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1、高中生物選修一生物技術實踐 知識點總結 專題一 傳統(tǒng)發(fā)酵技術的應用 課題一 果酒和果醋的制作 1、果酒菌種：附在葡萄皮上的野生型酵母菌（真菌，兼性厭氧，主要出芽生殖還有孢子生殖） 2、在有氧條件下，酵母菌進行有氧呼吸，大量繁殖。 在無氧條件下，酵母菌能進行酒精發(fā)酵。 3、制酒條件：溫度（18～25℃），發(fā)酵液缺氧 呈酸性（酵母菌可以生長繁殖，而其他微生物無法適應這一環(huán)境）。 4、葡萄酒呈現(xiàn)深紅色的原因：紅葡萄皮的色素進入發(fā)酵液。 5、果醋菌種：醋酸菌（原核生物），代謝類型異養(yǎng)需氧型。 6、有兩條途徑生成醋酸：當氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的

2、糖分解成醋酸；當缺少糖源時，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿帷? C2H5OH＋O2→CH3COOH＋H2O 7、制醋條件：①深層發(fā)酵時，短時間不通氧，醋酸菌死亡。②溫度：30～35℃。 挑選葡萄→沖洗→榨汁→酒精發(fā)酵→醋酸發(fā)酵 果酒 果醋 8、流程： 9、裝置：充氣口制酒時關閉；制醋時，連續(xù)輸入氧氣。排氣口長而彎曲的膠管目的是防止空氣中微生物的污染；開口向下的目的是排出酒精發(fā)酵時產生的二氧化碳。出料口是用來取樣檢測。 葡萄汁只裝2/3，留1/3空間的目的是讓酵母菌先有氧呼吸進行繁殖。 10、若用瓶子做裝置：制酒時，要每天擰松瓶蓋2～4次，目的是排二氧

3、化碳；制醋時，將瓶口打開，蓋上紗布。 11、所有用具清洗后晾干或清洗后用70%的酒精消毒。 先沖洗葡萄再除去枝梗，以避免除去枝梗時引起葡萄破損，增加被雜菌污染的機會。 12、酒精檢驗：酸性（3mol/L的H2SO4）重鉻酸鉀→灰綠色。醋酸檢驗：嗅味和品嘗（比較pH） 13、從哪些方面防止發(fā)酵液被污染？ 榨汁機要清洗干凈，并晾干。發(fā)酵瓶要清洗干凈，用體積分數(shù)70%的酒精消毒，或用洗潔精洗滌。裝入葡萄汁后，封閉充氣口。 課題二 腐乳的制作 1、菌種：多種微生物如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，主要是毛霉（真菌，代謝類型是異養(yǎng)需氧型。孢子生殖。）傳統(tǒng)制作毛霉來自空氣；現(xiàn)代生產將優(yōu)質毛霉菌種直

4、接接種在豆腐上。 2、原理：毛霉等微生物產生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。 3、實驗流程：讓豆腐上長出毛霉→加鹽腌制→加鹵湯裝瓶→密封腌制（加鹽之前為前期發(fā)酵，目的是創(chuàng)造條件讓毛霉生長，使毛霉形成菌膜包住豆腐使腐乳成型。后期發(fā)酵主要是酶與微生物協(xié)同作用，生成腐乳的香氣。） 4、所用豆腐的含水量為70％左右，水分過多則腐乳不易成形。豆腐生長的白毛是毛霉的白色菌絲。 5、溫度：15～18℃。 6、加鹽：逐層加鹽，隨著層數(shù)的加高而增加鹽量，接近瓶口表面的鹽要鋪厚一些?？刂汽}的用量（豆腐：鹽=5:1）：鹽的濃度過低，不足以抑制微生物的生

5、長，可能導致豆腐腐敗變質；鹽的濃度過高會影響腐乳的口味。 食鹽的作用：1.抑制微生物生長，避免腐敗變質2.析出水分，是豆腐變硬 3.調味 7、鹵湯：由酒及各種香辛料配制而成的。 8、鹵湯中酒的含量：12%左右。作用：1.防止雜菌污染 2.賦予腐乳風味3.酒精含量過高，對蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延長；酒精含量過低，不足以抑制微生物生長，導致豆腐腐敗。 9、香辛料的作用：1.調味 2.殺菌 10、防止雜菌污染的措施：①玻璃瓶，洗凈后用沸水消毒。②加鹵湯后，用膠條將瓶口密封。③封瓶時，將瓶口通過酒精燈的火焰。 11、影響腐乳風味的因素：鹽、酒、香辛料、豆腐含水量。

