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1、第十一章維生素類藥物的分析 桂林醫(yī)學(xué)院藥學(xué)-唐巖松 第十一章 維生素類藥物的分析 維生素是維持人體正常代謝功能所必需的生物活性物質(zhì)。從結(jié)構(gòu)上看，它們并非同屬于一類化合物。其中，有些是醇、酚或酯，有些則是醛、胺或酸類，它們各自具有不同的理化性質(zhì)和生理作用。關(guān)于維生素的分類，迄今為止，仍沿用其在油脂中和水中的溶解度不同而分為脂溶性和水溶性兩大類。其中，屬于脂溶性的有維生素A、D、E和K等；水溶性的有維生素B族、煙酸、泛酸、葉酸及抗壞血酸等。 本類藥物的分析方法大多基于其生物特性及理化性質(zhì)

2、，可分別采用生物、微生物、化學(xué)和物理化學(xué)的方法進(jìn)行分析，但目前常用的分析方法是化學(xué)和物理化學(xué)法。 本章不擬對(duì)所有的維生素類藥物的分析方法逐一敘述，而只著重介紹維生素A、E、B1和C四種維生素藥物的鑒別、檢查和含量測(cè)定。 第一節(jié) 維生素A的分析 維生素A(vitamin A)，通常是指維生素A1(視黃醇，retinol)。維生素Al是一種不飽和脂肪醇，在自然界中，其天然產(chǎn)物主要來(lái)源于鮫類無(wú)毒海魚肝臟中提取的脂肪油(即魚肝油)，其含量高達(dá)600000國(guó)際單位/克(U/g)，但目前主要采用人工合成方法制取。從魚肝油中提取的維生素A多為各種酯類的混合物，其中主要為醋酸酯和棕櫚

3、酸酯(表ll-1)。 表ll-l天然維生素A的主要組分 《中國(guó)藥典》收載的維生素A，是人工合成的維生素A醋酸酯結(jié)晶加精制植物油制成的油溶液，其制劑有維生素A膠丸、維生素AD膠丸和維生素AD滴劑三個(gè)品種。 一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) (一)結(jié)構(gòu) 維生素A的結(jié)構(gòu)為具有一個(gè)共軛多烯側(cè)鏈的環(huán)己烯，因而具有許多立體異構(gòu)體。天然維生素A主要是全反式維生素A，尚有多種其它異構(gòu)體，它們具有相似的化學(xué)性質(zhì)，但各具不同的光譜特性和生物效價(jià)(見表)。 維生素A及其異構(gòu)體性質(zhì) 此外，魚肝油中尚含有：去氫維生素A(Dehydroretinol，維生素A2)，其生物效價(jià)僅為維生素A1的40

4、％；去水維生素A(Anhydroretinol，維生素A3)，其效價(jià)亦低于維生素A1；鯨醇(Kitol)系維生素A醇的二聚體，無(wú)生物活性。這些物質(zhì)也有紫外吸收，并能與顯色試劑產(chǎn)生相近顏色。所以，在測(cè)定維生素A含量時(shí)必須考慮這些干擾因素。 去氫維生素A(A2，Dehydroretmol) （二）性質(zhì) 維生素A易溶于乙醚、氯仿、異丙醇、環(huán)己烷、脂肪和植物油，微溶于乙醇，在水中不溶。中國(guó)藥典收載的維生素A為合成維生素A醋酸酯結(jié)晶的精制植物油溶液。 維生素A能與三氯化銻作用呈色、在紫外光區(qū)呈強(qiáng)吸收，可用于鑒別和含量測(cè)定。 二、鑒別試驗(yàn) (一)三氯化銻反應(yīng) 1、原理

5、 三氯化銻反應(yīng)又稱Carr-Price反應(yīng)，反應(yīng)原理是在三氯甲烷中，維生素A與三氯化銻反應(yīng)顯藍(lán)色，漸變?yōu)樽霞t色。反應(yīng)機(jī)理為維生素A和氯化銻(Ⅲ)中存在的親電試劑氯化高銻(V)作用形成不穩(wěn)定的藍(lán)色正碳離子。 2、鑒別方法 取維生素A 1滴，加三氯甲烷lOml振搖使溶解，取出2滴，加三氯甲烷2ml與25％三氯化銻的三氯甲烷溶液0.5ml，即顯藍(lán)色，漸變成紫紅色。 3、注意事項(xiàng) 反應(yīng)需在無(wú)水、無(wú)醇條件下進(jìn)行。因?yàn)樗墒谷然R水解成氯化氧銻(SbOCl)，而乙醇可與正碳離子作用，使正電荷消失。 (二)紫外-可見分光光度法 (三)薄層色譜法 三、含量測(cè)定 維生素A

