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專題2 微生物的培養(yǎng)與應用 課題1 微生物的實驗室培養(yǎng)學業(yè)分層測評 (建議用時：45分鐘) [學業(yè)達標] 1．不同培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含(　　) A．碳源、磷酸鹽和維生素 B．氮源和維生素 C．水、碳源、氮源和無機鹽 D．碳元素、氧元素、氫元素、氮元素 【解析】　培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽，此外還應考慮pH、特殊營養(yǎng)物質及O2等條件。 【答案】　C 2．下列說法正確的是(　　) A．為微生物的生長繁殖提供營養(yǎng)基質的是固體培養(yǎng)基 B．培養(yǎng)基只有兩類：液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基 C．固體培養(yǎng)基中加入少量水即可制成液體培養(yǎng)基 D．微生物在固體培養(yǎng)基上生長時，可以形成肉眼可見的菌落 【解析】　培養(yǎng)基是微生物生長繁殖的營養(yǎng)基質，根據培養(yǎng)基的物理性質不同，可將培養(yǎng)基分成固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基；要想得到液體培養(yǎng)基只需不加凝固劑即可。 【答案】　D 3．獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是(　　) A．將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌 B．接種純種細菌 C．適宜環(huán)境條件下培養(yǎng) D．防止外來雜菌的入侵 【解析】　獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是防止外來雜菌的入侵。 【答案】　D 4．在微生物的實驗室培養(yǎng)中，下列各項操作不需要在無菌條件下進行的是 (　　) A．配制培養(yǎng)基 B．倒平板 C．接種 D．培養(yǎng) 【解析】　配制培養(yǎng)基時不需要無菌操作，因為配制后的培養(yǎng)基需要進行高壓蒸汽滅菌。 【答案】　A 5．能夠測定樣品活菌數的方法是(　　) A．稀釋涂布平板法 B．重量法 C．直接計數法 D．比濁法 【解析】　利用稀釋涂布平板法能夠在不影響生活的情況下，將細菌個體從固體培養(yǎng)基上分離出來，并可以繁殖形成菌落，可根據菌落數測定樣品活菌數。 【答案】　A 6．煮沸消毒法與巴氏消毒法的主要區(qū)別是(　　) 【導學號：05520013】 A．溫度不同 B．時間不同 C．前者適用于固體消毒，后者適用于液體消毒 D．沒有區(qū)別 【解析】　煮沸消毒法是指在100 ℃條件下煮沸5～6 min，而巴氏消毒法則是在70～75 ℃條件下煮30 min或在80 ℃條件下煮15 min，二者的關鍵區(qū)別是溫度不同。 【答案】　A 7．關于牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的制備，敘述錯誤的是(　　) A．操作順序為計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌 B．將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯 C．待培養(yǎng)基冷卻至50 ℃左右時進行倒平板 D．等平板冷卻凝固約5～10 min后將平板倒過來放置 【解析】　制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基時，其操作順序為計算―→稱量―→溶化―→滅菌―→倒平板；由于牛肉膏比較黏稠，稱量時可連同稱量紙一同放入燒杯；待培養(yǎng)基冷卻至50 ℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板；平板冷凝后，應將平板倒過來放置，以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 【答案】　A 8．下列有關稀釋涂布平板法的敘述中，錯誤的是(　　) A．首先將菌液進行一系列的梯度稀釋 B．然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面 C．適宜條件下培養(yǎng) D．結果都可在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落 【解析】　稀釋涂布平板法是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，在適宜條件下培養(yǎng)。只有在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物才能被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。