6、12、腐乳外部致密的“皮”是前期發(fā)酵時在豆腐表面上生長的毛霉菌絲，它能形成腐乳的“體”，使腐乳成形。 課題三 制作泡菜 1、菌種：乳酸菌（代謝類型異養(yǎng)厭氧，包括乳酸鏈球菌和乳酸桿菌。乳酸桿菌常用于生產酸奶。 2、流程 修整、洗滌 晾曬、切分 原料加工 條狀或片狀 加鹽 配制鹽水 泡菜鹽水 加入調味料， 并裝壇 發(fā)酵 成品 測定亞硝酸鹽含量 3、配制鹽水：水：鹽=4:1；煮沸冷卻（殺菌和去除溶解氧） 4、用水封閉壇口起什么作用？（保證發(fā)酵的無氧環(huán)境）不封閉有什么結果？（①有氧會抑制無氧呼吸，②雜菌污染） 5、泡菜腌制過程中，要注

7、意控制腌制時間、溫度和食鹽用量。溫度過高、食鹽用量過低、腌制時間過短，易造成細菌大量繁殖，亞硝酸鹽含量增加。一般在腌制 10 天后亞硝酸鹽含量開始降低，故在10天之后食用最好。 6、亞硝酸鹽：白色粉末，易溶于水，用作食品添加劑。 膳食中的絕大部分亞硝酸鹽隨尿排出，只有在特定的條件（適宜的pH、溫度和一定的微生物作用），才會轉變成致癌物――亞硝胺，它對動物還具有致畸和致突變作用。 7、測定亞硝酸鹽含量的原理：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應后，與 N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結合形成玫瑰紅色染料，與已知濃度的標準顯色液目測比較，估算泡菜中亞硝酸鹽含量。 提取劑：氯化鎘

8、、氯化鋇。 氫氧化鋁乳液：吸附泡菜汁中雜質，使泡菜汁透明澄清。 氫氧化鈉：中和過多的酸，制造弱堿性環(huán)境 8、含抗生素牛奶不能生產酸奶的原因是抗生素殺死乳酸菌。 9、醋瓶或啤酒瓶內形成的白膜是醋酸菌；泡菜壇內的白膜是酵母菌。 專題二 微生物的培養(yǎng)與應用 課題一 微生物的實驗室培養(yǎng) 1、培養(yǎng)基：人們按照微生物對營養(yǎng)物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質。 培養(yǎng)基按照物理性質可分為液體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基（加入凝固劑瓊脂，在其表面可形成菌落）。 ·按照用途，可分為選擇培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是指允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物

9、生長的培養(yǎng)基。鑒別培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的特點，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品，用以鑒別不同類別的微生物。 2、培養(yǎng)基的化學成分：水、無機鹽、碳源、氮源。還要滿足微生物生長對PH、特殊營養(yǎng)物質以及氧氣的要求。 碳源：提供碳元素。如CO2（自養(yǎng)生物用）、糖類（異養(yǎng)微生物用）。 氮源：提供氮元素。如N2（固氮菌）、NH3（硝化細菌）、NO3-、NH4+（自養(yǎng)微生物）、牛肉膏、蛋白胨（異養(yǎng)微生物）等。 特例：培養(yǎng)乳酸桿菌加維生素，培養(yǎng)霉菌須將pH調至酸性，培養(yǎng)細菌將pH調至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧型微生物需提供無氧條件。 3、無菌技術——獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是防止外來雜菌的入侵，有效避免操作

10、者自身被微生物感染。 4、消毒指使用較為溫和的物理或化學方法殺死物體表面或內部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。分為煮沸消毒法，巴氏消毒法（不耐高溫的液體）、化學藥劑（如酒精、氯氣、石炭酸等）消毒、紫外線消毒。 5、滅菌是指使用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子。分為灼燒滅菌（接種環(huán)、接種針等金屬工具、試管口）、干熱滅菌（吸管、培養(yǎng)皿等玻璃器皿、金屬用具，所用器械是干熱滅菌箱）、高壓蒸汽滅菌（培養(yǎng)基、無菌水等，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋）。 滅菌時物品不能擺得太擠，目的是避免妨礙熱氣流通。 6、制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基方法步驟：計算、稱量、溶化（包括定容和調pH）、

