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1、專題八 現代生物科技專題第一講第一講 基因工程和細胞工程基因工程和細胞工程 一、基因工程一、基因工程1.基本工具基本工具 （1）限制性核酸內切酶）限制性核酸內切酶“分子手術刀分子手術刀”來源：主要在來源：主要在 生物中生物中作用：一種限制酶只能識別一種特定的作用：一種限制酶只能識別一種特定的 ，并在特定的位點切割并在特定的位點切割原核原核核苷酸序列核苷酸序列（2）DNA連接酶連接酶“分子縫合針分子縫合針”：把兩條：把兩條DNA 之間的縫隙之間的縫隙“縫合縫合”起來起來 末端末端（3）載體）載體“分分子運輸車子運輸車”常用載體：常用載體： 載體條件載體條件質粒質粒在宿主細胞內在宿主細胞內 并能并

2、能 有多個限制酶切點有多個限制酶切點有有 ，便于，便于 對宿主細胞無害對宿主細胞無害穩(wěn)定存在穩(wěn)定存在復制復制標記基因標記基因篩選篩選2.基本操作程序基本操作程序 獲取目的基因：常用方法獲取目的基因：常用方法從基因文庫中獲取從基因文庫中獲取利用利用 技術擴增技術擴增人工合成法人工合成法 PCR導入受體細胞：常用方法導入受體細胞：常用方法農桿菌轉化法農桿菌轉化法基因槍法基因槍法 花粉管通道法花粉管通道法 顯微注射法顯微注射法 的的檢測與鑒定檢測與鑒定 目的基因目的基因檢測檢測鑒定：有些需要進行鑒定：有些需要進行 水平的鑒定水平的鑒定受體細胞是否具有某些受體細胞是否具有某些 目的基因是否翻譯成目的基

3、因是否翻譯成 個體生物學個體生物學標記基因標記基因蛋白質蛋白質表達載體表達載體構建構建 轉基因植物轉基因植物轉基因動物轉基因動物基因藥物基因藥物基因治療基因治療3.應用應用抗蟲、抗病、抗逆抗蟲、抗病、抗逆改良植物品質改良植物品質提高動物生長速度提高動物生長速度改善畜產品質量、作改善畜產品質量、作 移植的供體移植的供體器官器官4.蛋白質工程蛋白質工程 （1）概念：以蛋白質分子的結構規(guī)律及其與）概念：以蛋白質分子的結構規(guī)律及其與 的關的關系作為基礎，通過系作為基礎，通過 或基因合成，對現有蛋白質進或基因合成，對現有蛋白質進行改造，或制造一種新的蛋白質，以滿足人類的生產和生行改造，或制造一種新的蛋白

4、質，以滿足人類的生產和生活的需求活的需求生物功能生物功能基因修飾基因修飾（2）流程：）流程： 5.DNA的粗提取與鑒定的粗提取與鑒定 原理：根據原理：根據DNA和蛋白質等其他成分在不同濃度的和蛋白質等其他成分在不同濃度的NaCl溶溶液中液中 進行提取、分離進行提取、分離鑒定試劑：鑒定試劑： 主要步驟：材料的選取主要步驟：材料的選取破碎細胞獲得含破碎細胞獲得含DNA的濾液的濾液去去除濾液中雜質除濾液中雜質DNA的析出與鑒定的析出與鑒定注意事項：以血液為材料時需加入檸檬酸鈉抗凝，攪拌動注意事項：以血液為材料時需加入檸檬酸鈉抗凝，攪拌動作要作要 ，二苯胺需現用現配，二苯胺需現用現配 溶解度不同溶解度

5、不同二苯胺二苯胺輕緩輕緩二、細胞工程二、細胞工程 1.細胞全能性細胞全能性（1）概念：具有某種生物）概念：具有某種生物 遺傳信息的細胞，都遺傳信息的細胞，都具有發(fā)育成完整生物體的潛能具有發(fā)育成完整生物體的潛能（2）潛能大小：受精卵）潛能大?。菏芫焉臣毎臣毎w細胞體細胞全部全部2.植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)（1）過程：）過程：（2）應用）應用快速繁殖快速繁殖脫毒植株脫毒植株人工種子人工種子3.植物體細胞雜交植物體細胞雜交（1）過程：酶解去壁）過程：酶解去壁 組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)（2）意義：克服）意義：克服 的障礙，培育出自然的障礙，培育出自然 界中沒有的優(yōu)良品種界中沒有的優(yōu)良品種誘導融合誘導融

6、合遠緣雜交不親和遠緣雜交不親和4.動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)（1）過程：）過程：（2）應用：制備單克隆抗體、干擾素、病毒疫苗）應用：制備單克隆抗體、干擾素、病毒疫苗5.動物細胞融合動物細胞融合 （1）過程：）過程：（2）應用：制備）應用：制備 單克隆抗體單克隆抗體6.單克隆抗體單克隆抗體 過程：過程： 特點：特點： 強、強、 高高 篩選：兩次篩選，第一次是為了獲得正常的篩選：兩次篩選，第一次是為了獲得正常的 細胞細胞 （細胞整合有（細胞整合有AA、AB、BB，需要的是，需要的是AB類型），第類型），第 二次篩選是為了獲得能夠二次篩選是為了獲得能夠 細胞，細胞， 用用 法進行篩選法進行篩選特異性特

7、異性靈敏度靈敏度雜種雜種分泌特異性抗體的雜交分泌特異性抗體的雜交免疫免疫7.細胞核移植細胞核移植 過程：過程： 應用：應用：快速培育優(yōu)良家畜快速培育優(yōu)良家畜生產醫(yī)用蛋白生產醫(yī)用蛋白提供提供 移植的供體移植的供體器官異種器官異種考點一考點一 基因工程的具體操作流程和應用基因工程的具體操作流程和應用1.理解基因工程的工具理解基因工程的工具 （1）工具酶）工具酶 限制性核酸內切酶：只能在特定的部位進行切割，限制性核酸內切酶：只能在特定的部位進行切割，切割位點一般具有反向重復序列。作用結果：形成切割位點一般具有反向重復序列。作用結果：形成黏性末端或平末端。作用實質：使特定部位的兩核黏性末端或平末端。作

8、用實質：使特定部位的兩核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。 DNA連接酶作用實質：兩類連接酶作用實質：兩類DNA連接酶都是將雙連接酶都是將雙鏈鏈DNA片段片段“縫合縫合”起來，恢復被限制酶切開了的起來，恢復被限制酶切開了的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵。兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵。 （2）載體）載體 種類：常用的載體是質粒，大腸桿菌、枯草桿菌、種類：常用的載體是質粒，大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農桿菌等細菌中都有質粒。土壤農桿菌等細菌中都有質粒。 作為載體應具備的條件作為載體應具備的條件 a.對受體細胞無害，不影響受體細胞正常的生命活動。對受體細胞無害，不影響受體細胞正常的生命活動。

9、 b.具有標記基因，以便于鑒定目的基因是否進入受體具有標記基因，以便于鑒定目的基因是否進入受體細胞。細胞。 c.能自我復制，通過復制進行基因擴增，否則可能會能自我復制，通過復制進行基因擴增，否則可能會使重組使重組DNA丟失。丟失。 d.具有一個至多個酶切位點，具有一個至多個酶切位點， 以便于目的基因的插入。以便于目的基因的插入。 e.載體載體DNA分子大小適合，以方便操作。分子大小適合，以方便操作。2.基因工程的一般步驟基因工程的一般步驟 （1）獲取目的基因）獲取目的基因 獲取途徑：基因文庫、利用獲取途徑：基因文庫、利用PCR技術擴增目的基因等。技術擴增目的基因等。（2）基因表達載體的構建）基

