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1、專題27基因工程考考1 1點點1 1 基因工程的工具與操作程序基因工程的工具與操作程序1.(2017北京理綜,5,6分)為了增加菊花花色類型,研究者從其他植物中克隆出花色基因C(圖1),擬將其與質(zhì)粒(圖2)重組,再借助農(nóng)桿菌導入菊花中。下列操作與實驗目的不符的是()五年高考A.用限制性核酸內(nèi)切酶EcoR和連接酶構建重組質(zhì)粒B.用含C基因的農(nóng)桿菌侵染菊花愈傷組織,將C基因?qū)爰毎鸆.在培養(yǎng)基中添加卡那霉素,篩選被轉(zhuǎn)化的菊花細胞D.用分子雜交方法檢測C基因是否整合到菊花染色體上答案答案C本題主要考查基因工程的相關知識。由于C基因兩端及質(zhì)粒上均存在限制酶EcoR的酶切位點,因此,可采用限制酶EcoR

2、和DNA連接酶構建重組質(zhì)粒;用含C基因的農(nóng)桿菌侵染菊花愈傷組織(即農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法),可以將C基因?qū)爰毎?由于質(zhì)粒上存在潮霉素抗性基因(標記基因),因此,可以在培養(yǎng)基中添加潮霉素,篩選被轉(zhuǎn)化的菊花細胞,C符合題意;可用分子雜交方法檢測C基因是否整合到菊花染色體上。2.(2015重慶理綜,6,6分)下列有關人胰島素基因表達載體的敘述,正確的是()A.表達載體中的胰島素基因可通過人肝細胞mRNA反轉(zhuǎn)錄獲得B.表達載體的復制和胰島素基因的表達均啟動于復制原(起)點C.借助抗生素抗性基因可將含胰島素基因的受體細胞篩選出來D.啟動子和終止密碼子均在胰島素基因的轉(zhuǎn)錄中起作用答案答案C由于人肝細胞中胰島素基因

3、不能表達,所以無法利用肝細胞mRNA反轉(zhuǎn)錄獲得胰島素基因,A項錯誤;表達載體的復制啟動于復制原點,胰島素基因的轉(zhuǎn)錄啟動于啟動子,B項錯誤;抗生素抗性基因是標記基因,作用是檢測受體細胞中是否含有目的基因,從而將含有胰島素基因的受體細胞篩選出來,C項正確;啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位,是轉(zhuǎn)錄的起點,而終止密碼子位于mRNA上,在翻譯中起作用,D項錯誤。3.(2014天津理綜,4,6分)為達到相應目的,必須通過分子檢測的是()A.攜帶鏈霉素抗性基因受體菌的篩選B.產(chǎn)生抗人白細胞介素-8抗體的雜交瘤細胞的篩選C.轉(zhuǎn)基因抗蟲棉植株抗蟲效果的鑒定D.21三體綜合征的診斷答案答案B根據(jù)受體菌是否對鏈

4、霉素產(chǎn)生抗性進行攜帶鏈霉素抗性基因受體菌的篩選,不需要分子檢測,A錯誤;用特定選擇培養(yǎng)基篩選出的雜交瘤細胞,還需要進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測,才能獲得足夠多的能分泌抗人白細胞介素-8抗體的雜交瘤細胞,B正確;轉(zhuǎn)基因抗蟲棉是否具有抗蟲特性,需要做抗蟲的接種實驗,C錯誤;21三體綜合征可通過用顯微鏡直接觀察體細胞中的21號染色體數(shù)目的方法進行檢測,D錯誤。4.(2017課標全國,38,15分)真核生物基因中通常有內(nèi)含子,而原核生物基因中沒有,原核生物沒有真核生物所具有的切除內(nèi)含子對應的RNA序列的機制。已知在人體中基因A(有內(nèi)含子)可以表達出某種特定蛋白(簡稱蛋白A)?；卮鹣铝袉栴}:(1)某同學從人

5、的基因組文庫中獲得了基因A,以大腸桿菌作為受體細胞卻未得到蛋白A,其原因是。(2)若用家蠶作為表達基因A的受體,在噬菌體和昆蟲病毒兩種載體中,不選用作為載體,其原因是。(3)若要高效地獲得蛋白A,可選用大腸桿菌作為受體。因為與家蠶相比,大腸桿菌具有(答出兩點即可)等優(yōu)點。(4)若要檢測基因A是否翻譯出蛋白A,可用的檢測物質(zhì)是(填“蛋白A的基因”或“蛋白A的抗體”)。(5)艾弗里等人的肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實驗為證明DNA是遺傳物質(zhì)做出了重要貢獻,也可以說是基因工程的先導,如果說他們的工作為基因工程理論的建立提供了啟示,那么,這一啟示是。答案答案(1)基因A有內(nèi)含子,在大腸桿菌中,其初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中與內(nèi)含

6、子對應的RNA序列不能被切除,無法表達出蛋白A(2)噬菌體噬菌體的宿主是細菌,而不是家蠶(3)繁殖快、容易培養(yǎng)(4)蛋白A的抗體(5)DNA可以從一種生物個體轉(zhuǎn)移到另一種生物個體解析解析本題主要考查基因工程的相關知識。(1)從人的基因組文庫中獲得的基因A中含有內(nèi)含子,而大腸桿菌屬于原核生物,故大腸桿菌不能切除基因A初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中與內(nèi)含子對應的RNA序列,故基因A在大腸桿菌中無法表達出蛋白A。(2)由于病毒對宿主細胞的感染具有特異性,噬菌體只能寄生在細菌細胞中,不能感染家蠶細胞,故應選用可感染家蠶的昆蟲病毒作為載體。(3)與真核生物相比,大腸桿菌等原核生物具有繁殖快、容易培養(yǎng)、遺傳物質(zhì)相對較少等

7、優(yōu)點。(4)檢測基因A是否翻譯出蛋白A,一般用抗原抗體雜交的方法,即用蛋白A的抗體與從細胞中提取的蛋白質(zhì)進行雜交,觀察是否出現(xiàn)雜交帶。(5)肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實驗的實質(zhì)是S型菌的DNA進入R型菌體內(nèi),并可在R型菌體內(nèi)完成表達,這證明了DNA可以從一種生物個體轉(zhuǎn)移到另一種生物個體,為基因工程奠定了基礎。知識拓展知識拓展真核生物基因中通常有內(nèi)含子,原核生物的基因中不含有內(nèi)含子,所以原核生物不能切除內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄的RNA序列,故基因工程中不能將真核生物的基因直接導入原核生物,而常使用反轉(zhuǎn)錄的方法先獲得真核生物的cDNA(不含內(nèi)含子),再進行下一步操作。5.(2017課標全國,38,15分)幾丁質(zhì)是許多真菌細

8、胞壁的重要成分,幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi),可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}:(1)在進行基因工程操作時,若要從植物體中提取幾丁質(zhì)酶的mRNA,常選用嫩葉而不選用老葉作為實驗材料,原因是。提取RNA時,提取液中需添加RNA酶抑制劑,其目的是。(2)以mRNA為材料可以獲得cDNA,其原理是。(3)若要使目的基因在受體細胞中表達,需要通過質(zhì)粒載體而不能直接將目的基因?qū)胧荏w細胞,原因是(答出兩點即可)。(4)當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時,DNA連接酶催化形成的化學鍵是。(5)若獲得的轉(zhuǎn)基因植株(幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中)抗真菌病的能力沒有提