6、及其制劑的含量測(cè)定方法，最初采用生物學(xué)方法測(cè)定其生物活性，因該法操作繁瑣費(fèi)時(shí)、準(zhǔn)確度與重現(xiàn)性差，后來(lái)被三氯化銻比色法所替代；而三氯化銻法的反應(yīng)專屬性差，呈色極不穩(wěn)定，測(cè)定結(jié)果受水分和溫度的影響較大，目前各國(guó)藥典均收載紫外-可見分光光度法作為維生素A的含量測(cè)定方法。下面主要介紹中國(guó)藥典收載的紫外-可見分光光度法(三點(diǎn)校正法)，并簡(jiǎn)要介紹高效液相色譜法。 (一)紫外-可見分光光度法 維生素A在325～328nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)有最大吸收，可用于含量測(cè)定。其最大吸收波長(zhǎng)隨溶劑的不同而變化，表11-2為維生素A醇及其醋酸酯在不同溶劑中的最大吸收波長(zhǎng)、吸收系數(shù)和換算因數(shù)。 本法快速、準(zhǔn)確，測(cè)

7、定結(jié)果能較正確地反映出維生素A的生物效價(jià)。由于維生素A原料中?；煊衅渌镔|(zhì)，如多種異構(gòu)體、合成中間體、副產(chǎn)物、氧化降解產(chǎn)物；維生素A制劑中含稀釋用油。這些雜質(zhì)在325～328nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)也有吸收，對(duì)維生素A的測(cè)定產(chǎn)生干擾。為消除非維生素A產(chǎn)生的無(wú)關(guān)吸收所帶來(lái)的誤差，應(yīng)用“三點(diǎn)校正法”測(cè)定，即在三個(gè)波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度后，在規(guī)定的條件下用校正公式進(jìn)行校正，然后計(jì)算。 1、方法原理 三點(diǎn)校正法是在三個(gè)波長(zhǎng)處測(cè)得吸光度，根據(jù)校正公式計(jì)算吸光度A校正值后，計(jì)算含量，因此稱為“三點(diǎn)校正法”。方法原理主要基于兩點(diǎn)： (1)物質(zhì)對(duì)光的吸收具有加和性，即在供試品的吸收曲線中，各波長(zhǎng)處的吸光度是維生

8、素A與無(wú)關(guān)吸收(雜質(zhì)吸收)的代數(shù)和。 (2)雜質(zhì)的無(wú)關(guān)吸收在310～340nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)可視為一條直線，且隨波長(zhǎng)的增大吸光度下降。 2、波長(zhǎng)選擇 三點(diǎn)波長(zhǎng)的選擇原則：一點(diǎn)選擇在維生素A的最大吸收波長(zhǎng)處(即λ1)；其余兩點(diǎn)選擇在λ1的兩側(cè)各選一點(diǎn)(λ2和λ3)。 (1)第一法：即等波長(zhǎng)差法。 (2)第二法：即等吸收比法。 3、生物效價(jià)及換算因數(shù) (1)生物效價(jià)的定義 維生素A的含量仍沿用生物效價(jià)(國(guó)際單位，U)表示。效價(jià)(U/g)是指每克供試品中所含維生素A的國(guó)際單位數(shù)(U/g)維生素A的國(guó)際單位規(guī)定如下： 1國(guó)際單位維生素A=0.300ug的全反式維生

