也可作為運載體。(6)大腸桿菌作為受體細胞時，常用Ca2＋處理，使之成為能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細胞。 4． (xx江蘇卷，32)圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度(bp即堿基對)和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列?，F(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識別的堿基序列和酶切位點分別為CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG。 請回答下列問題： (1)圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之間依次由______________________連接。 (2)若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段，產(chǎn)生的末端是____________末端，其產(chǎn)物長度為____________。 (3)若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對被T－A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛騞。從雜合子中分離出圖1及其對應(yīng)的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產(chǎn)物中共有____________種不同長度的DNA片段。 (4)若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進行連接，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是____________。在導入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加____________的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。經(jīng)檢測，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達，其最可能的原因是_________________________ _______________________________________________________________________________________________________________________。 答案　(1)脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖 (2)平　537 bp、790 bp、661 bp　(3)4 (4)BamH Ⅰ　抗生素B　同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接 解析　(1)一條脫氧核苷酸鏈中相鄰的兩個堿基之間是通過“—脫氧核糖—磷酸—脫氧核糖—”相連的，要注意兩條脫氧核苷酸鏈的相鄰堿基之間通過氫鍵相連進行區(qū)分。(2)從SmaⅠ的識別序列和切點可見，其切割后產(chǎn)生的是平末端，圖1中DNA片段有Sma Ⅰ的兩個識別序列，故切割后產(chǎn)生的產(chǎn)物長度為537(534＋3)bp、790(796－3－3)bp和661(658＋3)bp三種。(3)圖示方框內(nèi)發(fā)生堿基對的替換后，形成的d基因失去了1個Sma Ⅰ的識別序列，故D基因、d基因用Sma Ⅰ完全切割后產(chǎn)物中除原有的3種長度的DNA片段外，還增加一種537＋790 bp的DNA片段。(4)目的基因的兩端都有BamH Ⅰ的識別序列，質(zhì)粒的啟動子后的抗生素A抗性基因上也有BamH Ⅰ的識別序列，故應(yīng)選用的限制酶是BamH Ⅰ，此時抗生素B抗性基因作為標記基因，故篩選時培養(yǎng)基中要添加抗生素B。若重組質(zhì)粒已導入了受體細胞卻不能表達，很可能是因為用同種限制酶切割后，目的基因和質(zhì)粒有兩種連接方式，導入受體細胞的重組質(zhì)粒是目的基因和質(zhì)粒反向連接形成的。 1． 下列一般不作為基因工程中的標記基因的是 (　　) A．四環(huán)素抗性基因 B．綠色熒光蛋白基因 C．產(chǎn)物具有顏色反應(yīng)的基因 D．貯藏蛋白的基因 答案　D 解析　標記基因位于載體(質(zhì)粒)上，以利于重組DNA的鑒定和選擇，如四環(huán)素抗性基因、綠色熒光蛋白基因、產(chǎn)物具有顏色反應(yīng)的基因等。 2． 若要利用某目的基因(圖甲)和P1噬菌體載體(圖乙)構(gòu)建重組DNA(圖丙)，限制酶的酶切位點分別是BglⅡ(AGATCT)、EcoRⅠ(GAATTC)和Sau3AⅠ(GATC)。下列分析合理的是 (　　) A．用EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌體載體 B．