10、因表達載體的構建用一定的限制酶切割質粒，使其出現一個有黏性末用一定的限制酶切割質粒，使其出現一個有黏性末端或平末端的切口。端或平末端的切口。用同種限制酶切割目的基因，產生相同的黏性末端用同種限制酶切割目的基因，產生相同的黏性末端或平末端。或平末端。用用DNA連接酶將質粒與目的基因重新連接形成重組連接酶將質粒與目的基因重新連接形成重組質粒。質粒。（3）將目的基因導入受體細胞）將目的基因導入受體細胞受體種類受體種類 植物植物 動物動物 微生物微生物 導入方法導入方法 農桿菌轉化法、基因槍法、農桿菌轉化法、基因槍法、花粉管通道法花粉管通道法 顯微顯微注射法注射法 感受態(tài)感受態(tài)細胞法細胞法 （4）目的

11、基因的檢測與鑒定）目的基因的檢測與鑒定 類型類型 步驟步驟 檢測內容檢測內容 方法方法 結果顯示結果顯示 分子分子水平水平檢測檢測 第一第一步步 轉基因生物染色體的轉基因生物染色體的DNA上是否插入目的上是否插入目的基因基因 DNA分子雜交分子雜交（DNA和和DNA之間）之間） 是否成功顯是否成功顯示出雜交帶示出雜交帶 第二第二步步 目的基因是否轉錄出目的基因是否轉錄出mRNA 分子雜交分子雜交（mRNA和和DNA之間）之間） 是否成功顯是否成功顯示出雜交帶示出雜交帶 第三第三步步 目的基因是否翻譯出目的基因是否翻譯出蛋白質蛋白質 抗原抗原抗體雜抗體雜交交 是否成功顯是否成功顯示出雜交帶示出雜

12、交帶 個體個體水平水平檢測檢測 包括抗蟲、抗病的接種實驗，以確定是否具有抗性以及抗性的包括抗蟲、抗病的接種實驗，以確定是否具有抗性以及抗性的程度；基因工程產品需要與天然產品的活性比較，以確定功能程度；基因工程產品需要與天然產品的活性比較，以確定功能活性是否相同等活性是否相同等 特別提醒特別提醒 目的基因的檢測也可利用質粒中的標記基目的基因的檢測也可利用質粒中的標記基因，如大腸桿菌質粒中含抗青霉素基因，把某種轉基因，如大腸桿菌質粒中含抗青霉素基因，把某種轉基因生物放入帶有青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。若有抗性，因生物放入帶有青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。若有抗性，說明導入成功；若無抗性，說明導入失敗。說明導入成

13、功；若無抗性，說明導入失敗。 3.基因工程與蛋白質工程的比較基因工程與蛋白質工程的比較項目項目 蛋白質工程蛋白質工程 基因工程基因工程區(qū)區(qū)別別過過程程預期蛋白質功能預期蛋白質功能設計預設計預期的蛋白質結構期的蛋白質結構推測氨推測氨基酸序列基酸序列推測脫氧核苷推測脫氧核苷酸序列酸序列合成合成DNA表達表達出蛋白質出蛋白質 獲取目的基因獲取目的基因構建表達構建表達載體載體導入受體細胞導入受體細胞目目的基因的檢測與鑒定的基因的檢測與鑒定 實實質質 定向改造或生產人類定向改造或生產人類所需的蛋白質所需的蛋白質 定向改造生物的遺傳特定向改造生物的遺傳特性，以獲得人類所需的生性，以獲得人類所需的生物類型或

14、生物產品物類型或生物產品 區(qū)區(qū)別別結結果果 生產自然界沒有的蛋白質生產自然界沒有的蛋白質 生產自然界中已有的蛋白質生產自然界中已有的蛋白質 聯系聯系 蛋白質工程是在基因工程的基礎上，延伸出來的第二代蛋白質工程是在基因工程的基礎上，延伸出來的第二代基因工程，因為對現有蛋白質的改造或制造新的蛋白質，基因工程，因為對現有蛋白質的改造或制造新的蛋白質，必須通過基因修飾或基因合成實現必須通過基因修飾或基因合成實現 我國科研人員發(fā)現，彎曲的蠶絲由于彎折處易我國科研人員發(fā)現，彎曲的蠶絲由于彎折處易斷裂，其強度低于由蜘蛛紡績器拖牽絲的直絲，并首斷裂，其強度低于由蜘蛛紡績器拖牽絲的直絲，并首次在世界上通過了轉基

15、因方法將次在世界上通過了轉基因方法將“綠色熒光蛋白基因綠色熒光蛋白基因”與與“蜘蛛拖牽絲基因蜘蛛拖牽絲基因”拼接后成功插入蠶絲基因組中，拼接后成功插入蠶絲基因組中，并在受體細胞中成功表達。并在受體細胞中成功表達。（1）在這項）在這項“基因工程基因工程”的操作中，目的基因是的操作中，目的基因是 ，采用綠色熒光蛋白基因的主要目的是，采用綠色熒光蛋白基因的主要目的是 。（2）兩基因組合在導入受體細胞前必須進行的步驟）兩基因組合在導入受體細胞前必須進行的步驟是：將其與由細菌體內取得的是：將其與由細菌體內取得的 進行切割處理，進行切割處理，以保證有相同的以保證有相同的 ，并拼接成，并拼接成 。如果引入。

16、如果引入的受體細胞是細菌，還要對細菌作的受體細胞是細菌，還要對細菌作 處理。處理。（3）在基因工程中受體常用微生物，為什么？）在基因工程中受體常用微生物，為什么？ 。（4）“蜘蛛拖牽絲基因蜘蛛拖牽絲基因”成功表達的標志是成功表達的標志是 。（5）帶有）帶有“綠色熒光蛋白基因綠色熒光蛋白基因”的轉基因蠶，是否的轉基因蠶，是否能引起生態(tài)安全性問題？請分析原因。能引起生態(tài)安全性問題？請分析原因。 。解析解析 從題目提供的信息不難看出，蜘蛛紡績器拖牽絲從題目提供的信息不難看出，蜘蛛紡績器拖牽絲的直絲強度比蠶絲要大，所以拖牽絲基因是目的基因，的直絲強度比蠶絲要大，所以拖牽絲基因是目的基因，綠色熒光蛋白基

17、因是作為標記基因。在形成重組綠色熒光蛋白基因是作為標記基因。在形成重組DNA時，時，首先要用同一種限制性內切酶切割目的基因和質粒，得首先要用同一種限制性內切酶切割目的基因和質粒，得到相同的黏性末端，再用到相同的黏性末端，再用DNA連接酶形成重組質粒，如連接酶形成重組質粒，如果要將重組質粒導入細菌體內，必須對細菌細胞壁用氯果要將重組質粒導入細菌體內，必須對細菌細胞壁用氯化鈣處理，增加其通透性，便于重組質粒進入細菌體內?；}處理，增加其通透性，便于重組質粒進入細菌體內。蜘蛛拖牽絲基因成功表達時，能產生高強度的絲，轉基蜘蛛拖牽絲基因成功表達時，能產生高強度的絲，轉基因生物的安全性問題正在探索中。因生

