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2019-2020年高考生物一輪復(fù)習(xí) 專題2 細(xì)胞工程（克隆技術(shù)）隨堂訓(xùn)練 新人教版選修3 題組、細(xì)胞工程 1．(xx年高考浙江卷)下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，正確的是(　　) A．連續(xù)細(xì)胞系的細(xì)胞大多具有二倍體核型 B．某些癌細(xì)胞在合適條件下能逆轉(zhuǎn)為正常細(xì)胞 C．由多個(gè)祖細(xì)胞培養(yǎng)形成的細(xì)胞群為一個(gè)克隆 D．未經(jīng)克隆化培養(yǎng)的細(xì)胞系細(xì)胞具有相同的性狀 解析：連續(xù)細(xì)胞系是發(fā)生轉(zhuǎn)化了的細(xì)胞系，大多數(shù)具有異倍體核型，A錯(cuò)誤；癌細(xì)胞在合適條件下可以發(fā)生不定向的基因突變而逆轉(zhuǎn)為正常細(xì)胞，B正確；由一個(gè)單細(xì)胞培養(yǎng)形成的細(xì)胞群為一個(gè)克隆，C錯(cuò)誤；未經(jīng)克隆化培養(yǎng)的細(xì)胞系具有異質(zhì)性，D錯(cuò)誤。 答案：B 2．(xx年高考北京卷)在25 ℃的實(shí)驗(yàn)條件下可順利完成的是(　　) A．光合色素的提取與分離 B．用斐林(本尼迪特)試劑鑒定還原糖 C．大鼠神經(jīng)細(xì)胞的培養(yǎng) D．制備用于植物組織培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基 解析：用斐林(本尼迪特)試劑鑒定還原糖時(shí)需50～65 ℃水浴加熱，B錯(cuò)誤；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜溫度是36.50.5 ℃，C錯(cuò)誤；制備用于植物組織培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基需高溫滅菌，D錯(cuò)誤；光合色素的提取與分離在室溫下即可完成，A正確。 答案：A 3．(xx年高考新課標(biāo)全國卷Ⅰ)某研究者用抗原(A)分別免疫3只同種小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后測定各小鼠血清抗體的效價(jià)(能檢測出抗原抗體反應(yīng)的血清最大稀釋倍數(shù))，結(jié)果如下圖所示。 若要制備雜交瘤細(xì)胞，需取免疫后小鼠的B淋巴細(xì)胞(染色體數(shù)目40條)，并將該細(xì)胞與體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細(xì)胞(染色體數(shù)目60條)按一定比例加入試管中，再加入聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合，經(jīng)篩選培養(yǎng)及抗體檢測，得到不斷分泌抗A抗體的雜交瘤細(xì)胞?；卮鹣铝袉栴}： (1)制備融合所需的B淋巴細(xì)胞時(shí)，所用免疫小鼠的血清抗體效價(jià)需達(dá)到16 000以上，則小鼠最少需要經(jīng)過________次免疫后才能有符合要求的。達(dá)到要求后的X、Y、Z這3只免疫小鼠中，最適合用于制備B淋巴細(xì)胞的是________小鼠，理由是______________________________。 (2)細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)完成后，融合體系中除含有未融合的細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞外，可能還有 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________， 體系中出現(xiàn)多種類型細(xì)胞的原因是________________________________。 (3)雜交瘤細(xì)胞中有________個(gè)細(xì)胞核，染色體數(shù)目最多是________條。 (4)未融合的B淋巴細(xì)胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后都不能存活，原因是____________________。 解析：(1)分析題圖可知，經(jīng)4次免疫后，小鼠Y的血清抗體效價(jià)就可達(dá)到16 000以上。由于4次免疫后的Y小鼠的血清抗體效價(jià)最高，故最適合用于制備B淋巴細(xì)胞。(2)細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)中，由于細(xì)胞融合是隨機(jī)的，而且誘導(dǎo)融合率不可能達(dá)到100%，所以會(huì)有未融合的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞、融合的具有同種核的細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞三種類型。