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中華人民共和國國家標準 ×××— ×××× 201×-××-××發(fā)布 201×-××-××實施 食品安全國家標準 食品添加劑 冰結構蛋白 （征求意見稿） 中 華 人 民 共 和 國 國家衛(wèi)生和計劃生育委員 會 發(fā)布 中華人民共和國衛(wèi)生×××— ×××× 1 食品安全國家標準 食品添加劑 冰結構蛋白 1 范圍 本標準主要適用于 以大豆為原料，經 酵母 （ 發(fā)酵培養(yǎng) ， 再經分離、濃縮、精制得到 的 食品添加劑 冰結構蛋白 （ 2 技術要求 官要求 感官要求 應符合表 1的規(guī)定。 表 1 感官要求 項 目 要 求 檢驗方法 色澤 淺棕色 將 適量 試樣 置于清潔、干燥的 白瓷點滴板 中 ， 在自然光線下，觀察其色澤和狀態(tài) 狀態(tài) 液體 化指標 理化指標 應符合表 2的規(guī)定。 表 2 理化指標 項 目 指 標 檢驗方法 冰結構蛋白（ 含量 ， g/ L ≥ 5 附錄 A 中 分， w/% ≤ 2 009.4 錄 A 中 （ ≤ B ： 測定各指標前，試樣應 于 4oC 下解凍約 20 h， 并 攪拌均勻 。 生物 指標 微生物指標 應符合表 3的規(guī)定。 表 3 微生物 指標 項 目 指 標 檢驗方法 菌落總數， 3000 大腸菌群， 10 霉菌和酵母菌， 100 沙門氏菌， /25得檢出 單核細胞增生李斯特氏菌 ， /25得檢出 樣芽孢桿 菌 ， 100 注： 測定各指標前，試樣應 于 4oC 下解凍約 20 h， 并 攪拌均勻 。 ×××— ×××× 2 3 儲存條件 產品應在 下 儲存 。 ×××— ×××× 3 附 錄 A 檢驗方法 般規(guī)定 本標準所用試劑和水在未注明其他要求時，均指分 析純試劑和 6682規(guī)定的 三 級水。試驗中所用標準溶液、雜質測定用標準溶液、制劑和制品在未注明其他要求時，均按 601、 602、 603的規(guī)定制備。試驗中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時，均指水溶液。 別試驗 相色譜法 在冰結構蛋白（ 量測定試驗中，試樣溶液色譜圖的主峰保留時間應和 標準 溶液色譜圖的主峰保留時間相一致，參見附錄 譜法 分別配制 10 的試樣溶液和 標準 溶液， 在附錄 兩者 分子結構 應 一致，參見附錄 . 2。 結 構蛋白（ 量 的 測定 劑 和材料 腈：色譜純。 氟乙酸：純度≥ 98 %。 結構蛋白 對照 品：純度 ≥ 10 %。 器 和設備 效液相色譜儀：帶二極管陣列檢測器 。 量進樣器： L。 考 色譜 條件 譜柱 ： Φ 4.6 5 ，填料直徑 m；或其他等效的色譜柱。 測波長： 214 溫： 室溫 。 速： 1.0 mL/ 樣量： L。 動相 A： 氟乙酸水溶液（體積分數） ；流動相 B： 積分數） 。 動相梯度洗脫參數見 表 表 動相梯度洗脫程序表 時間 /××××— ×××× 4 分析步驟 準溶液系列的制備 稱取適量 冰結構蛋白 對照 品溶解于水，分別配制濃度為 500 、 1000 、 1500 、 2000 和 2500 的標準溶液 系列 。 樣溶液 的制備 移 取 攪拌 均勻 試樣 0.5 水定容至 25 用 m 水相濾膜過濾。 定 在 考 色譜條件下 ，分別對 標準溶液系列和 試樣溶液 進行測定 ， 得到 冰結構蛋白標準溶液濃度和響應值（峰高或峰面積）的曲線，在曲線上對應 試樣溶液 色譜 圖 的響應值（峰高或峰面積），得到試樣溶液 中冰結構蛋白的濃度。 同時做空白試驗。 果計算 冰結構蛋白 （ 含 量 的質量分數 單位為 克每升（ g/L），按 式 （ 計算： 2011 1000 )( ???……… …………………… （ 式中： 試樣溶液的 體積， 單位為毫升（ ； 原始 試樣的 體積 ， 單位為毫升（ ； 由標準曲線獲得的空白 溶 液中冰結構蛋白的濃度， ； c—— 由標準曲線獲得的試樣 溶 液中冰結構蛋白 的 濃度， 。 試驗 結果以平行測定結果的算術平均值為準。在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的 絕對 差值不大于 算術平均值 的 10 %。 A.4 適量攪拌均勻 試樣 ， 用校正好的 在 室溫下 直接測定。 ×××— ×××× 5 附 錄 B 照 品參考譜圖 i n u t e 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5 1 6 1 7 1 8 1 9 圖 參考 液相 色譜圖 圖 參考 質譜圖 T: B ××××— ×××× 6 附 錄 C 參考質譜條件 考質譜條件 a) 毛細管電壓 ： 3000 V b) 錐孔 電壓： 30 V c) 提取 電壓： 1 V d) 透鏡電壓： e) 源溫： 100 ℃ f) 脫溶劑溫度： 300 ℃ g) 脫溶劑 氣流速度： 350 L/h h) 錐孔 氣流速度： 20 L/h i) 低頻分辨率 ： 14.0 j) 高 頻分辨率 ： 14.0 k) 離子能量： 1.0 l) 檢測器倍數 ： 650 m) 低質量區(qū)： 500 n) 高質量區(qū) ： 2000