11、滅菌、倒平板。【培養(yǎng)基在錐形瓶中則是先分裝再滅菌】 7、倒平板操作的步驟：拔棉塞→瓶口迅速通過火焰→將培養(yǎng)皿打開一條縫，倒培養(yǎng)基（培養(yǎng)皿的皿蓋始終在手中）→冷卻凝固→倒置平板（從此以后一直倒置） 8、平板冷凝后，為什么要將平板倒置？ 答：既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 9、平板劃線法只能得到單個的菌落，不能計數(shù)。劃線時不要將最后一區(qū)的與第一區(qū)相連。 操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少；劃線操作結束時，

12、仍然需要灼燒接種環(huán)是為了殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。 在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。 10、稀釋涂布平板法不僅能得到單個的菌落，還能計數(shù)。 稀釋涂布的所有操作都應在火焰附近進行。涂布器浸在酒精中，然后灼燒。 11、菌種保存 頻繁使用：臨時保藏（接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，4℃冰箱，每3～6個月，要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉移到新鮮的培養(yǎng)基上。） 長期保存：甘

13、油管藏（－20℃的冷凍箱中）。 課題二 土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù) 1、尿素：只有當土壤中的細菌將尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因為他們能合成脲酶。 2、微生物的篩選應用的原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度、pH等），同時抑制或阻止其他微生物生長。 3、測定微生物數(shù)量的常用方法：稀釋涂布平板法（一般設置3～5個平板，選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)，并取平均值。統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低，）和顯微鏡直接計數(shù)、濾膜法。 4、流程：土壤取樣（在距地表約3～8cm的土壤層取樣，取樣用具需滅菌）→樣品的

14、稀釋（稀釋程度細菌>放線菌>真菌）→微生物的培養(yǎng)與觀察（細菌30~37℃1~2天；放線菌25~28℃5~7天；霉菌25~28℃3~4天） 5、菌落特征：形狀、大小、隆起程度、顏色。 6、計算公式： 每克樣品中的菌落數(shù)=（C/V）*M 其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（ml），M代表稀釋倍數(shù) 7、鑒別方法：加酚紅指示劑，變紅（細菌合成的脲酶將尿素分解成氨，pH升高） 課題三 分解纖維素的微生物的分離 1、棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產物，商品纖維素：水溶性的羧甲基纖維素鈉（CMC—Na）、不溶于水的微晶纖維素（Avi

15、cel）。 2、纖維素酶是一種復合酶，包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。 3、篩選方法——剛果紅（CR）染色法。 剛果紅與纖維素等多糖物質形成紅色復合物，但并不和纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應。當纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅－纖維素的復合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣，我們就可以通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。 一種是先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進行顏色反應（先加CR，倒去CR后再加Nacl，目的是洗去結合不牢的CR）；另一種是在倒平板時就加入剛果紅（在培養(yǎng)基中加入CR，混勻后倒平板）。

16、 方法一缺點是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會使菌落之間發(fā)生混雜；其優(yōu)點是顯示出的顏色反應的就是纖維素分解菌。方法二的優(yōu)點是操作簡便，不存在菌落混雜問題，缺點是顯示出的顏色反應的可能是纖維素分解菌或淀粉分解菌；另一缺點是：有些微生物具有降解色素的能力，它們在長時間培養(yǎng)過程中會降解剛果紅形成明顯的透明圈，使纖維素分解菌不易區(qū)分。 4、分離分解纖維素的微生物的實驗流程 土壤取樣（可將濾紙埋在土壤）→選擇培養(yǎng)（此步可省略）→梯度稀釋→將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上→挑選產生透明圈的菌落 5、對分解纖維素的微生物進行了初步的篩選后，只是分離純化的第一步，為確定得到的是纖維素分解菌，還需要進行發(fā)