9、素A醇 =0.344ug的全反式維生素A醋酸酯 將計(jì)算出的供試品吸收系數(shù)與換算因數(shù)(見表1l-2)相乘，即得供試品的生物效價(jià)。 (2)換算因數(shù)的含義 換算因數(shù)是單位數(shù)值所相當(dāng)?shù)纳镄r(jià)，即： (3)維生素A醋酸酯換算因數(shù)的計(jì)算 已知，0.344ug的維生素A醋酸酯相當(dāng)于1個(gè)維生索A單位，則1g維生素A醋酸酯(純品)所相當(dāng)?shù)木S生素A單位數(shù)： 又知，維生素A醋酸酯(純品)的吸收系數(shù)E1%1cm (328,環(huán)已烷)，為1530，則： 4、測(cè)定方法 中國(guó)藥典視供試品的純度，采用不同的測(cè)定方法及數(shù)

10、據(jù)處理對(duì)維生素A原料及制劑的生物效價(jià)進(jìn)行測(cè)定。維生素A測(cè)定法有兩種方法，即“第一法”和“第二法”。合成的維生素A和天然魚肝油中的維生素A均是維生素A酯，如果供試品中干擾測(cè)定的雜質(zhì)較少，能符合第一法測(cè)定的規(guī)定時(shí)，可直接用溶劑溶解供試品后測(cè)定；否則應(yīng)按第二法，經(jīng)皂化提取除去干擾后測(cè)定。 (1)第一法(直接測(cè)定法) 本法適用于純度較高的維生素A醋酸酯。取供試品(維生素A醋酸酯)適量，精密稱定，加環(huán)己烷溶解并定量稀釋成每lml中含9～15U的溶液，照分光光度法，測(cè)定其吸收峰的波長(zhǎng)，并在表11-3所列各波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算各吸光度與波長(zhǎng)328nm處吸光度的比值和波長(zhǎng)328nm處的值(由公式

11、，求得)。 ①如果最大吸收波長(zhǎng)在326～329nm之間，且5個(gè)波長(zhǎng)處的差值均不超過(guò)±0.02，用下式計(jì)算含量： 維生素A醋酸酯占標(biāo)示量的百分含量： 例1：稱取維生素A供試品（標(biāo)示量為100萬(wàn)單位/g）0.1128g，用環(huán)己烷配成100ml溶液，精密量取此溶液1ml，用環(huán)己烷稀釋至100ml，在波長(zhǎng)300，316，328，340和360nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，分別為0.332，0.533，0.587，0.477和0.176。計(jì)算維生素A相當(dāng)于標(biāo)示量的百分含量？ 解： 最大吸收波長(zhǎng)在326～329nm之間，且5個(gè)波長(zhǎng)處的差值均不超過(guò)±0.02，用下式計(jì)算含量： 答

12、：維生素A標(biāo)示量％為98.9％。 ②如果最大吸收波長(zhǎng)在326～329nm之間，分別計(jì)算5個(gè)波長(zhǎng)處的差值，如有一個(gè)或一個(gè)以上超過(guò)±0.02，應(yīng)按下式計(jì)算校正吸光度： (1l-3) 然后，計(jì)算校正吸光度與(實(shí)測(cè))吸光度之差對(duì)(實(shí)測(cè))吸光度的相對(duì)偏差，即： (1l-4) 再按以下方法計(jì)算含量： 如果式(1l-4)的值未超過(guò)±3.0％(即在-3.0％～+3.0％范圍內(nèi))，則不用校正吸光度，而仍用A328計(jì)算含量。 例2：現(xiàn)有標(biāo)式量為1萬(wàn)/丸的VitA膠丸(平均每丸內(nèi)含物為0.2000克),今稱取樣品內(nèi)含物0.1920克,溶于環(huán)己烷并稀釋到1000ml,

13、于下列波長(zhǎng)測(cè)得吸收度為： 波長(zhǎng)(nm) 300 316 328 340 360 吸收度 0.265 0.450 0.500 0.410 0.150 求該丸劑中VitA的標(biāo)示量百分含量。換算因素為1900。 解： （1） 波長(zhǎng)(nm) 300 316 328 340 360 吸收度比值 0.530 0.907 1.000 0.820 0.300 規(guī)定的比值 0.555 0.907 1