(3)雜交瘤細(xì)胞同時(shí)具有B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的核物質(zhì)，但細(xì)胞核只有一個(gè)。由于雜交瘤細(xì)胞在分裂過程中染色體會(huì)丟失，故細(xì)胞核中染色體數(shù)目最多是40＋60＝100(條)。(4)B淋巴細(xì)胞已經(jīng)分化，沒有無限增殖的潛能。 答案：(1)4　Y　Y小鼠的血清抗體效價(jià)最高　(2)B淋巴細(xì)胞相互融合形成的細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞相互融合形成的細(xì)胞　細(xì)胞融合是隨機(jī)的，且融合率達(dá)不到100%　(3)1　100　(4)不能無限增殖 4．(xx年高考福建卷)Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞?？蒲腥藛T利用胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)對(duì)Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療。其技術(shù)流程如圖： (1)步驟①中，在核移植前應(yīng)去除卵母細(xì)胞的________。 (2)步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到________期時(shí)，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES細(xì)胞。 (3)步驟③中，需要構(gòu)建含有Rag2基因的表達(dá)載體。可以根據(jù)Rag2基因的________設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag2基因片段。為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有________酶的酶切位點(diǎn)。 (4)為檢測Rag2基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的________，用抗Rag2蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。 解析：(1)核移植是把體細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞中。(2)囊胚期才有內(nèi)細(xì)胞團(tuán)。(3)可根據(jù)目的基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物，要把目的基因和表達(dá)載體直接連接，目的基因和表達(dá)載體應(yīng)具有相同酶的酶切位點(diǎn)。(4)欲檢測Rag2基因的表達(dá)情況，需提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)，進(jìn)行抗原—抗體雜交實(shí)驗(yàn)。 答案：(1)細(xì)胞核　(2)囊胚　(3)核苷酸序列　HindⅢ和PstⅠ　(4)蛋白質(zhì) 5．(xx年高考廣東卷)鐵皮石斛是我國名貴中藥，生物堿是其有效成分之一。應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)鐵皮石斛擬原球莖(簡稱PLBs，類似愈傷組織)生產(chǎn)生物堿的實(shí)驗(yàn)流程如下： 在固體培養(yǎng)基上，PLBs的重量、生物堿含量隨增殖培養(yǎng)時(shí)間的變化如圖所示，請(qǐng)回答下列問題： (1)選用新生營養(yǎng)芽為外植體的原因是__________________________，誘導(dǎo)外植體形成PLBs的過程稱________。 (2)與黑暗條件下相比，PLBs在光照條件下生長的優(yōu)勢體現(xiàn)在________________，________________，____________________。 (3)脫落酸(ABA)能提高生物堿含量，但會(huì)抑制PLBs的生長。若采用液體培養(yǎng)，推測添加適量的ABA可提高生物堿產(chǎn)量。同學(xué)們擬開展探究實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該推測，在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案時(shí)探討了以下問題： ①ABA的濃度梯度設(shè)置和添加方式：設(shè)4個(gè)ABA處理組、1個(gè)空白對(duì)照組，3次重復(fù)。因ABA受熱易分解，故一定濃度的無菌ABA母液應(yīng)在各組液體培養(yǎng)基________后按比例加入。 ②實(shí)驗(yàn)進(jìn)程和取樣：實(shí)驗(yàn)50天完成，每10天取樣，將樣品(PLBs)稱重(g/瓶)后再測定生物堿含量。如初始(第0天)數(shù)據(jù)已知，實(shí)驗(yàn)過程中還需測定的樣品數(shù)為________。 ③依所測定數(shù)據(jù)確定適宜的ABA濃度和培養(yǎng)時(shí)間：當(dāng)某3個(gè)樣品(重復(fù)樣)的__________________時(shí)，其對(duì)應(yīng)的ABA濃度為適宜濃度，對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)時(shí)間是適宜培養(yǎng)時(shí)間。 解析：本題主要考查植物組織培養(yǎng)相關(guān)知識(shí)，并以植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)為背景考查實(shí)驗(yàn)探究能力。(1)植物組織培養(yǎng)中外植體常選用莖尖、芽尖，原因是莖尖和芽尖分裂能力強(qiáng)，易誘導(dǎo)其脫分化，而且一般不含病毒。(2)從圖中比較光照和黑暗條件下PLBs重量曲線可知，光照條件下PLBs生長優(yōu)勢主要體現(xiàn)在開始生長時(shí)間，快速生長的時(shí)間及達(dá)到生長穩(wěn)定時(shí)重量的大小等方面。(3)①因ABA受熱易分解，所以必須在培養(yǎng)基滅菌并冷卻至常溫時(shí)才能加入無菌ABA。②依題干信息可知，本實(shí)驗(yàn)有5組，每組3個(gè)樣品，需分別在第0天、10天、20天、30天、40天、50天測定PLBs重量和生物堿含量，而初始數(shù)據(jù)(第0天)已知，因此還需測定的樣品數(shù)是535＝75。③根據(jù)實(shí)驗(yàn)探究目的，當(dāng)3個(gè)樣品(重復(fù)樣)的PLBs重量和生物堿含量乘積的平均值最大時(shí)，其對(duì)應(yīng)的ABA濃度為適宜濃度，對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)時(shí)間為適宜培養(yǎng)時(shí)間。 答案：(1)細(xì)胞分化程度低，容易誘導(dǎo)形成PLBs　細(xì)胞的脫分化　(2)生長起始較快　快速生長時(shí)間較長　PLBs產(chǎn)量較高　(3)①滅菌、冷卻?、?5?、跴LBs重量和生物堿含量乘積的平均值最大 一、選擇題 1．(xx年高考江蘇卷)某種極具觀賞價(jià)值的蘭科珍稀花卉很難獲得成熟種子。為盡快推廣種植，可應(yīng)用多種技術(shù)獲得大量優(yōu)質(zhì)苗，下列技術(shù)中不能選用的是(　　) A．利用莖段扦插誘導(dǎo)生根技術(shù)快速育苗 B．采用花粉粒組織培養(yǎng)獲得單倍體苗 C．采集幼芽嫁接到合適的其他種類植物體上 D．采用幼葉、莖尖等部位的組織進(jìn)行組織培養(yǎng) 解析：本題考查對(duì)獲得大量優(yōu)質(zhì)苗的多種技術(shù)手段的分析。為了使優(yōu)質(zhì)苗的生物性狀不發(fā)生性狀分離，可采用莖段扦插誘導(dǎo)生根技術(shù)快速育苗，也可采用將幼芽嫁接到合適的其他種類植物體上的方法或用莖尖或幼葉等部位的組織進(jìn)行植物組織培養(yǎng)獲得大量優(yōu)質(zhì)苗；花粉粒是減數(shù)分裂的產(chǎn)物，利用花粉粒離體培養(yǎng)得到的是單倍體苗，其高度不育，且會(huì)發(fā)生性狀分離，因此B項(xiàng)方案不能選用。 答案：B 2．(xx年高考浙江卷)實(shí)驗(yàn)小鼠皮膚細(xì)胞培養(yǎng)(非克隆培養(yǎng))的基本過程如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是(　　) A．甲過程需要對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行消毒 B．乙過程對(duì)皮膚組織可用胰蛋白酶消化 C．丙過程得到的細(xì)胞大多具有異倍體核型 D．丁過程得到的細(xì)胞具有異質(zhì)性 解析：本題主要考查了動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)。取小鼠皮膚組織進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)需對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行消毒；通過胰蛋白酶消化皮膚組織可獲得皮膚細(xì)胞；丙過程為最初的傳代培養(yǎng)，得到的細(xì)胞大多具有正常二倍體核型；來源于多個(gè)細(xì)胞的非克隆培養(yǎng)所得到的細(xì)胞系具有異質(zhì)性，該實(shí)驗(yàn)小鼠皮膚細(xì)胞屬于非克隆培養(yǎng)，丁過程得到的細(xì)胞具有異質(zhì)性。 答案：C 二、非選擇題 3．