9、高,根據(jù)中心法則分析,其可能的原因是。答案答案(1)嫩葉組織細胞易破碎防止RNA降解(2)在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下,以mRNA為模板按照堿基互補配對的原則可以合成cDNA(3)目的基因無復制原點;目的基因無表達所需啟動子(4)磷酸二酯鍵(5)目的基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯異常解析解析本題考查基因工程的相關知識。(1)由于嫩葉組織細胞比老葉細胞易破碎,所以適于作為提取幾丁質(zhì)酶的mRNA的實驗材料。由于植物組織中存在的RNA酶能將RNA分解,所以實驗過程中要添加RNA酶抑制劑以降低RNA酶的活性,保護提取的RNA不被分解。(2)以mRNA為材料獲得cDNA的過程為逆轉(zhuǎn)錄,即以mRNA為模板、以4種脫氧核糖核苷酸為

10、原料,在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下,遵循堿基互補配對原則,合成cDNA的過程。(3)由于目的基因無復制原點,也無基因表達所需的啟動子和終止子,所以需與質(zhì)粒構建重組質(zhì)粒后再導入受體細胞。(4)DNA連接酶可以催化兩個DNA片段的黏性末端或平末端連接形成磷酸二酯鍵。(5)幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中,但是植株抗真菌病的能力沒有提高,從中心法則角度分析,可能是轉(zhuǎn)基因植株細胞中幾丁質(zhì)酶基因不能轉(zhuǎn)錄或不能進行翻譯導致的。6.(2016課標全國,40,15分)某一質(zhì)粒載體如圖所示,外源DNA插入到Ampr或Tetr中會導致相應的基因失活(Ampr表示氨芐青霉素抗性基因,Tetr表示四環(huán)素抗性基因)。有人將此

11、質(zhì)粒載體用BamH酶切后,與用BamH酶切獲得的目的基因混合,加入DNA連接酶進行連接反應,用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌。結果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化,有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種,分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌?；卮鹣铝袉栴}:(1)質(zhì)粒載體作為基因工程的工具,應具備的基本條件有(答出兩點即可),而作為基因表達載體,除滿足上述基本條件外,還需具有啟動子和終止子。(2)如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進行篩選,在上述四種大腸桿菌細胞中,未被轉(zhuǎn)化的和僅含環(huán)狀目的基因的細胞是不能區(qū)分的,其原因是;并且和的細胞也是不能區(qū)分的,其原因是。在上述篩選的基礎上,

12、若要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌單菌落,還需使用含有的固體培養(yǎng)基。(3)基因工程中,某些噬菌體經(jīng)改造后可以作為載體,其DNA復制所需的原料來自于。答案答案(1)能自我復制、具有標記基因(2)二者均不含有氨芐青霉素抗性基因,在該培養(yǎng)基上均不生長含有質(zhì)粒載體含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒(或答含有重組質(zhì)粒)二者均含有氨芐青霉素抗性基因,在該培養(yǎng)基上均能生長四環(huán)素(3)受體細胞解析解析(1)質(zhì)粒作為載體應具備的基本條件有:能自我復制、具有標記基因、含有一至多個限制酶切割位點等。(2)由題意可知,未被轉(zhuǎn)化的和僅含環(huán)狀目的基因的細胞中均不含有氨芐青霉素抗性基因,所以在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上

13、均不能生長。質(zhì)粒載體上含有氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因,插入了目的基因的重組質(zhì)粒中僅含有氨芐青霉素抗性基因,所以含有質(zhì)粒載體和含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的細胞均能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長,但前者可以在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長而后者不能,所以可用含有四環(huán)素的培養(yǎng)基,篩選出含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌單菌落。(3)噬菌體屬于病毒,病毒增殖過程中所需的原料、酶等均來自于受體細胞。知識歸納知識歸納標記基因要點總結:一般將一些抗性基因作為標記基因;標記基因的主要作用是鑒定和篩選含有目的基因的受體細胞;標記基因表達產(chǎn)物對什么物質(zhì)有抗性,在篩選培養(yǎng)時則在培養(yǎng)基中加入什么物質(zhì);標記基因

14、若被插入了外源DNA片段,則該標記基因會被破壞。7.(2016天津理綜,7,12分)人血清白蛋白(HSA)具有重要的醫(yī)用價值,只能從人血漿中制備。如圖是以基因工程技術獲取重組HSA(rHSA)的兩條途徑。(1)為獲取HSA基因,首先需采集人的血液,提取合成總cDNA,然后以cDNA為模板,使用PCR技術擴增HSA基因。下圖中箭頭表示一條引物結合模板的位置及擴增方向,請用箭頭在方框內(nèi)標出另一條引物的位置及擴增方向。(2)啟動子通常具有物種及組織特異性,構建在水稻胚乳細胞內(nèi)特異表達rHSA的載體,需要選擇的啟動子是(填寫字母,單選)。A.人血細胞啟動子B.水稻胚乳細胞啟動子C.大腸桿菌啟動子D.農(nóng)

15、桿菌啟動子(3)利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻受體細胞的過程中,需添加酚類物質(zhì),其目的是。(4)人體合成的初始HSA多肽,需要經(jīng)過膜系統(tǒng)加工形成正確空間結構才有活性。與途徑相比,選擇途徑獲取rHSA的優(yōu)勢是。(5)為證明rHSA具有醫(yī)用價值,須確認rHSA與的生物學功能一致。答案答案(12分)(1)總RNA(或mRNA)(2)B(3)吸引農(nóng)桿菌移向水稻受體細胞,有利于目的基因成功轉(zhuǎn)化(4)水稻是真核生物,具有膜系統(tǒng),能對初始rHSA多肽進行高效加工(5)HSA解析解析本題主要考查基因工程的相關知識。(1)總cDNA是以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄合成的,所以需要提取人的總RNA或mRNA;PCR擴增的原理是DNA

16、復制,DNA復制時,兩條子鏈的延伸方向相反,所以引物的位置及方向如答案所示。(2)要使rHSA基因在水稻胚乳細胞內(nèi)特異性表達,需要選擇水稻胚乳細胞的啟動子。(3)酚類物質(zhì)可吸引農(nóng)桿菌移向水稻受體細胞,使農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的T-DNA轉(zhuǎn)移到受體細胞并整合到受體細胞染色體的DNA上,有利于目的基因成功轉(zhuǎn)化。(4)大腸桿菌為原核生物,無內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體,不能對多肽進行高效加工,而水稻是真核生物,具有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體,可對多肽鏈進行高效加工。(5)要證明rHSA具有醫(yī)用價值,須確認rHSA與HSA的生物學功能一致。易錯警示易錯警示注意PCR技術的原理是DNA復制,DNA復制時,兩條母鏈分別作為模板,新合

17、成的兩條子鏈延伸的方向相反,由此確定引物的位置及擴增方向。解題反思解題反思本題考查基因工程的相關知識點,難度不大,只需要在復習的過程中牢牢把握基因工程的相關知識點即可。以下為教師用書專用8.(2016江蘇單科,33,9分)下表是幾種限制酶識別序列及其切割位點,圖1、圖2中標注了相關限制酶的酶切位點,其中切割位點相同的酶不重復標注。請回答下列問題:限制酶BamHBclSau3AHind識別序列及切割位點ATCCCCTAATCAACTAGATCCTAGGCTTTTCGGGGGTGGTAAAA圖1(1)用圖中質(zhì)粒和目的基因構建重組質(zhì)粒,應選用兩種限制酶切割,酶切后的載體和目的基因片段,通過酶作用后獲

