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第34講 克隆技術,突破1 植物細胞工程,突破2 動物細胞工程,總綱目錄,一、細胞工程 1.應用的原理和方法:細胞生物學和分子生物學的原理和方法。,2.操作水平:① 細胞 水平或細胞器水平。,3.目的:按照② 人的意愿 來改變細胞內的遺傳物質或獲得細胞產品。 4.分類:根據操作對象的不同,分為③ 植物細胞工程 和動物細胞工 程。,1.原理:細胞的④ 全能性 。 (1)原因:生物的任何一個細胞都包含本物種的⑤ 全部遺傳信息 。 (2)全能性表達的條件:處于⑥ 離體 狀態(tài),提供一定的營養(yǎng)、⑦ 激素 和其他適宜的外界條件。,二、植物細胞工程,2.植物組織培養(yǎng)技術 離體的植物器官、組織或細胞 ⑨ 愈傷組織 根、芽 植物體,3.植物體細胞雜交技術 (1)去壁:酶解法,所用酶為 纖維素酶和果膠酶 。 (2)誘導原生質體融合:物理法——離心、振動、電激等;化學法——常 用 聚乙二醇 (PEG)做誘導劑。 (3)植物體細胞雜交成功的標志:雜種細胞再生出細胞壁。 (4)優(yōu)點:克服 遠緣雜交不親和的障礙 。 (5)變異類型:染色體變異。,4.植物細胞工程的實際應用 (1)植物繁 殖新途徑 (2)作物新品種的培育:單倍體育種、突變體的利用。 (3)細胞產物的工廠化生產:利用 植物組織培養(yǎng) 技術生產蛋白 質、脂肪、糖類、藥物、香料和生物堿等物質。,1.動物細胞培養(yǎng) (1)過程 (2)條件 a.無菌、無毒的環(huán)境——無菌處理、加抗生素殺菌、定期更換培養(yǎng) 液。,三、動物細胞工程,b.營養(yǎng)——糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽和微量元素+ 血清 或血漿 等天然成分。 c.適宜的溫度(36.5±0.5 ℃)和pH(7.2~7.4)。,d.氣體環(huán)境——95%空氣+5%CO2(維持培養(yǎng)液的pH)。 (3)應用:生產細胞產品,如干擾素、疫苗、單克隆抗體;檢測并判斷某物 質毒性的大小;臨床醫(yī)學研究。,2.動物體細胞核移植 (1)原理: 動物細胞核具有全能性 。 (2)過程,3.動物細胞融合與單克隆抗體制備 (1)誘導動物細胞融合的方法:物理法——離心、振動、電激等;化學法 ——聚乙二醇;生物法—— 滅活的病毒 。 (2)單克隆抗體制備過程,(3)單克隆抗體的優(yōu)點: 特異性強 、靈敏度高、可大量制備。 (4)單克隆抗體的應用:作為診斷試劑;用于治療疾病和運載藥物。 四、生物技術中的倫理問題,1.克隆人 (1)分類 a.生殖性克隆是指以 繁殖個體 為目的的克隆,即用于產生人類個體。 b.治療性克隆是指利用 核移植 技術獲得克隆人胚胎,然后從胚胎 中提取 干細胞 進行醫(yī)學研究,是利用克隆技術產生特定細胞和 組織(皮膚、神經或肌肉等)用于治療性移植的克隆。 (2)中國態(tài)度: 禁止生殖性克隆人,不反對治療性克隆 。,2.試管嬰兒與設計試管嬰兒 (1)試管嬰兒:運用體外受精和胚胎移植技術繁殖個體,目的是解決 不孕夫婦的生育 問題。 (2)設計試管嬰兒:體外受精獲得的胚胎在移植前進行 遺傳學診斷 , 以便篩選出符合特定要求的胚胎。