浙江2018屆高三生物專題復(fù)習(xí)題型增分練四、加試非選擇題（打包6套）新人教版.zip,浙江,2018,屆高三,生物,專題,復(fù)習(xí),題型,增分練四,加試,選擇題,打包,新人 四、加試非選擇題(32～33題)專練 加試特訓(xùn)1　生物技術(shù)實踐(A) 1．尿素是一種高濃度氮肥且長期施用沒有不良影響，但尿素只有通過土壤中某些細菌的分解作用，才能被植物吸收利用。某同學(xué)要分離出土壤中能分解尿素的細菌，并嘗試進行計數(shù)，培養(yǎng)基配方如下： K2HPO4 NaCl H2O 葡萄糖 尿素 酚紅 瓊脂 0.12 g 0.12 g 15 mL 0.025 g 2.0 g 0.25 mg 0.5 g (1)分解尿素的細菌都能合成________，該種細菌在生態(tài)平衡中起到______________的作用。 (2)根據(jù)培養(yǎng)基的成分判斷，該同學(xué)能否分離出土壤中分解尿素的細菌？________(填“能”或“不能”)，原因是_______________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)分離得到分解尿素的細菌后，如果要擴大培養(yǎng)，則應(yīng)選擇________培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。培養(yǎng)一段時間后，使用________對微生物細胞進行計數(shù)。計數(shù)過程中，下列哪種行為會影響計數(shù)的準確性________。 A．計數(shù)時直接從靜置培養(yǎng)的試管底部取培養(yǎng)液進行計數(shù) B．如果方格內(nèi)微生物細胞數(shù)量多于300個，培養(yǎng)液先稀釋后再計數(shù) C．如果微生物細胞有粘連，要數(shù)出團塊中的每一個細胞 D．壓在方格線上的細胞只計左線和上線上的細胞數(shù) 答案　(1)脲酶　參與氮循環(huán)(或維持氮平衡)　(2)不能　瓊脂是未被純化的混合物，內(nèi)含一定的含氮化合物，尿素不是唯一氮源，不能選擇出只以尿素為氮源的微生物　(3)液體　血細胞計數(shù)板　A 解析　分解尿素的細菌都能合成脲酶，因此可以選用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基來分離尿素分解菌，并且用瓊脂糖來代替瓊脂作為微生物培養(yǎng)基的固化劑，這樣就使培養(yǎng)基中只含有尿素這一種含氮化合物，有利于對這種細菌的篩選。(1)含有脲酶的細菌將尿素降解為氨作為其生長的氮源，從而也起到維持生物圈氮元素平衡的作用。(2)因為瓊脂是一種未被純化的混合物，內(nèi)含一定量的含氮化合物，不利于目的菌的篩選，所以該培養(yǎng)基不能分離出分解尿素的細菌。(3)擴大培養(yǎng)需要使用液體培養(yǎng)基，微生物的計數(shù)可以采用涂布分離法或利用血細胞計數(shù)板進行顯微計數(shù)，結(jié)合后續(xù)選項可以看出本題采用的是后者。計數(shù)過程需要注意操作規(guī)范，如A選項所述的操作會影響計數(shù)的準確性，計數(shù)前應(yīng)該把試管上下倒轉(zhuǎn)數(shù)次，使細菌分布均勻，再取培養(yǎng)液進行計數(shù)。 2．某市葡萄種植基地為解決葡萄滯銷易腐爛問題，引進果酒、果醋生產(chǎn)線進行葡萄的深加工，獲得了較好的效益，其生產(chǎn)流程如圖所示，據(jù)圖回答： (1)在篩選菌種A時，需要在接種前用________________法對葡萄果汁進行滅菌。 (2)在純化菌種A時接種了5個平板，每個平板均接種了0.1 mL樣品并培養(yǎng)。其中乙平板的菌落分布如圖，純化菌種A的接種方法是____________，推測出現(xiàn)平板乙可能的操作失誤是________________。 (3)與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長素和____________。 (4)將葡萄加工成果汁時，為提高果汁的產(chǎn)量和品質(zhì)，應(yīng)加入適量的______酶，該酶能破壞植物細胞的________(填細胞結(jié)構(gòu))。 答案　(1)高壓蒸汽滅菌　(2)涂布分離法　涂布不均勻(3)細胞分裂素　(4)果膠(果膠酶和纖維素)　細胞壁 解析　(1)培養(yǎng)基常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌法。