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1、水果蔬菜中農藥殘留檢測技術水果蔬菜中農藥殘留檢測技術1行業(yè)知識第一章第一章 概述概述 第二章第二章 樣品前處理過程樣品前處理過程 第三第三章章 NY/T761-2008NY/T761-2008方法介紹及注意事項方法介紹及注意事項2行業(yè)知識概述概述 隨著農業(yè)科學技術的發(fā)展，化學農藥的隨著農業(yè)科學技術的發(fā)展，化學農藥的品種和數量不斷增加，已成為防治病蟲害的品種和數量不斷增加，已成為防治病蟲害的主要手段。主要手段。 農藥污染問題經常發(fā)生，農藥殘留量超農藥污染問題經常發(fā)生，農藥殘留量超標相當嚴重，并逐年加劇。標相當嚴重，并逐年加劇。 大力開展農藥殘留量檢測技術以及相關的大力開展農藥殘留量檢測技術以及相

2、關的前處理技術的研究是非常必要的。前處理技術的研究是非常必要的。 3行業(yè)知識 主要表現：主要表現：血液中血液中膽堿酯酶受抑膽堿酯酶受抑，活力下降，使分解，活力下降，使分解乙酰膽堿的能力喪失乙酰膽堿的能力喪失，從而引起一系列的中毒表現，如，從而引起一系列的中毒表現，如出出汗、肌肉顫動、心跳加快、瞳孔縮小等，嚴重的可導致中汗、肌肉顫動、心跳加快、瞳孔縮小等，嚴重的可導致中樞神經系統(tǒng)功能失常。樞神經系統(tǒng)功能失常。蓄積于脂肪含量較高的組織和臟器蓄積于脂肪含量較高的組織和臟器主要損害肝、腎和神經中樞主要損害肝、腎和神經中樞動物實驗表明有機氯農藥對動物有誘發(fā)肝癌的作用動物實驗表明有機氯農藥對動物有誘發(fā)肝癌

3、的作用有機磷類農藥的危害有機磷類農藥的危害有機氯類農藥的危害有機氯類農藥的危害4行業(yè)知識 毒性：與人體細胞色素氧化酶結合，造成毒性：與人體細胞色素氧化酶結合，造成 組織細胞內窒息組織細胞內窒息 中毒癥狀：神經系統(tǒng)癥狀及皮膚刺激癥狀中毒癥狀：神經系統(tǒng)癥狀及皮膚刺激癥狀 對魚類有很高的蓄積性，有對魚類有很高的蓄積性，有“三致三致”作用作用擬除蟲菊酯類農藥的危害擬除蟲菊酯類農藥的危害 在胃中酸性條件下可與食物中的亞硝基化合物的前在胃中酸性條件下可與食物中的亞硝基化合物的前體物質亞硝酸鹽和硝酸鹽反應生成強致癌性的亞硝基化體物質亞硝酸鹽和硝酸鹽反應生成強致癌性的亞硝基化合物（合物（NOC），因此認為氨基

4、甲酸酯類殺蟲劑可能具有），因此認為氨基甲酸酯類殺蟲劑可能具有致畸、致突變、致癌，并推斷氨基甲酸酯類殺蟲劑本身致畸、致突變、致癌，并推斷氨基甲酸酯類殺蟲劑本身在環(huán)境中也能形成亞硝胺。在環(huán)境中也能形成亞硝胺。氨基甲酸酯類農藥的危害氨基甲酸酯類農藥的危害5行業(yè)知識甲胺磷、久效磷、甲基對硫磷、對硫磷、磷胺 2004年：撤消其生產、銷售年：撤消其生產、銷售20052006年：僅用于棉花、小麥、玉米、水稻年：僅用于棉花、小麥、玉米、水稻 2007年年1月月1日：中國全面禁止日：中國全面禁止我國全面禁用的我國全面禁用的5種高毒農藥種高毒農藥6行業(yè)知識食品中農藥殘留檢驗的特點食品中農藥殘留檢驗的特點n食品殘留

5、量含量很低n食品中的其他成分含量大大高于農藥殘留，易對其測定產生干擾n樣品前處理及檢驗要求高n農藥殘留：指農藥施用后，殘存在生物體、農副產品和環(huán)境中的微量農藥原體、有毒代謝產物、降解物和雜質的總稱。殘留的數量叫殘留量。農藥殘留量（農藥殘留量（mg/kg）=農藥本身農藥本身+其代謝物的殘留量其代謝物的殘留量7行業(yè)知識蔬菜和水果中殘留農藥檢測方法 根據根據農藥農藥 的化學特性和毒理學性質，的化學特性和毒理學性質，檢測檢測農藥農藥 的方法有二大類：的方法有二大類： 快速檢驗法（快速檢驗法（乙酰膽堿酯酶抑制法乙酰膽堿酯酶抑制法） 儀器分析法（氣相或儀器分析法（氣相或氣相氣相- -質譜聯用法質譜聯用法）