,1.乳腺細胞比乳腺癌細胞更容易進行離體培養(yǎng)。 ( ),2.在愈傷組織培養(yǎng)中加入細胞融合的誘導劑,可獲得染色體加倍的細 胞。 ( ),3.棉花根尖細胞經誘導形成幼苗能體現細胞的全能性。 ( ),4.二倍體植株的花粉經脫分化與再分化后能得到穩(wěn)定遺傳的植株。 ( ),5.植物的每個細胞在植物體內和體外都能表現出細胞的全能性。 ( ),6.用人工薄膜將胚狀體、愈傷組織等分別包裝可制成人工種子。( ),?,?,√,?,?,?,8.未經克隆化培養(yǎng)的細胞系細胞具有相同的性狀。 ( ),7.由多個祖細胞培養(yǎng)形成的細胞群為一個克隆。 ( ),9.由動物組織細胞培養(yǎng)到連續(xù)細胞系的過程,得到的細胞大多具有二倍 體核型。 ( ),10.培養(yǎng)哺乳動物胚胎的培養(yǎng)液,其成分較簡單,一般只需一些無機鹽和 有機鹽類即可。 ( ),11.動物細胞培養(yǎng)技術可用于轉基因動物的培育。 ( ),?,?,?,?,√,1.細胞全能性 (1)原理:細胞含有本物種全部的遺傳信息。 (2)體內細胞全能性不表達的原因:基因在特定的時間和空間條件下選 擇性表達。 (3)細胞全能性表達的條件:具完整細胞核;離體;無菌;一定的營養(yǎng)、激素 和適宜的外界條件。,突破1 植物細胞工程,(4)一般地,細胞全能性大小與細胞分化程度成反比。 (5)全能性大小: 植物細胞:受精卵生殖細胞體細胞。 動物細胞:受精卵生殖細胞體細胞核。 (動物細胞全能性受限制,但細胞核具有全能性),2.植物組織培養(yǎng)與體細胞雜交,知能拓展 影響植物組織培養(yǎng)的幾種主要因素 (1)植物激素:影響脫分化、再分化的重要因素為植物激素。當細胞分 裂素與生長素共同使用時,能強烈地促進愈傷組織的形成,兩者不同濃 度的配比在再分化過程中,分別對誘導根或芽的產生起關鍵作用。當細 胞分裂素與生長素的濃度比高時,有利于芽的產生;濃度比低時,有利于 根的產生。 (2)光照:對于植物組織培養(yǎng),光照條件非常重要,包括光照強度、時間和 波長。但在愈傷組織的誘導階段往往要暗培養(yǎng),而在愈傷組織分化出芽 和葉的過程中一定要有光照。愈傷組織誘導階段的暗培養(yǎng)有利于細胞 的脫分化產生愈傷組織,如果在光照條件下則容易分化產生維管等組 織,不利于產生大量的愈傷組織。,(3)無菌:培養(yǎng)基上的細菌等微生物比植物細胞具有更強的新陳代謝能 力,比植物細胞生長繁殖得更快,而且它們往往會產生毒素,使培養(yǎng)基上 的植物細胞死亡。因此,在培養(yǎng)過程中要求一系列的消毒、滅菌處理, 并且要求無菌操作。,3.單倍體育種和突變體利用的比較,1.(2018北京西城期末)通過植物組織培養(yǎng)可獲得完整幼苗。下列對此 過程的敘述,正確的是 ( ) A.花粉不含完整的基因組,不能培養(yǎng)成單倍體植株 B.選擇植物幼嫩的部分作外植體,更易誘導脫分化 C.植物組織培養(yǎng)過程中可發(fā)生基因突變和基因重組 D.