18、得重組質(zhì)粒。為了擴增重組質(zhì)粒,需將其轉(zhuǎn)入處于態(tài)的大腸桿菌。(2)為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌,應在篩選平板培養(yǎng)基中添加,平板上長出的菌落,常用PCR鑒定,所用的引物組成為圖2中。(3)若BamH酶切的DNA末端與Bcl酶切的DNA末端連接,連接部位的6個堿基對序列為,對于該部位,這兩種酶(填“都能”、“都不能”或“只有一種能”)切開。(4)若用Sau3A切圖1質(zhì)粒最多可能獲得種大小不同的DNA片段。圖1答案答案(9分)(1)Bcl和Hind連接感受(2)四環(huán)素引物甲和引物丙(3)TGATCCACTAGG都不能(4)7GGATCACCTAGT解析解析本題主要考查基因工程的相關知識。(1)分

19、析4種限制酶識別的序列可知:BamH和Bcl識別序列中含有Sau3A的識別序列,這三種酶切割DNA后可以產(chǎn)生相同的黏性末端。為保證質(zhì)粒上含有標記基因,切割質(zhì)粒時不能選用BamH和Sau3A,應選用Bcl和Hind兩種限制酶切割;酶切后的載體和目的基因片段,需用DNA連接酶連接形成重組質(zhì)粒,為了擴增重組質(zhì)粒,需將其轉(zhuǎn)入處于感受態(tài)的大腸桿菌中。(2)重組質(zhì)粒中四環(huán)素抗性基因結構完整,氨芐青霉素抗性基因結構被破壞,在篩選平板培養(yǎng)基中添加四環(huán)素可以篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌。PCR擴增目的基因時,需用引物甲和引物丙兩種引物。(3)BamH酶切產(chǎn)生的黏性末端為,Bcl酶切產(chǎn)生的黏性末端為,經(jīng)DNA連

20、接酶連接后,連接部位的6個堿基對序列為,此序列不能被BamH和Bcl識別,因此不能被兩種酶切開。(4)圖1質(zhì)粒中含有Sau3A酶的3個識別序列,如圖:(A、B、C分別表示相鄰切點間的DNA片段)用Sau3A酶切,若在一個切點處切割可得到:B+C+A、C+A+B、A+B+C三種DNA片段(但其大小相同),若在兩個切點處切割可得到:A、B+C、A+C、B、A+B、C六種DNA片段(其大小均不同);若在三個切點處均切割,可得到A、B、C三種大小不同的DNA片段,綜上所述,用Sau3A酶切質(zhì)粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段。疑難突破疑難突破準確識別出BamH酶和Bcl酶識別序列中含有Sau3A酶

21、的識別序列,是準確解答本題的關鍵。注意第(4)小題,Sau3A酶可能打開1個切點、2個切點和3個切點三種情況。9.(2016課標全國,40,15分)圖(a)中的三個DNA片段上依次表示出了EcoR、BamH和Sau3A三種限制性內(nèi)切酶的識別序列與切割位點,圖(b)為某種表達載體的示意圖(載體上的EcoR、Sau3A的切點是唯一的)。圖(a)圖(b)根據(jù)基因工程的有關知識,回答下列問題:(1)經(jīng)BamH酶切后得到的目的基因可以與上述表達載體被酶切后的產(chǎn)物連接,理由是。(2)若某人利用圖(b)所示的表達載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子,如圖(c)所示。這三種重組子中,不能在宿主細胞中表

22、達目的基因產(chǎn)物的有,不能表達的原因是。圖(c)(3)DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶,常見的有和,其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。答案答案(1)Sau3A兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端(每空2分,共4分)(2)甲和丙(2分)甲中目的基因插入在啟動子的上游,丙中目的基因插入在終止子的下游,二者的目的基因均不能被轉(zhuǎn)錄(3分,其他合理答案可酌情給分)(3)EcoliDNA連接酶T4DNA連接酶T4DNA連接酶(每空2分,共6分,其他合理答案可酌情給分)解析解析(1)分析圖(a)可知,限制酶Sau3A與BamH切割DNA后形成的黏性末端相同,故經(jīng)這兩種酶切割得到的產(chǎn)物可以用

23、DNA連接酶進行連接。(2)構建基因表達載體時,為保證目的基因能在宿主細胞中成功表達,目的基因應插入在啟動子和終止子之間,據(jù)此可判斷甲、丙均不符合要求,目的基因均不能被轉(zhuǎn)錄。(3)常見的DNA連接酶有EcoliDNA連接酶和T4DNA連接酶,其中T4DNA連接酶既能連接黏性末端又能連接平末端。解后反思解后反思本題與2012年高考理綜新課標卷第40題相類似,從而提醒我們:可以從歷年高考真題中窺探國家考試中心出題者的命題方向與角度。10.2016浙江自選,18(一)下面是關于獲得能產(chǎn)生人干擾素大腸桿菌的問題。請回答:(1)用限制性核酸內(nèi)切酶識別人干擾素基因和質(zhì)粒中一段特定的并切割,然后用連接形成重

24、組DNA。該質(zhì)粒是一種含抗生素抗性基因的核酸分子。A.雙鏈環(huán)狀B.單鏈環(huán)狀C.雙鏈線狀D.單鏈線狀(2)將含人干擾素基因的重組質(zhì)粒導入到大腸桿菌,經(jīng)含有的培養(yǎng)基篩選等過程,最終獲得能產(chǎn)生人干擾素的大腸桿菌。答案答案(1)核苷酸序列DNA連接酶A(2)抗生素解析解析(1)限制性核酸內(nèi)切酶可以識別特定的核苷酸序列并切割每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸間的磷酸二酯鍵,然后用DNA連接酶連接形成重組DNA。該大腸桿菌質(zhì)粒是一種很小的雙鏈環(huán)狀DNA分子。(2)由于該質(zhì)粒含有抗生素抗性基因,所以可以在含有抗生素的培養(yǎng)基中進行篩選,最終獲得能產(chǎn)生人干擾素的大腸桿菌。評析評析本題考查基因工程的原理及生態(tài)工程相關

25、知識。難度較小。11.(2015廣東理綜,25,6分)圖為培育轉(zhuǎn)基因山羊生產(chǎn)人-酪蛋白的流程圖。下列敘述正確的是(雙選)()A.過程所用的人-酪蛋白基因可從人cDNA文庫中獲得B.過程可選用囊胚期或原腸胚期的胚胎進行移植C.過程可使用胚胎分割技術擴大轉(zhuǎn)基因山羊群體D.過程人-酪蛋白基因在細胞質(zhì)內(nèi)進行轉(zhuǎn)錄、翻譯答案答案AC胚胎移植一般選桑椹胚或囊胚期胚胎進行移植,不能選用原腸胚,B錯誤;基因的轉(zhuǎn)錄發(fā)生在細胞核內(nèi),D錯誤。12.(2014廣東理綜,25,6分)利用基因工程技術生產(chǎn)羧酸酯酶(CarE)制劑的流程如圖所示,下列敘述正確的是(雙選)()A.過程需使用逆轉(zhuǎn)錄酶B.過程需使用解旋酶和PCR獲

26、取目的基因C.過程使用的感受態(tài)細胞可用NaCl溶液制備D.過程可利用DNA分子雜交鑒定目的基因是否已導入受體細胞答案答案AD由mRNA形成cDNA需要逆轉(zhuǎn)錄酶,A正確;過程需要使用限制酶和PCR技術獲得并擴增目的基因,B錯誤;過程使用的感受態(tài)細胞可用CaCl2溶液制備,C錯誤;工程菌是指用基因工程方法,使外源基因得到高效表達的菌類細胞株系,所以過程可利用DNA分子雜交鑒定目的基因是否已導入受體細胞,D正確。13.(2013江蘇單科,22,3分)小鼠雜交瘤細胞表達的單克隆抗體用于人體試驗時易引起過敏反應,為了克服這個缺陷,可選擇性擴增抗體的可變區(qū)基因(目的基因)后再重組表達。下列相關敘述正確的是