故選D。 【答案】　D 9．微生物培養(yǎng)過程中，肉眼鑒別金黃色葡萄球菌和枯草桿菌的重要依據是 (　　) A．細菌的大小、形狀、顏色 B．菌落的大小、形狀、顏色 C．有無鞭毛 D．培養(yǎng)基的不同 【解析】　微生物的鑒別和分離，一般要用固體培養(yǎng)基，由于不同微生物在固體培養(yǎng)基上長出菌落的形狀、顏色等各不相同，所以可以作為鑒別的標準。因為每一個細菌細胞很小，肉眼無法看到其顏色、形狀等。 【答案】　B 10．某小組同學為了調查湖水中細菌的污染情況而進行了實驗。實驗包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察、計數。請回答與此實驗相關的問題： (1)培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉分別為細菌的培養(yǎng)提供了________和________。除此之外，培養(yǎng)基還必須含有的基本成分是________和________。 (2)對培養(yǎng)基進行滅菌，應該采用的方法是________。 (3)為了盡快觀察到細菌培養(yǎng)的實驗結果，應將接種了湖水樣品的平板置于________中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設定在37 ℃。要使該實驗所得結果可靠，還應該同時在另一平板上接種________作為對照進行實驗。 (4)培養(yǎng)20小時后，觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落，這說明湖水樣品中有________種細菌。一般來說，菌落總數越多，湖水遭受細菌污染的程度越________。 【解析】　用于培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基中，一般含有微生物所需要的碳源、氮源、水和無機鹽等成分，碳源、氮源一般分別由糖類和蛋白質類物質所提供。對培養(yǎng)基常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌法。在檢測湖水中細菌的污染情況時，應設置對照實驗，才能得出可靠的結果。 【答案】　(1)氮源　碳源　無機鹽　水 (2)高壓蒸汽滅菌法 (3)恒溫培養(yǎng)箱　無菌水 (4)多　高 [能力提升] 11．某研究小組從有機廢水中分離微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是 (　　) A．培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進行滅菌 B．轉換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進行劃線 C．接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng) D．培養(yǎng)過程中每隔一周觀察一次 【解析】　培養(yǎng)基滅菌后再分裝到培養(yǎng)皿中；轉換劃線角度后要灼燒接種環(huán)，冷卻后再從上次劃線的末端開始進行劃線；接種后的培養(yǎng)皿必須放在恒溫箱中進行培養(yǎng)，一般每隔12 h或24 h觀察一次。 【答案】　B 12．金黃色葡萄球菌有很強的致病力，常引起骨髓炎等，還可能引起食物中毒，下述實驗結束后的做法錯誤的是(　　) A．對接種環(huán)進行灼燒處理 B．帶菌培養(yǎng)基必須經高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后才能倒掉 C．帶菌培養(yǎng)基必須經加熱后才能倒掉 D．接種后雙手必須用肥皂洗凈，再用75%的酒精棉球擦拭 【解析】　金黃色葡萄球菌有很強的致病力，所以在操作時一定要做到安全防范，接種后雙手用肥皂洗凈，再用75%的酒精棉球擦拭，以起到殺菌的作用；對接種環(huán)進行灼燒也可以殺滅細菌，防止污染環(huán)境；高壓蒸汽滅菌也可殺死培養(yǎng)基中的金黃色葡萄球菌；如果只對帶菌培養(yǎng)基進行加熱，殺不盡其中的致病菌，因為此菌的耐高溫能力很強，會污染環(huán)境。 【答案】　C 13.如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序為12345。下列操作方法正確的是(　　) A．操作前要將接種環(huán)放在火焰邊灼燒滅菌 B．劃線操作須在火焰上進行 C．在5區(qū)域中才可以得到所需菌落 D．在12345區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)滅菌 【解析】　本題考查平板劃線的操作方法。在每次劃線前后都要對接種環(huán)進行滅菌，接種環(huán)的滅菌方法應是在火焰上灼燒，接種時劃線操作是在火焰邊進行。在5個區(qū)域中，只要有單個活細菌，通過培養(yǎng)即可獲得所需菌落。 【答案】　D 14．下圖為平板劃線法分離純化細菌示意圖。根據所學生物學知識，回答下列問題。 (1)微生物所需的營養(yǎng)成分包括________、________、水和無機鹽。 (2)培養(yǎng)微生物時，除考慮微生物生長所需的營養(yǎng)外，還要考慮微生物生長所需的溫度、________以及是否需要O2等。 (3)對培養(yǎng)基進行滅菌時，多采用________法，而對接種環(huán)或涂布器滅菌時則用________法。 (4)平板劃線時，為保證每次劃線都從上次劃線末端的微生物濃度開始，所以每次劃線前都要________，平板劃線結束后，最后一次劃的線不能與第一次劃的線________。 (5)脲酶可以將尿素分解為氨，從而使尿素溶液pH升高，這可用________試劑來檢驗。用纖維素作唯一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物，得到的纖維素分解菌中可能還混雜有________。 (6)抗生素可以抑制肽聚糖合成，從而可以抑制多數原核生物繁殖。實驗室現(xiàn)有酵母菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌三種微生物混雜生長的固體培養(yǎng)基，已知大腸桿菌菌落遇伊紅美藍試劑變?yōu)樽仙?，并帶有金屬光澤；金黃色葡萄球菌耐高濃度食鹽水，菌落為金黃色；酵母菌細胞壁成分主要為幾丁質，營養(yǎng)條件好，氧氣充足時，顯微鏡下可見典型的出芽生殖。現(xiàn)在請你設計一個合理的實驗方案，從一個培養(yǎng)基中，將三種微生物一次分離開來。(所需試劑可自選) _________________________________________________________________ _________________________________________________________________ _________________________________________________________________ ________________________________________________________________。 【解析】　平板劃線法如劃線相重合則不能分離出純種；酚酞可檢測堿性溶液，用纖維素作唯一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物，得到纖維素分解菌，但自養(yǎng)菌可以利用空氣中的CO2生存，需要進一步分離；根據條件可以將不同菌落分離開來。 【答案】　(1)碳源　氮源　(2)pH　(3)高壓蒸汽滅菌　灼燒滅菌　(4)對接種環(huán)灼燒滅菌　相交(相接、相連、交叉等)　(5)酚酞　自養(yǎng)微生物(硝化細菌)　(6)根據菌落顏色，首先分離出金黃色葡萄球菌，然后向培養(yǎng)基中加入伊紅美藍，將變?yōu)樽仙?，帶有金屬光澤的菌落分離出來，得到大腸桿菌，然后加入非磺胺類抗生素如青霉素，將培養(yǎng)基中的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌殺死，得到酵母菌(分離順序不唯一，答案合理即可) 15．炭疽病是由炭疽桿菌引起的一種人畜共患傳染病。炭疽桿菌兩端截平、呈竹節(jié)狀排列，菌落呈卷發(fā)狀。對炭疽病疑似患者，可根據噬菌體的宿主專一性，通過實驗確診。 (1)細菌培養(yǎng)：采集疑似患者的樣本，分離培養(yǎng)，獲得可疑菌落。 (2)細菌鑒定：實驗流程如下圖所示： ①對配制的液體培養(yǎng)基等需采取________方法滅菌；實驗所用液體培養(yǎng)基的碳源為________(填“無機碳”或“有機碳”)。 ②挑選可疑菌落制片后，用________觀察，可看到呈竹節(jié)狀排列的桿菌。 ③接種可疑菌后，35 ℃培養(yǎng)24 h，液體培養(yǎng)基變渾濁，原因是________。對照組試管中應加入______________，與實驗組同時培養(yǎng)6 h后，若實驗組液體培養(yǎng)基的渾濁度比對照組________(填“高”或“低”)，則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染；反之則排除。 ④對排除的疑似患者及易感人群，可接種炭疽桿菌疫苗，刺激機體產生相應抗體，與產生抗體相關的細胞除T細胞、B細胞外，還有____________________。 【解析】?、倥囵B(yǎng)基應用高壓蒸汽方法進行滅菌。炭疽桿菌同化類型為異養(yǎng)型，應選有機碳作為其碳源。②微生物個體小，肉眼觀察不到，必須借助顯微鏡才能觀察到菌體特征。③在液體培養(yǎng)基中，細菌大量繁殖會導致培養(yǎng)液變渾濁；該實驗中實驗變量為是否加入噬菌體，所以對照組除不加噬菌體外，其他處理都應該和實驗組保持一致(即應加入不含噬菌體的生理鹽水)。噬菌體可破壞細菌細胞，從而使培養(yǎng)液變清。④在特異性免疫的感應階段，吞噬細胞參與了對抗原的攝取、處理和呈遞，效應B(漿)細胞是直接產生抗體的細胞。 【答案】　(2)①高壓蒸汽(98 kPa蒸汽)　有機碳　②顯微鏡?、奂毦罅糠敝场〉攘可睇}水　低　④吞噬細胞、效應B(漿)細胞