17、酵產纖維素酶的實驗，纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。纖維素酶的測定方法，一般是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產生的葡萄糖進行定量的測定。 專題三 植物的組織培養(yǎng)技術 課題一 菊花的組織培養(yǎng) 1、愈傷組織：細胞排列疏松而無規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細胞。 2、脫分化：由高度分化的植物組織或細胞產生愈傷組織的過程，也叫去分化。 3、再分化：脫分化產生的愈傷組織繼續(xù)進行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官的過程。 4、植物組織培養(yǎng)的基本過程 離體的植物組織、器官或細胞 組織培養(yǎng) 脫分化 愈傷組織 組織培養(yǎng) 再分化 根、芽等器官 人為使用植物激素

18、控制 移植 ——→試管苗———→完整的植物體 5、影響植物組織培養(yǎng)的因素 ①材料：植物的種類、材料的年齡和保存時間的長短等都會影響實驗結果。菊花組織培養(yǎng)一般選擇未開花植物的莖上部新萌生的側枝。培育無病毒作物，選莖尖分生區(qū)細胞。 ②營養(yǎng)：MS培養(yǎng)基（含有大量元素、微量元素、有機物） ③激素： 使用順序 實驗結果 先生長素， 后細胞分裂素 有利于分裂但不分化 先細胞分裂素， 后生長素 細胞既分裂也分化 同時使用 分化頻率提高 生長素／ 細胞分裂素比值與結果 比值高時 促根分化， 抑芽形成 比值低時 促芽分

19、化， 抑根形成 比值適中 促進愈傷組織生長 ④環(huán)境條件：PH、溫度、光等。菊花的組織培養(yǎng)，pH5.8，溫度18~22℃，并且每日用日光燈照射12h。. 6、菊花組織培養(yǎng)的操作流程 ①配制MS固體培養(yǎng)基（配制各種母液4℃保存，大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，使用時根據(jù)母液的濃縮倍數(shù)，計算用量；配制培養(yǎng)基，可以不添加植物激素；高壓蒸汽滅菌）→②外植體的消毒（流水沖洗→洗衣粉+軟刷刷洗→流水沖洗20min→無菌吸水紙吸干外植體表面→體積分數(shù)為70%的酒精中搖動2～3次，持續(xù)6~7s→無菌水清洗→無菌吸水紙吸干外植體表面→質量分數(shù)為0.1﹪的氯化汞

20、溶液中1～2min→無菌水中至少清洗3次；既要考慮藥劑的消毒效果，又要考慮植物的耐受能力）→③接種（無菌操作，形態(tài)學上端朝上）→④培養(yǎng)（無菌箱，18~22℃，光照12h）→⑤移栽（先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，生長幾日；然后用流水清洗根部培養(yǎng)基，移植到消過毒的蛭石或珍珠巖中進行壯苗。最后露天栽培）→⑥栽培 7、微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機營養(yǎng)。 專題二 月季的花藥培養(yǎng) 1、花粉發(fā)育過程： 2個精子(n) 小孢子母細胞（2n） 有絲分裂 減數(shù)分裂 小孢子四分體時期（n） 營養(yǎng)細胞（n） 生殖細胞（n） 花粉管細胞核（n） 生殖細胞核（n）

21、 單核居中期（n） 有絲分裂 單核靠邊期（n） 雙核期 2、產生花粉植株的兩種途徑：一種是花粉通過胚狀體階段發(fā)育為植物，另一種是花粉在誘導培養(yǎng)基上先形成愈傷組織，再將其誘導分化成植株。這兩種途徑之間并沒有絕對的界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比。 ①先誘導生芽，再誘導生根；②胚狀體又稱為細胞胚。 3、影響花藥培養(yǎng)的因素：材料的選擇與培養(yǎng)基的組成是主要的影響因素。親本植株的生長條件、材料的低溫預處理以及接種密度等對誘導成功率都有一定影響 選初花期、完全未開放的花蕾、單核(靠邊)期花粉。 4、月季的花藥培養(yǎng)過程：材料的選取→材料的消毒→接種