18、物的安全性問題正在探索中。答案答案 （1）拖牽絲基因）拖牽絲基因 作為標記（基因）作為標記（基因） （2）質）質粒粒 黏性末端黏性末端 重組質粒（或重組重組質粒（或重組DNA） CaCl2（或提（或提高膜的通透性）高膜的通透性） （3）微生物的繁殖速度快）微生物的繁殖速度快 （4）產生）產生高強度的絲高強度的絲 （5）可能。轉基因蠶擴散進入自然生態(tài)系）可能。轉基因蠶擴散進入自然生態(tài)系統，與同種的野生蠶雜交后，使野生蠶也含有轉基因，統，與同種的野生蠶雜交后，使野生蠶也含有轉基因，可能會威脅到原有物種，引起生態(tài)危機可能會威脅到原有物種，引起生態(tài)危機 （08廣東卷）天然釀酒酵母菌通常缺乏分解淀粉廣東

19、卷）天然釀酒酵母菌通常缺乏分解淀粉的酶類，用作發(fā)酵原料的淀粉需經一系列復雜的轉化的酶類，用作發(fā)酵原料的淀粉需經一系列復雜的轉化過程才能被利用。研究者從某絲狀真菌中獲取淀粉酶過程才能被利用。研究者從某絲狀真菌中獲取淀粉酶基因并轉入釀酒酵母菌，獲得的釀酒酵母工程菌可直基因并轉入釀酒酵母菌，獲得的釀酒酵母工程菌可直接利用淀粉產生酒精。請回答下列問題：接利用淀粉產生酒精。請回答下列問題：（1）將淀粉酶基因切割下來所用的工具是）將淀粉酶基因切割下來所用的工具是 ，用用 將淀粉酶基因與載體拼接成新的將淀粉酶基因與載體拼接成新的DNA分分子，下一步將該子，下一步將該DNA分子分子 ，以完成工程菌的，以完成工

20、程菌的構建。構建。（2）若要鑒定淀粉酶基因是否插入釀酒酵母菌，可）若要鑒定淀粉酶基因是否插入釀酒酵母菌，可采用的檢測方法是采用的檢測方法是 ；若要鑒定淀粉酶基因是；若要鑒定淀粉酶基因是否翻譯成淀粉酶，可采用否翻譯成淀粉酶，可采用 檢測；將該工程菌檢測；將該工程菌接種在含淀粉的固體平板培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一定時間后，接種在含淀粉的固體平板培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一定時間后，加入碘液，工程菌周圍出現透明圈，該現象發(fā)生的原加入碘液，工程菌周圍出現透明圈，該現象發(fā)生的原因是因是 。（3）如何進一步鑒定不同的轉基因工程菌菌株利用）如何進一步鑒定不同的轉基因工程菌菌株利用淀粉能力的大?。康矸勰芰Φ拇笮。?。（4）微生物在

21、基因工程領域中有哪些重要作用？）微生物在基因工程領域中有哪些重要作用？ 。解析解析 限制酶可以識別并切割限制酶可以識別并切割DNA分子的特定部位；分子的特定部位；用用DNA連接酶來連接兩段連接酶來連接兩段DNA分子；用分子；用DNA分子雜分子雜交技術來檢測交技術來檢測DNA分子或分子或RNA分子；用抗原分子；用抗原抗體雜抗體雜交法來檢測特定的蛋白質。淀粉酶可以使淀粉水解，交法來檢測特定的蛋白質。淀粉酶可以使淀粉水解，所以加入碘液后培養(yǎng)基中淀粉被水解的區(qū)域不會變藍。所以加入碘液后培養(yǎng)基中淀粉被水解的區(qū)域不會變藍。答案答案 （1）限制酶（限制性核酸內切酶）限制酶（限制性核酸內切酶） DNA連接連接

22、酶酶 導入受體細胞導入受體細胞 （2）DNA分子雜交技術分子雜交技術 抗抗原原抗體雜交或淀粉酶活性抗體雜交或淀粉酶活性 該工程菌產生的淀粉酶該工程菌產生的淀粉酶可分泌至培養(yǎng)基，水解淀粉后的區(qū)域，遇碘不再變藍可分泌至培養(yǎng)基，水解淀粉后的區(qū)域，遇碘不再變藍色，產生透明圈色，產生透明圈 （3）測定相同培養(yǎng)條件下不同工程）測定相同培養(yǎng)條件下不同工程菌菌株的淀粉酶活性或酒精產量菌菌株的淀粉酶活性或酒精產量 （4）工具酶主要工具酶主要來自微生物；來自微生物；最重要的目的基因供體庫之一；最重要的目的基因供體庫之一；目目的基因的載體之一；的基因的載體之一；作為受體細胞；作為受體細胞；提供用于發(fā)提供用于發(fā)酵的工

23、程菌酵的工程菌考點二考點二 細胞工程的原理和應用細胞工程的原理和應用1.動、植物細胞工程技術手段的原理和工具酶動、植物細胞工程技術手段的原理和工具酶比較比較 植物細胞工程植物細胞工程 動物細胞工程動物細胞工程 原理原理 植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)細胞全能性細胞全能性植物體細胞雜交植物體細胞雜交細胞的全能性、細細胞的全能性、細胞膜流動性胞膜流動性 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)細胞增殖細胞增殖體細胞核移植體細胞核移植動物細胞核的動物細胞核的全能性全能性單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備細胞膜的細胞膜的流動性、細胞增殖流動性、細胞增殖動物細胞融合動物細胞融合細胞膜流動性細胞膜流動性 工工具具酶酶 纖維素酶、

24、果膠酶纖維素酶、果膠酶 胰蛋白酶、膠原蛋白酶胰蛋白酶、膠原蛋白酶 2.動、植物細胞全能性動、植物細胞全能性（1）原因：生物體的每個細胞都有發(fā)育成完整個體）原因：生物體的每個細胞都有發(fā)育成完整個體所必需的全部基因。所必需的全部基因。（2）全能性表現的大?。菏芫训娜苄宰畲螅洌┤苄员憩F的大小：受精卵的全能性最大，其次是生殖細胞，體細胞相對較小。次是生殖細胞，體細胞相對較小。（3）全能性表現與細胞種類有關：離體的植物體細）全能性表現與細胞種類有關：離體的植物體細胞的全能性在一定條件下可充分體現。離體的動物胞的全能性在一定條件下可充分體現。離體的動物體細胞，全能性受到限制，但其細胞核仍具有全能體

25、細胞，全能性受到限制，但其細胞核仍具有全能性，需要借助卵細胞的細胞質才能體現出來。未離性，需要借助卵細胞的細胞質才能體現出來。未離體細胞的全能性不能表達，只能在機體調控下定向體細胞的全能性不能表達，只能在機體調控下定向分化。分化。（4）細胞的全能性是植物細胞工程的理論基礎。）細胞的全能性是植物細胞工程的理論基礎。3.植物體細胞雜交與動物細胞融合的比較植物體細胞雜交與動物細胞融合的比較項目項目 植物體細胞雜交植物體細胞雜交 動物細胞融合動物細胞融合 細胞融細胞融合原理合原理 細胞膜的流動性細胞膜的流動性 細胞膜的流動性細胞膜的流動性 細胞融細胞融合方法合方法 用纖維素酶、果膠酶用纖維素酶、果膠酶