(xx年南京模擬)下圖所示為科學(xué)家利用番茄葉細(xì)胞和馬鈴薯葉細(xì)胞雜交培育“番茄—馬鈴薯”植株的過程，請(qǐng)回答下列問題： (1)①②過程使用了________________酶，以使植物原生質(zhì)體相互分離，此處使用的溶液濃度較大，以保證植物細(xì)胞會(huì)發(fā)生________，以保護(hù)原生質(zhì)體不被破壞；在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中，使細(xì)胞分離開來的酶是________。 (2)過程③在化學(xué)藥劑________的作用下會(huì)發(fā)生細(xì)胞融合；動(dòng)物細(xì)胞融合的方法與植物細(xì)胞不相同的是 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)過程________屬于脫分化，過程________屬于再分化，細(xì)胞發(fā)生分化的根本原因是 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (4)過程⑤⑥⑦的細(xì)胞工程技術(shù)是________，其培養(yǎng)時(shí)選用的材料通常是分生組織，原因是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (5)植物體細(xì)胞雜交的研究在________________________方面，取得了巨大突破。 解析：植物細(xì)胞的細(xì)胞壁主要由纖維素和果膠組成，因此可以用纖維素酶和果膠酶將其水解得到原生質(zhì)體，然后用聚乙二醇或物理方法誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合，再生細(xì)胞壁形成雜種細(xì)胞。⑤⑥是雜種細(xì)胞經(jīng)過脫分化、再分化形成幼苗的過程，體現(xiàn)了植物細(xì)胞的全能性。在較高濃度的溶液中，有細(xì)胞壁的植物細(xì)胞可以發(fā)生質(zhì)壁分離。 答案：(1)纖維素酶和果膠　質(zhì)壁分離　胰蛋白酶　(2)聚乙二醇　可以使用滅活的病毒　(3)⑤?、蕖』虻倪x擇性表達(dá)　(4)植物組織培養(yǎng)　全能性高，易培養(yǎng)形成愈傷組織　(5)克服不同生物遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙 4．(xx年江西六校聯(lián)考)如圖為細(xì)胞融合的簡略過程，請(qǐng)據(jù)圖回答： (1)若A、B是動(dòng)物細(xì)胞，通常用________處理獲得分散的單個(gè)細(xì)胞。A、B到C的過程中，常用的不同于植物細(xì)胞融合的手段是________________。 (2)若該圖是生產(chǎn)抗甲型流感病毒的單克隆抗體的制備過程。A為從小鼠體內(nèi)獲取的________，在獲得此細(xì)胞之前，小鼠需注射________，圖中B細(xì)胞是小鼠骨髓瘤細(xì)胞，符合要求的D細(xì)胞具有的特點(diǎn)是 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)若A、B是植物細(xì)胞，則之前已用________________________去除了細(xì)胞壁。常用來誘導(dǎo)細(xì)胞融合的化學(xué)試劑是________。 (4)若A是番茄原生質(zhì)體，B為馬鈴薯原生質(zhì)體，D要再生出________。通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)把D培養(yǎng)成雜種植株，D個(gè)體________(填“可育”或“不育”)。這種育種方式的優(yōu)點(diǎn)是_______________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 利用上圖原理育種工作者還可以進(jìn)行________育種。 (5)若A、B分別是優(yōu)良奶牛的精子和卵細(xì)胞進(jìn)行體外受精，一般要把B培養(yǎng)到________期。若要通過A、B獲得多個(gè)遺傳物質(zhì)相同的且能產(chǎn)奶的個(gè)體，實(shí)際操作中用到的技術(shù)有________________________(至少寫四種)。 解析：(1)(3)注意動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交過程的比較，找出其中的不同點(diǎn)與相同點(diǎn)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中需要使用胰蛋白酶處理，以便獲得單個(gè)分散的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸浮液；而植物體細(xì)胞雜交過程中，需要用纖維素酶和果膠酶處理，得到原生質(zhì)體。在促融方法上，要注意題目的限制條件，是物理方法、化學(xué)方法還是生物方法，是促融動(dòng)物細(xì)胞還是植物細(xì)胞，這些都要分清。