22、和培養(yǎng) ①選擇花藥用鏡檢法。最常用醋酸洋紅法（紫紅色）、焙花青-鉻礬法（藍黑色）。 ②材料的消毒： 70%酒精30s 無菌水 沖洗 0.1%氯化汞 2～4min 無菌吸水紙 吸干水分 花蕾 無菌水 清洗 清洗 ③每瓶接種花藥7～10個,溫度25℃,pH5.8，不需要光照.幼小植株形成后才需要光照。 在剝離花藥時，要盡量不損傷花藥（否則接種后容易從受傷部位產生愈傷組織），同時還要徹底去除花絲，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。 花藥開裂,若是長出愈傷組織，要將愈傷組織及時轉移到分化培養(yǎng)基上，以便進一步分化出再生植株。若是胚狀體，則一個花

23、藥內就會產生大量幼小植株，須盡快將其分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開。 專題四 酶的研究與應用 課題一 果膠酶在果汁生產中的作用 1、果膠是植物細胞壁以及胞間層的主要組成成分之一。不溶于水，化學本質是半乳糖醛酸聚合而成的高分子化合物。 2、果膠酶包括多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶、果膠酯酶。果膠酶的作用是能夠將果膠分解成半乳糖醛酸。 3、植物、霉菌、酵母菌、細菌均能產生果膠酶。霉菌發(fā)酵產生的果膠酶是食品工業(yè)中使用量最大的酶制劑之一。 課題2 探討加酶洗衣粉的洗滌效果 1、加酶洗衣粉是指含酶制劑的洗衣粉，目前常用的酶制劑有蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纖維素酶四類

24、。應用最廣泛的是堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。 2、脂肪酶可以將脂肪分解成甘油和脂肪酸；蛋白酶可以將蛋白質分解成小分子肽和氨基酸。 課題3 酵母細胞的固定化 1、酶：對環(huán)境條件敏感，易失活；溶液中的酶很難回收，不能再次利用，提高了生產成本；反應后的酶會混合在產物中，影響產品質量。 2、固定化酶優(yōu)點：使酶既能與反應物接觸，又能與產物分離；固定在載體上的酶還可以被反復利用。 3、固定化細胞優(yōu)點：成本低，操作更容易，對酶影響小，能同時進行一系列反應。 4、固定化酶的應用實例 ①高果糖漿是指果糖含量為42%左右的糖漿。能將葡萄糖轉化為果糖的酶是葡萄糖異構酶。 ②固定化酶技術：

25、將酶固定在一種載體上，再將這些酶顆粒裝到一個反應柱內，柱子底端裝上分布著許多小孔的篩板。酶顆粒無法通小孔，而反應溶液卻可以自由出入。生產過程中，將葡萄糖溶液從反應柱的上端注入，使葡萄糖溶液流過反應柱，與固定化葡萄糖異構酶接觸，轉化成果糖，從反應柱的下端流出。 5、固定化酶及固定化細胞技術 ①固定化酶和固定化細胞是利用物理或化學方法，將酶或細胞固定在一定空間內的技術，包括包埋法、化學結合法和物理吸附法（對固定酶的作用影響?。?。酶更適合采用后兩種方法固定，而細胞多采用包埋法固定化。這是因為細胞個大，而酶分子很??；個大的細胞難以被吸附或結合，而個小的酶容易從包埋材料中漏出。 ②包埋法固定化細胞

26、即將微生物細胞均勻包埋在不溶于水的多孔性載體中。常用的載體有明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸纖維素和聚丙烯酰胺等。 6、固定化酵母細胞的流程：制備固定化酵母細胞→用固定化酵母細胞發(fā)酵 ①制備固定化酵母細胞的實驗步驟 酵母菌的活化→配制CaCl2溶液→配制海藻酸鈉溶液（小火間斷加熱并不斷攪拌，防止焦糊，是制作成功的關鍵步驟）→海藻酸鈉溶液與酵母菌細胞混合（冷卻后）→固定化酵母細胞（凝膠珠應黃色，若白色，說明海藻酸鈉的濃度偏低，固定的酵母細胞數(shù)目較少；若凝膠珠不是圓形或橢圓形，則說明海藻酸鈉的濃度偏高。） ②用固定化酵母細胞發(fā)酵 固定好的凝膠珠用蒸餾水沖洗2-3次→凝膠珠加入葡萄糖溶液，溫度