14、.000 0.811 0.229 二種比值之差 -0.025 -0.007 0.000 +0.009 +0.071 （2）最大吸收波長(zhǎng)在326～329nm之間，分別計(jì)算5個(gè)波長(zhǎng)處的差值，有一個(gè)或一個(gè)以上超過(guò)±0.02，按下式計(jì)算校正吸光度： A328(校正) ＝3.52(2A328 -A316 -A340 )＝0.493 因?yàn)?，未超過(guò)-3.0%,故仍以A328(測(cè)定) 計(jì)算含量。 （3）用下式計(jì)算含量： 答：該丸劑中VitA的標(biāo)示量百分含量為99.0％。 如果式(1l-4)的值在-15％～-3.0％之間，則以校正吸光度計(jì)算含量。

15、 例3：維生素AD膠丸的測(cè)定：精密稱取維生素AD膠丸裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物重0.1287g（每丸內(nèi)容物的平均裝量0.07985g），置10ml燒杯中，加環(huán)己烷溶解并定量轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻；精密量取2ml，置另一50ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻。以環(huán)己烷為空白，測(cè)得最大吸收波長(zhǎng)為328nm，并分別于300、316、328、340和360nm的波長(zhǎng)處測(cè)得吸收度如下。求膠丸中維生素A占標(biāo)示量的百分含量？已知標(biāo)示量每丸含維生素A 10000單位。 波長(zhǎng)（nm） 300 316 328 340 360 測(cè)得吸收度（A） 0.374 0.592

16、0.663 0.553 0.228 解： 最大吸收波長(zhǎng)在326～329nm之間，分別計(jì)算5個(gè)波長(zhǎng)處的差值，有一個(gè)或一個(gè)以上超過(guò)±0.02，按下式計(jì)算校正吸光度： 因?yàn)?，超過(guò)-3.0%,故以A328(校正) 計(jì)算含量。 用下式計(jì)算含量： 答：維生素A醋酸酯膠丸占標(biāo)示量的百分含量為93.9％。 如果式(11-4)的值超過(guò)-15％或+3％(即小于-15％或大于+3％)，不能用本法測(cè)定，須按第二法測(cè)定。如果最大吸收波長(zhǎng)不在326～329nm之間，也只能采用第二法。 上述應(yīng)用如圖(11-2)所示： (2)第二法(皂化

17、法) 精密稱取供試品適量(約相當(dāng)于維生素A總量500U以上，重量不大于2g)，加乙醇30ml與50％(g/g)氫氧化鉀溶液3ml，水浴煮沸回流，皂化液用不含過(guò)氧化物的乙醚提取并稀釋至250ml，精密量取適量，經(jīng)低溫蒸餾、減壓干燥后，迅速用異丙醇溶解并稀釋成每lml中含維生素A 9～15U的溶液，在300nm、310nm、325nm、340nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，并確定最大吸收波長(zhǎng)(應(yīng)為325nm)。用下式計(jì)算校正吸光度： (1l-5) ①如果最大吸收波長(zhǎng)在323～327nm之間，而且300nm與325nm波長(zhǎng)處吸光度的比值不大于0.73，按下面的方法計(jì)算： 如果的值

18、在±3.0％范圍內(nèi)，直接用A325代入公式求得： 每1g供試品中含有的維生素A醇國(guó)際單位數(shù)，即效價(jià)：。 維生素A醇占標(biāo)示量的百分含量： 如果的值超出±3.0％范圍，則用校正公式計(jì)算吸光度，用計(jì)算效價(jià)。 ②如果最大吸收波長(zhǎng)不在323～327nm之間，或者300 nm與325 nm波長(zhǎng)處吸光度的比值大于0.73時(shí)，說(shuō)明供試品中雜質(zhì)太多，應(yīng)另取上述皂化后的乙醚提取液，采用色譜法純化后進(jìn)行測(cè)定。 5、討論 (1)對(duì)維生素A測(cè)定有影響的雜質(zhì)，主要包括下列幾種。 維生素A2和維生素A3；維生素A的氧化產(chǎn)物(環(huán)氧化物)、維生素A醛和維生素A酸；維生素