26、去除細胞壁后，誘導原去除細胞壁后，誘導原生質體融合生質體融合 用胰蛋白酶使細用胰蛋白酶使細胞分散后，誘導胞分散后，誘導細胞融合細胞融合 誘導誘導手段手段 離心、電刺激、振動、顯離心、電刺激、振動、顯微操作、聚乙二醇等誘導微操作、聚乙二醇等誘導 與植物體細胞雜交與植物體細胞雜交相比，還可用滅活相比，還可用滅活的病毒誘導的病毒誘導 用途用途 克服遠緣雜交不親和的克服遠緣雜交不親和的障礙，擴展雜交親本范障礙，擴展雜交親本范圍，培育新品種圍，培育新品種 制備單克隆抗體、制備單克隆抗體、病毒疫苗、干擾病毒疫苗、干擾素等素等 4.動物細胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)的比較動物細胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)的比較項目項目 植

27、物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng) 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 培養(yǎng)基的培養(yǎng)基的物理性質物理性質 固體固體 液體液體 培養(yǎng)基培養(yǎng)基的成分的成分 水、礦質元素、維生素、水、礦質元素、維生素、蔗糖、氨基酸、激素、蔗糖、氨基酸、激素、瓊脂等瓊脂等 葡萄糖、氨基酸、無機葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清鹽、維生素、動物血清等等 結果結果 新的植株或組織新的植株或組織 新的細胞系或細胞株新的細胞系或細胞株 目的目的 植株快速繁殖植株快速繁殖脫毒植株的培育脫毒植株的培育人工種子人工種子生產藥物、殺蟲劑等生產藥物、殺蟲劑等轉基因植物的培育轉基因植物的培育 蛋白質生物制品的生產蛋白質生物制品的生產皮膚移植材料的培育皮

28、膚移植材料的培育檢測有毒物質檢測有毒物質生理、病理、藥理學研生理、病理、藥理學研究究 取材取材 植物幼嫩的部位或花植物幼嫩的部位或花藥等藥等 動物胚胎或出生不久的幼齡動動物胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織物的器官或組織 其他條件其他條件 均為無菌操作，需要適宜的溫度、均為無菌操作，需要適宜的溫度、pH等條件等條件 （09江蘇卷）動物器官的體外培養(yǎng)技術對于研江蘇卷）動物器官的體外培養(yǎng)技術對于研究器官的生理、病理過程及其機制意義重大。下圖是究器官的生理、病理過程及其機制意義重大。下圖是一個新生小鼠的肝臟小塊培養(yǎng)裝置示意圖。請回答下一個新生小鼠的肝臟小塊培養(yǎng)裝置示意圖。請回答下列問題：列問題：

29、（1）肝臟切成小薄片，這有利于肝臟細胞）肝臟切成小薄片，這有利于肝臟細胞 。（2）氣室中充入）氣室中充入5CO2：氣體的主要作用是：氣體的主要作用是 。（3）培養(yǎng)液中添加抗生素是為了抑制細菌生長，但要注）培養(yǎng)液中添加抗生素是為了抑制細菌生長，但要注意選擇抗生素的意選擇抗生素的 ，以保證抗生素對肝臟無害。，以保證抗生素對肝臟無害。（4）有機物）有機物X有毒性，可誘發(fā)染色體斷裂。利用上圖所有毒性，可誘發(fā)染色體斷裂。利用上圖所示裝置和提供的下列材料用具，探究肝臟小塊對有機物示裝置和提供的下列材料用具，探究肝臟小塊對有機物X是否具有解毒作用。是否具有解毒作用。材料用具：肝臟小塊，外周血淋巴細胞，淋巴細

30、胞培養(yǎng)材料用具：肝臟小塊，外周血淋巴細胞，淋巴細胞培養(yǎng)液，植物凝集素（刺激淋巴細胞分裂）；顯微鏡，載玻液，植物凝集素（刺激淋巴細胞分裂）；顯微鏡，載玻片，蓋玻片，玻璃皿，滴管；吉姆薩染液（使染色體著片，蓋玻片，玻璃皿，滴管；吉姆薩染液（使染色體著色），有機物色），有機物X溶液等。溶液等。實驗過程：實驗過程：在淋巴細胞培養(yǎng)液中加入植物凝集素培養(yǎng)淋巴細胞，在淋巴細胞培養(yǎng)液中加入植物凝集素培養(yǎng)淋巴細胞，取取4等份，備用。等份，備用。利用甲、乙、丙、丁利用甲、乙、丙、丁4組上圖所示裝置，按下表步組上圖所示裝置，按下表步驟操作（驟操作（“”表示已完成的步驟）。表示已完成的步驟）。 甲甲 乙乙 丙丙 丁丁

31、 步驟一：加入肝臟培養(yǎng)液步驟一：加入肝臟培養(yǎng)液 步驟二：加入有機物步驟二：加入有機物X溶液溶液 步驟三：放置肝臟小塊步驟三：放置肝臟小塊 上表中還需進行的操作是上表中還需進行的操作是 。培養(yǎng)一段時間后，取培養(yǎng)一段時間后，取4組裝置中的等量培養(yǎng)液，分組裝置中的等量培養(yǎng)液，分別添加到別添加到4份備用的淋巴細胞培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)。份備用的淋巴細胞培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)。一段時間后取淋巴細胞分別染色、制片。在顯微鏡一段時間后取淋巴細胞分別染色、制片。在顯微鏡下觀察下觀察 ，并對比分析。若，并對比分析。若丙組淋巴細胞出現異常，而甲組的淋巴細胞正常，則丙組淋巴細胞出現異常，而甲組的淋巴細胞正常，則說明說明 。解析

32、解析 肝臟是動物體內最大的消化腺，還有造血和解肝臟是動物體內最大的消化腺，還有造血和解毒功能。將肝臟切成小薄片，可使肝細胞直接接觸培毒功能。將肝臟切成小薄片，可使肝細胞直接接觸培養(yǎng)液，有利于肝細胞吸收氧氣和營養(yǎng)物質、排出代謝養(yǎng)液，有利于肝細胞吸收氧氣和營養(yǎng)物質、排出代謝廢物。向培養(yǎng)液中充入廢物。向培養(yǎng)液中充入5% CO2，有利于維持培養(yǎng)液，有利于維持培養(yǎng)液的的pH。添加抗生素可抑制細菌生長，但不能用錯、用。添加抗生素可抑制細菌生長，但不能用錯、用多，否則會傷害甚至殺死肝細胞。多，否則會傷害甚至殺死肝細胞。 答案答案 （1）吸收氧氣和營養(yǎng)物質、排出代謝廢物）吸收氧氣和營養(yǎng)物質、排出代謝廢物（2）

33、維持培養(yǎng)液適宜的）維持培養(yǎng)液適宜的pH（3）種類和劑量）種類和劑量（4）向乙（或丁）組裝置中放置肝臟小塊染色體形）向乙（或丁）組裝置中放置肝臟小塊染色體形態(tài)和數量肝臟小塊對有機物態(tài)和數量肝臟小塊對有機物X具有解毒作用具有解毒作用 （09威海二模）日本研究人員依靠體細胞克隆威海二模）日本研究人員依靠體細胞克隆技術進行反復技術進行反復“拷貝拷貝”，成功培育出第四代克隆豬。，成功培育出第四代克隆豬。這個研究小組培育的第一代克隆豬于這個研究小組培育的第一代克隆豬于2004年年4月誕生，月誕生，此后，他們又從長大的克隆豬唾液腺中提取細胞，將此后，他們又從長大的克隆豬唾液腺中提取細胞，將細胞核植入未受精的

