《高中生物 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)課件 新人教版選修1》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《高中生物 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)課件 新人教版選修1（60頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、專題專題2 :2 :微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用微生物包括微生物包括真菌真菌原生動(dòng)物原生動(dòng)物特點(diǎn)：特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡(jiǎn)單結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡(jiǎn)單, ,個(gè)體多數(shù)十分微小個(gè)體多數(shù)十分微小. .通通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的甚至沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu). .且體內(nèi)一般不含有葉綠且體內(nèi)一般不含有葉綠素素. .不能進(jìn)行光合作用不能進(jìn)行光合作用. . 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界微生物基礎(chǔ)知識(shí)一、基礎(chǔ)知識(shí)：一、基礎(chǔ)知識(shí)：（一）培養(yǎng)基（一）培養(yǎng)基 培養(yǎng)基是人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不培養(yǎng)基是人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物

2、質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。（1 1）按物理狀態(tài)來(lái)分：培養(yǎng)基可分為）按物理狀態(tài)來(lái)分：培養(yǎng)基可分為固體培固體培養(yǎng)基養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基和和半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基。（2 2）按功能來(lái)分，可分為）按功能來(lái)分，可分為選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基和和鑒別鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基。（3 3）按成分來(lái)分，可分為）按成分來(lái)分，可分為天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基和和合成合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基。1.1.培養(yǎng)基的類型和用途培養(yǎng)基的類型和用途培養(yǎng)基的種類液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基據(jù)物理性質(zhì)分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基據(jù)化學(xué)成分分選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基據(jù)用途分常用于工業(yè)生產(chǎn)常用于觀察微生物

3、的運(yùn)動(dòng)、鑒定菌種用于微生物的分離、計(jì)數(shù)常用于工業(yè)生產(chǎn)常用于分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)。例如，在培養(yǎng)基中加入青霉素，以抑制細(xì)菌、放線菌的生長(zhǎng)，從而分離到酵母菌和霉菌。又如，在培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽可以抑制多種細(xì)菌的生長(zhǎng)，但不影響金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)。根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成，用以鑒別不同種類的微生物。例如，在培養(yǎng)基中加入伊紅和美藍(lán)，可以用來(lái)鑒別飲用水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細(xì)菌：如果有大腸桿菌，其代謝產(chǎn)物就與伊紅和美藍(lán)結(jié)合，使菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤。固體培養(yǎng)基：菌落固體培養(yǎng)基：菌落

4、液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基：表面生長(zhǎng)表面生長(zhǎng)均勻混濁生長(zhǎng)均勻混濁生長(zhǎng)沉淀生長(zhǎng)沉淀生長(zhǎng)選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基: : 分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: : 分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基: : 分離固氮菌分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基: : 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物 根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。量，用人工方法模擬合成的。 合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、

5、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽和其它一生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。些輔助物質(zhì)。 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相對(duì)固定對(duì)固定; ;成本低成本低 缺點(diǎn)：缺點(diǎn)： 缺少某些成分，不能完全滿缺少某些成分，不能完全滿足體外細(xì)胞生長(zhǎng)需要。足體外細(xì)胞生長(zhǎng)需要。 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基: : 天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液）。提取液（如雞胚和牛胚浸液）。優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：營(yíng)養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好營(yíng)養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：來(lái)源受限來(lái)源受限; ;成分復(fù)雜，影響對(duì)某成分復(fù)雜，影響對(duì)某些實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析些實(shí)驗(yàn)

6、產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析; ;易發(fā)生支原體污染易發(fā)生支原體污染; ;天然培養(yǎng)基：天然培養(yǎng)基：2、培養(yǎng)基配制原則： （1）目的要明確目的要明確：根據(jù)微生物的種類（自養(yǎng)：根據(jù)微生物的種類（自養(yǎng)或異養(yǎng)）、培養(yǎng)目的等確定配制培養(yǎng)基的種類，或異養(yǎng)）、培養(yǎng)目的等確定配制培養(yǎng)基的種類，因?yàn)椴煌奈⑸飳?duì)培養(yǎng)物質(zhì)的需求不同。因?yàn)椴煌奈⑸飳?duì)培養(yǎng)物質(zhì)的需求不同。 （2）營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度：注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例（谷氨酸生產(chǎn)中碳氮比和比例（谷氨酸生產(chǎn)中碳氮比4：1時(shí)，菌體大時(shí)，菌體大量繁殖谷氨酸少；量繁殖谷氨酸少；3：1時(shí)菌體繁殖受抑制，谷時(shí)菌體繁殖受抑制，谷氨酸合成量大增。）