6、8行業(yè)知識樣品前處理的目的樣品前處理的目的檢測痕量組分檢測痕量組分復雜的體系復雜的體系將待測組分與母體或基體分離濃縮濃縮痕量的被測組分痕量的被測組分樣品預處理新技術與方法的探索與研究已成為當樣品預處理新技術與方法的探索與研究已成為當代分析化學的重要課題與發(fā)展方向之一。代分析化學的重要課題與發(fā)展方向之一。9行業(yè)知識完整的樣品分析過程色譜分析過程時間分配示意圖色譜分析過程時間分配示意圖 61%6%27%6%樣 品 采 集樣 品 前 處 理分 析 測 試數 據 處 理 與 報 告樣品采集樣品采集樣品前處理樣品前處理分析測定分析測定數據處理數據處理報告結果報告結果痕量有痕量有機物機物10行業(yè)知識正確采

7、樣的意義: 均勻、代表性 采樣的過程便是由檢樣原始樣品平均樣品試樣的過程。 不同質量的檢樣單獨作為原始樣品、平均樣品、試樣，單獨進行分析。 隨機隨意 (一一)樣品采集樣品采集11行業(yè)知識12行業(yè)知識n根據待測成分與其它成分結合的狀況以及與其它大量基質的性質上某種差異，選擇適當的方法將待測成分釋放并分離出來，同時還排除一些其它成分的干擾。n常用的提取方法有溶劑浸取法、蒸餾法、酶解或酸解釋放法等。1.提取提取13行業(yè)知識依據相似相溶判斷查閱文獻資料試驗確定選擇極性相近的溶劑14行業(yè)知識（1 1）溶劑提）溶劑提取法取法浸漬法浸漬法搗碎法搗碎法索氏提取法索氏提取法加速溶劑萃取法加速溶劑萃取法 蒸餾蒸餾

8、液液萃取液液萃取提取劑的選擇：相似相溶原理 （1） 沸點在4580 （2） 選穩(wěn)定性好的溶劑15行業(yè)知識 A.提取方法比較 方法 特 點1索氏提取法經典提取法, 提取效果好,時間長、干擾物質多2振蕩法通常樣品經溶劑浸泡過夜后, 振蕩提取。此法便于批量操作, 但要求待測農藥非內吸性。3勻漿法通常用組織搗粹機快速勻漿12分鐘。此法簡便、快速, 但不能批量操作。4超聲提取法此法便于批量操作, 但要注意超聲波的功率, 在超聲提取的過程中, 要用玻璃棒多次攪拌樣品5消煮法要求待測農藥具有熱穩(wěn)定性和低揮發(fā)性6快速溶劑提取提取速度快，效率高16行業(yè)知識（2）蒸餾法 蒸餾法是利用待測成分與其它物質的蒸氣壓的不

9、同而進行分離與提純的一種方法。這一方法常用于將揮發(fā)性物質與不揮發(fā)性物質分離，或用于沸點不同的物質分離。常用的蒸餾法有： （1）氣液平衡法 ,依據拉烏爾定律 （頂空氣相色譜法） （2）常壓蒸餾法（3）分餾法 （4）減壓蒸餾法 （5）水蒸氣蒸餾法17行業(yè)知識2. 凈化n使用有機溶劑提取樣本中的農藥時，樣本中的油脂、蠟質、蛋白質、葉綠素及其他色素、胺類、酚類、有機酸類、糖類等會同農藥一起被提取出來，提取液中既有農藥又有許多干擾物質，這些物質亦稱共提物，會嚴重干擾殘留量的測定。故必須將農藥與上述雜質進行分離，然后才能對痕量農藥進行分析測定。n凈化(cleanup)是指通過物理的或化學的方法去除提取物中