植物組織培養(yǎng)過程不需添加有機碳源但需要光照,考向1 以基礎判斷或實例分析的形式,考查植物的組織培養(yǎng),B,答案 B 花粉含有該植物的全套遺傳信息,可以經花藥離體培養(yǎng)而培 養(yǎng)成單倍體植株,A錯誤;幼嫩部位的新陳代謝旺盛,分化程度低,更易誘 導脫分化過程發(fā)生,B正確;植物組織培養(yǎng)是無性生殖過程,不產生配子, 故在有絲分裂間期可發(fā)生基因突變,但無法發(fā)生基因重組,C錯誤;植物 組織培養(yǎng)過程中需要有機碳源,脫分化過程要嚴格避光,D錯誤。,2.(2017北京師大附中期中)下列有關植物組織培養(yǎng)的敘述,正確的是 ( ) A.愈傷組織是一團有特定結構和功能的薄壁細胞 B.二倍體植株的花粉經脫分化與再分化后得到穩(wěn)定遺傳的植株 C.用人工薄膜將胚狀體、愈傷組織等分別包裝可制成人工種子 D.植物耐鹽突變體可通過添加適量NaCl的培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選而獲得,D,答案 D 愈傷組織是一團排列疏松而無規(guī)則、高度液泡化的、呈無 定形狀態(tài)的、具有分生能力的薄壁細胞,不具有特定的結構和功能,A錯 誤;二倍體植株的花粉中只含一個染色體組,培養(yǎng)得到的個體為單倍體, 高度不育,B錯誤;人工種子中包裹的是再分化形成的胚狀體或不定芽、 頂芽和腋芽等,但不能是愈傷組織,C錯誤;用特定的選擇培養(yǎng)基可篩選 出所需的突變體類型,如可利用加適量NaCl的培養(yǎng)基對植物耐鹽突變 體進行篩選,D正確。,考向2 以實例分析的形式,考查植物體細胞雜交 3.“白菜—甘藍”是用細胞工程的方法培育出來的蔬菜新品種,它具有 生長期短、耐熱性強和易于儲藏等優(yōu)點。如圖是“白菜—甘藍”的雜 交過程示意圖。以下說法正確的是 ( ),A.除去細胞壁形成原生質體,可運用的酶是纖維素酶、淀粉酶和果膠酶 B.通?？烧T導上述原生質體相互融合的方法是PEG和滅活的病毒誘導 C.雜種細胞形成的標志是產生了新的細胞壁 D.愈傷組織形成“白菜—甘藍”植物體必須經過脫分化和再分化兩個 過程,答案 C 用于除去植物細胞壁的酶有纖維素酶和果膠酶;植物體細胞 雜交過程中誘導原生質體融合不能用滅活的病毒;雜種細胞形成的標志 是產生了新的細胞壁;愈傷組織形成“白菜—甘藍”植物體屬于再分化 過程。,4.下面為“番茄—馬鈴薯”的培育過程示意圖,請據圖回答下列問題: (1)若運用傳統(tǒng)有性雜交(即用番茄、馬鈴薯雜交)能否得到可育的雜種 植株?為什么? 。,(2)在利用雜種細胞培育雜種植株的過程中,運用的技術手段是 ,依據的原理是 ,其中過程②稱為 技術,與過程③密切相關的具有單層膜結構的細胞器為 ,過 程④相當于 ,過程⑤涉及的細胞分裂方式為 。 (3)已知番茄、馬鈴薯分別為四倍體、二倍體,則“番茄—馬鈴薯”屬 于 倍體植株。 (4)柴油樹種子含有的柴油是植物細胞的代謝產物,可用植物組織培養(yǎng) 來實現柴油的工業(yè)化生產。若利用此技術,將柴油樹細胞培養(yǎng)進行到 (填字母編號)階段即可。,答案 (1)不能。不同種的植物存在生殖隔離 (2)植物組織培養(yǎng) 植物細胞的全能性 原生質體融合 高爾基體 脫 分化 有絲分裂 (3)六 (4)e 解析 (1)番茄和馬鈴薯屬于兩種植物,存在生殖隔離,不能通過有性雜 交產生后代。