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2019-2020年高中生物 課時訓練5 土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù) 新人教版選修1 1.可以鑒定出分解尿素的細菌的方法是(　　)。 A.以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑 B.以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加二苯胺試劑 C.以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入蘇丹Ⅲ試劑 D.以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入雙縮脲試劑 解析:細菌合成的脲酶可以催化尿素分解形成氨。氨會使培養(yǎng)基的堿性增強,pH升高。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,培養(yǎng)某種細菌后,如果pH升高,指示劑若變紅,則說明該細菌能產(chǎn)生脲酶分解尿素。 答案:A 2.關(guān)于微生物的培養(yǎng),下列敘述錯誤的是(　　)。 A.細菌一般在30~37 ℃的溫度下培養(yǎng)1~2 d B.放線菌一般在25~28 ℃的溫度下培養(yǎng)5~7 d C.霉菌一般在25~28 ℃的溫度下培養(yǎng)3~4 d D.不同種類的微生物,一般需要相同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間 解析:不同種類的微生物,往往需要不同的培養(yǎng)溫度和時間。 答案:D 3.在尋找目的菌株時,要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求,到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找,下列不屬于厭氧細菌生存環(huán)境的是(　　)。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　 A.土壤深層 B.人或動物體內(nèi) C.真空 D.池塘淤泥 解析:厭氧型微生物的生長繁殖不僅需要厭氧環(huán)境,同時還需要生存所必需的各種營養(yǎng)物質(zhì),如碳源、氮源、水、無機鹽等。真空環(huán)境只能提供無氧環(huán)境,卻不能提供其他營養(yǎng)物質(zhì)。 答案:C 4.需要在火焰旁操作的有(　　)。 ①土壤取樣　②稱取土壤?、巯♂屚寥廊芤骸、芡坎计桨濉、菸⑸锏呐囵B(yǎng) A.①②③④⑤ B.②③④⑤ C.③④⑤ D.②③④ 解析:除了土壤取樣和微生物的培養(yǎng)不便于在火焰旁進行外,其他均要在火焰旁進行,以防止雜菌污染。 答案:D 5.分離土壤中分解尿素的細菌,對培養(yǎng)基的要求是(　　)。 ①加尿素?、诓患幽蛩亍、奂迎傊、懿患迎傊、菁悠咸烟恰、薏患悠咸烟恰、呒酉跛猁}?、嗖患酉跛猁} A.①③⑤⑦ B.②④⑥⑧ C.①③⑤⑧ D.①④⑥⑦ 解析:分離分解尿素的細菌,應(yīng)該以尿素為唯一氮源,不用加硝酸鹽來提供氮源。另外還要加葡萄糖提供碳源,加瓊脂作為凝固劑,制成固體培養(yǎng)基,利于細菌的分離、鑒定、計數(shù)等。 答案:C 6.以下關(guān)于分解尿素的細菌的說法正確的是(　　)。 A.能分解尿素的原因是能合成分泌蛋白酶 B.以尿素作為唯一的碳源 C.環(huán)境中含有大量的尿素誘導(dǎo)該細菌產(chǎn)生了分解尿素的特性 D.以尿素為唯一氮源且添加了酸堿緩沖劑的培養(yǎng)基培養(yǎng)該菌后不會使酚紅指示劑變紅 解析:A項:酶有專一性,分解尿素的細菌之所以能分解尿素是因為能合成分泌脲酶。B項:該菌能以葡萄糖作為碳源。C項:環(huán)境中含有大量的尿素對分解尿素的性狀起了選擇作用而非誘導(dǎo)作用。D項:該菌產(chǎn)生脲酶把尿素分解為氨后,使pH升高,進一步使酚紅指示劑變紅,但添加酸堿緩沖劑后,阻止了pH的升高,因此培養(yǎng)基不再使酚紅指示劑變紅。 答案:D 7.稀釋涂布平板法分離分解尿素的細菌時使用的涂布器應(yīng)保存在體積分數(shù)為70%的酒精中,取出后又要放在酒精燈火焰上引燃,這兩步分別屬于什么技術(shù)?(　　) A.滅菌、滅菌 B.消毒、消毒 C.滅菌、消毒 D.消毒、滅菌 解析:消毒和滅菌是不同的。往往消毒比較溫和,僅僅消滅危害健康的致病菌;而滅菌就比較強烈,如高壓蒸汽、灼燒等,它是殺死一切菌。因此本題前者屬消毒,后者屬滅菌。 答案:D 8.下列有關(guān)土壤中微生物的分離與計數(shù)的說法中,錯誤的是(　　)。 A.因為土壤中各類微生物的數(shù)量不同,所以,為獲得不同類型的微生物要按不同的稀釋倍數(shù)進行分離 B.測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數(shù)量,選用的稀釋范圍不同 C.如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30~300的平板,則說明稀釋操作比較成功,并能夠進行菌落的計數(shù) D.