19、A在光照下產(chǎn)生的無(wú)生物活性的聚合物鯨醇；維生素A的異構(gòu)體；合成時(shí)的中間體等。 這些雜質(zhì)在310～340nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)均有吸收，因此在測(cè)定維生素A的含量時(shí)，必須考慮它們的干擾，常用三點(diǎn)校正法。 (2)應(yīng)用三點(diǎn)校正法時(shí)，除其中一點(diǎn)在最大吸收波長(zhǎng)處外，其余兩點(diǎn)均在最大吸收峰的兩側(cè)(上升或下降的陡坡處)。如果儀器波長(zhǎng)精度不夠時(shí)，會(huì)產(chǎn)生較大誤差，因此，測(cè)定前務(wù)必校正波長(zhǎng)。測(cè)定應(yīng)在半暗室中盡快進(jìn)行。 (二)高效液相色譜法 第二節(jié) 維生素E的分析 維生素E(vitamin E)為α-生育酚(α-tocopherols)及其酯。天然品為右旋體，合成品為消旋體，右旋體與消旋體的效

20、價(jià)比為1.4:10，藥用品一般為合成品。中國(guó)藥典收載的維生素E是消旋α-生育酚醋酸酯，同時(shí)收載了維生素E粉劑、片劑、膠丸與注射液。USP(25)收載了右旋或消旋α-生育酚及其醋酸酯和琥珀酸酯。 一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) (一)結(jié)構(gòu) 維生素E為苯并二氫吡喃醇(色滿醇)衍生物，在苯環(huán)上有羥基，因此又被稱為生育酚(tocopherols)，主要有α、β、γ和δ四種異構(gòu)體，其中α異構(gòu)體的活性最強(qiáng)。 (二)性質(zhì) 4、易氧化性 游離生育酚暴露于空氣和日光中，極易被氧化變色；維生素E在無(wú)氧條件下對(duì)熱穩(wěn)定，加熱至200℃也未被破壞，但對(duì)氧十分敏感，遇光、空氣可被氧化，氧化產(chǎn)物為醌型化合物

21、。 二、鑒別試驗(yàn) (二)三氯化鐵反應(yīng) 維生素E在堿性條件下發(fā)生水解，生成游離生育酚，經(jīng)乙醚提取后，生育酚被Fe3+氧化生成對(duì)生育醌；同時(shí)Fe3+被還原成Fe2+，F(xiàn)e2+與聯(lián)吡啶生成血紅色的配位離子。 鑒別方法：取本品約10mg，加乙醇制氫氧化鉀試注2ml，煮沸5min，放冷，加水4ml與乙醚10ml，振搖，靜置使分層；取乙醚液2ml，加2，2′-聯(lián)吡啶的乙醇溶液(0.5→100)數(shù)滴與三氯化鐵的乙醇溶液(0.2→100)數(shù)滴，應(yīng)顯血紅色。 三、維生素E中游離生育酚的檢查 四、含量測(cè)定 維生素E的含量測(cè)定方法較多，主要是利用其水解產(chǎn)物游離生育酚的易

22、氧化性質(zhì)，在酸性或堿性條件下水解后，用硫酸鈰標(biāo)準(zhǔn)液直接滴定；或?qū)e3+還原為Fe2+后，再與不同試劑反應(yīng)生成配位化合物后比色測(cè)定；也可用硝酸氧化，與鄰苯二胺縮合后熒光測(cè)定。近年來(lái)多采用氣相色譜法，方法的專屬性強(qiáng)、簡(jiǎn)便快速，適用于維生素E及制劑的分析。 第三節(jié) 維生素B1的分析 一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) (一)結(jié)構(gòu) 維生素Bl(vitamin B1)，又稱鹽酸硫胺(thiamine hydrochloride)，是由氨基嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)通過(guò)亞甲基連結(jié)而成的季銨類化合物，化學(xué)名稱為氯化4-甲基-3[(2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基)甲基]-5-(2-羥基乙基)噻唑鹽酸鹽。噻唑環(huán)上季銨