(2)分析圖乙中培養(yǎng)基培養(yǎng)結(jié)果，培養(yǎng)基中的菌落沒有呈線形分布，可以推知采用的純化方法是涂布分離法；由于菌落有聚集現(xiàn)象，可以推知平板乙可能的操作失誤是涂布不均勻，導(dǎo)致菌落分布不均勻。(3)進行植物組織培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中常常添加的植物激素有生長素和細胞分裂素。(4)果膠酶包括多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶和果膠酯酶等，它們能催化果膠的分解，水解植物細胞壁，從而使果汁變得澄清，提高產(chǎn)量和品質(zhì)。 3．(2017·浙江模擬)如圖是“分離以尿素為氮源的微生物”實驗的基本流程，請回答下列問題： (1)該實驗培養(yǎng)基應(yīng)該含有________(多選)。 A．尿素 B．氯化鈉 C．葡萄糖 D．瓊脂糖 (2)尿素溶液可用________________使之無菌。若要檢查B過程滅菌是否徹底，可以采用的方法是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)圖中步驟C為________。相對于劃線分離法，過程D涂布分離法的優(yōu)點是________________________________________________________________________。 (4)如果菌落周圍出現(xiàn)________色環(huán)帶，說明該菌落能分泌脲酶。 答案　(1)ABCD　(2)G6玻璃砂漏斗過濾　將空白培養(yǎng)基放在適宜溫度下培養(yǎng)一段時間，觀察有無菌落出現(xiàn)(3)倒平板　單菌落更易分開　(4)紅 解析　(1)分解尿素的細菌是異養(yǎng)微生物，因此培養(yǎng)基中應(yīng)該加入有機碳源，如葡萄糖；分離分解尿素的細菌培養(yǎng)基從功能上分應(yīng)屬于選擇培養(yǎng)基，應(yīng)該以尿素為唯一氮源；從物理性質(zhì)上分應(yīng)屬于固體培養(yǎng)基，因此應(yīng)加入凝固劑瓊脂糖。故選：ABCD。(2)尿素溶液可用G6玻璃砂漏斗過濾使之無菌。若要檢查B過程滅菌是否徹底，可以采用的方法是將空白培養(yǎng)基放在適宜溫度下培養(yǎng)一段時間，觀察有無菌落出現(xiàn)。(3)圖中步驟C為倒平板。相對于劃線分離法，過程D涂布分離法的優(yōu)點是單菌落更易分開。(4)如果菌落周圍出現(xiàn)紅色環(huán)帶，說明該菌落能分泌脲酶，脲酶分解尿素產(chǎn)生氨，使pH升高，酚紅指示劑顏色發(fā)生變化。 4．多環(huán)芳烴菲在染料、殺蟲劑等生產(chǎn)過程中被廣泛使用，是土壤、河水中常見的污染物之一。下圖表示科研人員從被石油污染的土壤中分離獲得能降解多環(huán)芳烴菲的菌株Q的主要步驟。請回答： (1)步驟①→③的培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)液中加入多環(huán)芳烴菲作為唯一碳源，目的是__________________________。 (2)步驟①→③的培養(yǎng)過程中，需將錐形瓶放在搖床上振蕩，一方面使菌株與培養(yǎng)液充分接觸，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率；另一方面能__________________________。 (3)步驟④用劃線分離法純化菌株Q的過程中，在做第二次以及其后的劃線操作時，總是從上一次劃線的末端開始劃線，原因是__________________________。采用固體平板培養(yǎng)基培養(yǎng)細菌時要倒置培養(yǎng)的目的是________________________________。 (4)接種環(huán)通過灼燒來滅菌，完成步驟④中劃線操作，共需灼燒接種環(huán)________(A.4　B．5　C．6　D．7)次。 (5)為了獲得分解多環(huán)芳烴菲能力更強的菌株，研究人員又對菌株Q進行了誘變處理，得到突變株K。為了比較兩種菌株降解多環(huán)芳烴菲的能力，設(shè)計了下列實驗，請補充實驗步驟： ①取9只錐形瓶均分成3組，編號A、B、C。 ②向9只錐形瓶中分別加入________________為唯一碳源的培養(yǎng)液。 ③向A、B、C 3組培養(yǎng)液中分別加入______________________________________________。 ④28℃恒溫培養(yǎng)3天后，測定錐形瓶中多環(huán)芳烴菲的降解率。 