7、氨酸合成量大增。） （3）pH要適宜要適宜：各種微生物適宜生長(zhǎng)的：各種微生物適宜生長(zhǎng)的pH范范圍不同。圍不同。 細(xì)菌細(xì)菌pH為：為：6.5-7.5； 放線菌放線菌pH為：為：7.5-8.5； 真菌真菌pH為：為：5.0-6.0。3、培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成 不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水水、碳源碳源、和、和氮源氮源、無(wú)無(wú)機(jī)鹽機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(例如例如:生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子即細(xì)菌生長(zhǎng)必需，而自身不能即細(xì)菌生長(zhǎng)必需，而自身不能合成的化合物合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶如維生素、

8、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。 4、微生物的五種營(yíng)養(yǎng)要素、微生物的五種營(yíng)養(yǎng)要素碳源 （carbon source） 氮源（nitrogen source） 生長(zhǎng)因子（growth factor） 無(wú)機(jī)鹽（mineral salts） 水（wahtor） 凡能為微生物提供生長(zhǎng)繁殖所需碳元凡能為微生物提供生長(zhǎng)繁殖所需碳元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)都稱為碳源素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)都稱為碳源 。碳源碳源C素構(gòu)成細(xì)胞及代謝產(chǎn)物的骨架素構(gòu)成細(xì)胞及代謝產(chǎn)物的骨架 C素是大多數(shù)微生物代謝所需的能量來(lái)源素是大多數(shù)微生物代謝所需的能量來(lái)源 自養(yǎng)微生物以二氧化碳或碳酸鹽為惟

9、一碳源進(jìn)行代謝自養(yǎng)微生物以二氧化碳或碳酸鹽為惟一碳源進(jìn)行代謝生長(zhǎng)；異養(yǎng)微生物必須以有機(jī)物作為碳源進(jìn)行代謝生生長(zhǎng)；異養(yǎng)微生物必須以有機(jī)物作為碳源進(jìn)行代謝生長(zhǎng)。長(zhǎng)。 碳源是異養(yǎng)微生物的主要能源物質(zhì)。碳源是異養(yǎng)微生物的主要能源物質(zhì)。碳源功能碳源功能無(wú)機(jī)無(wú)機(jī)C源：源：CO2、碳酸鹽，只能被自養(yǎng)微生物利用碳酸鹽，只能被自養(yǎng)微生物利用有機(jī)有機(jī)C源：各種糖類，其次是有機(jī)酸、醇類、源：各種糖類，其次是有機(jī)酸、醇類、 脂類和烴脂類和烴類化合物類化合物 （脂肪酸，花生粉餅，石油）（脂肪酸，花生粉餅，石油） 碳源種類碳源種類 凡是能為微生物提供所需氮元素的營(yíng)養(yǎng)物凡是能為微生物提供所需氮元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)都稱為氮源。質(zhì)都

10、稱為氮源。氮源(nitrogin source) 為微生物提供合成細(xì)胞物質(zhì)代謝產(chǎn)物的原料為微生物提供合成細(xì)胞物質(zhì)代謝產(chǎn)物的原料 對(duì)許多微生物來(lái)說(shuō)，既可利用無(wú)機(jī)態(tài)氮，也可對(duì)許多微生物來(lái)說(shuō)，既可利用無(wú)機(jī)態(tài)氮，也可利用有機(jī)態(tài)氮。利用有機(jī)態(tài)氮。 固氮微生物可以利用氮?dú)庾鳛榈催M(jìn)行生長(zhǎng)。固氮微生物可以利用氮?dú)庾鳛榈催M(jìn)行生長(zhǎng)。 某些種類的氮源也能為微生物提供能量，某些種類的氮源也能為微生物提供能量， 如如NH3既是硝化細(xì)菌的氮源又是能源，既是硝化細(xì)菌的氮源又是能源， 含含C、H、O、N的蛋白質(zhì)等也能為微生物提的蛋白質(zhì)等也能為微生物提供能量。供能量。氮源功能氮源功能分子態(tài)氮：固氮微生物以分子氮為唯一氮源分