34、卵子中，依次培育出第二代和第細胞核植入未受精的卵子中，依次培育出第二代和第三代克隆豬。研究人員發(fā)現，豬與人類身體構造相似，三代克隆豬。研究人員發(fā)現，豬與人類身體構造相似，克隆豬可作為研究人類疾病的實驗動物。根據材料回克隆豬可作為研究人類疾病的實驗動物。根據材料回答下列問題：答下列問題：（1）第四代克隆豬利用了動物細胞核的）第四代克隆豬利用了動物細胞核的 性。性。（2）在細胞核植入受體卵母細胞之前，要用顯微針）在細胞核植入受體卵母細胞之前，要用顯微針去除卵母細胞的去除卵母細胞的 ，再將唾液腺細胞核注入。獲，再將唾液腺細胞核注入。獲得的重組胚胎需要體外培養(yǎng)，培養(yǎng)時不僅要有無機鹽得的重組胚胎需要體外

35、培養(yǎng)，培養(yǎng)時不僅要有無機鹽類和有機鹽類，而且還要有類和有機鹽類，而且還要有 等營養(yǎng)成分等營養(yǎng)成分及及 等物質。當發(fā)育到囊胚期時，將其移植到等物質。當發(fā)育到囊胚期時，將其移植到受體雌動物體內。受體雌動物體內。（3）研究顯示，利用克隆技術根本無法培育出完全）研究顯示，利用克隆技術根本無法培育出完全相同的個體，究其原因，除了發(fā)育過程中的環(huán)境因素相同的個體，究其原因，除了發(fā)育過程中的環(huán)境因素的影響外，還可能有的影響外，還可能有 等原因。等原因。（4）如果希望克隆豬都能生產人體胰島素，那么需）如果希望克隆豬都能生產人體胰島素，那么需要利用要利用 技術，把技術，把 拼接拼接到豬的核基因中。轉基因是否成功都

36、可以用到豬的核基因中。轉基因是否成功都可以用 檢測。檢測。解析解析 體細胞核移植技術利用了動物細胞核的全能性；體細胞核移植技術利用了動物細胞核的全能性；在供體細胞的細胞核移入受體細胞之前，必須將受體在供體細胞的細胞核移入受體細胞之前，必須將受體細胞的遺傳物質去掉或將其破壞。哺乳動物胚胎的培細胞的遺傳物質去掉或將其破壞。哺乳動物胚胎的培養(yǎng)液成分一般都比較復雜，除一些無機鹽類外，還需養(yǎng)液成分一般都比較復雜，除一些無機鹽類外，還需添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營養(yǎng)成分以及添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營養(yǎng)成分以及血清等物質?？寺〖夹g根本無法培育出完全相同的個血清等物質?？寺〖夹g根本無法培育出

37、完全相同的個體，原因可能是在細胞分裂中發(fā)生基因突變或個體發(fā)體，原因可能是在細胞分裂中發(fā)生基因突變或個體發(fā)育中受細胞質基因及環(huán)境的影響?；蛱结樇夹g的原育中受細胞質基因及環(huán)境的影響。基因探針技術的原理是理是DNA分子雜交，可用于疾病診斷、生物檢測等。分子雜交，可用于疾病診斷、生物檢測等。 答案答案 （1）全能）全能（2）細胞核）細胞核 維生素、激素、氨基酸、核苷酸維生素、激素、氨基酸、核苷酸 動動物血清物血清（3）細胞分裂中可能發(fā)生基因突變或卵母細胞的細胞）細胞分裂中可能發(fā)生基因突變或卵母細胞的細胞質內也有遺傳物質質內也有遺傳物質DNA，也控制后代的性狀表達，也控制后代的性狀表達（4）基因工程）

38、基因工程 人的胰島素基因人的胰島素基因 基因探針基因探針考點三考點三 DNADNA的提取與鑒定的提取與鑒定1.DNA1.DNA粗提取的原理粗提取的原理 DNADNA與蛋白質在不同濃度的與蛋白質在不同濃度的NaClNaCl溶液中的溶解度不同。溶液中的溶解度不同。溶解規(guī)律溶解規(guī)律 2 mol/L NaCl 0.14 mol/L NaCl DNA 溶解溶解 析出析出 蛋白蛋白質質 NaCl溶液濃度從溶液濃度從2 mol/L降低過程降低過程 中，溶解度逐漸增大中，溶解度逐漸增大 部分發(fā)生部分發(fā)生鹽析沉淀鹽析沉淀 溶解溶解 由上表可以看出，在由上表可以看出，在NaCl溶液濃度為溶液濃度為2 mol/L時

39、，時，DNA溶解，而部分蛋白質發(fā)生鹽析生成沉淀，通過過溶解，而部分蛋白質發(fā)生鹽析生成沉淀，通過過濾可除去部分蛋白質；濾可除去部分蛋白質；NaCl溶液濃度為溶液濃度為0.14 mol/L時，時，DNA析出，過濾可除去溶解的部分蛋白質。析出，過濾可除去溶解的部分蛋白質。2.方法步驟方法步驟 破碎細胞破碎細胞 雞血細胞中加入一定量的蒸餾水，同時用雞血細胞中加入一定量的蒸餾水，同時用 玻璃棒沿一個方向快速攪拌玻璃棒沿一個方向快速攪拌紗布過濾，濾液中含紗布過濾，濾液中含DNA和其他核物質，和其他核物質， 如蛋白質、如蛋白質、RNA等等 溶解核內溶解核內DNA：上述濾液：上述濾液+2 mol/L的的NaC

40、l溶液，玻溶液，玻 璃棒沿同一方向攪拌璃棒沿同一方向攪拌 過濾除去不溶雜質過濾除去不溶雜質析出含析出含DNA的絲狀物：向上述濾液中緩緩加入蒸餾水，的絲狀物：向上述濾液中緩緩加入蒸餾水， 并輕輕地沿一個方向攪拌，出現絲狀物，當絲狀物并輕輕地沿一個方向攪拌，出現絲狀物，當絲狀物 不再增加時，停止加水（此時不再增加時，停止加水（此時NaCl濃度為濃度為0.14 mol/L） 過濾，取含過濾，取含DNA的絲狀物：用多層紗布過濾，含的絲狀物：用多層紗布過濾，含DNA的的 絲狀物留在紗布上絲狀物留在紗布上 DNA絲狀物再溶解：再次用絲狀物再溶解：再次用2 mol/L的的NaCl溶解溶解DNA 提取含雜質較

41、少的提取含雜質較少的DNA：將上述濾液：將上述濾液+體積分數為體積分數為95% 的冷卻的酒精靜置的冷卻的酒精靜置23 min，溶液中出現白色絲狀，溶液中出現白色絲狀 物，用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起絲狀物物，用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起絲狀物3.DNA的鑒定的鑒定（1）原理）原理:DNA+二苯胺二苯胺 藍色藍色（2）步驟）步驟沸水加熱沸水加熱 5 min項目項目 兩支兩支20 mL的試管的試管 1號號 2號號 實實驗驗步步驟驟 加入加入2 mol/L的的NaCl溶液溶液 5 mL 5 mL 加入絲狀物（加入絲狀物（DNA） - 用玻璃棒攪拌用玻璃棒攪拌 - 絲狀物溶解絲狀物溶解 加入二苯胺試劑