10、對測定有干擾作用的雜質的過程。 凈化目的：是去掉樣品中的脂肪、蠟質與色素等, 以除去測定時的干擾及保護儀器。18行業(yè)知識農藥殘留分析中常見的干擾雜質類別化合物脂類蠟質、脂肪、油脂色素葉綠素、葉黃素、花青素氨基酸衍生物蛋白質、肽、生物堿、氨基酸碳水化合物糖、淀粉、醇木質素酚類及其衍生物萜類單萜、倍半萜、二萜等環(huán)境污染物各種有機物、礦物、硫、多氯聯苯、鄰苯二甲酸酯、碳氫化合物等19行業(yè)知識凈化的方法凈化的方法 液液萃取液液萃取 磺化法磺化法 皂化法皂化法 沉淀分離沉淀分離法法 柱色譜柱色譜固相萃取固相萃取 QuEChERS法法20行業(yè)知識(1)液 液分配法 利用待測農藥與雜質在兩種互不相溶的溶劑中

11、. 溶解度的差異而達到分離的目的。通常采用極性/非極性的溶劑組合進行分配。21行業(yè)知識（2.）柱色譜）柱色譜ABCABC的混合液的混合液22行業(yè)知識 用來除去樣品中脂肪、色素，使本來憎水性油脂用來除去樣品中脂肪、色素，使本來憎水性油脂色素變成親水性化合物，從樣品中分離出去。色素變成親水性化合物，從樣品中分離出去。（5）沉淀分離法）沉淀分離法 利用沉淀反應進行分離。在試樣中加入適當的利用沉淀反應進行分離。在試樣中加入適當的沉淀劑，使被測組分沉淀下來或將干擾組分沉淀下沉淀劑，使被測組分沉淀下來或將干擾組分沉淀下來，再經過濾或離心把沉淀和母液分開。來，再經過濾或離心把沉淀和母液分開。（3）磺化法（）

12、磺化法（4）皂化法）皂化法除去脂肪除去脂肪除去脂肪除去脂肪和色素和色素23行業(yè)知識(6)固相萃取法（Solid Phase Extraction，SPE）n原理：n利用固定相將液體樣品中的待測組分吸附，與樣品中基利用固定相將液體樣品中的待測組分吸附，與樣品中基體和干擾組分分離，然后用洗脫液洗脫，達到分離或富體和干擾組分分離，然后用洗脫液洗脫，達到分離或富集待測組分目的。集待測組分目的。活化（再生）活化（再生） 加樣加樣 洗滌洗滌 洗脫洗脫24行業(yè)知識（7）QuEChERS方法nQuEChERS方法實質是固相萃取技術與基質固相分散技術的衍生和進一步的發(fā)展。該方法的核心是它提出了加入單一溶劑乙腈提

13、取農藥的新模式；并通過具有更強吸水功能的試劑無水硫酸鎂代替常用的無水硫酸鈉；采用PSA(N一丙基乙二胺)和GCB(石墨化碳黑)凈化，去除脂肪酸、有機酸和色素。 25行業(yè)知識（3）濃縮）濃縮目的：縮小樣品液的體積、提高待測組分的濃度方法： 常壓濃縮常壓濃縮 待測物易損失、需轉移定容，增大樣液體積 氣流吹蒸濃縮法氣流吹蒸濃縮法 空氣或N2吹拂樣液表面，輔以水浴加熱 減壓濃縮減壓濃縮 KD濃縮器、旋轉蒸發(fā)器，水浴加熱并抽氣減 壓，濃縮速度快，被測組分損失少。26行業(yè)知識K-D濃縮法(Kuderna-Danish evaporative concentration)是利用K-D濃縮器直接濃縮到刻度試管

14、中，適合于中等體積（1050 mL）提取液的濃縮。K-D蒸發(fā)濃縮器是為濃縮易揮發(fā)性溶劑而設計的，其特點是濃縮瓶與施耐德分餾柱連接，下接有刻度的收集管，可以有效地減少濃縮過程中農藥的損失，且其樣品收集管能在濃縮后直接定容測定，無需轉移樣品 。 27行業(yè)知識旋轉蒸發(fā)器旋轉蒸發(fā)器使用時，水浴溫度不宜超使用時，水浴溫度不宜超過過4040。濃縮中，注意不能蒸干。濃縮中，注意不能蒸干。28行業(yè)知識減少甚至不用有毒有機溶劑減少甚至不用有毒有機溶劑減少操作步驟減少操作步驟盡量集采樣、萃取、凈化、濃縮、預分盡量集采樣、萃取、凈化、濃縮、預分離、進樣于一身離、進樣于一身能適應處理復雜介質、痕量成分、特殊能適應處理