用BglⅡ和EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌體載體 C．用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌體載體 D．用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌體載體 答案　D 解析　解答本題的關(guān)鍵是要看準切割后目的基因插入的方向，只有用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌體載體，構(gòu)建的重組DNA中RNA聚合酶在插入的目的基因上的移動方向才一定與圖丙相同。 3． 如圖表示利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法獲得某種轉(zhuǎn)基因植物的部分操作步驟。以下說法錯誤的是 (　　) A．利用含有四環(huán)素的培養(yǎng)基可將含Ⅱ的細菌篩選出來 B．Ⅲ是農(nóng)桿菌，通過步驟③將目的基因?qū)胫仓? C．⑥可與多個核糖體結(jié)合，并可以同時翻譯出多種蛋白質(zhì) D．①過程的完成需要限制酶和DNA連接酶的參與 答案　C 解析?、奘且粋€mRNA分子，可與多個核糖體結(jié)合形成多聚核糖體，由于翻譯的模板是同一個mRNA分子，故翻譯出的是同一種蛋白質(zhì)。 4． 研究人員將魚的抗凍基因?qū)敕洋w內(nèi)，獲得抗凍能力明顯提高的番茄新品種。下列操作合理的是 (　　) A．設(shè)計相應(yīng)DNA單鏈片段作為引物，利用PCR技術(shù)擴增目的基因 B．利用限制酶和DNA聚合酶構(gòu)建基因表達載體 C．將基因表達載體導入番茄細胞之前需用Ca2＋處理細胞 D．運用DNA分子雜交技術(shù)檢測抗凍基因是否在番茄細胞中表達 答案　A 解析　利用限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶構(gòu)建基因表達載體；將基因表達載體導入原核細胞之前需用Ca2＋處理，番茄細胞為真核細胞；運用抗原—抗體雜交技術(shù)可檢測抗凍基因是否在番茄細胞中表達。 5． 如圖是從酵母菌中獲取某植物需要的某種酶的基因的流程，結(jié)合所學知識及相關(guān)信息回答下列問題： (1)圖中cDNA文庫________________基因組文庫(大于、等于、小于)。 (2)①過程提取的DNA需要____________的切割，B過程是____________過程。 (3)為在短時間內(nèi)大量獲得目的基因，可用的技術(shù)是______________________，其原理是________________________________________________________________________。 (4)目的基因獲取之后，需要進行____________________，其組成必須有_______________ _____________及標記基因等，此步驟是基因工程的核心。 (5)將該目的基因?qū)肽畴p子葉植物細胞，常采用的方法是__________，其能否在此植物體內(nèi)穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是________________，可以用____________________技術(shù)進行檢測。 答案　(1)小于　(2)限制酶　逆轉(zhuǎn)錄 (3)PCR　DNA復制 (4)基因表達載體的構(gòu)建　啟動子、終止子、目的基因(復制原點可不答) (5)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法　目的基因是否整合到植物細胞的染色體上　DNA分子雜交 解析　(1)基因組文庫是指將某生物的全部基因組DNA切割成一定長度的DNA片段克隆到某種載體上形成的集合；cDNA文庫是由mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成的基因組成的，由于基因的選擇性表達，cDNA文庫小于基因組文庫。(2)從供體細胞的DNA中獲取目的基因，首先應(yīng)用限制酶將目的基因從其所在的DNA分子上切割下來；B過程是以mRNA為模板合成DNA的過程，應(yīng)為逆轉(zhuǎn)錄過程。(3)PCR技術(shù)是一種體外擴增DNA的方法，其原理為DNA復制，能將得到的目的基因在細胞外大量擴增。(4)基因表達載體包括目的基因、標記基因、啟動子和終止子，其構(gòu)建是基因工程的核心。(5)將目的基因?qū)肽畴p子葉植物細胞常采用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，目的基因只有整合到植物細胞的染色體上才能在植物體內(nèi)穩(wěn)定遺傳，可通過DNA分子雜交的方法對目的基因是否整合到染色體上進行檢測。 6． 在某些深海魚中發(fā)現(xiàn)的抗凍蛋白基因afp對提高農(nóng)作物的抗寒能力有較好的應(yīng)用價值。如圖所示是獲得轉(zhuǎn)基因萵苣的技術(shù)流程，請據(jù)圖回答下列問題： (1)獲取目的基因的主要途徑包括從自然界已有的物種中分離和__________。 (2)①過程需要的酶有____________、____________________。 (3)重組質(zhì)粒除了帶有抗凍蛋白基因afp，還必須含有啟動子、終止子和____________，這樣才能構(gòu)成一個完整的基因表達載體。 (4)如果受體細胞C1是土壤農(nóng)桿菌，則將目的基因?qū)胨哪康氖抢棉r(nóng)桿菌的______________，使目的基因進入受體細胞C2，并將其插入到受體細胞C2中______________________上，使目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達，形成轉(zhuǎn)基因萵苣。經(jīng)②過程獲得的轉(zhuǎn)基因萵苣中的目的基因是否表達，在分子水平上可用____________法進行檢測，如果出現(xiàn)雜交帶，說明目的基因已經(jīng)表達蛋白質(zhì)產(chǎn)品，轉(zhuǎn)基因萵苣培育成功。 答案　(1)(用逆轉(zhuǎn)錄等方法進行)人工合成　(2)限制酶　DNA連接酶　(3)標記基因　(4)轉(zhuǎn)化作用　染色體的DNA　抗原—抗體雜交 解析　(1)獲取目的基因的主要途徑有從自然界已有的物種中分離和人工合成。(2)①過程為基因表達載體的構(gòu)建過程，需要用到限制酶和DNA連接酶。(3)一個完整的基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因。(4)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法利用的是農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，將目的基因整合到受體細胞染色體的DNA上，進而使目的基因能夠穩(wěn)定遺傳和表達。檢測目的基因是否成功表達可采用抗原—抗體雜交法。 7． 科學家從預(yù)期人的生長激素的功能出發(fā)，推測相應(yīng)的脫氧核苷酸序列，并人工合成了雙鏈DNA片段，獲得雙鏈DNA。 科學家將人的生長激素基因與大腸桿菌的質(zhì)粒進行重組，并使其成功地在大腸桿菌中表達。已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點是—GGATCC—，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是—GATC—。據(jù)圖回答： (1)為了精確地獲取圖中的重組質(zhì)粒，應(yīng)用____________切割質(zhì)粒，用____________切割目的基因。 (2)將基因表達載體導入大腸桿菌B之前，要將大腸桿菌B放入一定濃度的____________溶液中處理，使之成為感受態(tài)的大腸桿菌。 (3)人的基因之所以能與大腸桿菌的質(zhì)粒進行重組并發(fā)揮其功能，是因為二者都是_______________。人的生長激素基因能在細菌體內(nèi)成功表達是因為______________。 (4)將得到的大腸桿菌B涂布在一個含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能夠生長，說明該菌已導入了__________________，反之則沒有導入。 (5)上述方法制備人的生長激素，運用的現(xiàn)代生物技術(shù)是____________。 答案　(1)限制酶Ⅰ　限制酶Ⅱ　(2)CaCl2　(3)規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu)　二者共用一套(遺傳)密碼子　(4)普通質(zhì)粒或重組質(zhì)?！?5)蛋白質(zhì)工程 解析　(1)根據(jù)圖示分析可知，目的基因插在了質(zhì)粒中含抗四環(huán)素基因的部位，而該位置有限制酶Ⅰ和Ⅱ的識別位點，但限制酶Ⅱ會同時在GeneⅠ和Ⅱ處切開，因此在構(gòu)建基因表達載體過程中，應(yīng)用限制酶Ⅰ切割質(zhì)粒。目的基因的兩側(cè)均含有能被限制酶Ⅱ識別的堿基序列，所以用限制酶Ⅱ切割目的基因，能夠露出兩端的黏性末端。因此，為了精確地獲取圖中的重組質(zhì)粒，應(yīng)分別用限制酶Ⅰ和限制酶Ⅱ切割質(zhì)粒和目的基因。(2)將基因表達載體導入大腸桿菌B之前，要將大腸桿菌B放入一定濃度的CaCl2溶液中處理，使之成為感受態(tài)的大腸桿菌。(3)人的基因之所以能與大腸桿菌的DNA分子進行重組，是因為人的基因與大腸桿菌DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)相同。人的生長激素基因能在細菌體內(nèi)成功表達是因為人和細菌共用一套(遺傳)密碼子。(4)將得到的大腸桿菌B涂布在一個含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能夠生長，說明該菌已導入了普通質(zhì)?；蛑亟M質(zhì)粒，因為普通質(zhì)?；蛑亟M質(zhì)粒中都含抗氨芐青霉素基因。(5)科學家從預(yù)期人的生長激素的功能出發(fā)，推測相應(yīng)的脫氧核苷酸序列，并人工合成了雙鏈DNA片段，獲得雙鏈DNA，從而合成人的生長激素，這運用了現(xiàn)代生物技術(shù)中的蛋白質(zhì)工程。