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2019-2020年高中生物 2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體教案 新人教版選修3 教學(xué)建議 在“動(dòng)物細(xì)胞融合”部分,由于考慮到其基本原理與植物的原生質(zhì)體融合相同,方法也類(lèi)似,所以教師可先啟發(fā)學(xué)生回顧植物體細(xì)胞雜交技術(shù)的過(guò)程,再通過(guò)動(dòng)植物細(xì)胞異同點(diǎn)的對(duì)比,引導(dǎo)學(xué)生大膽推測(cè)出動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的原理及方法基本相同,以培養(yǎng)學(xué)生的知識(shí)遷移能力。隨后通過(guò)教材上的用滅活病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程的示意圖,重點(diǎn)講解為什么滅活的病毒可作為誘導(dǎo)物,并指出動(dòng)物細(xì)胞的融合也需要把多個(gè)兩種細(xì)胞放在一起,讓它們隨機(jī)融合后,再?gòu)闹泻Y選雜交細(xì)胞。最后教師要講明動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的意義和應(yīng)用,以便自然過(guò)渡到單克隆抗體。 單克隆抗體是動(dòng)物細(xì)胞工程的新技術(shù),也是本節(jié)的重點(diǎn)、難點(diǎn)內(nèi)容。教師要利用好教材提供的材料,從傳統(tǒng)抗體生產(chǎn)存在的問(wèn)題入手,一步一步啟發(fā)學(xué)生討論怎樣解決這個(gè)問(wèn)題,引出單克隆抗體的概念。隨后又提出問(wèn)題——怎樣才能獲得單克隆抗體?由此自然過(guò)渡到單克隆抗體的制備。關(guān)于單克隆抗體的制備,要把科學(xué)家在研制單克隆抗體過(guò)程中,通過(guò)大膽的想象,創(chuàng)造性地解決問(wèn)題的過(guò)程作為本節(jié)教學(xué)的重點(diǎn)和亮點(diǎn)。 參考資料 目前常用的細(xì)胞融合方法的融合率都不能達(dá)到100%,如果僅兩個(gè)細(xì)胞融合不一定能得到融合細(xì)胞,那就需要多個(gè)細(xì)胞。即使兩個(gè)細(xì)胞融合,也不一定就是研究者所需要的雜交細(xì)胞。如在單克隆抗體的制備過(guò)程中,B淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合,骨髓瘤細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合就不是研究者所需要的細(xì)胞。研究者需要的細(xì)胞是已免疫的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的細(xì)胞,即雜交瘤細(xì)胞。要想獲得雜交瘤細(xì)胞可以從融合細(xì)胞中篩選出能分泌所需要抗體的雜交瘤細(xì)胞。 雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測(cè)及克隆化培養(yǎng) 融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后,能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞。但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞,通常用“有限稀釋法”來(lái)選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀釋,用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng),使每孔細(xì)胞不超過(guò)一個(gè),通過(guò)培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測(cè)各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體(常用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法),那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽(yáng)性孔。陽(yáng)性孔中的細(xì)胞還不能保證是來(lái)自單個(gè)細(xì)胞,挑選陽(yáng)性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋,一般需進(jìn)行3~4次,直至確信每個(gè)孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。該過(guò)程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。