11、子態(tài)氮：固氮微生物以分子氮為唯一氮源 無(wú)機(jī)態(tài)氮：硝酸鹽、銨鹽幾乎所有微生物能利用無(wú)機(jī)態(tài)氮：硝酸鹽、銨鹽幾乎所有微生物能利用 有機(jī)態(tài)氮：蛋白質(zhì)及其降解產(chǎn)物有機(jī)態(tài)氮：蛋白質(zhì)及其降解產(chǎn)物 a實(shí)驗(yàn)室常用牛肉膏、蛋白胨、酵母膏做氮源實(shí)驗(yàn)室常用牛肉膏、蛋白胨、酵母膏做氮源 b生產(chǎn)用玉米漿、豆餅、葵花餅、花生餅等生產(chǎn)用玉米漿、豆餅、葵花餅、花生餅等氮源種類氮源種類 構(gòu)成微生物細(xì)胞的組成成分構(gòu)成微生物細(xì)胞的組成成分 調(diào)解微生物細(xì)胞的滲透壓，調(diào)解微生物細(xì)胞的滲透壓， PH值和氧化還原電值和氧化還原電 位位 有些無(wú)機(jī)鹽如有些無(wú)機(jī)鹽如S、Fe還可做為自養(yǎng)微生物的能源還可做為自養(yǎng)微生物的能源 構(gòu)成酶活性基的組成成分，

12、維持酶活性。構(gòu)成酶活性基的組成成分，維持酶活性。Mg、Ca、K是多種酶的激活劑是多種酶的激活劑 無(wú)機(jī)鹽（無(wú)機(jī)鹽（mineral saltsmineral salts） 無(wú)機(jī)鹽功能無(wú)機(jī)鹽功能 構(gòu)成微生物細(xì)胞構(gòu)成微生物細(xì)胞以以C、H、O、N、P、S六種六種元素為主，約占細(xì)胞干重的元素為主，約占細(xì)胞干重的95以上；以上； Ca、K 、Mg、Fe為大量元素，以無(wú)機(jī)鹽陽(yáng)為大量元素，以無(wú)機(jī)鹽陽(yáng)離子形式被吸收，配培養(yǎng)基要加磷酸鹽、硫酸離子形式被吸收，配培養(yǎng)基要加磷酸鹽、硫酸鹽。鹽。 Zn、Ca、Mn、Co、Mo等微量元素，在微等微量元素，在微生物培養(yǎng)中有生物培養(yǎng)中有0.1PPM就可以了，自來(lái)水原料就可以了，

13、自來(lái)水原料中已夠用，不需另加。中已夠用，不需另加。無(wú)機(jī)鹽種類無(wú)機(jī)鹽種類 微生物生長(zhǎng)不可缺少的微生物生長(zhǎng)不可缺少的 微量有機(jī)物質(zhì)叫生長(zhǎng)因子。微量有機(jī)物質(zhì)叫生長(zhǎng)因子。維生素 氨基酸堿 基 生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子 有的微生物自己不能合成維生素，需要外加，主有的微生物自己不能合成維生素，需要外加，主要是要是B族維生素、硫胺素、葉酸、泛酸、核黃素等，如族維生素、硫胺素、葉酸、泛酸、核黃素等，如生產(chǎn)味精需加生物素（是生產(chǎn)味精需加生物素（是B族中的一種即族中的一種即VH）。）。 維生素維生素 有些微生物自己不能合成某種氨基酸，必須給予有些微生物自己不能合成某種氨基酸，必須給予補(bǔ)充，如賴補(bǔ)充，如賴AA發(fā)酵所用的黃色

