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2019-2020年高考生物 第43講 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用限時(shí)規(guī)范特訓(xùn) 1.制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的下列操作中，不正確的是(　　) A．操作流程是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌和倒平板 B．將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同倒入燒杯中再加水、去紙 C．滅菌后向牛肉膏蛋白胨溶液中加2%瓊脂，并使其溶解 D．將培養(yǎng)基冷卻到約50℃時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板 解析：瓊脂加入到牛肉膏蛋白胨溶液中，溶化后再滅菌。 答案：C 2．平板劃線法和稀釋涂布平板法是接種微生物的兩種常用方法，下列描述正確的是(　　) A．都要將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋 B．平板劃線法是將不同稀釋度的菌液通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作 C．稀釋涂布平板法是將不同稀釋度的菌液倒入液體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng) D．都會在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落 解析：平板劃線法不需要進(jìn)行梯度稀釋；稀釋涂布平板法需要將不同稀釋度的菌液滴加到固體培養(yǎng)基的表面；平板劃線法和稀釋涂布平板法都能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。 答案：D 3．某學(xué)者欲研究被石油污染過的土壤中細(xì)菌數(shù)量，并從中篩選出能分解石油的細(xì)菌。下列操作錯(cuò)誤的是(　　) A．利用平板劃線法對細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù) B．用以石油為唯一碳源的培養(yǎng)基篩選 C．采用稀釋涂布平板法分離菌種 D．稱取和稀釋土壤樣品時(shí)應(yīng)在火焰旁 解析：分離細(xì)菌常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，但平板劃線法不能對細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)；篩選能分解石油的細(xì)菌，要以石油作為培養(yǎng)基中唯一的碳源； 篩選細(xì)菌的整個(gè)操作過程都需要在無菌條件下進(jìn)行，所以應(yīng)在火焰旁進(jìn)行。 答案：A 4．在做土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，甲組實(shí)驗(yàn)用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，乙組實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)基中的氮源除尿素外還含硝酸鹽，其他成分都相同，在相同條件下操作，培養(yǎng)觀察，則乙組實(shí)驗(yàn)屬于(　　) A．空白對照 　　　　　　 B．標(biāo)準(zhǔn)對照 C．相互對照 D．條件對照 解析：乙組和甲組實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)條件不同，形成了條件對照。 答案：D 5．某同學(xué)學(xué)習(xí)完微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)后，要利用所學(xué)知識研究水中微生物的情況。該同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況而進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察計(jì)數(shù)。請回答與此實(shí)驗(yàn)相關(guān)的問題： (1)該同學(xué)所用培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供了________和________。 (2)對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，應(yīng)該采用的方法是________。 (3)為了盡快觀察到細(xì)菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)將接種了湖水樣品的平板置于________中培養(yǎng)、培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37℃。要使該實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時(shí)在另一平板上接種________作為對照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 解析：蛋白胨是源于動(dòng)物的原料，含有維生素、糖和有機(jī)氮等營養(yǎng)物質(zhì)，在培養(yǎng)基中主要作為氮源。實(shí)驗(yàn)室的滅菌方法一般有：灼燒滅菌(適用于接種工具的滅菌)、干熱滅菌(適用于耐高溫的、需要保持干燥的物品的滅菌)、高壓蒸汽滅菌(適用于培養(yǎng)基等物品的滅菌)。要想使微生物快速地繁殖，就要置于適宜的條件下，特別是適宜的溫度下，所以要置于恒溫培養(yǎng)箱中。對照實(shí)驗(yàn)就是要設(shè)置一個(gè)用無菌水接種的平板進(jìn)行觀察比較。 答案：(1)氮源 　 碳源 　 (2)高壓蒸汽滅菌 　 (3)恒溫培養(yǎng)箱 　無菌水 6．大腸桿菌是“明星菌”，在生物技術(shù)上常用作“工程菌”。某生物小組的同學(xué)利用實(shí)驗(yàn)室提供的某品系大腸桿菌及其他必需材料，對該品系大腸桿菌進(jìn)行了培養(yǎng)、計(jì)數(shù)。 (1)大腸桿菌在生長過程中對各種營養(yǎng)成分所需的量不同，故制備培養(yǎng)基時(shí)各營養(yǎng)成分要有合適的________。 (2)在制備固體培養(yǎng)基進(jìn)行倒平板操作時(shí)，平板冷凝后，甲同學(xué)將平板倒置，其原因是____________________________________。 (3)乙同學(xué)采用平板劃線法接種，獲得單菌落后繼續(xù)篩選，在每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，其目的是_____________________。 (4)丙、丁同學(xué)用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)。在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果：丙同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230；丁同學(xué)在該濃度下涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21、212、256，然后取其平均值163作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果。請?jiān)u價(jià)這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性： ①丙同學(xué)的結(jié)果________，原因是________________。 ②丁同學(xué)的結(jié)果________，原因是________________。 (5)戊同學(xué)在測定大腸桿菌的密度時(shí)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上還有其他雜菌的菌落，由此他判斷該品系大腸桿菌被污染了。他的判斷是否確切？為什么？ ________________________________________________________________________________________________________________。 解析：(1)從培養(yǎng)基制備的重要原則入手分析，制備培養(yǎng)基時(shí)要注意控制各種營養(yǎng)物質(zhì)的比例。(2)平板冷凝后培養(yǎng)皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止培養(yǎng)皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。(3)灼燒接種環(huán)的目的是殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，以免對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響。(4)實(shí)驗(yàn)時(shí)，至少要涂布3個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力和準(zhǔn)確性，丁同學(xué)雖然涂布了3個(gè)平板，但其中一個(gè)平板上的菌落數(shù)與另外兩個(gè)平板上的菌落數(shù)相差甚遠(yuǎn)，故不能取這3個(gè)平板上的菌落的平均值作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果。(5)判斷雜菌的來源時(shí)，只有排除其他可能的情況才能得出確切的結(jié)論。 答案：(1)比例 　 (2)培養(yǎng)皿蓋上會凝結(jié)有水珠，平板倒置可防止水珠落入培養(yǎng)皿中而造成污染，還可使培養(yǎng)皿表面的水分更好地?fù)]發(fā) 　 (3)殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種　 (4)①不合理　 沒有設(shè)置重復(fù)組，結(jié)果不具有說服力　 ②不合理 　 一個(gè)平板上的計(jì)數(shù)結(jié)果與另外兩個(gè)相差太遠(yuǎn)(或在操作過程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，或只簡單地計(jì)算了平均值)　(5)不確切。因?yàn)椴荒艽_定雜菌是來自培養(yǎng)基還是來自培養(yǎng)過程 7．從自然菌樣中篩選較理想的生產(chǎn)菌種的一般步驟是：采集菌樣→富集培養(yǎng)→純種分離→性能測定。 (1)不同微生物的生存環(huán)境不同，獲得理想微生物的第一步是從適宜的環(huán)境中采集菌樣，然后再按一定的方法分離、純化。篩選嗜鹽菌的菌樣應(yīng)從________環(huán)境中采集。 (2)富集培養(yǎng)指創(chuàng)設(shè)僅適合待分離微生物旺盛生長的特定環(huán)境條件，使其數(shù)量大大增加，從而分離出所需微生物的培養(yǎng)方法。對產(chǎn)耐高溫淀粉酶微生物的富集培養(yǎng)應(yīng)選擇________的培養(yǎng)基，并在________條件下培養(yǎng)。 (3)如圖甲、乙是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖，請分析接種的具體方法。 獲得圖甲效果的接種方法是______________，獲得圖乙效果的接種方法是____________。 (4)配制培養(yǎng)基時(shí)各種成分在溶化后分裝前必須進(jìn)行________，接種前要進(jìn)行________。在整個(gè)微生物的分離和培養(yǎng)中，一定要注意在________條件下進(jìn)行。 解析：采集菌樣時(shí)必須考慮所分離的微生物的生理特性和相應(yīng)的土壤特點(diǎn)。培養(yǎng)微生物時(shí)則要考慮它對營養(yǎng)的需要和對氧氣、pH的不同要求。分析圖甲和圖乙不難得出相應(yīng)的接種方法。配制培養(yǎng)基的步驟包括計(jì)算、稱量、溶化、調(diào)節(jié)pH、分裝、包扎、滅菌、倒平板等。 答案：(1)海灘等高鹽 　(2)以淀粉為唯一碳源 　高溫 (3)稀釋涂布平板法 　 平板劃線法 　 (4)pH調(diào)整　高壓蒸汽滅菌 　 無菌 8．尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)肥料，但若不經(jīng)細(xì)菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物種類和數(shù)量繁多，同學(xué)們試圖探究土壤中微生物對尿素是否有分解作用，設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)，并成功篩選到能高效降解尿素的細(xì)菌(目的菌)。培養(yǎng)基成分如下表所示，實(shí)驗(yàn)步驟如下圖所示。請分析回答問題： (1)此培養(yǎng)基能否用于植物組織培養(yǎng)？ _____________________________________________________， 理由是_______________________________________________。 (2)培養(yǎng)基中加入尿素的目的是______________，這種培養(yǎng)基屬于________________培養(yǎng)基。 (3)“目的菌”生長所需的氮源和碳源分別來自培養(yǎng)基中的________和________，實(shí)驗(yàn)需要振蕩培養(yǎng)，原因是____________________________________________________。 (4)轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)時(shí)，常采用______________________(方法)接種，獲得單菌落后繼續(xù)篩選。 (5)下列材料或用具中：①培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿；②玻璃棒、試管、錐形瓶和吸管；③實(shí)驗(yàn)操作者的雙手。 需要滅菌的是________；需要消毒的是________。(填序號) (6)在進(jìn)行分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，A同學(xué)從培養(yǎng)基上篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個(gè)菌落。A同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的原因可能有________(填序號)。 ①由于土樣不同 　 ②由于培養(yǎng)基污染　 ③由于操作失誤 　 ④沒有設(shè)置對照 (7)在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入________，細(xì)菌合成的________將尿素分解為氨，pH增高，使指示劑變紅色。 解析：(1)微生物與植物生長所需的營養(yǎng)不完全相同，培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基不能用于組織培養(yǎng)。(2)培養(yǎng)基中加入尿素作唯一氮源，分解尿素的微生物可生長，這種培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。(3)“目的菌”生長所需的氮源和碳源分別來自尿素和葡萄糖。實(shí)驗(yàn)需要振蕩培養(yǎng)增加溶氧量。(4)在固體培養(yǎng)基上接種用稀釋涂布平板法或平板劃線法。(5)滅菌要徹底消滅微生物及其芽孢，如①或②。實(shí)驗(yàn)操作者的雙手要消毒。(6)A同學(xué)從培養(yǎng)基上篩選出的菌落數(shù)與其他組相比偏多，原因可能是土樣不同、培養(yǎng)基污染、操作失誤等，與是否設(shè)置對照無關(guān)。(7)由于細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解為氨，pH增高，故在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑將變紅。 答案：(1)不能 　 缺少植物激素(或缺少植物需要的各種營養(yǎng)) 　(2)篩選目的菌 　 選擇 　 (3)尿素 　 葡萄糖 為目的菌提供氧氣 　 (4)稀釋涂布平板法(平板劃線法) (5)①②　 ③　 (6)①②③ 　(7)酚紅指示劑　 脲酶