(2)過程②是把a、b兩個原生質體融合在一起,所以稱為 原生質體融合。過程③是在融合的原生質體外再生一層細胞壁,而植物 細胞壁的形成與高爾基體有關。過程④的結果是形成了愈傷組織,所以 ④為脫分化。(3)“番茄—馬鈴薯”屬于異源多倍體中的異源六倍體。 (4)柴油是植物細胞的代謝產物,要實現其工業(yè)化生產需將柴油樹細胞 培養(yǎng)到愈傷組織階段,然后進行提取。,突破2 動物細胞工程,1.動物細胞培養(yǎng)與動物體細胞核移植,2.細胞融合的過程分析 細胞融合的過程包括細胞膜融合、細胞質融合和細胞核融合,其中細胞 膜融合是細胞融合的先導,在細胞膜融合中體現出細胞膜具有一定的流 動性。,3.單克隆抗體的制備 (1)血清抗體與單克隆抗體,(2)制備單克隆抗體過程中的兩次篩選,(3)獲取單克隆抗體的場所 ①若在培養(yǎng)基中進行雜交瘤細胞培養(yǎng),則從培養(yǎng)液中提取。 ②若在小鼠或其他動物腹腔中培養(yǎng),則從腹水中提取。,1.下列關于動物細胞培養(yǎng)、植物組織培養(yǎng)和微生物培養(yǎng)的敘述,正確的 是 ( ) A.培養(yǎng)基都需要加入瓊脂 B.所用的培養(yǎng)溫度都相同 C.都要經歷脫分化和再分化過程 D.都需要無菌培養(yǎng)條件,考向1 以基礎判斷或實例分析的形式,考查動物細胞培養(yǎng)的特點及應用,D,答案 D 動物細胞培養(yǎng)所用培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基,不用添加瓊脂,A錯 誤;動物細胞培養(yǎng)、植物組織培養(yǎng)和微生物培養(yǎng)所需培養(yǎng)溫度不一定相 同,B錯誤;只有植物組織培養(yǎng)才要經歷脫分化和再分化過程,C錯誤;動 物細胞培養(yǎng)、植物組織培養(yǎng)和微生物培養(yǎng)都需要無菌培養(yǎng)條件,D正 確。,2.(2016課標全國Ⅱ)下圖表示通過核移植等技術獲得某種克隆哺乳動 物(二倍體)的流程。 回答下列問題: (1)圖中A表示正常細胞核,染色體數為2n,則其性染色體的組成可為 。過程①表示去除細胞核,該過程一般要在卵母細胞培養(yǎng)至適當 時期再進行,去核時常采用 的方法。②代表的過程是 。,(2)經過多次傳代后,供體細胞中 的穩(wěn)定性會降低。因此,選材 時必須關注傳代次數。 (3)若獲得的克隆動物與供體動物性狀不完全相同,從遺傳物質的角度 分析其原因是 。 (4)與克隆羊“多莉(利)”培育成功一樣,其他克隆動物的成功獲得也證 明了 。,答案 (1)XX或XY 顯微操作 胚胎移植 (2)遺傳物質 (3)卵母細胞的細胞質中的遺傳物質會對克隆動物的性狀產生影響 (4)動物已分化體細胞的細胞核具有全能性 解析 (1)因供體的性別不確定,故其細胞核內的性染色體組成為XX或 XY;一般將卵母細胞培養(yǎng)到MⅡ中期,用顯微操作法將其細胞核去除;② 代表的過程是胚胎移植。(2)傳代培養(yǎng)10代以內的細胞可以保持正常的 二倍體核型,超過10代以后,供體細胞中遺傳物質的穩(wěn)定性會降低。(3) 克隆動物細胞質中的遺傳物質來自卵母細胞的細胞質,細胞質中的遺傳 物質對克隆動物的性狀會產生影響。