14、短桿菌不能合成環(huán)絲發(fā)酵所用的黃色短桿菌不能合成環(huán)絲AA，為環(huán)為環(huán)絲絲AA缺陷型菌株，在培養(yǎng)基中必須添加含缺陷型菌株，在培養(yǎng)基中必須添加含環(huán)絲環(huán)絲AA的氮源。如豆餅水解液或毛發(fā)水解液等。的氮源。如豆餅水解液或毛發(fā)水解液等。氨基酸氨基酸 嘧啶和嘌呤是核酸和輔酶的重要組分，是許多微生物嘧啶和嘌呤是核酸和輔酶的重要組分，是許多微生物必須的生長(zhǎng)因素。必須的生長(zhǎng)因素。 有些微生物不僅不能合成嘧啶和嘌呤，而且不能將補(bǔ)有些微生物不僅不能合成嘧啶和嘌呤，而且不能將補(bǔ)充的嘧啶和嘌呤結(jié)合在核苷酸上，還必須供給核苷酸，充的嘧啶和嘌呤結(jié)合在核苷酸上，還必須供給核苷酸，有的菌需補(bǔ)充卟啉或其衍生物，還有的菌需供給（低有的菌

15、需補(bǔ)充卟啉或其衍生物，還有的菌需供給（低碳）脂肪酸等。碳）脂肪酸等。堿基堿基水水 是細(xì)胞中生化反應(yīng)的良好介質(zhì)；營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和代謝產(chǎn)物是細(xì)胞中生化反應(yīng)的良好介質(zhì)；營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和代謝產(chǎn)物都必須溶解在水里，才能被吸收或排出體（細(xì)胞）外。都必須溶解在水里，才能被吸收或排出體（細(xì)胞）外。 水的比熱高，能有效的吸收代謝過(guò)程中放出的熱量，水的比熱高，能有效的吸收代謝過(guò)程中放出的熱量，不致使細(xì)胞的溫度驟然上升。不致使細(xì)胞的溫度驟然上升。 維持細(xì)胞的膨壓（控制細(xì)胞形態(tài)）。維持細(xì)胞的膨壓（控制細(xì)胞形態(tài)）。碳源、氮源、生長(zhǎng)因子的比較來(lái) 源常用原料功 能碳源CO2、NaHCO3、糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等糖類構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)

16、和一些代謝產(chǎn)物，有些還是異養(yǎng)做生物的主要能源物質(zhì)氮源N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽、尿素、牛肉膏和蛋白胨等銨鹽、硝酸鹽等合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物生長(zhǎng)因子維生素、氨基酸、堿基酶、核酸等的組成成分1.1.無(wú)菌技術(shù)的概念無(wú)菌技術(shù)的概念 無(wú)菌操作泛指無(wú)菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。所有防止雜菌污染的方法。無(wú)論是隨后無(wú)論是隨后將要學(xué)到的將要學(xué)到的倒平板倒平板、平板劃線平板劃線操作，還操作，還是是稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法，其操作中的每一步，其操作中的每一步都需要做到都需要做到“無(wú)菌無(wú)菌”，即，即防止雜菌污染。防止雜菌污染。只有熟練、規(guī)范地進(jìn)行無(wú)菌操

17、作，才可只有熟練、規(guī)范地進(jìn)行無(wú)菌操作，才可能成功地培養(yǎng)微生物。能成功地培養(yǎng)微生物。 （）（）消毒定義：消毒定義：使用較溫和的物理或化學(xué)方法殺死使用較溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包括物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。芽孢和孢子）。2.2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別 （2 2）滅菌的定義：）滅菌的定義：是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外體內(nèi)外所有的所有的微生物，包括所有細(xì)菌微生物，包括所有細(xì)菌的孢子、芽孢、霉菌及病毒，而達(dá)到的孢子、芽孢、霉菌及病毒，而達(dá)到完全無(wú)菌完全無(wú)菌之過(guò)程。之過(guò)程。 滅菌與消毒技