(2)單克隆抗體制備的過程應(yīng)注意：對(duì)提供漿細(xì)胞的動(dòng)物要進(jìn)行免疫，以便能獲得產(chǎn)生抗體的漿細(xì)胞；要進(jìn)行兩次篩選，最終獲得能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。(4)原生質(zhì)體融合成功的標(biāo)志是雜種細(xì)胞再生出細(xì)胞壁，植物體細(xì)胞雜交能克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，得到的雜種植株是多倍體，體細(xì)胞內(nèi)有同源染色體，可以正常減數(shù)分裂產(chǎn)生配子，是可育的。如果用同種植物的細(xì)胞進(jìn)行融合則可以進(jìn)行多倍體育種。(5)進(jìn)行體外受精的精子需獲能，卵細(xì)胞需成熟，即培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期，才能進(jìn)行受精作用。題中提到不僅要獲得多個(gè)遺傳物質(zhì)相同的個(gè)體而且要能產(chǎn)奶，審題時(shí)容易忽視能產(chǎn)奶這個(gè)信息。 答案：(1)胰蛋白酶　滅活的病毒誘導(dǎo)　(2)漿細(xì)胞　滅活甲流病毒　既能分泌抗甲流病毒抗體又能無限增殖　(3)纖維素酶、果膠酶(酶解法)　聚乙二醇(PEG)　(4)細(xì)胞壁　可育　按照人們的意愿改變了生物的遺傳物質(zhì)，克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙　多倍體　(5)減數(shù)第二次分裂中　體外受精技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)、性別鑒定、胚胎分割、胚胎移植技術(shù)等 5．下圖是某實(shí)驗(yàn)室做的通過動(dòng)物纖維母細(xì)胞等獲得單抗的實(shí)驗(yàn)研究。據(jù)圖回答相關(guān)問題。 (1)X、Y、Z細(xì)胞的名稱分別是________、________、________。 (2)①過程類似于植物組織培養(yǎng)技術(shù)中的________過程。與纖維母細(xì)胞相比，誘導(dǎo)干細(xì)胞的全能性較________。②過程的實(shí)質(zhì)是________________。 (3)③過程中需用到的生物誘導(dǎo)劑是________。 (4)④處需要篩選，其目的是 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (5)用32P標(biāo)記的核苷酸的培養(yǎng)基培養(yǎng)Z細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)中能測到32P的細(xì)胞器有________和________。 解析：(1)X、Y、Z細(xì)胞的名稱分別是骨髓瘤細(xì)胞、抗原刺激過的B細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞。(2)①過程是將甲小鼠的纖維母細(xì)胞誘導(dǎo)成誘導(dǎo)干細(xì)胞，相當(dāng)于植物組織培養(yǎng)技術(shù)中的脫分化過程，與纖維母細(xì)胞相比誘導(dǎo)干細(xì)胞的全能性較高。②過程是誘導(dǎo)干細(xì)胞分化成各種體細(xì)胞，細(xì)胞分化的實(shí)質(zhì)是基因選擇性表達(dá)。(3)誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合，需用到的生物誘導(dǎo)劑是滅活的病毒。(5)核苷酸是核酸的基本組成單位，動(dòng)物細(xì)胞中線粒體含有少量DNA，核糖體是由蛋白質(zhì)和rRNA構(gòu)成的。因此用32P標(biāo)記的核苷酸的培養(yǎng)基培養(yǎng)Z細(xì)胞，則在線粒體和核糖體中能檢測到32P。 答案：(1)骨髓瘤細(xì)胞　抗原刺激過的B細(xì)胞　雜交瘤細(xì)胞　(2)脫分化　高　基因的選擇性表達(dá)　(3)滅活的病毒　(4)篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞　(5)核糖體　線粒體 6．回答下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的問題： (1)在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到細(xì)胞表面________時(shí)，細(xì)胞會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的________。此時(shí)，瓶壁上形成的細(xì)胞層數(shù)是________。要使貼壁的細(xì)胞從瓶壁上分離下來，需要用酶處理，可用的酶是________。 (2)隨著細(xì)胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分細(xì)胞分裂停止，進(jìn)而出現(xiàn)________的現(xiàn)象；但極少數(shù)細(xì)胞可以連續(xù)增殖，其中有些細(xì)胞會(huì)因遺傳物質(zhì)發(fā)生改變而變成________細(xì)胞，該種細(xì)胞的黏著性________，細(xì)胞膜表面蛋白質(zhì)(糖蛋白)的量________。 (3)現(xiàn)用某種大分子染料，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，觀察到死細(xì)胞被染色，而活細(xì)胞不染色，原因是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (4)檢查某種毒物是否能改變細(xì)胞染色體的數(shù)目，最好選用細(xì)胞分裂到________期的細(xì)胞用顯微鏡進(jìn)行觀察。 (5)在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，通常在________條件下保存細(xì)胞。因?yàn)樵谶@種條件下，細(xì)胞中________的活性降低，細(xì)胞________的速率降低。 (6)給患者移植經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)形成的皮膚組織后，發(fā)生了排斥現(xiàn)象，這是因?yàn)闄C(jī)體把移植的皮膚組織當(dāng)作________進(jìn)行攻擊。 解析：(1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，有接觸抑制的現(xiàn)象，當(dāng)細(xì)胞在瓶壁上長滿一層時(shí)，停止生長，此時(shí)需要用胰蛋白酶處理，使貼壁的細(xì)胞分離下來。(2)細(xì)胞培養(yǎng)到40～50代時(shí)，有些細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，變成不死性細(xì)胞(癌細(xì)胞)。(3)細(xì)胞膜具有選擇透過性，大分子物質(zhì)不能通過，細(xì)胞死亡后，細(xì)胞膜的選擇透過性消失，大分子物質(zhì)可以自由進(jìn)出細(xì)胞。(4)觀察染色體的數(shù)目和形態(tài)，應(yīng)該選取有絲分裂中期的細(xì)胞進(jìn)行觀察。(5)細(xì)胞在超低溫的情況下，酶的活性降低，新陳代謝的速率降低，因此，需要在低溫或冷凍的條件下保存。(6)對(duì)于患者來說，移植的皮膚屬于抗原，有可能引起排斥現(xiàn)象。 答案：(1)相互接觸　接觸抑制　單層(或一層)　胰蛋白酶　(2)衰老甚至死亡　不死性　降低　減少　(3)由于活細(xì)胞的膜具有選擇透過性，大分子染料不能進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)，故活細(xì)胞不能著色(或由于死細(xì)胞的膜喪失了選擇透過性，大分子染料能夠進(jìn)入死細(xì)胞內(nèi)而著色)　(4)中　(5)冷凍(或超低溫、液氮)　酶　新陳代謝　(6)抗原 7．植物組織培養(yǎng)是克隆植物的一種方法，過程如下圖所示，請(qǐng)回答相應(yīng)的問題： (1)為了獲得脫毒植株，外植體往往取自植物的花芽、葉芽等處的分生組織，其原因是________________________________________________________________________。 (2)培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基除添加營養(yǎng)物質(zhì)外，還需要添加植物激素，其目的是誘導(dǎo)外植體________________________________________________________________________。 (3)在生產(chǎn)實(shí)踐中為獲得大量的細(xì)胞，可將①________放入液體培養(yǎng)基中，經(jīng)機(jī)械作用分散成單個(gè)細(xì)胞，制備成細(xì)胞懸液，再經(jīng)過________即可獲得大量細(xì)胞。 (4)組織培養(yǎng)過程需要提供植物生長和繁殖的最適條件，否則在光學(xué)顯微鏡下可能觀察到發(fā)生________________異常，進(jìn)而使植物出現(xiàn)遺傳不穩(wěn)定甚至不育。 (5)植物組織培養(yǎng)技術(shù)不僅應(yīng)用于花卉和果樹的快速大量繁殖以及脫毒植株的獲取，還廣泛用于_______、________、________等育種過程中。 解析：(1)剛長出的芽尖還沒有受到病毒的侵染，因此用這些部位的細(xì)胞做植物組織培養(yǎng)的材料，可以獲得脫毒植株。(2)在植物組織培養(yǎng)時(shí)，常用生長素和細(xì)胞分裂素來誘導(dǎo)外植體形成愈傷組織，生根、發(fā)芽，從而形成新的植物體。(3)一般利用外植體脫分化形成的愈傷組織獲得細(xì)胞產(chǎn)物，愈傷組織有很強(qiáng)的分裂能力，通過培養(yǎng)愈傷組織細(xì)胞可獲得大量細(xì)胞產(chǎn)物。