42、加入二苯胺試劑 4 mL 4 mL 沸水浴加熱沸水浴加熱 5 min 5 min 觀察現象觀察現象 不變藍不變藍 變藍變藍 （09江蘇卷）下列關于江蘇卷）下列關于DNA和蛋白質提取與分和蛋白質提取與分離實驗的敘述，正確的有（多選）離實驗的敘述，正確的有（多選） （ ）A.提取細胞中的提取細胞中的DNA和蛋白質都需用蒸餾水漲破細胞和蛋白質都需用蒸餾水漲破細胞B.用不同濃度用不同濃度NaCl溶液反復溶解與析出溶液反復溶解與析出DNA可去除可去除蛋白質蛋白質C.蛋白質提取和分離過程中進行透析可去除溶液中的蛋白質提取和分離過程中進行透析可去除溶液中的DNAD.蛋白質和蛋白質和DNA都可以用電泳的方法進

43、行分離純化都可以用電泳的方法進行分離純化解析解析 提取細胞中的提取細胞中的DNA要用蒸餾水漲破細胞，提取要用蒸餾水漲破細胞，提取蛋白質要用蒸餾水和甲苯使紅細胞破裂；蛋白質提取蛋白質要用蒸餾水和甲苯使紅細胞破裂；蛋白質提取和分離過程中進行透析可除去相對分子質量較小的雜和分離過程中進行透析可除去相對分子質量較小的雜質，而將大分子保留在袋內。故質，而將大分子保留在袋內。故A、C項錯誤。項錯誤。 BD 如圖為如圖為DNA的粗提取與鑒定實驗裝置：的粗提取與鑒定實驗裝置：（1）實驗材料選用雞血球液，而不用雞全血，主要）實驗材料選用雞血球液，而不用雞全血，主要原因是雞血球液中有較高含量的原因是雞血球液中有較

44、高含量的 。（2）在圖）在圖A所示的實驗步驟中加蒸餾水的目的是所示的實驗步驟中加蒸餾水的目的是 ，通過圖，通過圖B所示的步驟取得濾液，再在所示的步驟取得濾液，再在溶液中加入溶液中加入2 mol/L的的NaCl溶液的目的是溶液的目的是 ；圖；圖C所示實驗步驟中加蒸餾水的目的是所示實驗步驟中加蒸餾水的目的是 。（3）為鑒定實驗所得絲狀物的主要成分是）為鑒定實驗所得絲狀物的主要成分是DNA，可，可滴加滴加 溶液，結果絲狀物被染成綠色。溶液，結果絲狀物被染成綠色。解析解析 “DNA粗提取與鑒定粗提取與鑒定”的實驗材料選用雞血球的實驗材料選用雞血球液，而不用雞全血，主要原因是液，而不用雞全血，主要原因是

45、DNA主要儲存于細胞主要儲存于細胞核內，而不在血漿內，使用雞血球液提高材料中的細核內，而不在血漿內，使用雞血球液提高材料中的細胞數量和胞數量和DNA含量，從而可以保證實驗提取到的含量，從而可以保證實驗提取到的DNA數量。圖數量。圖A、B、C所示為本實驗的三個關鍵步驟。圖所示為本實驗的三個關鍵步驟。圖A通過添加蒸餾水，血細胞與蒸餾水相混合而使血細通過添加蒸餾水，血細胞與蒸餾水相混合而使血細胞處于極低濃度的溶液中，細胞因大量吸水而導致最胞處于極低濃度的溶液中，細胞因大量吸水而導致最終破裂，并釋放出胞內物。圖終破裂，并釋放出胞內物。圖B通過紗布過濾使血細通過紗布過濾使血細胞釋放出的胞釋放出的DNA濾

46、入收集的濾液中（將大量膠狀物濾濾入收集的濾液中（將大量膠狀物濾出），再在濾液中加入出），再在濾液中加入2 mol/L的的NaCl溶液使溶液使DNA的的溶解度增加。圖溶解度增加。圖C在在DNA濃鹽溶液中加入蒸餾水（大濃鹽溶液中加入蒸餾水（大量），可使溶液的量），可使溶液的NaCl濃度降至較底，由于濃度降至較底，由于DNA在在較低濃度的較低濃度的NaCl溶液中溶解度很低（在溶液中溶解度很低（在0.14 mol/L的的NaCl溶液中溶解度最低，濃度再變小則溶液中溶解度最低，濃度再變小則DNA溶解度溶解度將增大），使將增大），使DNA析出，經過濾等手段可以收集到析出，經過濾等手段可以收集到DNA。甲基

47、綠為比較常用的細胞核染色劑，染色后細。甲基綠為比較常用的細胞核染色劑，染色后細胞核中染色體呈綠色，屬堿性染料，可以用來鑒定胞核中染色體呈綠色，屬堿性染料，可以用來鑒定DNA。 答案答案 （1）DNA （2）使血細胞破裂）使血細胞破裂 使濾液中的使濾液中的DNA溶于濃鹽溶液溶于濃鹽溶液 使使DNA析出析出 （3）甲基綠）甲基綠例例1 英國科學家維爾莫特首次用羊的體細胞（乳腺細英國科學家維爾莫特首次用羊的體細胞（乳腺細胞）成功地培育出一只小母羊，取名為胞）成功地培育出一只小母羊，取名為“多利多利”，這一方法被稱為這一方法被稱為“克隆克隆”，以下四項中與此方法在，以下四項中與此方法在本質上最相近的是

48、本質上最相近的是（） A.將兔的早期胚胎分割后，分別植入兩只母兔子宮將兔的早期胚胎分割后，分別植入兩只母兔子宮 內，并最終發(fā)育成兩只一樣的兔內，并最終發(fā)育成兩只一樣的兔 B.將人的抗病毒基因嫁接到煙草的將人的抗病毒基因嫁接到煙草的DNA分子上，培分子上，培 育出具有抗病能力的煙草新品種育出具有抗病能力的煙草新品種 C.將鼠骨髓瘤細胞與經過免疫的腺細胞融合成雜交將鼠骨髓瘤細胞與經過免疫的腺細胞融合成雜交 瘤細胞瘤細胞D.將人的精子與卵細胞在體外受精，待受精卵在試管內將人的精子與卵細胞在體外受精，待受精卵在試管內發(fā)育到囊胚期時，再植入女性子宮內發(fā)育成發(fā)育到囊胚期時，再植入女性子宮內發(fā)育成“試管嬰兒

49、試管嬰兒”解析解析 “克隆克隆”是采用細胞核移植技術，屬于無性生殖。是采用細胞核移植技術，屬于無性生殖。將兔的早期胚胎分割后，分別植入兩只母兔子宮內，并將兔的早期胚胎分割后，分別植入兩只母兔子宮內，并最終發(fā)育成兩只一樣的兔屬于胚胎分割移植，屬無性生最終發(fā)育成兩只一樣的兔屬于胚胎分割移植，屬無性生殖。將人的抗病毒基因嫁接到煙草的殖。將人的抗病毒基因嫁接到煙草的DNA分子上，培育分子上，培育出具有抗病能力的煙草新品種，這屬于基因工程技術。出具有抗病能力的煙草新品種，這屬于基因工程技術。“試管嬰兒試管嬰兒”是胚胎移植技術，屬于有性生殖。是胚胎移植技術，屬于有性生殖。答案答案 A方法點撥方法點撥 做好