18、術(shù)是微生物有關(guān)工滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。作中最普通也是最重要的技術(shù)。比比較較項(xiàng)項(xiàng)理化因素的理化因素的作用強(qiáng)度作用強(qiáng)度消滅微生物消滅微生物的數(shù)量的數(shù)量芽孢和孢子芽孢和孢子能否被消滅能否被消滅消消毒毒較為溫和較為溫和部分生活狀部分生活狀態(tài)的微生物態(tài)的微生物不能不能滅滅菌菌強(qiáng)烈強(qiáng)烈全部微生物全部微生物能能消毒與滅菌的比較消毒與滅菌的比較1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min（不耐高溫的液（不耐高溫的液體：牛

19、奶）體：牛奶）3 3、化學(xué)藥劑消毒法化學(xué)藥劑消毒法: :用用75%75%酒精、新潔酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒爾滅等進(jìn)行皮膚消毒; ;氯氣消毒水源氯氣消毒水源4 4、紫外線消毒紫外線消毒（對(duì)空氣消毒）（對(duì)空氣消毒）(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒與滅菌的方法常用的消毒與滅菌的方法1 1、灼燒滅菌、灼燒滅菌（接種環(huán)、接種針、（接種環(huán)、接種針、試管口）試管口）2 2、干熱滅菌：干熱滅菌：160-160-170 170 下加熱下加熱1-2h1-2h。（玻璃、金屬器皿）（玻璃、金屬器皿）3 3、高壓蒸氣滅菌：高壓蒸氣滅菌：100kPa100kPa、121 121 下下維持維持15-30

20、min.15-30min.（培（培養(yǎng)基及多種容器、物養(yǎng)基及多種容器、物品）品）(2)滅菌的方法：滅菌的方法： 最常用的滅菌方法是最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌，它可以殺，它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時(shí)可以基本保持培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞。，同時(shí)可以基本保持培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞。 有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌高溫干熱滅菌。為了防。為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也瓶都需采用適宜的塞子

21、塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過(guò)，而空氣中的其他微生物不能通過(guò)。通過(guò)，而空氣中的其他微生物不能通過(guò)。 培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)皿是由培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)皿是由正反兩平面板互扣而正反兩平面板互扣而成成，這種器具是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)，這種器具是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計(jì)的。計(jì)的。 1.1.無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？2.2.請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒

22、或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。（1 1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2 2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管（3 3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手實(shí)驗(yàn)操作者的雙手 答：無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自答：無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要滅菌；（）需要滅菌；（3）需要消毒）需要消毒。1 1、器具的滅菌、器具的滅菌2 2、培養(yǎng)基的配制、培養(yǎng)基的配制3 3、培養(yǎng)基的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接種、微生物接種6 6、恒溫箱中培養(yǎng)、恒溫箱中培養(yǎng)7 7

23、、菌種的保存、菌種的保存三、實(shí)驗(yàn)操作三、實(shí)驗(yàn)操作 （ 一一.）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）1 1計(jì)算、稱量計(jì)算、稱量2 2溶化溶化3 3調(diào)調(diào)pHpH：pH7pH76 64 4過(guò)濾：這一步可以省去。過(guò)濾：這一步可以省去。5 5分裝：分裝過(guò)程中注意不要使培養(yǎng)分裝：分裝過(guò)程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過(guò)引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過(guò)三角燒瓶容積的一半為宜。三角燒瓶容積的一半為宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作步驟操作步驟 8 8滅菌滅菌: : 將將5050ml

24、ml培養(yǎng)基培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為鍋，在壓力為100100kPakPa、溫度為溫度為121121，滅菌，滅菌15153030minmin。將將培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿用舊報(bào)紙包裹，放入干用舊報(bào)紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在熱滅菌箱內(nèi)，在160160170 170 下滅菌下滅菌2 2h h。 9 9倒平板倒平板: : 待培養(yǎng)基冷卻到待培養(yǎng)基冷卻到50 50 左右時(shí)，在酒精燈附左右時(shí)，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見(jiàn)課本）近倒平板。（倒平板操作見(jiàn)課本）2 2d d后觀察平后觀察平板，無(wú)

25、雜菌污染才可用來(lái)接種板，無(wú)雜菌污染才可用來(lái)接種. . 10 10無(wú)菌檢查：無(wú)菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入將滅菌的培養(yǎng)基放入3737的溫室中培的溫室中培養(yǎng)養(yǎng)24482448小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。 1. 1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 50 左右左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？基的溫度？ 答：答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2.2.

