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PPT模板下載：www.1ppt.com/moban/,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,大腸桿菌 檢測方法,,,2,,,,,,,,,,,,,目錄,概述,檢測方法,檢測原理,討論與展望,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,Your text,Your text,Your text,,,概述,大腸桿菌是人和動物腸道中最著名的一種細菌，主要寄生于大腸內，約占腸道菌中的1%，是一種兩端鈍圓、能運動、無芽孢的革蘭氏陰性短桿菌。大腸桿菌能合成維生素B和K，正常棲居條件下不會致?。蝗暨M入膽囊、膀胱等處可引起炎癥。在水和食品中檢出，可認為是被糞便污染的指標。大腸菌群數常作為飲水、食物或藥物的衛(wèi)生學標準。大腸桿菌是國際上公認的衛(wèi)生監(jiān)測指示茵，因此大腸桿菌的檢測技術顯得十分重要，相應出現了大量的大腸桿菌的各種檢測方法。我將介紹一些常用的大腸桿菌檢測的傳統(tǒng)方法以及最近出現的新的檢測方法，為以后大腸桿菌檢測提供一些參考。,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,傳統(tǒng)檢測方法,檢測新技術,多管發(fā)酵法,濾膜法,平板計數法,,,氣相色譜與液相色譜法,ATP生物發(fā)光技術,PCR檢測技術,生物傳感器檢測技術,免疫磁珠技術IMS,基因芯片技術,自動化儀器,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,Your text,Your text,Your text,,,檢測原理,多管發(fā)酵法是一種檢測食品及水體中大腸桿菌的傳統(tǒng)方法。這種方法是將樣品接種于LST肉湯中在37℃±1℃的條件下培養(yǎng)24±2h，之后對產氣樣品進行復發(fā)酵；復發(fā)酵是將初發(fā)酵中產氣樣品接種于EC肉湯中，44.5±0.2℃條件下培養(yǎng)24±2h，若產氣則進行平板分離培養(yǎng)。多管發(fā)酵法對試驗條件要求不高，成本低，但是檢測時間較長，容易受其他條件干擾，進而影響到測定結果的精確度。,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,Your text,Your text,Your text,Your text,,,檢測原理,濾膜法適用于水質監(jiān)測，是首先于濾器內加入10mL無菌稀釋水，接著將適量充分混勻的待檢食品的水溶液加入濾器中，進行抽濾，快濾完前加少許無菌稀釋水以沖洗濾器內壁，使水溶液內的細菌全部集中于濾膜上；用滅菌鑷子夾取濾膜邊緣部分，移放在M-FC培養(yǎng)基上,濾膜截留細菌面向上，濾膜與培養(yǎng)基完全緊貼不能有氣泡，將培養(yǎng)皿緊密蓋好后，置于能準確恒溫于44.5±0.5℃的恒溫培養(yǎng)箱中,經24±2h培養(yǎng)，糞大腸菌群呈藍色或藍綠色,計數此類菌落數目。,,Your text,Your text,Your text,Your text,,,檢測原理,平板計數法首先選取較適宜的連續(xù)稀釋梯度樣品勻液，將冷卻至45℃±0.5℃的結晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）傾注于平皿內，混勻并凝固后加入3~4mL的VRBA-MUG覆蓋平板表層，36±1℃下培養(yǎng)18~24h，之后在紫外燈下計數。該方法是將樣本做一定比例的稀釋，其中的微生物被稀釋后分散成單個細胞，然后在一定的條件下進行培養(yǎng)一直到生長成能用肉眼觀察的菌落，最后通過樣本數量和稀釋度來計算出單位樣本中的菌數。本方法適用于除貝類產品外的食品中大腸桿菌檢測。,,Your text,Your text,Your text,Your text,,,檢測原理,氣相色譜法主要是將大腸桿菌經過一系列衍生化的前處理后，為接下來的分析研究提供盡可能多的化學組分。大腸桿菌的污染程度可以用頂空氣相色譜法來分析，其原理是利用食品密封系統(tǒng)頂部的微生物代謝產物CO2對微生物進行分析。這種方法對食品質量安全檢測有重大意義。與上述傳統(tǒng)技術相比，此種方法具有檢測速度快、靈敏度高的優(yōu)點。高效液相色譜法（HPLC）主要是根據離子配對反相層析的原理來分析核酸。HPLC主要是針對DNA片段分離。