27、(多選)()A.設計擴增目的基因的引物時不必考慮表達載體的序列B.用PCR方法擴增目的基因時不必知道基因的全部序列C.PCR體系中一定要添加從受體細胞中提取的DNA聚合酶D.一定要根據(jù)目的基因編碼產(chǎn)物的特性選擇合適的受體細胞答案答案BD本題主要考查PCR技術的有關知識。利用PCR技術擴增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便根據(jù)這一序列設計引物,但不需知道目的基因的全部序列,需要考慮載體的序列;因PCR反應在高溫條件下進行,故反應體系中需加入耐高溫的DNA聚合酶;因某些目的基因編碼的產(chǎn)物需經(jīng)特殊的加工修飾過程,故一定要根據(jù)目的基因編碼產(chǎn)物的特性選擇合適的受體細胞。14.(201

28、5天津理綜,8,16分)纖維素分子不能進入酵母細胞。為了使酵母菌能夠利用環(huán)境中的纖維素為原料生產(chǎn)酒精,構建了含3種不同基因片段的重組質(zhì)粒。下面是酵母菌轉(zhuǎn)化及纖維素酶在工程菌內(nèi)合成與運輸?shù)氖疽鈭D。據(jù)圖回答:(1)本研究構建重組質(zhì)粒時可選用四種限制酶,其識別序列如下圖。為防止酶切片段的自身連接,可選用的限制酶組合是或。A.B.C.D.(2)設置菌株為對照,是為了驗證不攜帶纖維素酶基因。(3)纖維素酶基因的表達包括和過程。與菌株相比,在菌株、中參與纖維素酶合成和分泌的細胞器還有。(4)在以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基上分別培養(yǎng)菌株、,菌株不能存活,原因是。(5)酵母菌生成酒精的細胞部位是,產(chǎn)生酒精時細胞

29、的呼吸方式是。在利用纖維素生產(chǎn)酒精時,菌株更具優(yōu)勢,因為導入的重組質(zhì)粒含有,使分泌的纖維素酶固定于細胞壁,減少因培養(yǎng)液更新而造成的酶的流失,提高酶的利用率。答案答案(16分)(1)B(或C)C(或B)(2)質(zhì)粒DNA和酵母菌基因組(3)轉(zhuǎn)錄翻譯內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體(4)缺少信號肽編碼序列,合成的纖維素酶不能分泌到胞外,細胞無可利用的碳源(5)細胞質(zhì)基質(zhì)無氧呼吸A基因片段解析解析本題借助新情境材料考查對照實驗結果分析、基因工程、分泌蛋白表達、呼吸等相關知識,考查學生獲取信息能力、實驗能力、理解能力。(1)為防止酶切片段的自身連接,必須用不同限制酶切割,且酶切片段兩端的黏性末端不相同(不存在堿基互補片

30、段)。從圖示看,符合要求的限制酶有以下組合:、,B、C正確。(2)分析對照實驗首先要確定自變量,本題中自變量是導入含不同基因片段的重組質(zhì)粒。菌株為空白對照,與其他三個組別比較,不難發(fā)現(xiàn)設置菌株的目的是驗證質(zhì)粒自身及酵母菌原基因組不攜帶纖維素酶基因。(3)基因表達包括轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個過程。通過圖示來看菌株中,纖維素酶只分布在細胞質(zhì)基質(zhì)中,而菌株和菌株的纖維素酶分布在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、囊泡、細胞外,所以菌株、中參與纖維素酶合成和分泌的細胞器還有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體。(4)菌株、進行對比,不難發(fā)現(xiàn)信號肽的作用是引導多肽(纖維素酶)進入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)加工,再經(jīng)高爾基體分泌到胞外,這樣纖維素酶可在胞外將纖維素水解為葡

31、萄糖,供酵母菌吸收利用。而菌株纖維素酶在胞內(nèi)無法水解纖維素,故在以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基上,菌株不能存活。(5)酵母菌無氧呼吸生成酒精,場所為細胞質(zhì)基質(zhì)。菌株和均能水解纖維素產(chǎn)生酒精,兩組進行對比,菌株的纖維素酶流失多,菌株因?qū)階基因片段使得纖維素酶固定于細胞壁,減少因培養(yǎng)液更新而造成的酶的流失,酶的利用率更高。15.(2015江蘇單科,32,9分)胰島素A、B鏈分別表達法是生產(chǎn)胰島素的方法之一。圖1是該方法所用的基因表達載體,圖2表示利用大腸桿菌作為工程菌生產(chǎn)人胰島素的基本流程(融合蛋白A、B分別表示-半乳糖苷酶與胰島素A、B鏈融合的蛋白)。請回答下列問題:圖1圖2(1)圖1基因表達載體

32、中沒有標注出來的基本結構是。(2)圖1中啟動子是酶識別和結合的部位,有了它才能啟動目的基因的表達;氨芐青霉素抗性基因的作用是。(3)構建基因表達載體時必需的工具酶有。(4)-半乳糖苷酶與胰島素A鏈或B鏈融合表達,可將胰島素肽鏈上蛋白酶的切割位點隱藏在內(nèi)部,其意義在于。(5)溴化氰能切斷肽鏈中甲硫氨酸羧基端的肽鍵,用溴化氰處理相應的融合蛋白能獲得完整的A鏈或B鏈,且-半乳糖苷酶被切成多個肽段,這是因為。(6)根據(jù)圖2中胰島素的結構,請推測每個胰島素分子中所含游離氨基的數(shù)量。你的推測結果是,理由是。答案答案(9分)(1)終止子(2)RNA聚合作為標記基因,將含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌篩選出來(3)限制

33、酶和DNA連接酶(4)防止胰島素的A、B鏈被菌體內(nèi)蛋白酶降解(5)-半乳糖苷酶中含多個甲硫氨酸,而胰島素A、B鏈中不含甲硫氨酸(6)至少2個兩條肽鏈的一端各有一個游離的氨基,氨基酸R基團中可能還含有游離的氨基解析解析(1)完整的基因表達載體應包含目的基因、啟動子、終止子、標記基因等,圖1中沒有標注出終止子。(2)啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位,可驅(qū)動轉(zhuǎn)錄出mRNA;氨芐青霉素抗性基因?qū)儆跇擞浕?可利用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選出含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌。(3)構建基因表達載體需用限制酶分別切割目的基因和質(zhì)粒,再用DNA連接酶將兩者連接形成重組質(zhì)粒。(4)利用-半乳糖苷酶與胰島素A鏈或B鏈融

34、合表達的意義是將胰島素肽鏈上的蛋白酶切割位點隱藏在-半乳糖苷酶內(nèi)部,從而防止胰島素A鏈或B鏈被大腸桿菌體內(nèi)的蛋白酶降解。(5)根據(jù)溴化氰的作用特點可知,溴化氰可將-半乳糖苷酶切成多個肽段,但不會切割胰島素A、B鏈,這與肽鏈中含有的甲硫氨酸數(shù)量有關。(6)由于每條肽鏈的一端都含有一個游離的氨基,所以蛋白質(zhì)分子中游離氨基的數(shù)量=肽鏈數(shù)+R基上游離氨基數(shù),故可推測胰島素(由A、B鏈組成)至少含有2個游離的氨基。易錯警示易錯警示基因表達載體幾個組成部分中,啟動子和終止子是?？疾榈膬?nèi)容,也是易與mRNA上起始密碼子和終止密碼子相混淆的知識。避免將“游離氨基”與“氨基殘基”混淆。注意肽鏈、氨基酸、肽鍵、游

