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ICS 67.040X 04 LS中 華 人 民 共 和 國 糧 食 行 業(yè) 標 準LS/T 6119—2017糧油檢驗 植物油中多酚的測定分光光度法Inspection of grain and oils—Determination of polyphenols in vegetable oil—Spectrometric method2017 - 09 - 15 發(fā)布 2017 - 09 - 15 實施國  家  糧  食  局   發(fā) 布LS/T 6119—20171前  言本標準按照GB/T 1.1-2009 給出的規(guī)則起草。本標準由國家糧食局提出。本標準由全國糧油標準化技術(shù)委員會（SAC/TC 270）歸口。本標準起草單位：國家糧食局科學研究院、國家林業(yè)局國有林場和林木種苗工作總站、中紡糧油進出口有限責任公司、中糧食品營銷有限公司。本標準主要起草人：張東、楊超、薛雅琳、趙兵、歐國平、朱琳、劉寶珍、安駿。LS/T 6119—20172糧油檢驗 植物油中多酚的測定 分光光度法1　范圍本標準規(guī)定了采用分光光度法測定植物油中多酚含量的原理、試劑、儀器、試樣制備、操作步驟、結(jié)果表示及精密度等。本標準適用于植物油中多酚含量的測定。本標準的檢出限為6mg/kg。2　規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6379.1 測量方法與結(jié)果的準確度（正確度與精密度） 第1部分：總則與定義GB/T 6379.2 測量方法與結(jié)果的準確度(正確度與精密度) 第2部分：確定標準測量方法重復(fù)性與再現(xiàn)性的基本方法GB/T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和實驗方法GB/T 15687 動植物油脂 試樣的制備3　原理植物油中多酚經(jīng)二醇基小柱凈化后，福林酚試劑氧化多酚中-OH基團并顯藍色，在最大吸收波長750nm處測定溶液的吸光度，以沒食子酸作校正標準定量測定植物油中多酚含量。4　試劑除非另有說明，在分析中應(yīng)使用分析純試劑，水為GB/T 6682推薦使用的三級水。4.1　甲醇：色譜純。4.2　正己烷：色譜純。4.3　甲醇-水溶液：準確移取 50mL 甲醇（4.1）至 100mL 容量瓶，用水定容至刻度。4.4　碳酸鈉。4.5　福林酚（Folin-Ciocalteu）試劑。4.6　7.5%碳酸鈉溶液（質(zhì)量濃度）：稱取 7.5g±0.01g 碳酸鈉（4.4），加適量水溶解，轉(zhuǎn)移至100mL 容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。4.7　沒食子酸標準品：純度≥98%，相對分子質(zhì)量 170.12。LS/T 6119—201734.8　沒食子酸標準儲備液（1mg/mL）：稱取 0.100g±0.001g 沒食子酸標準品（4.7），加入少量甲醇（4.1）溶解后，轉(zhuǎn)移至 100mL 容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。4.9　沒食子酸工作液：用移液管分別移取 1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL 沒食子酸準儲備液（4.8）于 100mL 容量瓶中，分別用水定容至刻度，搖勻，濃度分別為10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL。5　儀器5.1　分析天平：感量 1mg。5.2　水浴鍋：70℃±1℃。5.3　旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：帶控溫裝置。5.4　分光光度計：波長 750nm；石英比色皿，10mm。5.5　二醇基（Diol）固相萃取柱：規(guī)格為 500mg，3mL。5.6　冷凍離心機：可控溫，轉(zhuǎn)速 10000rpm。5.7　渦旋振蕩儀。5.8　氮吹儀。6　試樣制備按GB/T 15687執(zhí)行。7　操作步驟7.1　柱活化二醇基固相萃取柱（5.5）依次用10mL甲醇（4.1）和10mL正己烷（4.2）活化，流速為2.0mL/min。7.2　凈化準確稱取2g（精確至0.001g）試樣（6）溶于6mL正己烷（4.2）中，將該溶液以1.0mL/min流速過二醇基固相萃取柱（5.5），然后再用10mL正己烷（4.2）淋洗萃取柱，棄去全部的流出液，最后用10mL甲醇（4.1）洗脫，收集全部的洗脫液，于45℃水浴（5.2）中弱氮氣吹干，殘渣溶于2mL甲醇-水溶液（4.3）中，渦旋振蕩1min，-18℃冷凍16h，4℃下10000rpm離心5min，取上清液，待測。7.3　測定用移液管分別移取沒食子酸工作液（4.9）、水（空白）及樣品待測液各1mL于刻度試管中，加入0.5mL福林酚試劑（4.5）、2mL 7.5%碳酸鈉溶液（4.6）和 6.5mL水，渦旋振蕩1min，70℃水浴中反應(yīng)30min，用10mm比色皿，在750nm波長條件下測定吸光度（ A）。若吸光度不在0.1~0.8之間時，應(yīng)適當調(diào)整待測樣品的稱樣量或稀釋待測溶液，再重新進行測定。LS/T 6119—20174根據(jù)沒食子酸工作液的吸光度（ A）與各工作溶液的沒食子酸濃度，繪制標準曲線。8　結(jié)果表示..................................(1)102??mDCX式中：X——植物油中多酚的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；C——由標準曲線查得多酚濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；D——樣品定容后的稀釋倍數(shù)，如未進行稀釋，則 D=1；2——洗脫液蒸干后定容體積，單位為毫升（mL）；m——試樣質(zhì)量，單位為克（g）。結(jié)果保留小數(shù)點后兩位。9　精密度9.1　重復(fù)性在重復(fù)性條件下獲得的兩個獨立測試結(jié)果的絕對差值小于等于重復(fù)性限（ r）的情況應(yīng)大于95%。多酚含量的重復(fù)性限（ r）參見附錄A。9.2　再現(xiàn)性在再現(xiàn)性條件下獲得的兩個獨立測試結(jié)果的絕對差值小于等于再現(xiàn)性限（ R）的情況應(yīng)大于95%。多酚含量的再現(xiàn)性限（ R）參見附錄A。LS/T 6119—20175A A附　錄　A（資料性附錄）實驗室間比對試驗表A.1和表A.2給出了5種類型油脂以及多家實驗室采用分光光度法測定植物油中多酚含量的結(jié)果，測試結(jié)果按GB/T 6379.1和GB/T 6379.2進行統(tǒng)計分析，統(tǒng)計結(jié)果見表A.2。表 A.1　樣品樣品A 10%橄欖油+90%精煉油茶籽油樣品B 油茶籽毛油樣品C 50%橄欖油+50%精煉油茶籽油樣品D 70%橄欖油+30%精煉油茶籽油樣品E 橄欖油表 A.2　實驗室間比對試驗統(tǒng)計結(jié)果樣品 樣品 A 樣品 B 樣品 C 樣品 D 樣品 E實驗室數(shù)目 10 10 10 10 10參加統(tǒng)計實驗室數(shù)目 10 10 10 10 10離群實驗室數(shù)目 3 2 0 1 1平均值/（mg/kg） 10.70 17.84 61.87 91.79 135.76重復(fù)性標準偏差， Sr 0.60 0.54 2.30 3.65 3.30重復(fù)性限， r 1.69 1.50 6.45 10.23 9.23重復(fù)性變異系數(shù)/% 5.64 3.01 3.72 3.98 2.43再現(xiàn)性標準偏差， SR 2.33 2.50 13.02 13.65 21.43再現(xiàn)性限， R 6.53 6.99 36.44 12.26 18.52再現(xiàn)性變異系數(shù)/% 21.81 13.99 21.04 14.88 15.79_________________________________