15、復雜介質、痕量成分、特殊性質成分分析的要求性質成分分析的要求樣品前處理的發(fā)展趨勢樣品前處理的發(fā)展趨勢29行業(yè)知識蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留檢測方法基甲酸酯類農藥多殘留檢測方法 農藥種類和個數：有機磷（農藥種類和個數：有機磷（5454種）、有機氯和擬種）、有機氯和擬除蟲菊酯（除蟲菊酯（4141種）、氨基甲酸酯類（種）、氨基甲酸酯類（1010種）農藥種）農藥等共等共105105種種使用儀器：使用儀器：GCGCNY/T 761-200830行業(yè)知識加入加入2.0mL丙酮丙酮丙酮定容丙酮定容5.0mL加入加入2.0 mL2.

16、0 mL正己烷正己烷5 mL丙酮正己烷丙酮正己烷(1090)淋洗，重復一次淋洗，重復一次依次依次5mL丙酮丙酮+正正己烷己烷(10+90), 5mL正己烷預淋正己烷預淋弗羅里矽柱弗羅里矽柱50 水浴氮吹近干水浴氮吹近干正己烷定容正己烷定容5 mLECD GC檢測檢測加入加入2 mL甲醇二氯甲烷甲醇二氯甲烷(1+99)2 .0mL甲醇二氯甲烷甲醇二氯甲烷(1+99)淋洗，重復一次淋洗，重復一次4 mL甲醇二氯甲醇二氯甲烷甲烷(1+99)預淋預淋氨基柱氨基柱50 水浴氮吹近干水浴氮吹近干甲醇定容甲醇定容2.5 mL配柱后衍生配柱后衍生FLD HPLC檢測檢測過過0.2 m濾膜濾膜25.0 g25.

17、0 g樣品樣品 ，加入，加入50 .0mL50 .0mL乙腈高速分散乙腈高速分散2 min2 min過濾到過濾到5 g7 g5 g7 g氯化鈉的氯化鈉的100 mL100 mL具塞量筒具塞量筒振蕩振蕩1 min1 min后靜置后靜置30 min30 min80 80 水浴氮氣或空氣流蒸干水浴氮氣或空氣流蒸干分取乙腈層分取乙腈層10.00 mLFPD GC檢測檢測樣品前處理過程31行業(yè)知識樣品前處理過程l 稱取樣品稱取樣品25.0g，記錄的是實際稱量數字，倒入，記錄的是實際稱量數字，倒入50.0mL乙腈，高速勻漿乙腈，高速勻漿2min，轉速，轉速2萬轉萬轉/min。32行業(yè)知識樣品前處理過程l

18、勻漿后收集到裝有勻漿后收集到裝有5-7g氯化鈉的氯化鈉的100mL具具塞量筒中，收集濾液，劇烈震蕩塞量筒中，收集濾液，劇烈震蕩1min，靜止靜止30min，使乙腈相和水相分開。，使乙腈相和水相分開。 33行業(yè)知識樣品前處理過程從具塞量筒中吸取從具塞量筒中吸取10.00mL的上層乙腈溶液，放入三個小的上層乙腈溶液，放入三個小燒杯中（由于做三個項目就吸三個燒杯中（由于做三個項目就吸三個10.00mL），將燒），將燒杯放在杯放在80水浴鍋上加熱（或電熱板），杯內緩緩通水浴鍋上加熱（或電熱板），杯內緩緩通入氮氣或空氣流，蒸發(fā)至近干。入氮氣或空氣流，蒸發(fā)至近干。34行業(yè)知識 有機磷：蒸發(fā)近干的小燒杯，加

19、入有機磷：蒸發(fā)近干的小燒杯，加入2.0mL丙酮，蓋上鋁箔，備用。將上述備用液完全轉丙酮，蓋上鋁箔，備用。將上述備用液完全轉移至移至15mL刻度離心管中，再用刻度離心管中，再用3mL丙酮分三丙酮分三次沖洗燒杯，并轉移至離心管，最后定容至次沖洗燒杯，并轉移至離心管，最后定容至5.0mL，在漩渦混合器上混勻，移入自動進，在漩渦混合器上混勻，移入自動進樣小瓶中，如果定容后的樣品溶液過于混濁，樣小瓶中，如果定容后的樣品溶液過于混濁，應用應用0.2m的濾膜過濾后再裝入小瓶，待測。的濾膜過濾后再裝入小瓶，待測。 35行業(yè)知識樣品前處理過程 有機氯和擬除蟲菊酯類農藥的操作：蒸發(fā)近干的小燒杯加入有機氯和擬除蟲菊