27、25℃，時間24h。 專題五 ＤＮＡ和蛋白質技術 課題2 多聚酶鏈式反應擴增DNA片段 1、PCR：（多聚酶鏈式反應）。PCR儀實質上是一臺能夠自動調控溫度的儀器（可用3個恒溫水浴鍋替代）。 2、原理：DNA的熱變性、DNA復制。 3、PCR 與體內復制的區(qū)別 ①無解旋酶；②需耐高溫（Taq）DNA聚合酶；③用加熱代替ATP。 4、PCR的反應過程：變性（90℃）→復性（50℃）→延伸（72℃） 5、引物： DNA的羥基（—OH）末端稱為3’，而磷酸集團的末端稱為5’。引物總是以自己的5’端與模板的3’端配對，DNA的合成方向是從子鏈的5’端向3’端延伸（即脫氧核苷酸從引物

28、的3’端連接）。 6、為避免污染，使用的儀器和試劑必須進行高壓滅菌。 7、PCR所用的緩沖液和酶應分成小份，在—20℃儲存。在冰塊上緩慢融化。 8、DNA在260nm的紫外線波段有一強烈的吸收峰。 計算公式：DNA含量（μL/mL）= 50×（260nm的讀數(shù)）×稀釋倍數(shù) 課題3 血紅蛋白的提取和分離 1、凝膠色譜法（分配色譜法）：相對分子質量小的蛋白質容易進入凝膠內部的通道，路程較長，移動速度較慢，而相對分子質量較大的蛋白質無法進入凝膠內部的通道，只能在凝膠外內部移動，路程較短，移動速度較快，從而使相對分子質量不同的蛋白質分子得以分離。 2、凝膠：多

29、糖類化合物構成的微小的多孔球體，如葡聚糖、瓊脂糖。 3、緩沖液：在一定范圍內，抵制外界的酸和堿對溶液pH的影響，維持pH基本不變。H2CO3—NaHCO3、NaH2PO4—Na2HPO4、醋酸—醋酸鈉。 4、電泳：利用各種分子帶電性質的差異及分子本身的的大小、形狀的不同，使帶電分子遷移速度不同，從而實現(xiàn)樣品中各種分子的分離。 5、常用的電泳方法有瓊脂糖凝膠電泳法和聚丙烯酰胺凝膠電泳。測定蛋白質分子量時通常使用SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS所帶負電荷量大，掩蓋了蛋白質的電荷差別，使電泳遷移率只取決分子大?。? 6、蛋白質的提取和分離流程：樣品處理→粗分離→純化→純度鑒定。 7、

30、樣品處理：紅細胞的洗滌（①目的：去除雜蛋白；②方法：血液＋生理鹽水低速短時離心）→血紅蛋白的釋放（加蒸餾水和40%體積的甲苯，攪拌）→分離血紅蛋白溶液（離心后，試管分4層：從上向下第1層無色透明甲苯層，第2層為白色薄層固體——脂溶性物質的沉淀層，第3層是紅色透明液體——血紅蛋白，第4層為其他雜質的暗紅色沉淀物。濾紙過濾，濾液于分液漏斗中靜置，分出下層的紅色透明液體） 8、粗分離：即透析，目的除去小分子雜質 9、純化：即凝膠色譜法分離蛋白質 10、純度鑒定：常用SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳法。 11、交聯(lián)葡聚糖凝膠（SephadexG—75）。G表示凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度及分離范圍

31、，75表示凝膠得水值，即每克凝膠膨脹時吸水7.5g。 12、商品凝膠使用前需直接放在洗脫液中膨脹，并可用沸水浴加熱；裝填凝膠柱時不能有氣泡存在；操作過程中不能發(fā)生洗脫液流干露出凝膠顆粒的現(xiàn)象。 13、加樣前，打開流出口，使緩沖液下降到與凝膠面平齊，關閉出口。用吸管環(huán)繞管壁加樣，不要破壞凝膠面。 專題六　植物有效成分的提取 課題一　植物芳香油的提取 天然香料的來源：植物、動物（麝、靈貓、海貍、抹香鯨）、真菌。 植物芳香油的組成：萜類化合物及其衍生物。 芳香油的提取方法：蒸餾、壓榨、萃取等。 水蒸氣蒸餾法：（玫瑰精油） 原理：水蒸汽可將揮發(fā)性較強的芳香油攜帶出來形成油水混合物，冷