26、為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？ 答：通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微答：通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。生物污染培養(yǎng)基。3.3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.4.在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒

27、置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。培養(yǎng)微生物。（二）、純化大腸桿菌（二）、純化大腸桿菌接種方法有：接種方法有：平板劃線法平板劃線法和和稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法 平板劃線法平板劃線法: :通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫(huà)線的操作基表面連續(xù)畫(huà)線的操作, ,將聚集的菌鐘逐步稀將

28、聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面釋分散到培養(yǎng)基的表面. . 在數(shù)次畫(huà)線后在數(shù)次畫(huà)線后, ,可以分離到可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體, ,這就是這就是菌落菌落. .菌落： 單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌個(gè)肉眼可見(jiàn)的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落落。 菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落細(xì)菌的菌落特征細(xì)菌的菌落特征因種而異因種而異 霉菌的菌落霉菌的菌落特征特征因種而異因種而異菌落 1.1

29、.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線菌種直接來(lái)源于上次劃線的末

30、端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。感染操作者。 2.2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 3.3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線為什么總是從上一次劃

31、線的末端開(kāi)始劃線？ 答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。的菌落。 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求，想一想，第操作要求，想一想，第2 2步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作？菌操作？ 應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保

32、證“無(wú)菌無(wú)菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。在酒精燈火焰周圍等等。四、課題成果評(píng)價(jià)四、課題成果評(píng)價(jià) （一）培養(yǎng)基的制作是否合格（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 12 d2 d后無(wú)后無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。制備。 （二）接種操作是否符合無(wú)菌要求（二）接種操作是否符合無(wú)菌要求 如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基如果培養(yǎng)基上

33、生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說(shuō)明接種操作本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說(shuō)明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說(shuō)明是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說(shuō)明接種過(guò)程中，無(wú)菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，接種過(guò)程中，無(wú)菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。再次練習(xí)。 （三）是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄（三）是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄 培養(yǎng)培養(yǎng)12 h12 h與與24 h24 h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同，及時(shí)觀察記錄的同學(xué)會(huì)發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)，并能觀察顯不同，及時(shí)觀察記錄的同學(xué)會(huì)發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)

34、，并能觀察到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。 1 1、臨時(shí)保藏：、臨時(shí)保藏：接種到固體斜面培接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長(zhǎng)成后養(yǎng)基，菌落長(zhǎng)成后置于置于44冰箱保存。冰箱保存。 2 2、長(zhǎng)期保存：、長(zhǎng)期保存：甘油冷凍管藏法甘油冷凍管藏法本課題知識(shí)小結(jié)本課題知識(shí)小結(jié): :【典例解析典例解析】 例例1 1關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是A.A.是碳源的物質(zhì)不可能同時(shí)是氮源是碳源的物質(zhì)不可能同時(shí)是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的無(wú)機(jī)

35、物只提供無(wú)機(jī)鹽除水以外的無(wú)機(jī)物只提供無(wú)機(jī)鹽 D.D.無(wú)機(jī)氮源也能提供能量無(wú)機(jī)氮源也能提供能量 解析：解析：不同的微生物，所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要不同的微生物，所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對(duì)微生物的具體情況分析。對(duì)于針對(duì)微生物的具體情況分析。對(duì)于A A、B B選項(xiàng)，它的表達(dá)是選項(xiàng)，它的表達(dá)是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時(shí)是氮源，如同時(shí)是氮源，如NH4HCO3NH4HCO3；有的碳源同時(shí)是能源，如葡；有的碳源同時(shí)是能源，如葡萄糖；有的碳源同時(shí)是氮源，也是能源，如蛋白胨。對(duì)于萄糖；有的碳源同時(shí)是氮源，也是能源，如蛋白胨。