20、酯類農藥的操作：蒸發(fā)近干的小燒杯加入2.0mL正己烷，正己烷，蓋上鋁箔，備用。將弗羅里矽柱依次用蓋上鋁箔，備用。將弗羅里矽柱依次用5.0mL丙酮丙酮+正己烷（正己烷（10+90）、）、5.0mL正己烷預淋洗，當溶劑液面到達柱吸附層表面時，立即倒入上述凈化溶液，用正己烷預淋洗，當溶劑液面到達柱吸附層表面時，立即倒入上述凈化溶液，用15mL刻度離心管收集洗脫液，用刻度離心管收集洗脫液，用5mL丙酮丙酮+正己烷（正己烷（10+90）沖洗燒杯后淋洗弗）沖洗燒杯后淋洗弗羅里矽柱，并重復一次，收集。羅里矽柱，并重復一次，收集。36行業(yè)知識樣品前處理過程 然后將收集好的淋洗液的刻度離心管再放入氮吹然后將收集

21、好的淋洗液的刻度離心管再放入氮吹儀上，這次水浴溫度為儀上，這次水浴溫度為50，吹蒸發(fā)至小于，吹蒸發(fā)至小于5mL，用，用正己烷定容正己烷定容5.0mL，在漩渦混合器上混勻，移入自動，在漩渦混合器上混勻，移入自動進樣小瓶中，待測。進樣小瓶中，待測。37行業(yè)知識 氨基甲酸酯類農藥的操作：蒸發(fā)近干的小燒杯氨基甲酸酯類農藥的操作：蒸發(fā)近干的小燒杯加入加入2.0mL的甲醇的甲醇+二氯甲烷（二氯甲烷（1+99），蓋上鋁），蓋上鋁箔，備用。將氨基柱用箔，備用。將氨基柱用4.0mL甲醇甲醇+二氯甲烷二氯甲烷（1+99）預淋洗，當溶劑液面到達柱吸附層表面）預淋洗，當溶劑液面到達柱吸附層表面時，立即倒入上述凈化溶液

22、，用時，立即倒入上述凈化溶液，用15mL刻度離心管刻度離心管收集洗脫液，用收集洗脫液，用2mL甲醇甲醇+二氯甲烷（二氯甲烷（1+99）沖）沖洗燒杯后過柱，并重復一次。將離心管至于氮吹儀洗燒杯后過柱，并重復一次。將離心管至于氮吹儀上，水浴溫度也為上，水浴溫度也為50，蒸發(fā)至近干，用甲醇準確，蒸發(fā)至近干，用甲醇準確定容至定容至2.5mL。漩渦混合器上混勻，過。漩渦混合器上混勻，過0.2m的濾的濾膜過濾后再裝入小瓶，待測。膜過濾后再裝入小瓶，待測。38行業(yè)知識實驗室里的工作人員一定要有良好操作習慣：實驗室里的工作人員一定要有良好操作習慣：l 穿工作服，戴手套穿工作服，戴手套l 實驗時應隨時記錄實驗數

23、據，儀器使用記錄實驗時應隨時記錄實驗數據，儀器使用記錄 和環(huán)境條件等和環(huán)境條件等 l 稱樣時要準確記錄稱樣時要準確記錄39行業(yè)知識樣品前處理注意事項樣品前處理注意事項1樣品要碎的均勻，不能有大塊；樣品要碎的均勻，不能有大塊； 2劇烈震蕩要充分，保證完全分層；劇烈震蕩要充分，保證完全分層；3從移液開始，包括移液管，燒杯以及后面的離心瓶決從移液開始，包括移液管，燒杯以及后面的離心瓶決不能沾到水，要完全干燥；不能沾到水，要完全干燥； 4在水浴上要在不完全干的狀態(tài)下取下，不能烤干，防在水浴上要在不完全干的狀態(tài)下取下，不能烤干，防止農藥損失，造成結果數據偏低；止農藥損失，造成結果數據偏低； 5定容要準確定容要準確 ；6做過農藥標準品的一系列玻璃儀器要絕對和農殘儀器做過農藥標準品的一系列玻璃儀器要絕對和農殘儀器分開，防止交叉污染，影響結果；分開，防止交叉污染，影響結果；7一般先做樣品再做標樣，以防柱子污染；一般先做樣品再做標樣，以防柱子污染；8一定要處理好廢液，分類處理。一定要處理好廢液，分類處理。40行業(yè)知識