23、及嘧啶環(huán)上氨基，為堿性基團(tuán)，可與酸成鹽，如鹽酸、硝酸和氫溴酸。 (二)性質(zhì) 4、與生物堿沉淀劑的反應(yīng) 結(jié)構(gòu)中有兩個(gè)雜環(huán)(嘧啶環(huán)和噻唑環(huán))，可與生物堿沉淀劑(如碘化汞鉀、三硝基酚、碘溶液和硅鎢酸等)生成沉淀。 5、硫色素反應(yīng) 噻唑環(huán)在堿性介質(zhì)中可開環(huán)，再與嘧啶環(huán)上的氨基環(huán)合，被鐵氰化鉀氧化生成具有熒光的硫色素，在正丁醇中顯藍(lán)色熒光。 二、鑒別試驗(yàn) (一)硫色素反應(yīng) 1、原理 硫色素(thioehrome)反應(yīng)是維生素B1在堿性條件下，被鐵氰化鉀氧化生成硫色素。硫色素溶于正丁醇(或異丁醇)中，顯藍(lán)色熒光。反應(yīng)式如下： 本反應(yīng)為維生素B1的專屬

24、反應(yīng)，各國(guó)藥典多以此反應(yīng)作鑒別。 三、含量測(cè)定 維生素B1及其制劑的常用含量測(cè)定方法有：硅鎢酸重量法、硫色素?zé)晒夥?、紫外分光光度法及非水溶液滴定法等?，F(xiàn)介紹硅鎢酸重量法如下： 1、原理：維生素B1在酸性溶液中，能與硅鎢酸定量地生成組成恒定的硅鎢酸鹽沉淀，其組成為(C12H17ClN4OS)2·SiO2(OH)2·12WO3·4H2O，摩爾質(zhì)量為3479．22。根據(jù)沉淀及供試品的重量即可計(jì)算維生素B1含量。 2、測(cè)定方法 [中國(guó)藥典(1990年版)] 取本品約50mg，精密稱定，加水50ml溶解后，加鹽酸2ml，煮沸。立即滴加硅鎢酸試液4ml，繼續(xù)煮沸2分鐘，用8

25、0C恒重的垂熔玻璃坩堝濾過(guò)，沉淀先用煮沸的鹽酸溶液(1→20)20m1分次洗滌，再用水10ml洗滌1次，最后用丙酮洗滌2次，每次5ml，在80C干燥至恒重，精密稱定，所得沉淀重量與0.1939相乘，即得供試量中含有C12H17ClN4OS·HCl的重量。 3、操作中應(yīng)注意問(wèn)題 本法操作中應(yīng)注意鹽酸、硅鎢酸的用量，以及沉淀干燥的溫度。①在鹽酸酸性下沉淀，可得到易于濾過(guò)的沉淀顆粒，若鹽酸用量不足，會(huì)使沉淀過(guò)細(xì)，濾過(guò)時(shí)會(huì)穿過(guò)濾器，一般以加鹽酸2ml或稍多為宜；②加熱煮沸可促使沉淀顆粒增大，便于濾過(guò)；③沉淀劑硅鎢酸的用量與維生素B1的重量比應(yīng)不低于8：1，太少時(shí)，測(cè)得結(jié)果偏低；④干燥溫度與沉淀中結(jié)

26、晶水的含量有關(guān)，經(jīng)研究證實(shí)：若在80C干燥3小時(shí)后，室溫冷卻30分鐘稱量時(shí)，即可恢復(fù)失去的結(jié)晶水，故中國(guó)藥典(1990年版)規(guī)定在80℃干燥至恒重。 此外，沉淀劑加入的快慢、煮沸時(shí)間的長(zhǎng)短，以及沉淀的洗滌等因素也將直接影響測(cè)定結(jié)果，應(yīng)予注意。沉淀劑的加入不宜過(guò)快；沉淀劑加入后，煮沸時(shí)間應(yīng)以2～5分鐘為宜；沉淀的洗滌宜快速，且用量不宜過(guò)大，否則由于沉淀溶解使結(jié)果偏低。 硅鎢酸重量法為測(cè)定維生素B1的經(jīng)典方法，其結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定，為中國(guó)藥典(1990年版)所采用。但本法操作繁瑣、費(fèi)時(shí)，故中國(guó)藥典(1995年版)改用非水滴定法，而對(duì)維生素B1片劑及注射劑采用直接紫外分光光度法。 第四節(jié) 維生