長鏈DNA所攜帶的磷酸基團比較多，因此會有更多的TEAA與之相融合，其在柱內停留的時間增加。,,Your text,Your text,Your text,Your text,,,檢測原理,ATP生物發(fā)光技術是近些年來發(fā)展較快的微生物快速檢測方法。ATP是活細胞中最普遍的能量代謝產物，為細胞提供各種生理活動所需的能量，而且其在生物體內含量維持在一定的范圍內。ATP含量檢測的一種方法是熒光光度法，生物發(fā)光是活細胞在熒光素酶催化下發(fā)出的熒光。與傳統(tǒng)檢測方法相比，不同之處在于幾分鐘內便可獲得檢測結果，而且熒光光度計是便攜式的，使用非常方便，適用于現場檢測，這種技術可以用于檢測微小的污染物水平以及食品加工設備及其表面的清潔程度的檢測。,,Your text,Your text,Your text,Your text,,,檢測原理,PCR檢測技術是在1971年首先被Kleppe等提出，1985年才作為一種檢測方法獲得認可。PCR檢測技術是一種聚合酶鏈反應，其采用變性—退火—延伸三個步驟使DNA基因能夠在體外實現解旋解鏈，類似于一種體外增加、復制形式。史云等建立了用于肉及肉制品中大腸桿菌的兩重PCR檢測方法，但該方法需要較長的時間的樣品純化處理，且對操作人員的專業(yè)知識的要求也較高。,,Your text,Your text,Your text,Your text,,,檢測原理,生物傳感器主要是以生物化學傳感技術為基礎，用抗體、酶、細胞等作為識別元件，并與信號轉換器和電子測量儀聯(lián)合構成的一種分析工具。目前已經成熟的商品化的傳感器有免疫傳感器、酶傳感器、DNA雜交傳感器、微生物傳感器、分子印跡傳感器等。生物傳感器具有諸多優(yōu)點，如高靈敏度、高選擇性、較好的穩(wěn)定性、低成本、且能在復雜的體系中快速在線監(jiān)測。,,Your text,Your text,Your text,Your text,,,檢測原理,免疫磁珠技術是一種大腸桿菌的分離技術。其原理是以磁珠為抗體載體，磁珠和大腸桿菌結合，通過磁力來實現力學移動進而將大腸桿菌進行分離。與其他的細菌分離方法相比，免疫磁珠技術在很大程度上提高了樣本中病原性副溶血性弧菌的檢測效率。免疫磁珠技術可以快速地在不同菌種的樣本中處理不同的微生物，該方法可以大幅度地提升檢測效率。,,Your text,Your text,Your text,Your text,,,檢測原理,自動免疫測定分析儀誕生于20世紀70年代。隨著科技的發(fā)展，自動免疫測定分析儀在各領域的應用也越來越多，該儀器使用簡單，無太多操作干擾，既省時省力，又大大提高了檢測的精確度和靈敏度。這種自動酶標免疫測試系統(tǒng)目前在國內外是酶免疫自動化系統(tǒng)中應用最為廣泛的一種。但是由于與其配套的試劑昂貴，從而限制了其在基層實驗室的使用。,,Your text,Your text,Your text,Your text,,,檢測原理,基因芯片技術(gene chip)是20世紀90年代興起的生物技術，也叫DNA微陣列(DNA mi—croarray)。采用原位合成(insitu synthesis)或顯微打印方法，將數以萬計的DNA探針固化在支持物表面，產生二維DNA探針陣列，接著與標記的樣品進行雜交，通過檢測雜交信號來實現對生物樣品快速、并行、高效地檢測，由于它常用硅芯片作為固相支持物，而且制備中運用了計算機芯片的制備技術，所以稱為基因芯片技術?；蛐酒梢詫κ称分械闹虏【鷮嵭懈咄亢推叫袡z測，一次實驗就可以得出全部檢測結果。另外整個檢測在很短時間內即可得出檢測結果，且敏感性高，特異性強。,,Your text,Your text,Your text,Your text,,,討論與展望,近年來，世界各國針對水環(huán)境和食品中大腸桿菌的快速檢測技術展開了大量研究，在已知的檢測方法中均有自己的優(yōu)勢與不足。隨著科學和生物生化技術的發(fā)展，食品中大腸桿菌的檢測計數也將趨于提高精度與速度，不斷改進與完善才能切實解決食品安全問題，為人品生活提供保障。,Your text,Your text,Your text,Your text,,,參考文獻,[1] 4種食品中大腸桿菌檢測方法評價.周宏霞. [2]關于食品中大腸桿菌檢測方法的研究.姚勇. [3]食源性大腸桿菌快速檢測技術研究進展.董妍. [4]水中細菌總數與大腸桿菌檢測方法的比較研究.黃友芳. [5]GB4789.38-2012 食品微生物學檢測 大腸埃希氏菌計數 [6]HJ/T 347-2007 水質 糞大腸菌群的測定 [7]快速檢測大腸菌群數的研究.徐爾尼.,,,Thank you!,,