(4)愈傷組織細(xì)胞分裂時(shí)易受環(huán)境條件影響而發(fā)生染色體結(jié)構(gòu)或數(shù)目的變異，故需要在適宜的條件下進(jìn)行組織培養(yǎng)。(5)植物體細(xì)胞雜交、植物基因工程、單倍體育種等育種過程均需要用到植物組織培養(yǎng)技術(shù)。 答案：(1)這些部位很少受到病毒等病原體的侵害　(2)脫分化和再分化　(3)愈傷組織　細(xì)胞分裂　(4)染色體結(jié)構(gòu)與數(shù)目　(5)植物體細(xì)胞雜交育種　基因工程育種　單倍體育種 8．單克隆抗體的制備過程如圖所示，據(jù)圖回答以下問題： (1)淋巴細(xì)胞能與骨髓瘤細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞，兩種細(xì)胞膜也能“融合”在一起，說明細(xì)胞膜________________________。此過程，常用________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞的特點(diǎn)是 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (2)已知細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤細(xì)胞中盡管沒有S途徑，但能不斷分裂增殖，將這兩種細(xì)胞在試管中混合，加聚乙二醇促融，獲得雜種細(xì)胞。請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一種方法(不考慮機(jī)械方法)，從培養(yǎng)液中分離出雜交瘤細(xì)胞。 ________________________________________________________________________。 (3)雜交瘤細(xì)胞繁殖進(jìn)行的是________分裂，其遺傳性狀________。 (4)雜交瘤細(xì)胞的體外培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基相比有何主要不同？ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (5)單克隆抗體注入體內(nèi)后可以自動(dòng)追蹤抗原(病原體或癌變細(xì)胞等)并與之結(jié)合，而絕不攻擊任何正常細(xì)胞，故稱為“生物導(dǎo)彈”，這是利用了 ________________________________________________________________________。 (6)在單克隆抗體制備過程中，還應(yīng)用了細(xì)胞工程中的________和________兩大技術(shù)。 解析：本題考查單克隆抗體制備的原理、過程以及應(yīng)用。(1)細(xì)胞融合的過程體現(xiàn)了細(xì)胞膜的流動(dòng)性，在動(dòng)物細(xì)胞融合時(shí)，常用聚乙二醇或滅活的病毒作為誘導(dǎo)劑。(2)雜交瘤細(xì)胞具有兩種細(xì)胞的特點(diǎn)：既能無限增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體。雜交瘤細(xì)胞中的DNA合成存在D途徑和S途徑，那么，將氨基嘌呤加入培養(yǎng)基中，即可阻斷僅存在D途徑的骨髓瘤細(xì)胞的增殖，這樣能增殖的細(xì)胞就只有雜交瘤細(xì)胞。(3)雜交瘤細(xì)胞是由兩種體細(xì)胞融合而來的，只能進(jìn)行有絲分裂，其遺傳物質(zhì)沒有改變。(4)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是液體培養(yǎng)基，而植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基，在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)需加入動(dòng)物血清。(5)“生物導(dǎo)彈”利用了抗原(癌細(xì)胞或病原體)與抗體特異性結(jié)合的原理，可以用來治療疾病。(6)在單克隆抗體制備過程中用到了細(xì)胞工程的細(xì)胞融合(雜交瘤細(xì)胞的形成)與細(xì)胞培養(yǎng)。 答案：(1)具有一定的流動(dòng)性　聚乙二醇或滅活的病毒　既具有無限增殖能力，又能產(chǎn)生特異性抗體　(2)培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細(xì)胞　(3)有絲　保持不變(穩(wěn)定)　(4)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)用的是液體培養(yǎng)基，且其中含有動(dòng)物血清　(5)抗原與抗體之間結(jié)合的高度特異性　(6)動(dòng)物細(xì)胞融合　動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)