紫外分光光度法和熒光分析法.ppt
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一、紫外—可見光分光光度法,光譜分析法,二、熒光分析法,,基本原理,儀器主要部件,,紫外-可見光分光光度法,主要應用,基本原理,概述：紫外-可見分光光度法是通過被測物質(zhì)在紫外-可見光區(qū)的特定波長或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對該物質(zhì)進行定性和定量分析的方法。主要用于藥品的鑒別、檢查和含量測定。范圍：,可見光區(qū)（400~760nm）,紫外光區(qū)（200~400nm）,Beer-Lambort定律,*A為吸收度；*T為透光率；*E為吸收系數(shù)（以表示，溶液濃度為1%（g/ml），厚度為1cm時的吸光度值）*c為溶液濃度；*l為樣品總厚度。,適用條件：,入射光為單色光溶液是稀溶液固體、液體和氣體樣品在同一波長下，各組分吸光度具有加和性,儀器主要部件,光源:常采用氘燈和鎢鹵燈鎢燈最適宜的使用波長范圍為320～1000nm。氘燈能發(fā)出光的波長范圍一般為190～400nm單色器：棱鏡或光柵吸收池：玻璃或石英吸收池檢測器：光電池、光電管、光電倍增管及二極管陣列檢測器,儀器分類,單光束紫外可見分光光度計準雙光束紫外可見分光光度計雙光束紫外可見分光光度計雙波長紫外可見分光光度計,主要應用,利用藥物與雜質(zhì)對光的選擇性吸收性質(zhì)的差異，若藥物在雜質(zhì)的最大吸收波長處沒有吸收，則可在此波長處測樣品溶液的吸收度，通過控制樣品溶液吸收度來控制雜質(zhì)的量。例：地蒽酚中二羥基蒽醌的檢查二羥基蒽醌的三氯甲烷溶液在432nm處有最大吸收，而地蒽酚在該處幾乎無吸收。,,1、藥物的雜質(zhì)檢查,,2、藥物的含量測定,如巴比妥類藥物的含量測定（巴比妥類藥物在堿性介質(zhì)中電離為具有紫外吸收特征的結(jié)構(gòu)）、芳酸及其脂類藥物含量測定、維生素A含量測定（在325~328nm的波長范圍內(nèi)有最大吸收）等。,三點校正法本方法是在三個波長處測得吸光度，根據(jù)校正公式計算吸光度校正值后，再計算含量。其原理主要基于以下兩點：①雜質(zhì)的無關(guān)吸收再310~340nm的波長范圍內(nèi)幾乎呈一條直線，且隨波長的增大吸光度下降。②物質(zhì)對光吸收呈加和性的原理，即在某一樣品的吸收曲線上，各波長的吸光度是維生素A與雜質(zhì)吸光度的代數(shù)和，因而吸收曲線也是二者吸收的疊加。,,3、藥物的鑒別,對比吸收光譜特征數(shù)據(jù)對比吸收度（或吸收系數(shù)）的比值對比吸收光譜的一致性,例苯磺舒：用含鹽酸的乙醇[取鹽酸溶液（9-1000）2ml，加乙醇制成100ml]制成沒1ml中含20ug的溶液，在225nm與249nm的波長處有最大吸收，在249nm波長處的吸收度為0.67。甾體激素類藥物：丙酸倍氯米松的乙醇溶液（20ug/ml），在239nm的波長處應有最大吸收，吸光度為0.57~0.60;在239nm與263nm波長處的吸光度比值應為2.25~2.45,,1.判別物質(zhì)的異構(gòu)體，如互變異構(gòu)體，順反異構(gòu)體，開鏈和成環(huán)異構(gòu)體，旋光異構(gòu)體，空間異構(gòu)體等。反式異構(gòu)體空間位阻小，共軛程度較完全。最大吸收峰波長，最大摩爾吸收系數(shù)，大于順式。2.推測物質(zhì)的共軛體系和部分骨架一般需與色譜，紅外，質(zhì)譜，波譜等多種儀器聯(lián)合作物質(zhì)的結(jié)構(gòu)分析。,,4.結(jié)構(gòu)分析,紫外分光光度測定方法,普通測定分光光度法1.單組分的測定通常采用A-C標準曲線法定量測定。2.多組分的同時測定⑴若各組分的吸收曲線互不重疊，則可在各自最大吸收波長處分別進行測定。這本質(zhì)上與單組分測定沒有區(qū)別。⑵若各組分的吸收曲線互有重疊，則可根據(jù)吸光度的加合性求解聯(lián)立方程組得出各組分的含量。Aλ1=εaλ1bca＋εbλ1bcbAλ2=εaλ2bca＋εbλ2bcb,差示分光光度法,普通分光光度法一般只適于測定微量組分，當待測組分含量較高時，將產(chǎn)生較大的誤差。需采用示差法。即提高入射光強度，并采用濃度稍低于待測溶液濃度的標準溶液作參比溶液。設：待測溶液濃度為cx，標準溶液濃度為cs(cs下載提示(請認真閱讀)
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