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯小于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目,說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些細菌菌落 解析:樣品的稀釋度直接影響平板上生長的菌落的數(shù)目。實際操作中,通常選用一定稀釋范圍的樣品液進行培養(yǎng),以保證獲得菌落在30~300之間適于計數(shù)的平板。測定土壤中細菌的數(shù)量,一般選用104、105和106倍的稀釋液;測定放線菌的數(shù)量一般選用103、104和105倍的稀釋液;測定真菌的數(shù)量,一般選用102、103和104倍的稀釋液。將菌液稀釋相同的倍數(shù),在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目,從而說明選擇培養(yǎng)基的篩選作用。 答案:D 9.馬丁培養(yǎng)基是實驗室常用的培養(yǎng)基之一。下列為馬丁培養(yǎng)基的化學成分,據(jù)此回答下列問題。 成分 含量 成分 含量 KH2PO43H2O 0.1 g 葡萄糖 1 g MgSO47H2O 0.05 g 蛋白胨 0.5 g 0.1%孟加拉紅溶液 0.33 mL 瓊脂 1.5~2 g 2%去氧膽酸鈉溶液 2 mL H2O 100 mL 鏈霉素溶液(1104 μ/mL) 0.33 mL — (1)該培養(yǎng)基中加入了鏈霉素,能抑制細菌和放線菌,但真菌可以在上面生長,因此培養(yǎng)基是一種　　　　培養(yǎng)基。 (2)葡萄糖能給微生物生長提供　　　　和　　　　。 (3)蛋白胨能給微生物生長提供　　　　和　　　　。 (4)培養(yǎng)基中KH2PO43H2O可給微生物提供含　　　　的無機鹽。 (5)瓊脂的作用是作為　　　　。 解析:鏈霉素能抑制細菌和放線菌生長,真菌可以在上面生長。因此該培養(yǎng)基是一種選擇培養(yǎng)基。葡萄糖是一種含碳的有機物,既可給微生物提供碳源,又可給微生物提供能源。該培養(yǎng)基蛋白胨可以給微生物提供氮源和維生素。 答案:(1)選擇 (2)碳源　能源 (3)氮源　維生素 (4)K、P (5)凝固劑 10.探究如何從土壤中分離自生固氮菌并計數(shù)。 實驗原理:農(nóng)田的表層土壤中,自生固氮菌的含量比較多。將用表層土制成的稀泥漿,接種到無氮培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。在這種情況下,只有自生固氮菌才能生長繁殖。 材料用具:農(nóng)田的表層土壤、無氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、盛9 mL無菌水的大試管若干、無菌移液管、無菌涂布器、無菌培養(yǎng)皿、盛90 mL無菌水的錐形瓶、酒精燈、恒溫箱。 方法步驟: (1)倒平板。分別將無氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒平板,應(yīng)在　　　　　操作。 (2)制備土壤稀釋液。取土樣10 g加入盛有90 mL無菌水的錐形瓶中,充分搖勻。用無菌移液管吸取上清液 1 mL,轉(zhuǎn)至9 mL無菌水的大試管中,依次稀釋到107倍稀釋度。為實現(xiàn)無菌操作,試管口和移液管應(yīng)在離火焰　　　　　cm處。 (3)涂布。按照由107~103稀釋度的順序分別吸取0.1 mL進行平板涂布,每個稀釋度下,無氮培養(yǎng)基應(yīng)至少涂布　　　個平板,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布　　　個平板。 (4)培養(yǎng)。放入恒溫箱內(nèi),在適宜溫度條件下培養(yǎng)3~4 d。一般每隔　　　小時統(tǒng)計一次,選取　　　時的記錄作為結(jié)果,這樣可以防止　。 (5)細菌的計數(shù)。當菌落數(shù)目穩(wěn)定時,選取菌落數(shù)在　　　　　的平板進行計數(shù)。如果測試的平均值為50,則每克樣品中的菌株數(shù)是　　　　　。(稀釋度是105) (6)預(yù)期結(jié)果。相同稀釋度下,牛肉膏蛋白胨平板上的菌落數(shù)　　　　　(填“多于”或“少于”)無氮培養(yǎng)基上的數(shù)目。理由是　 　。 解析:要分離自生固氮菌,采用選擇培養(yǎng)基分離的方法,缺乏氮源的培養(yǎng)基可用來分離自生固氮微生物,而其他微生物因缺乏氮源不能生長。實驗步驟一般是:配制無氮培養(yǎng)基→滅菌→倒平板→系列稀釋→涂布平板→培養(yǎng)→觀察并計數(shù)。實驗中要注意無菌操作和設(shè)計對照等。 答案:(1)酒精燈火焰旁 (2)1~2 (3)3　1 (4)24　菌落數(shù)目穩(wěn)定　因培養(yǎng)時間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目 (5)30~300　5107 (6)多于　無氮培養(yǎng)基上可以生存和繁殖的只是土壤中的固氮菌,而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上幾乎允許土壤中所有菌類的生存