50、本題的關鍵是要準確區(qū)分胚胎移植、胚做好本題的關鍵是要準確區(qū)分胚胎移植、胚胎分割移植和細胞核移植技術。胎分割移植和細胞核移植技術。 例例2 如圖為某種質粒表達載體簡圖，小箭頭所指分別如圖為某種質粒表達載體簡圖，小箭頭所指分別為限制性為限制性EcoEcoR、BamBamH的酶切位點，的酶切位點， ampR為青霉素抗性基因，為青霉素抗性基因，terR為四環(huán)素為四環(huán)素 抗性基因，抗性基因，P為啟動子，為啟動子，T為終止子，為終止子，ori 為復制原點。已知目的基因的兩端分別有為復制原點。已知目的基因的兩端分別有 包括包括EcoEcoR、BamBamH在內的多種酶的酶切位點。在內的多種酶的酶切位點。 據

51、圖回答下列問題：據圖回答下列問題： （1）將含有目的基因的）將含有目的基因的DNA與質粒表達載體分別用與質粒表達載體分別用EcoEcoR酶切，酶切產物用酶切，酶切產物用DNA連接酶進行連接后，連接酶進行連接后，其中由兩個其中由兩個DNA片段之間連接形成的產物有片段之間連接形成的產物有 、 、 三種。若要從這些連三種。若要從這些連接產物中分離出重組質粒，需要對這些連接產物進接產物中分離出重組質粒，需要對這些連接產物進行行 。（2）用上述）用上述3種連接產物與無任何抗藥性的原核宿主種連接產物與無任何抗藥性的原核宿主細胞進行轉化實驗。之后將這些宿主細胞接種到含四細胞進行轉化實驗。之后將這些宿主細胞接

52、種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細胞所含有的連環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細胞所含有的連接物是接物是 ；若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，；若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細胞所含有的連接產物是能生長的原核宿主細胞所含有的連接產物是 。（3）目的基因表達時，）目的基因表達時，RNA聚合酶識別和結合的位聚合酶識別和結合的位點是點是 ，其合成的產物是，其合成的產物是 。（4）在上述實驗中，為了防止目的基因和質粒表達）在上述實驗中，為了防止目的基因和質粒表達載體在酶切后產生的末端發(fā)生任意連接，酶切時應選載體在酶切后產生的末端發(fā)生任意連接，酶切時應選用的酶是用的酶是 。解析解析 （1

53、）用）用EcoEcoR酶切出的目的基因和質粒具有相酶切出的目的基因和質粒具有相同的黏性末端，如果放在一起加入同的黏性末端，如果放在一起加入DNA連接酶，則可連接酶，則可出現三種連接結果，即會出現目的基因自身形成的連出現三種連接結果，即會出現目的基因自身形成的連接物，載體自身形成的連接物和重組質粒，要通過篩接物，載體自身形成的連接物和重組質粒，要通過篩選、純化才能選出符合要求的選、純化才能選出符合要求的DNA。（。（2）載體自身）載體自身形成的連接物能重新形成完整的形成的連接物能重新形成完整的tetR基因，具有抗四基因，具有抗四環(huán)素的特點，其他連接物中環(huán)素的特點，其他連接物中tetR基因被限制酶

54、破壞，基因被限制酶破壞，不再具有抗四環(huán)素的特點；在整個操作過程中，不再具有抗四環(huán)素的特點；在整個操作過程中，ampR基因保持完整，質粒自身形成的連接物和重組基因保持完整，質粒自身形成的連接物和重組質粒都具有抗青霉素的特性。（質粒都具有抗青霉素的特性。（3）RNA聚合酶與相聚合酶與相關基因的啟動子結合，完成的是轉錄過程。（關基因的啟動子結合，完成的是轉錄過程。（4）將）將含有目的基因的靶含有目的基因的靶DNA片段和載體分別用兩個不同的片段和載體分別用兩個不同的限制酶切割，使兩種限制酶切割，使兩種DNA片段自身的片段自身的5和和3黏性末端黏性末端不同，但二者相同末端又互補，這明顯減少靶不同，但二者

55、相同末端又互補，這明顯減少靶DNA片片段和載體自身環(huán)化與串連，使外源段和載體自身環(huán)化與串連，使外源DNA片段能正確插片段能正確插入載體啟動子下游。在本題中目的基因兩端有入載體啟動子下游。在本題中目的基因兩端有EcoEcoR酶切點和酶切點和Bam Bam H酶切點，在質粒載體上也有這兩種酶切點，在質粒載體上也有這兩種酶的切點，所以可以用這兩種酶切出非同源性互補末酶的切點，所以可以用這兩種酶切出非同源性互補末端來阻止其他連接。端來阻止其他連接。 答案答案 （1）目的基因）目的基因載體連接物載體連接物 載體載體載體連接載體連接物物 目的基因目的基因目的基因連接物目的基因連接物 分離純化分離純化（2）

56、載體）載體載體連接物載體連接物 目的基因目的基因載體連接物、載載體連接物、載體體載體連接物載體連接物（3）啟動子）啟動子 mRNA（4）Eco Eco R和和Bam Bam H錯因分析錯因分析 由于對基因工程工具酶的應用理解不到位，由于對基因工程工具酶的應用理解不到位，特別是兩種工具酶與獲取目的基因和表達載體之間的特別是兩種工具酶與獲取目的基因和表達載體之間的聯系與拓展掌握不好，造成錯誤。聯系與拓展掌握不好，造成錯誤。第（第（1）小題中，由于含有目的基因的）小題中，由于含有目的基因的DNA片段和質片段和質粒上均含有粒上均含有EcoEcoR酶的切割位點，所以用此酶切割后酶的切割位點，所以用此酶切

57、割后產生相同的黏性末端。這樣，具有相同的黏性末端的產生相同的黏性末端。這樣，具有相同的黏性末端的片段用片段用DNA連接酶均可連接，從而產生連接酶均可連接，從而產生3類連接產物，類連接產物，這是教材知識的一種拓展，也是最易出錯的地方。這是教材知識的一種拓展，也是最易出錯的地方。1.（09浙江理綜）下列關于基因工程的敘述，錯誤的浙江理綜）下列關于基因工程的敘述，錯誤的是是( () ) A.目的基因和受體細胞均可來自動、植物或微生物目的基因和受體細胞均可來自動、植物或微生物 B.限制性核酸內切酶和限制性核酸內切酶和DNA連接酶是兩類常用的工連接酶是兩類常用的工 具酶具酶 C.人胰島素原基因在大腸桿菌

58、中表達的胰島素原無人胰島素原基因在大腸桿菌中表達的胰島素原無 生物活性生物活性 D.載體上的抗性基因有利于篩選含重組載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細胞的細胞 和促進目的基因的表達和促進目的基因的表達解析解析 基因工程中目的基因和受體細胞均可來自動、基因工程中目的基因和受體細胞均可來自動、植物或微生物；常用的工具酶是限制性核酸內切酶和植物或微生物；常用的工具酶是限制性核酸內切酶和DNA連接酶；人胰島素原基因在大腸桿菌中表達的胰連接酶；人胰島素原基因在大腸桿菌中表達的胰島素原無生物活性，只有經過一定的物質激活以后，島素原無生物活性，只有經過一定的物質激活以后，才有生物活性。載體上的抗性基

59、因主要是有利于篩選才有生物活性。載體上的抗性基因主要是有利于篩選含重組含重組DNA的細胞，不能促進目的基因的表達。所以的細胞，不能促進目的基因的表達。所以D錯誤。錯誤。答案答案 D2.（09廣東理基）錢永健先生因在研究綠色熒光蛋白廣東理基）錢永健先生因在研究綠色熒光蛋白方面的杰出成就而獲方面的杰出成就而獲2008年諾貝爾獎。在某種生物年諾貝爾獎。在某種生物中檢測不到綠色熒光，將水母綠色熒光蛋白基因轉中檢測不到綠色熒光，將水母綠色熒光蛋白基因轉入該生物體內后，結果可以檢測到綠色熒光。由此入該生物體內后，結果可以檢測到綠色熒光。由此可知可知 （ ） A.該生物的基因型是雜合的該生物的基因型是雜合的