35、離氨基數(shù)、游離羧基數(shù)的規(guī)律特點。16.(2015江蘇單科,33,8分)熒光原位雜交可用熒光標記的特異DNA片段為探針,與染色體上對應的DNA片段結合,從而將特定的基因在染色體上定位。請回答下列問題:圖1圖2(1)DNA熒光探針的制備過程如圖1所示,DNA酶隨機切開了核苷酸之間的鍵從而產(chǎn)生切口,隨后在DNA聚合酶作用下,以熒光標記的為原料,合成熒光標記的DNA探針。(2)圖2表示探針與待測基因結合的原理。先將探針與染色體共同煮沸,使DNA雙鏈中鍵斷裂,形成單鏈。隨后在降溫復性過程中,探針的堿基按照原則,與染色體上的特定基因序列形成較穩(wěn)定的雜交分子。圖中兩條姐妹染色單體中最多可有條熒光標記的DNA

36、片段。(3)A、B、C分別代表不同來源的一個染色體組,已知AA和BB中各有一對同源染色體可被熒光探針標記。若植物甲(AABB)與植物乙(AACC)雜交,則其F1有絲分裂中期的細胞中可觀察到個熒光點;在減數(shù)第一次分裂形成的兩個子細胞中分別可觀察到個熒光點。答案答案(8分)(1)磷酸二酯脫氧核苷酸(2)氫堿基互補配對4(3)62和4解析解析本題主要考查DNA的結構、復制、有絲分裂和減數(shù)分裂的相關知識。(1)DNA酶可使DNA分子斷裂成為片段,為限制酶,其作用為切開兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵。合成DNA分子的原料為4種脫氧核苷酸。(2)DNA分子受熱變性,氫鍵斷裂,解旋為單鏈。探針的堿基與染色體上的

37、特定基因序列按照堿基互補配對的原則,形成雜交分子。由于每條染色單體含有一個DNA分子,一個DNA分子可以有2條熒光標記的片段,所以兩條姐妹染色單體中最多有4條熒光標記的片段,但只能觀察到兩個熒光點。(3)植物甲與植物乙雜交后代F1為AABC,在有絲分裂中期已完成了DNA復制,并且A和B都可以被熒光探針標記,所以可觀察到6個熒光點。F1AABC在減數(shù)第一次分裂形成的兩個子細胞分別含有A、AB,因此分別可觀察到2和4個熒光點。易錯警示易錯警示本題易錯答案:(1)磷酸二脂鍵,氫;DNA聚合酶,聚合酶。(2)空白或少數(shù)填“二硫”,“肽”;空白或少數(shù)填“單向?qū)钡?2,1等。;(3)6,3,2或3;3

38、,4,12,1和2,2或4。錯因分析:(1)“酯鍵”錯寫為“脂鍵”較多;很多學生被復雜背景迷惑,填寫為DNA聚合酶或聚合酶;(2)第三層次考生答題空白比較多,可能由于最后一題,部分考生來不及作答,空白較多;錯答為2,1等;(3)部分考生沒能正確審題,“分別”意味著該空有兩個數(shù)字,考生對于減數(shù)分裂和有絲分裂的知識遷移不夠,在新情境下不能靈活運用相關知識,對于熒光點的去向和數(shù)量搞不清楚,出現(xiàn)了2或4、6、3等多種答案。17.(2015福建理綜,33,10分)GDNF是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子,對損傷的神經(jīng)細胞具有營養(yǎng)和保護作用。研究人員構建了含GDNF基因的表達載體(如圖1所示),并導入到大鼠神經(jīng)干細胞中

39、,用于干細胞基因治療的研究。請回答:圖1圖2(1)在分離和培養(yǎng)大鼠神經(jīng)干細胞的過程中,使用胰蛋白酶的目的是。(2)構建含GDNF基因的表達載體時,需選擇圖1中的限制酶進行酶切。(3)經(jīng)酶切后的載體和GDNF基因進行連接,連接產(chǎn)物經(jīng)篩選得到的載體主要有3種:單個載體自連、GDNF基因與載體正向連接、GDNF基因與載體反向連接(如圖1所示)。為鑒定這3種連接方式,選擇Hpa酶和BamH酶對篩選得到的載體進行雙酶切,并對酶切后的DNA片段進行電泳分析,結果如圖2所示。圖中第泳道顯示所鑒定的載體是正向連接的。(4)將正向連接的表達載體導入神經(jīng)干細胞后,為了檢測GDNF基因是否成功表達,可用相應的與提取

40、的蛋白質(zhì)雜交。當培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞達到一定密度時,需進行培養(yǎng)以得到更多數(shù)量的細胞,用于神經(jīng)干細胞移植治療實驗。答案答案(10分)(1)使細胞分散開(2)Xho(3)(4)抗體傳代解析解析(1)因動物細胞體外培養(yǎng)時有接觸抑制現(xiàn)象,故需用胰蛋白酶處理動物組織,使細胞分散開。(2)目的基因兩端及載體DNA分子中均有Xho酶識別的核苷酸序列,故構建基因表達載體時,應用Xho酶切割DNA分子。(3)圖示可知載體中酶Hpa與Xho切割點距離為100bp,GDNF基因切割成600bp和100bp兩種DNA片段,由正向連接的重組載體中GDNF基因方向與Hpa、Xho酶切割結果可知,正向連接的重組載體被酶Hpa和

41、酶Xho切割后,將得到6000bp和700bp兩種DNA片段,即為。(4)可用抗原抗體雜交原理,對目的基因是否表達進行檢測。當培養(yǎng)液中的細胞達到一定密度后,可分瓶進行傳代培養(yǎng),以獲得更多數(shù)量的細胞。18.(2014海南單科,31,15分)下圖是將某細菌的基因A導入大腸桿菌內(nèi),制備“工程菌”的示意圖。據(jù)圖回答:(1)獲得A有兩條途徑:一是以A的mRNA為模板,在酶的催化下,合成互補的單鏈DNA,然后在的作用下合成雙鏈DNA,從而獲得所需基因;二是根據(jù)目標蛋白質(zhì)的序列,推測出相應的mRNA序列,然后按照堿基互補配對原則,推測其DNA的序列,再通過化學方法合成所需基因。(2)利用PCR技術擴增DNA

42、時,需要在反應體系中添加的有機物質(zhì)有、4種脫氧核糖核苷三磷酸和耐熱性的DNA聚合酶,擴增過程可以在PCR擴增儀中完成。(3)由A和載體B拼接形成的C通常稱為。(4)在基因工程中,常用Ca2+處理D,其目的是。答案答案(1)逆轉(zhuǎn)錄DNA聚合酶氨基酸脫氧核苷酸(2)引物模板DNA(3)重組DNA(4)提高受體細胞的轉(zhuǎn)化率解析解析(1)利用逆轉(zhuǎn)錄法合成目的基因的過程是:以mRNA為模板,在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化作用下合成單鏈DNA,然后在DNA聚合酶作用下,合成雙鏈DNA分子;根據(jù)蛋白質(zhì)工程合成目的基因的過程是:根據(jù)目標蛋白質(zhì)的氨基酸序列,推測相應的mRNA序列,然后按照堿基互補配對原則,推測DNA中脫氧核

