《乙肝病毒DNA的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)ppt課件》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《乙肝病毒DNA的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)ppt課件（27頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

LOREMIPSUMDOLOR,乙肝病毒DNA的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),1,1、熒光定量PCR技術(shù)2、乙肝病毒的感染3、HBV-DNA與臨床,2,熒光定量PCR技術(shù),3,熒光定量PCR技術(shù),Polymerasechainreaction(PCR)，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一種DNA的快速擴(kuò)增技術(shù)。PCR技術(shù)通過(guò)兩個(gè)短的稱為引物的DNA小片段和一種耐熱酶（TaqDNA聚合酶）的作用，經(jīng)過(guò)高溫變性、低溫退火、適溫延伸三個(gè)步驟在3個(gè)小時(shí)內(nèi)反復(fù)循環(huán)25-30次，把特定的DNA片段擴(kuò)增1000萬(wàn)倍。每個(gè)PCR體系含4種主要成分：含有待擴(kuò)增序列的DNA模板、引物、TaqDNA聚合酶、脫氧核糖核酸三磷酸（dNTP）,4,實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在反應(yīng)體系中加入熒光標(biāo)記，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)檢測(cè)整個(gè)PCR過(guò)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)PCR終產(chǎn)物的分析，最終實(shí)現(xiàn)對(duì)未知的起始模版進(jìn)行定量分析的一種技術(shù)，是迄今對(duì)已知基因序列的核酸測(cè)定中最靈敏的方法。,熒光定量PCR技術(shù),5,PCR反應(yīng)過(guò)程,d.NTPs,Taq酶,Primers,反應(yīng)組分,變性,,6,,延伸,,重復(fù),退火,7,循環(huán)24個(gè)拷貝,循環(huán)38個(gè)拷貝,8,熒光定量PCR原理,插入染料法SYBRGreenI雜交探針?lè)?最常用)TaqMan,9,TaqMan探針,d.NTPs,Taq酶,Primers,反應(yīng)體系,變性,,l,10,,退火,1.鏈取代,2.水解,3.聚合,4.檢測(cè)熒光,l,,,,11,乙肝病毒的感染,12,乙肝病毒的感染,（一）乙型肝炎病毒結(jié)構(gòu)及特點(diǎn),HBsAg：是HBV感染的主要標(biāo)志HBsAb：保護(hù)性抗體HBcAg：僅存于感染的肝細(xì)胞核內(nèi)，一般不存在于血循環(huán)中HBcAb:非保護(hù)性抗體，HBcAb-IgM提示HBV處于復(fù)制狀態(tài)HBeAg：HBV復(fù)制及強(qiáng)感染性的指標(biāo)HBeAb：有一定的保護(hù)作用，預(yù)后良好,13,乙肝病毒的感染,（二）HBV-DNA與“兩對(duì)半”,1.“兩對(duì)半”：機(jī)體的免疫反應(yīng)狀態(tài)；,2.“攜帶者”、“大三陽(yáng)”、“小三陽(yáng)”等免疫學(xué)指標(biāo)不能反應(yīng)體內(nèi)病毒復(fù)制水平與感染程度。,FQ-PCR：檢測(cè)的是HBV本身的遺傳物質(zhì)—DNA，是病毒存在和復(fù)制的最可靠、最直接的指標(biāo)。,,3.血清學(xué)指標(biāo)(－)不能排除HBV感染。,14,乙肝病毒的感染,5.HBeAg陽(yáng)性標(biāo)本HBVDNA檢出率90％左右HBeAg與HBVDNA有著良好的相關(guān)性,4.也可能出現(xiàn)HBsAg(＋)，HBV-DNA(－)。,15,乙肝病毒的感染,16,乙肝病毒的感染,慢性HBV感染分期及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo),魯鳳民，莊輝，乙型肝炎實(shí)驗(yàn)室診斷研究進(jìn)展2009,,17,HBV-DNA與臨床,18,HBVDNA檢測(cè)的臨床意義,HBVDNA是HBV存在最直接的依據(jù)HBVDNA是HBV復(fù)制的標(biāo)志HBVDNA是患者具有傳染性的標(biāo)志HBVDNA對(duì)乙肝兩對(duì)半起補(bǔ)充作用HBVDNA是目前判斷乙肝抗病毒藥物療效最敏感的指標(biāo)HBVDNA可檢測(cè)出隱匿性慢性乙型肝炎,19,有利于獻(xiàn)血員窗口期病毒核酸的篩查和早期診斷,提供直接證據(jù)縮短“窗口期”,HBVDNA檢測(cè)的臨床意義,20,調(diào)查表明并不是所有“大三陽(yáng)”的病人都處于HBV復(fù)制期，具有傳染性；也不是所有“小三陽(yáng)”的病人HBV都無(wú)復(fù)制。因此，要準(zhǔn)確知道HBV是否處于復(fù)制狀態(tài)，最準(zhǔn)確的方法還是通過(guò)檢測(cè)HBVDNA來(lái)決定。,HBVDNA檢測(cè)的臨床意義,21,22,23,HBVDNA檢測(cè)的臨床意義,HBsAg和HBeAg均陽(yáng)性而HBVDNA陰性？,●干擾素或拉米夫定等治療后病毒復(fù)制受抑制?！馪CR所用引物相應(yīng)的DNA序列發(fā)生突變，此引物與突變DNA不能配對(duì)結(jié)合?！癫《綝NA整合于宿主肝細(xì)胞染色體而血中游離HBVDNA很少或缺乏。,24,目前尚無(wú)一種能迅速、直接殺死清除乙肝病毒的藥物，最好的抗病毒藥物療效也僅能達(dá)到50％左右。目前國(guó)際醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的治療慢性乙肝有確切療效的抗病毒藥物主要有兩大類：?干擾素：重組人α-1b干擾素、α-2a、α-2b干擾素等。核苷類似物：拉米夫定、阿德福韋。,乙肝的治療,25,主要包括抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、抗炎保肝、抗纖維化等對(duì)于HBVDNA≥105的患者應(yīng)進(jìn)行抗病毒治療,乙肝的治療,26,謝謝,27,