60、 B.該生物與水母有很近的親緣關系該生物與水母有很近的親緣關系 C.綠色熒光蛋白基因在該生物體內得到了表達綠色熒光蛋白基因在該生物體內得到了表達 D.改變綠色熒光蛋白基因的改變綠色熒光蛋白基因的1個核苷酸對，就不能個核苷酸對，就不能 檢測到綠色熒光檢測到綠色熒光 解析解析 某種生物中檢測不到綠色熒光，將水母綠色熒某種生物中檢測不到綠色熒光，將水母綠色熒光蛋白基因轉入該生物體內后，結果可以檢測到綠光蛋白基因轉入該生物體內后，結果可以檢測到綠色熒光，說明綠色熒光蛋白基因在該生物體內得到色熒光，說明綠色熒光蛋白基因在該生物體內得到了表達。了表達。 答案答案 C3.（09浙江理綜）用動、植物成體的體細

61、胞進行離體浙江理綜）用動、植物成體的體細胞進行離體培養(yǎng)，下列敘述正確的是培養(yǎng)，下列敘述正確的是 ( ( ) ) A.都需用都需用CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱 B.都須用液體培養(yǎng)基都須用液體培養(yǎng)基 C.都要在無菌條件下進行都要在無菌條件下進行 D.都可體現細胞的全能性都可體現細胞的全能性 解析解析 動、植物成體的體細胞進行離體培養(yǎng)都要在無動、植物成體的體細胞進行離體培養(yǎng)都要在無菌條件下進行；動物成體的體細胞離體培養(yǎng)用液體菌條件下進行；動物成體的體細胞離體培養(yǎng)用液體培養(yǎng)基，不能體現細胞的全能性；植物成體的體細培養(yǎng)基，不能體現細胞的全能性；植物成體的體細胞離體培養(yǎng)不一定用液體培養(yǎng)基，能體現細胞的全胞離體培養(yǎng)不

62、一定用液體培養(yǎng)基，能體現細胞的全能性。能性。C4.（08寧夏理綜）回答下列有關動物細胞培養(yǎng)的問題：寧夏理綜）回答下列有關動物細胞培養(yǎng)的問題： （1）在動物細胞培養(yǎng)過程中，當貼壁細胞分裂生長）在動物細胞培養(yǎng)過程中，當貼壁細胞分裂生長到細胞表面到細胞表面 時，細胞會停止分裂增殖，這種時，細胞會停止分裂增殖，這種現象稱為細胞的現象稱為細胞的 。此時，瓶壁上形成的細。此時，瓶壁上形成的細胞層數是胞層數是 。要使貼壁的細胞從瓶壁上分離下。要使貼壁的細胞從瓶壁上分離下來，需要用酶處理，可用的酶是來，需要用酶處理，可用的酶是 。 （2）隨著細胞傳代次數的增多，絕大部分細胞分裂）隨著細胞傳代次數的增多，絕大部

63、分細胞分裂停止，進而出現停止，進而出現 的現象；但極少數細胞可的現象；但極少數細胞可以連續(xù)增殖，其中有些細胞會因遺傳物質發(fā)生改變以連續(xù)增殖，其中有些細胞會因遺傳物質發(fā)生改變而變成而變成 細胞，該種細胞的黏著性細胞，該種細胞的黏著性 ，細，細胞膜表面蛋白質（糖蛋白）的量胞膜表面蛋白質（糖蛋白）的量 。（3）現用某種大分子染料，對細胞進行染色時，觀）現用某種大分子染料，對細胞進行染色時，觀察到死細胞被染色，而活細胞不染色，原因是察到死細胞被染色，而活細胞不染色，原因是 。（4）檢查某種毒物是否能改變細胞染色體的數目，）檢查某種毒物是否能改變細胞染色體的數目，最好選用細胞分裂到最好選用細胞分裂到 期

64、的細胞用顯微鏡期的細胞用顯微鏡進行觀察。進行觀察。（5）在細胞培養(yǎng)過程中，通常在）在細胞培養(yǎng)過程中，通常在 條件下保條件下保存細胞。因為在這種條件下，細胞中存細胞。因為在這種條件下，細胞中 的活的活性降低，細胞的性降低，細胞的 速率降低。速率降低。（6）給患者移植經細胞培養(yǎng)形成的皮膚組織后，發(fā)）給患者移植經細胞培養(yǎng)形成的皮膚組織后，發(fā)生了排斥現象，這是因為機體把移植的皮膚組織當作生了排斥現象，這是因為機體把移植的皮膚組織當作 進行攻擊。進行攻擊。解析解析 細胞增殖過程中存在接觸抑制現象，即正常細細胞增殖過程中存在接觸抑制現象，即正常細胞在體外培養(yǎng)時表現為貼壁生長和匯合成單層后停止胞在體外培養(yǎng)時

65、表現為貼壁生長和匯合成單層后停止生長，需用胰蛋白酶處理后再分瓶培養(yǎng)；在細胞培養(yǎng)生長，需用胰蛋白酶處理后再分瓶培養(yǎng)；在細胞培養(yǎng)過程中，部分細胞的遺傳物質會發(fā)生改變，會增加細過程中，部分細胞的遺傳物質會發(fā)生改變，會增加細胞分裂的次數；活細胞的細胞膜具有選擇透過性，大分胞分裂的次數；活細胞的細胞膜具有選擇透過性，大分子染料無法進入細胞內部，因此不能著色；進行器官移子染料無法進入細胞內部，因此不能著色；進行器官移植時，會發(fā)生免疫排斥，移植的器官會被機體當作抗原。植時，會發(fā)生免疫排斥，移植的器官會被機體當作抗原。答案答案 （1）相互接觸）相互接觸 接觸抑制接觸抑制 單層（或一層）單層（或一層） 胰胰蛋白

66、酶蛋白酶（2）衰老甚至死亡）衰老甚至死亡 不死性不死性 降低降低 減少減少（3）由于活細胞的膜具有選擇透過性，大分子染料不能）由于活細胞的膜具有選擇透過性，大分子染料不能進入活細胞內，故活細胞不能著色（或由于死細胞的膜進入活細胞內，故活細胞不能著色（或由于死細胞的膜喪失了選擇透過性，大分子染料能夠進入死細胞內而著喪失了選擇透過性，大分子染料能夠進入死細胞內而著色）色）（4）中）中 （5）冷凍（或超低溫、液氮）冷凍（或超低溫、液氮） 酶酶 新陳代謝新陳代謝（6）抗原）抗原5.（09山東理綜）人類在預防與診療傳染性疾病過程山東理綜）人類在預防與診療傳染性疾病過程中，經常使用疫苗和抗體。已知某傳染性疾病的病中，經常使用疫苗和抗體。已知某傳染性疾病的病原體為原體為RNA病毒，該病毒表面的病毒，該病毒表面的A蛋白為主要抗原，蛋白為主要抗原，其疾苗生產和抗體制備的流程之一如下圖：其疾苗生產和抗體制備的流程之一如下圖： 請回答：請回答：（1）過程）過程代表的是代表的是 。（2）過程）過程構建構建A基因表達載體時，必須使用基因表達載體時，必須使用 和和 兩種工具酶。兩種工具酶。（3）過程）過程采用的實