43、苷酸的排列順序,通過化學方法合成。(2)PCR過程中需要酶、底物、模板、引物和能量等條件。(3)目的基因和運載體結合,形成重組DNA(基因表達載體)。(4)在利用大腸桿菌做受體細胞時,需要先用Ca2+處理,使之成為感受態(tài)細胞,有利于其吸收重組DNA分子。19.(2014山東理綜,36,12分)人組織纖溶酶原激活物(htPA)是一種重要的藥用蛋白,可在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中獲得。流程如下:(1)htPA基因與載體用切割后,通過DNA連接酶連接,以構建重組表達載體。檢測目的基因是否已插入受體細胞DNA,可采用技術。(2)為獲取更多的卵(母)細胞,要對供體母羊注射促性腺激素,使其。采集的精子需要

44、經(jīng)過,才具備受精能力。(3)將重組表達載體導入受精卵常用的方法是。為了獲得母羊,移植前需對已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進行。利用胚胎分割和胚胎移植技術可獲得多個轉(zhuǎn)基因個體,這體現(xiàn)了早期胚胎細胞的。(4)若在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中檢測到,說明目的基因成功表達。答案答案(1)同種限制性核酸內(nèi)切酶(或同種限制酶)DNA分子雜交(或核酸探針)(2)超數(shù)排卵獲能(處理)(3)顯微注射法性別鑒定全能性(4)htPA(或人組織纖溶酶原激活物)解析解析(1)目的基因和載體先用同種限制酶切割后,再用DNA連接酶連接,以構建基因表達載體;判斷受體細胞的DNA是否插入目的基因可采用DNA分子雜交技術。(2)利用促性

45、腺激素處理供體母羊可使其產(chǎn)生更多的卵母細胞;精子必須獲能后才具備受精能力。(3)將重組表達載體導入動物受精卵常用的方法是顯微注射法。為了獲得母羊,移植前需對已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進行性別鑒定。(4)若在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中檢測到人組織纖溶酶原激活物,說明目的基因成功表達。20.(2014天津理綜,8,12分)嗜熱土壤芽胞桿菌產(chǎn)生的-葡萄糖苷酶(BglB)是一種耐熱纖維素酶,為使其在工業(yè)生產(chǎn)中更好地應用,開展了以下試驗:.利用大腸桿菌表達BglB酶(1)PCR擴增bglB基因時,選用基因組DNA作模板。(2)上圖為質(zhì)粒限制酶酶切圖譜。bglB基因不含圖中限制酶識別序列。為使PCR擴增的b

46、glB基因重組進該質(zhì)粒,擴增的bglB基因兩端需分別引入和不同限制酶的識別序列。(3)大腸桿菌不能降解纖維素,但轉(zhuǎn)入上述構建好的表達載體后則獲得了降解纖維素的能力,這是因為。.溫度對BglB酶活性的影響(4)據(jù)圖1、2可知,80保溫30分鐘后,BglB酶會;為高效利用BglB酶降解纖維素,反應溫度最好控制在(單選)。A.50B.60C.70D.80注:酶的熱穩(wěn)定性是酶在一定溫度下,保溫一段時間后通過其活性的保持程度來反映的.利用分子育種技術提高BglB酶的熱穩(wěn)定性在PCR擴增bglB基因的過程中,加入誘變劑可提高bglB基因的突變率。經(jīng)過篩選,可獲得能表達出熱穩(wěn)定性高的BglB酶的基因。(5)

47、與用誘變劑直接處理嗜熱土壤芽胞桿菌相比,上述育種技術獲取熱穩(wěn)定性高的BglB酶基因的效率更高,其原因是在PCR過程中(多選)。A.僅針對bglB基因進行誘變B.bglB基因產(chǎn)生了定向突變C.bglB基因可快速累積突變D.bglB基因突變不會導致酶的氨基酸數(shù)目改變答案答案(12分)(1)嗜熱土壤芽胞桿菌(2)NdeBamH(3)轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶(4)失活B(5)A、C解析解析(1)BglB由嗜熱土壤芽胞桿菌產(chǎn)生,故PCR擴增bglB基因時,應選用嗜熱土壤芽胞桿菌基因組DNA作模板。(2)目的基因在與質(zhì)粒連接時,需連接在啟動子和終止子之間,且所用限制酶不能切除、破壞啟動子、

48、終止子和標記基因,所以切割質(zhì)粒應選用Nde和BamH兩種酶,則擴增的bglB基因兩端需分別引入Nde和BamH兩種酶的識別序列。(3)轉(zhuǎn)基因大腸桿菌含有的bglB基因表達,合成了耐熱的纖維素酶,所以其獲得了降解纖維素的能力。(4)由圖2可知,80保溫30分鐘后,BglB酶的相對活性為0,所以此時該酶失活;由圖1可知:6070時BglB酶的相對活性最高。70時,該酶活性易降低,所以為高效利用BglB酶降解纖維素應最好將溫度控制在60。(5)在PCR擴增bglB基因時加入誘變劑僅對該基因進行誘變,可快速累積突變,但誘發(fā)基因突變時,突變?nèi)允遣欢ㄏ虻?且突變的結果可以改變酶中氨基酸的數(shù)目。21.(20

49、13課標,40,15分,0.6526)閱讀如下資料:資料甲:科學家將牛生長激素基因?qū)胄∈笫芫阎?得到了體型巨大的“超級小鼠”;科學家采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育出轉(zhuǎn)基因煙草。資料乙:T4溶菌酶在溫度較高時易失去活性?？茖W家對編碼T4溶菌酶的基因進行了改造,使其表達的T4溶菌酶第3位的異亮氨酸變?yōu)榘腚装彼?在該半胱氨酸與第97位的半胱氨酸之間形成了一個二硫鍵,提高了T4溶菌酶的耐熱性。資料丙:兔甲和兔乙是同一物種的兩個雌性個體,科學家將兔甲受精卵發(fā)育成的胚胎移植到兔乙體內(nèi),成功產(chǎn)出兔甲的后代,證實了同一物種的胚胎可在不同個體的體內(nèi)發(fā)育。回答下列問題:(1)資料甲屬于基因工程的范疇。將基因表達載體導入

50、小鼠的受精卵中常用法。構建基因表達載體常用的工具酶是和。在培育有些轉(zhuǎn)基因植物時,常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,農(nóng)桿菌的作用是。(2)資料乙中的技術屬于工程的范疇。該工程是指以分子生物學相關理論為基礎,通過基因修飾或基因合成,對進行改造,或制造一種的技術。在該實例中,引起T4溶菌酶空間結構改變的原因是組成該酶肽鏈的序列發(fā)生了改變。(3)資料丙屬于胚胎工程的范疇。胚胎移植是指將獲得的早期胚胎移植到種的、生理狀態(tài)相同的另一個雌性動物體內(nèi),使之繼續(xù)發(fā)育成新個體的技術。在資料丙的實例中,兔甲稱為體,兔乙稱為體。答案答案(1)顯微注射限制性內(nèi)切酶DNA連接酶農(nóng)桿菌可感染植物,將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細胞中(2)蛋白質(zhì)現(xiàn)有

51、的蛋白質(zhì)新蛋白質(zhì)氨基酸(3)同供受解析解析本題綜合考查了基因工程、蛋白質(zhì)工程和胚胎工程的基本概念和原理。(1)將目的基因?qū)雱游锛毎某Ｓ梅椒ㄊ秋@微注射法;由于農(nóng)桿菌可感染植物,并且其Ti質(zhì)粒上的T-DNA具有攜帶目的基因并將目的基因整合到受體細胞染色體DNA上的能力,故培育轉(zhuǎn)基因植物時常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。(2)資料乙中的技術對T4溶菌酶完成了改造,這種對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進行改造或制造一種新蛋白質(zhì)的技術屬于蛋白質(zhì)工程。(3)資料丙中兔甲和兔乙的作用分別是提供早期胚胎和接受并孕育胚胎,兩者在胚胎工程中分別被稱為供體和受體?？键c考點2 2 基因工程的應用及蛋白質(zhì)工程基因工程的應用及蛋白質(zhì)工程1.(2014