(4)克隆動物的成功獲得可以證明 動物已分化的體細胞的細胞核具有全能性。,3.將特定藥物與單克隆抗體相結合制成的“生物導彈”,能夠用于殺死 人類某些癌細胞。其過程如圖所示。下列相關敘述不正確的是 ( ) 抗癌藥物,考向2 以實例分析的形式,考查動物細胞融合與單克隆抗體的制備,A.①過程的原理和植物原生質體融合的原理基本相同 B.經①形成的雜交瘤細胞能無限增殖并產生單一抗體 C.②過程需要篩選并克隆單個雜交瘤細胞 D.抗體的靶向作用使③過程具有高度特異性,答案 B 細胞融合后,需經過篩選才能獲得既能無限增殖,又能產生單 一抗體的雜交瘤細胞。,4.(2018北京東城期末)中國倉鼠卵巢細胞(CHO細胞)能夠高效表達外源 基因?？茖W研究中常使用重組CHO細胞(導入了重組載體的CHO細胞) 大量生產外源蛋白,一般步驟為:Ⅰ.長期傳代培養(yǎng),獲得大量重組細胞; Ⅱ.批式培養(yǎng),獲得大量外源蛋白。 (1)體外培養(yǎng)動物細胞的基本培養(yǎng)液(BM)中除抗生素和一般營養(yǎng)物質 外,還應含有 。為了獲得能生產抗體A的重組CHO細胞,需 要將含有抗體A基因的重組載體通過 法導入CHO細胞,經 篩選獲得重組CHO細胞。 (2)研究發(fā)現,酵母抽提物(YE)在動物細胞培養(yǎng)和促進蛋白質表達中具 有重要作用。為確定YE在不同培養(yǎng)階段的使用策略,研究人員進行了 下列實驗。,①圖1所示實驗探究了在長期傳代培養(yǎng)階段 對重組 CHO細胞增殖以及抗體A表達量的影響。通過細胞計數和計算得出實 驗結果如圖2所示,結果說明 。此處理對后續(xù)批式培養(yǎng)中的細胞增殖及單個細胞的抗體產量基 本無影響。,圖1,圖2 ②進一步探究YE對批式培養(yǎng)階段的影響,應在階段Ⅰ、Ⅱ分別使用 和 進行培養(yǎng)。結果表明,抗體A的總產 量隨著YE濃度的提高而增加。 ③綜上所述,為提高抗體A的總產量,整個培養(yǎng)過程中對YE的使用策略 是 。,答案 (1)動物血清 顯微注射 (2)①不同濃度的YE 較低濃度YE促進細胞增殖,較高濃度YE抑制細 胞增殖 ②BM 添加不同濃度YE的BM ③傳代培養(yǎng)過程中添加低濃度YE,批式培養(yǎng)過程中添加高濃度YE 解析 (1)體外培養(yǎng)動物細胞,培養(yǎng)基中除了添加抗生素和一般營養(yǎng)物 質外,還應含有動物血清。因為要將重組載體導入動物細胞(倉鼠卵巢 細胞),所以應采用顯微注射法。(2)①圖1實驗中后四組分別加入了1、 2、5、10 g/L 的YE,因此是探究了長期傳代培養(yǎng)階段不同濃度YE對重 組CHO細胞增殖以及抗體A表達量的影響。從圖2中可看出YE濃度為0 g/L時細胞數相對值(對照組)接近0.8,而YE濃度為1 g/L時細胞數相對值,高于對照組,YE濃度為2、5、10 g/L時,細胞數相對值低于對照組,因此 可得出結論:較低濃度YE促進細胞增殖,較高濃度YE抑制細胞增殖。② 為了研究YE對批式培養(yǎng)階段的影響,應在階段Ⅰ加入BM,階段Ⅱ加入 含不同濃度YE的BM。③在整個培養(yǎng)過程中,長期傳代培養(yǎng)應加入低濃 度的YE,而批式培養(yǎng)應加入高濃度的YE,保證各時期均能產生較多抗 體。,