36、對(duì)于C C選項(xiàng)，除水以外的無(wú)機(jī)物種類繁多，功能也多樣。如二氧化選項(xiàng)，除水以外的無(wú)機(jī)物種類繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHCO3NaHCO3，可作為自養(yǎng)，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無(wú)機(jī)鹽；而型微生物的碳源和無(wú)機(jī)鹽；而NaClNaCl則只能提供無(wú)機(jī)鹽。對(duì)則只能提供無(wú)機(jī)鹽。對(duì)于于D D選項(xiàng)，無(wú)機(jī)氮源提供能量的情況還是存在的，如選項(xiàng)，無(wú)機(jī)氮源提供能量的情況還是存在的，如NH3NH3可可為硝化細(xì)菌提供能量和氮源。為硝化細(xì)菌提供能量和氮源。答案：答案：D例例2 2下面對(duì)發(fā)酵工程中滅菌的理解下面對(duì)發(fā)酵工程中滅菌的理解的是的是A.A.防止雜菌污染防止

37、雜菌污染 B.B.消滅雜菌消滅雜菌C.C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌 D.D.滅菌必須在接種前滅菌必須在接種前答案：答案：B 解析：滅菌是微生物發(fā)酵過(guò)程的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。解析：滅菌是微生物發(fā)酵過(guò)程的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。A A說(shuō)的是滅菌的目的，因?yàn)榘l(fā)酵所用的菌種大多是單一說(shuō)的是滅菌的目的，因?yàn)榘l(fā)酵所用的菌種大多是單一的純種，整個(gè)發(fā)酵過(guò)程不能混入其他微生物（雜菌），的純種，整個(gè)發(fā)酵過(guò)程不能混入其他微生物（雜菌），所以是所以是A A正確的；正確的；B B是錯(cuò)誤的，因?yàn)闇缇哪康氖欠乐故清e(cuò)誤的，因?yàn)闇缇哪康氖欠乐闺s菌污染，但實(shí)際操作中不可能只消滅雜菌，而是消雜菌污染，但實(shí)際操作中不

38、可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生物。滅全部微生物。C C是正確的，因?yàn)榕c發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)是正確的，因?yàn)榕c發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門備和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門接種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會(huì)接種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會(huì)把所接菌種也殺死。把所接菌種也殺死。編號(hào)編號(hào)成分成分含量含量粉狀硫粉狀硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0

39、.5gHH2 2OO100ml100ml例例3 3右表是某微生物右表是某微生物培養(yǎng)基成分，請(qǐng)據(jù)此回答：培養(yǎng)基成分，請(qǐng)據(jù)此回答：（1 1）右表培養(yǎng)基可培）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型養(yǎng)的微生物類型是是 。（2 2）若不慎將過(guò)量）若不慎將過(guò)量NaClNaCl加入培養(yǎng)基中。加入培養(yǎng)基中。如不想浪費(fèi)此培養(yǎng)基，如不想浪費(fèi)此培養(yǎng)基，可再加入可再加入 . .自養(yǎng)型微生物自養(yǎng)型微生物 含碳有機(jī)物含碳有機(jī)物 （3 3）若除去成分，加入（）若除去成分，加入（CH2OCH2O），該培），該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)養(yǎng)基可用于培養(yǎng) 。（4 4）表中營(yíng)養(yǎng)成分共有）表中營(yíng)養(yǎng)成分共有 類。類。（5 5）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝前，要進(jìn)行的是分裝前，要進(jìn)行的是 。（6 6）右表中各成分重量確定的原則）右表中各成分重量確定的原則是是 。（7 7）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應(yīng)該增加）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應(yīng)該增加的成分是的成分是 。固氮微生物固氮微生物 3 調(diào)整調(diào)整pHpH 依微生物的生長(zhǎng)需要確定依微生物的生長(zhǎng)需要確定 瓊脂（或凝固劑）瓊脂（或凝固劑）