52、重慶理綜,2,6分)生物技術安全性和倫理問題是社會關注的熱點。下列敘述,錯誤的是()A.應嚴格選擇轉(zhuǎn)基因植物的目的基因,避免產(chǎn)生對人類有害的物質(zhì)B.當今社會的普遍觀點是禁止克隆人的實驗,但不反對治療性克隆C.反對設計試管嬰兒的原因之一是有人濫用此技術選擇性設計嬰兒D.生物武器是用微生物、毒素、干擾素及重組致病菌等來形成殺傷力答案答案D在獲得轉(zhuǎn)基因植物時,要嚴格選擇目的基因,避免產(chǎn)生對人類有害的毒性蛋白或過敏蛋白等物質(zhì),A正確;當今社會的普遍觀點是禁止有關人類的生殖性克隆,但不反對治療性克隆,B正確;反對設計試管嬰兒的原因之一是有人將此技術用于設計嬰兒性別,C正確;生物武器包括致病菌、病毒、生化

53、毒劑及經(jīng)過基因重組的致病菌等,干擾素不屬于生物武器,D錯誤。2.(2014重慶理綜,4,6分)如圖是利用基因工程培育抗蟲植物的示意圖。以下相關敘述,正確的是()A.的構建需要限制性核酸內(nèi)切酶和DNA聚合酶參與B.侵染植物細胞后,重組Ti質(zhì)粒整合到的染色體上C.的染色體上若含抗蟲基因,則就表現(xiàn)出抗蟲性狀D.只要表現(xiàn)出抗蟲性狀就表明植株發(fā)生了可遺傳變異答案答案D的構建需要限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶參與,A錯誤;侵染植物細胞后,通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用,使目的基因進入植物細胞并整合到的染色體上,B錯誤;的染色體上含有目的基因(抗蟲基因)但不一定表達,C錯誤;基因工程依據(jù)的原理是基因重組,基因重組屬于

54、可遺傳變異,D正確。評析評析本題考查了基因工程的相關知識,考查了學生的理解能力,難度中等。3.(2013廣東理綜,3,4分)從某海洋動物中獲得一基因,其表達產(chǎn)物為一種抗菌性和溶血性均較強的多肽P1。目前在P1的基礎上研發(fā)抗菌性強但溶血性弱的多肽藥物,首先要做的是()A.合成編碼目的肽的DNA片段B.構建含目的肽DNA片段的表達載體C.依據(jù)P1氨基酸序列設計多條模擬肽D.篩選出具有優(yōu)良活性的模擬肽作為目的肽答案答案C由題中信息“在P1的基礎上研發(fā)抗菌性強但溶血性弱的多肽藥物”可推知本題考查蛋白質(zhì)工程的相關知識。根據(jù)蛋白質(zhì)工程的基本途徑:從預期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)設計預期的蛋白質(zhì)結構推測應有的氨基酸序

55、列找到相對應的脫氧核苷酸序列(基因),可推知答案為C。4.(2017天津理綜,9,20分)玉米自交系(遺傳穩(wěn)定的育種材料)B具有高產(chǎn)、抗病等優(yōu)良性狀,但難以直接培育成轉(zhuǎn)基因植株,為使其獲得抗除草劑性狀,需依次進行步驟、試驗。.獲得抗除草劑轉(zhuǎn)基因玉米自交系A,技術路線如下圖。(1)為防止酶切產(chǎn)物自身環(huán)化,構建表達載體需用2種限制酶,選擇的原則是(單選)。Ti質(zhì)粒內(nèi),每種限制酶只有一個切割位點G基因編碼蛋白質(zhì)的序列中,每種限制酶只有一個切割位點酶切后,G基因形成的兩個黏性末端序列不相同酶切后,Ti質(zhì)粒形成的兩個黏性末端序列相同A.B.C.D.(2)下表是4種玉米自交系幼胚組織培養(yǎng)不同階段的結果。據(jù)

56、表可知,細胞脫分化時使用的激素是,自交系的幼胚最適合培養(yǎng)成愈傷組織作為轉(zhuǎn)化受體。激素結果自交系2,4-D(2.0mg/L)6-BA(0.5mg/L)IBA(2.0mg/L)愈傷組織形成率(%)芽的分化率(%)根的誘導率(%)甲991390乙858087丙888312丁168583(3)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化愈傷組織時,T-DNA攜帶插入其內(nèi)的片段轉(zhuǎn)移到受體細胞。篩選轉(zhuǎn)化的愈傷組織,需使用含的選擇培養(yǎng)基。(4)轉(zhuǎn)化過程中,愈傷組織表面常殘留農(nóng)桿菌,導致未轉(zhuǎn)化愈傷組織也可能在選擇培養(yǎng)基上生長。含有內(nèi)含子的報告基因只能在真核生物中正確表達,其產(chǎn)物能催化無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍色。用K分別處理以下愈傷組織,出現(xiàn)藍色的是(

57、多選)。A.無農(nóng)桿菌附著的未轉(zhuǎn)化愈傷組織B.無農(nóng)桿菌附著的轉(zhuǎn)化愈傷組織C.農(nóng)桿菌附著的未轉(zhuǎn)化愈傷組織D.農(nóng)桿菌附著的轉(zhuǎn)化愈傷組織(5)組織培養(yǎng)獲得的轉(zhuǎn)基因植株(核DNA中僅插入一個G基因)進行自交,在子代含G基因的植株中,純合子占。繼續(xù)篩選,最終選育出抗除草劑純合自交系A。答案答案(共20分)(1)A(2)2,4-D乙(3)除草劑(4)BD(5)13解析解析(1)利用雙酶切可有效防止出現(xiàn)限制酶切割后的產(chǎn)物(目的基因、載體)發(fā)生自身環(huán)化及目的基因與載體的任意連接現(xiàn)象。這要求每種限制酶在Ti質(zhì)粒內(nèi)只有一個切割位點,含目的基因的DNA片段被兩種限制酶切割形成的黏性末端堿基序列不同。(2)細胞脫分化形

58、成愈傷組織。表格信息顯示,使用了2,4-D促使細胞脫分化。作為轉(zhuǎn)化受體的幼胚,不僅要易脫分化,而且還要易再分化生芽、生根,故乙的幼胚最適合培養(yǎng)成愈傷組織作為轉(zhuǎn)化受體。(3)構建的基因表達載體中有抗生素抗性基因和除草劑抗性基因(除草劑抗性基因位于T-DNA片段上),因利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)基因時,只有T-DNA整合到植物細胞染色體DNA上,故需使用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)化的愈傷組織。(4)因“含有內(nèi)含子的報告基因只能在真核生物中正確表達”,只有細胞內(nèi)含有報告基因(成功轉(zhuǎn)化)的愈傷組織,用K處理后出現(xiàn)藍色,故選BD。(5)轉(zhuǎn)基因植株相當于攜帶G基因的雜合子,轉(zhuǎn)基因植株自交,后代有3/4植株攜帶G基因,