32、卻后水油分層。 方法：水中蒸餾：原料放在沸水中加熱蒸餾。（最簡便易行） 水上蒸餾：原料隔放在沸水上加熱蒸餾。 水汽蒸餾：利用外來高溫水蒸氣加熱蒸餾。 實驗流程： 采集玫瑰花（盛花期），清水清洗瀝干→水蒸氣蒸餾（花：水=1:4）→油水混合 過濾 無水Na2SO4 NaCl 物 分離油層 除水 玫瑰油 蒸餾裝置：安裝按照從左向右、自下到上次序；蒸餾完畢，先撤熱源，然后停止通水，最后拆卸蒸餾裝置，拆卸的順序與安裝時相反。 整套裝置左邊：加熱蒸餾，中部將蒸餾物冷凝，右邊接收。 安裝順序：酒精燈→蒸餾瓶

33、（加沸石，防止過度沸騰）→蒸餾頭→冷凝管→接液管→接收瓶→溫度計（溫度計水銀球的上限與蒸餾頭側管的下限處在同一水平線上） 油水混合物：乳白色。 氯化鈉作用：增加鹽的濃度，使油水混合物分層。 分離油層用具：分液漏斗 無水硫酸鈉：吸收油層中的水分。 注意事項：蒸餾時間不能過短（油沒出來），溫度不能過高（糊了）。 不足：有些原料不適宜于水中蒸餾，如柑橘、檸檬。易焦糊，有效成分易水解。 萃取法： 原理：芳香油易溶于有機溶劑，溶劑揮發(fā)后得到芳香油。如石油醚、酒精、乙醚等。 不足：有機溶劑中的雜質影響芳香油的品質 壓榨法（橘皮精油） 橘皮精油：無色，主要成分檸檬烯，主要分布在橘皮中。

34、 流程：石灰水浸泡→漂洗→壓榨→過濾→靜置→再次過濾→橘皮油 的提取 石灰水：防止壓榨時滑脫，提高出油率，降低壓榨液黏稠度，過濾不堵塞篩眼。 小蘇打、硫酸鈉：促進油和水的分離（用量分別為橘皮質量的0.25％和5％）。 實驗步驟：①橘皮的處理：將新鮮橘皮用清水清洗瀝干。 ②石灰水浸泡：用7～8％石灰水浸泡橘皮10h。 ③清水漂洗：浸泡好的橘皮用流水徹底漂洗干凈，瀝干。 ④粉碎和壓榨：將橘皮粉碎，加入小蘇打和硫酸鈉后，用壓榨機壓榨得到壓榨液。 ⑤過濾壓榨液：用布袋過濾，濾液再高速離心處理，分離出上層橘皮油。 ⑥靜置處理：將橘皮油在5～10℃冰箱中靜置5～7d，分離出上層澄清橘皮

35、油。 ⑦再次過濾：將下層橘皮油用濾紙過濾，濾液與上層橘皮油合并，得到橘皮精油。 分析：靜置處理目的：除去果蠟和水分。 課題二　胡蘿卜素的提取 依據(jù)碳碳雙鍵的數(shù)目胡蘿卜素劃分為三類。其中最主要的為β-胡蘿卜素。 性質：橘黃色。 提取β－胡蘿卜素的方法主要有三種：①從植物中提?、趶拇竺娣e養(yǎng)殖的巖藻中獲得③利用微生物的發(fā)酵生產。 實驗流程：粉碎→干燥→萃取→過濾→濃縮 注意事項：①粉碎：顆粒要小。②干燥：溫度太高，干燥時間太長會導致胡蘿卜素分解。 ③萃?。? Ⅰ、萃取劑的選擇：具有較高的沸點，能夠充分溶解胡蘿卜素，并且不與水混溶。最好是石油醚。Ⅱ、萃取時溫度要高，時間要長。Ⅲ、裝置：水浴加熱，這是因為有機溶劑都是易燃物，直接使用明火加熱容易引起燃燒爆炸。為了防止加熱時有機溶劑揮發(fā)，還要在加熱瓶口安裝回流冷凝裝置。④過濾：除去萃取液中的不溶物。 ⑤濃縮：可直接使用蒸餾裝置。蒸發(fā)出有機溶劑。 鑒定：紙層析法 點樣：萃取樣品（上下2個點）和標準樣品 感謝22班趙思明友情校對 14