27、素C的分析 維生素C(vitamin C)又稱L-抗壞血酸(L-aseorbie acid)。維生素C在化學(xué)結(jié)構(gòu)上和糖十分相似，有兩個(gè)手性碳原子，有四種光學(xué)異構(gòu)體，其中以L構(gòu)型右旋體的生物活性最強(qiáng)。中、美、英、日等國(guó)藥典收載的都是L-抗壞血酸。 一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) (一)結(jié)構(gòu) (二)性質(zhì) 4、酸性 維生素C分子中具有烯二醇結(jié)構(gòu)，由于受共軛效應(yīng)的影響，C3-OH酸性較強(qiáng)(pK1=4.17)，C2-OH酸性較弱(pK2=11.5)，故維生素C一般表現(xiàn)為一元酸，可與碳酸氫鈉作用生成鈉鹽。 6、還原性 分子結(jié)構(gòu)中的烯二醇基具有極強(qiáng)的還原性，易被氧化為二酮基而生成去氫抗壞血酸

28、，后者亦可被氫化還原為抗壞血酸。同時(shí)，去氫抗壞血酸在堿性或強(qiáng)酸性溶液中，可進(jìn)一步水解生成2，3-二酮古洛糖酸而失活，此反應(yīng)為不可逆反應(yīng)。 二、鑒別試驗(yàn) (一)硝酸銀反應(yīng) 維生素C分子中有烯二醇結(jié)構(gòu)，具有極強(qiáng)的還原性，可被硝酸銀氧化為去氫維生素C，同時(shí)產(chǎn)生黑色銀沉淀。 鑒別方法：取本品0.2g，加水10ml溶解。取該溶液5ml，加硝酸銀試液0.5ml，即生成金屬銀黑色沉淀。 (二)2，6-二氯靛酚鈉反應(yīng) 2，6-二氯靛酚為一氧化性的染料，其氧化型在酸性介質(zhì)中為玫瑰紅色，堿性介質(zhì)中為藍(lán)色。當(dāng)2，6-二氯靛酚鈉與維生素C作用后，被還原成無(wú)色的酚亞胺。

29、 鑒別方法：取本品0.2g，加水10ml溶解。取該溶液5ml，加2，6-二氯靛酚試液l～2滴，試液的顏色即消失。 (三)堿性酒石酸銅反應(yīng) 維生素C鈉具有還原性，與堿性酒石酸銅試液共熱，可將Cu2+還原，生成紅色氧化亞銅沉淀。 鑒別方法：取維生素C鈉水溶液(1→50)4ml，加鹽酸溶液lml，加堿性酒石酸銅試液數(shù)滴，加熱，生成紅色沉淀。 中國(guó)藥典(1995年版)即采用硝酸銀反應(yīng)和2，6-二氯吲哚酚反應(yīng)進(jìn)行鑒別。USP(XXl)則用堿性酒石酸銅溶液（斐林氏液）反應(yīng)鑒別。 三、含量測(cè)定 維生素C的含量測(cè)定方法大多是基于其較強(qiáng)的還原性，可被不同氧化劑

30、定量氧化的性質(zhì)。由于容量分析法簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確，被各國(guó)藥典所采用，如碘量法、2，6-二氯靛酚(2，6-二氯吲哚酚)法和鈰量法等。為適應(yīng)復(fù)方制劑和體液中微量維生素C的測(cè)定，先后發(fā)展了紫外-可見分光光度法、熒光法和高效液相色譜法等。 教學(xué)要求： 一、掌握以下內(nèi)容： 1、紫外分光光度法測(cè)定維生素A含量的判斷與計(jì)算；生物效價(jià)及換算因數(shù)； 2、維生素B1的鑒別反應(yīng)：硫色素(Thiochrome)反應(yīng)； 3、維生素C的含量測(cè)定：碘量法的原理、指示終點(diǎn)的原理、注意事項(xiàng)。 二、熟悉以下內(nèi)容： 1、常見藥品的結(jié)構(gòu)和特點(diǎn)； 2、維生素A的鑒別反應(yīng)：三氯化銻反應(yīng)(Carr-Price反應(yīng)) 3、維生素E的鑒別反應(yīng)：三氯化鐵反應(yīng) 4、維生素B1的性質(zhì)； 5、維生素B1的鑒別反應(yīng)：沉淀反應(yīng)； 6、維生素C的性質(zhì)、鑒別試驗(yàn)。 三、了解其他的內(nèi)容。 第 10 頁(yè) 共 10 頁(yè)