59、其中純合子占1/3。易錯警示易錯警示轉(zhuǎn)基因植物培育過程中,篩選成功轉(zhuǎn)化的植物受體細胞的標準利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法完成植物細胞轉(zhuǎn)基因時,因只有Ti質(zhì)粒的T-DNA整合到受體細胞染色體DNA上,故篩選轉(zhuǎn)化的植物受體細胞只能借助T-DNA片段上的特殊基因作為篩選標準,而Ti質(zhì)粒上的非T-DNA片段未導入植物受體細胞,在對轉(zhuǎn)化后的受體細胞篩選時不以此作為選擇標準。5.(2017江蘇單科,33,8分)金屬硫蛋白(MT)是一類廣泛存在的金屬結合蛋白,某研究小組計劃通過多聚酶鏈式反應(PCR)擴增獲得目的基因,構建轉(zhuǎn)基因工程菌,用于重金屬廢水的凈化處理。PCR擴增過程示意圖如下,請回答下列問題:(1)從高表達MT

60、蛋白的生物組織中提取mRNA,通過獲得用于PCR擴增。(2)設計一對與MT基因兩端序列互補配對的引物(引物1和引物2),為方便構建重組質(zhì)粒,在引物中需要增加適當?shù)奈稽c。設計引物時需要避免引物之間形成,而造成引物自連。(3)圖中步驟1代表,步驟2代表退火,步驟3代表延伸,這三個步驟組成一輪循環(huán)。(4)PCR擴增時,退火溫度的設定是成敗的關鍵。退火溫度過高會破壞的堿基配對。退火溫度的設定與引物長度、堿基組成有關,長度相同但的引物需要設定更高的退火溫度。(5)如果PCR反應得不到任何擴增產(chǎn)物,則可以采取的改進措施有(填序號:升高退火溫度降低退火溫度重新設計引物)。答案答案(8分)(1)逆轉(zhuǎn)錄cDNA

61、(2)限制性核酸內(nèi)切酶堿基互補配對(3)變性(4)引物與模板GC含量高(5)解析解析本題主要考查目的基因的獲取及PCR技術的有關知識。(1)依據(jù)題中表述現(xiàn)象分析,mR-NA合成目的基因的過程應為逆轉(zhuǎn)錄過程,由mRNA直接逆轉(zhuǎn)錄形成的DNA為cDNA。(2)構建重組質(zhì)粒時需要限制酶和DNA連接酶,因此推測在引物中需要增加適當?shù)南拗泼缸R別的位點。設計引物時需要注意避免引物1和引物2之間形成堿基互補配對。(3)圖中步驟1代表變性。(4)退火溫度過高會破壞引物與模板鏈之間的堿基互補配對。由于含G/C堿基對多的DNA穩(wěn)定性強,因此在PCR過程中設置的溫度應視G/C的含量而定。(5)溫度過高不利于引物與模

62、板結合;引物設計不合理也會影響PCR擴增反應。知識歸納知識歸納關于引物的幾個問題:引物是一小段DNA或RNA,它能與DNA母鏈的一段堿基序列互補配對,其長度通常為2030個核苷酸。由于PCR利用了DNA的熱變性原理,因此溫度的高低直接影響DNA變性、復性和延伸的過程,特別是復性的過程即題中的退火過程,它關乎引物是否能與模板鏈結合,只有二者結合后才有可能進行“延伸”。結合DNA結構特點,A與T之間有2個氫鍵、C與G之間有3個氫鍵的知識分析,引物中含堿基不同耐溫程度不同,其中含C/G較多的引物,PCR擴增時溫度可適當提高。6.(2015課標,40,15分,0.4173)已知生物體內(nèi)有一種蛋白質(zhì)(P

63、),該蛋白質(zhì)是一種轉(zhuǎn)運蛋白,由305個氨基酸組成。如果將P分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸,240位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸,改變后的蛋白質(zhì)(P1)不但保留P的功能,而且具有了酶的催化活性。回答下列問題:(1)從上述資料可知,若要改變蛋白質(zhì)的功能,可以考慮對蛋白質(zhì)的進行改造。(2)以P基因序列為基礎,獲得P1基因的途徑有修飾基因或合成基因。所獲得的基因表達時是遵循中心法則的,中心法則的全部內(nèi)容包括的復制;以及遺傳信息在不同分子之間的流動,即:。(3)蛋白質(zhì)工程也被稱為第二代基因工程,其基本途徑是從預期蛋白質(zhì)功能出發(fā),通過和,進而確定相對應的脫氧核苷酸序列,據(jù)此獲得基因,再經(jīng)表達、純化獲得蛋白質(zhì),

64、之后還需要對蛋白質(zhì)的生物進行鑒定。答案答案(1)氨基酸序列(或結構)(1分,其他合理答案也給分)(2)PP1(每空2分,共4分)DNA和RNA(或遺傳物質(zhì))(2分)DNARNA、RNADNA、RNA蛋白質(zhì)(或轉(zhuǎn)錄、逆轉(zhuǎn)錄、翻譯)(3分)(3)設計蛋白質(zhì)的結構推測氨基酸序列(每空2分,共4分)功能(1分)解析解析(1)蛋白質(zhì)的功能與結構相關,若要改變蛋白質(zhì)的功能,需要對其結構進行改造。(2)確定目的基因的堿基序列后,可通過對現(xiàn)有基因進行改造或者重新合成來獲得目的基因。中心法則的內(nèi)容包括遺傳信息的復制、轉(zhuǎn)錄、逆轉(zhuǎn)錄和翻譯。(3)蛋白質(zhì)工程的基本途徑是從預期蛋白質(zhì)功能出發(fā),通過設計蛋白質(zhì)的結構和推測

65、氨基酸序列,進而確定相對應的脫氧核苷酸序列。獲得蛋白質(zhì)之后要對蛋白質(zhì)的生物功能進行鑒定。7.(2014課標,40,15分,0.5599)植物甲具有極強的耐旱性,其耐旱性與某個基因有關。若從該植物中獲得該耐旱基因,并將其轉(zhuǎn)移到耐旱性低的植物乙中,有可能提高后者的耐旱性。回答下列問題:(1)理論上,基因組文庫含有生物的基因;而cDNA文庫中含有生物的基因。(2)若要從植物甲中獲得耐旱基因,可首先建立該植物的基因組文庫,再從中出所需的耐旱基因。(3)將耐旱基因?qū)朕r(nóng)桿菌,并通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將其導入植物的體細胞中,經(jīng)過一系列的過程得到再生植株。要確認該耐旱基因是否在再生植株中正確表達,應檢測此再生植株

66、中該基因的,如果檢測結果呈陽性,再在田間試驗中檢測植株的是否得到提高。(4)假如用得到的二倍體轉(zhuǎn)基因耐旱植株自交,子代中耐旱與不耐旱植株的數(shù)量比為3 1時,則可推測該耐旱基因整合到了(填“同源染色體的一條上”或“同源染色體的兩條上”)。答案答案(1)全部(2分)部分(2分,其他合理答案也給分)(2)篩選(2分,其他合理答案也給分)(3)乙(2分)表達產(chǎn)物(2分,其他合理答案也給分)耐旱性(2分)(4)同源染色體的一條上(3分)解析解析(1)基因組文庫包含某種生物的全部基因,cDNA文庫又稱為部分基因文庫,含有生物的部分基因。(2)植物甲基因組文庫中有該種植物的全部基因,從中可篩選出耐旱基因。(3)植物乙的耐旱性低,所以植物乙體細胞作為受體細胞;要確定耐旱基因是否正確表達,應檢測該基因的表達產(chǎn)物,對于個體水平的檢測,應在干旱的田間進行試驗,檢測植物乙耐旱性是否得到了提高。(4)將耐旱基因看作A,不耐旱基因看作a,AaAa耐旱與不耐旱數(shù)量比為3 1,則耐旱基因整合到了同源染色體的一條上。以下為教師用書專用8.(2013江蘇單科,15,2分)下列關于轉(zhuǎn)基因生物安全性的敘述中,錯誤的是()A.