答案　(1)篩選出菌株Q　(2)增加培養(yǎng)液中的溶氧量　(3)線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處少(或能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終得到由單個細菌繁殖而來的菌落)　防止冷凝后形成水珠滴在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基　(4)C　(5)②等量的多環(huán)芳烴菲　③等量的無菌水、菌株Q菌液和突變株K菌液 5．回答下列關(guān)于微生物和酶的問題。 高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實用性。研究者從熱泉中篩選了高效產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過程如圖所示： (1)①過程稱為________，②過程是為了________________。 (2)Ⅰ號培養(yǎng)基稱為________________(按功能分)；該培養(yǎng)基中除了加入淀粉外，還需加入另一種重要的營養(yǎng)成分____(A.瓊脂　B．葡萄糖　C．硝酸銨　D．碳酸氫鈉)。 (3)一般對配制的培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌，其中“高壓”是為了_____________________。在高溫淀粉酶運用到工業(yè)生產(chǎn)前，需對該酶作用的最佳溫度范圍進行測定。圖中的曲線①表示酶在各種溫度下酶活性相對最高酶活性的百分比。將酶在不同溫度下保溫足夠長的時間，再在酶活性最高的溫度下測其殘余酶活性，由此得到的數(shù)據(jù)為酶的熱穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，即圖中的曲線②。 (4)根據(jù)圖中的數(shù)據(jù)，判斷該酶使用的最佳溫度范圍是________(A.40～50 ℃　B．50～60 ℃　C．60～70 ℃D.70～80 ℃)。 (5)據(jù)圖判斷下列敘述錯誤的是________。 A．該酶只能在最佳溫度范圍內(nèi)測出活性 B．曲線②35 ℃數(shù)據(jù)點是在80 ℃時測得的 C．曲線①表明80 ℃是該酶活性最高的溫度 D．曲線②表明該酶的熱穩(wěn)定性在70 ℃之后急劇下降 答案　(1)稀釋　分離純化嗜熱菌　(2)選擇培養(yǎng)基　C(3)殺死培養(yǎng)基中的細菌芽孢　(4)C　(5)A 6．(2017·臺州模擬)某研究小組欲用蘋果汁為原料，利用發(fā)酵瓶制作果酒和果醋，請分析回答： (1)將蘋果汁放入發(fā)酵瓶時，要預(yù)留約________的空間。為得到酒精和糖含量較高的果酒，可在果汁中加入一定比例的________。若發(fā)酵瓶內(nèi)持續(xù)無氣泡產(chǎn)生，則需加入更多的________，使發(fā)酵作用盡快發(fā)生。 (2)變酸的果酒表面有一層醋化醋桿菌形成的菌膜，若要在該菌膜中篩選出高表達量的醋化醋桿菌菌株，可通過獲得____________的方法來分離篩選。若要統(tǒng)計獲得菌種的數(shù)目，則常采用____________法。對獲得的優(yōu)質(zhì)醋化醋桿菌菌種常用劃線法接種在固體培養(yǎng)基________上低溫保存。 (3)如圖是果酒和果醋的發(fā)酵裝置，關(guān)于果醋發(fā)酵敘述錯誤的是________。 A．發(fā)酵前，瓶內(nèi)酒－水混合物的pH需調(diào)至7.0 B．發(fā)酵過程中，充氣口要適時適量充氣 C．發(fā)酵過程中，排氣口排出醋酸發(fā)酵產(chǎn)生的CO2 D．發(fā)酵完成后，出料口的pH值不再減少 答案　(1)1/3　蔗糖　酵母菌　(2)單菌落　涂布分離　斜面　(3)C 解析　(1)將葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時，要留大約1/3的空間，并封閉充氣口。為得到酒精和糖含量較高的果酒，可在果汁中加入一定比例的蔗糖。若發(fā)酵瓶內(nèi)持續(xù)無氣泡產(chǎn)生，則需加入更多的酵母菌，使發(fā)酵作用盡快發(fā)生。(2)變酸的果酒表面有一層醋化醋桿菌形成的菌膜，若要在該菌膜中篩選高表達量的醋化醋桿菌菌株，可通過獲得單菌落的方法來分離篩選。接種微生物常用劃線分離法和涂布分離法，其中涂布分離法可以統(tǒng)計獲得菌種的數(shù)目。對獲得的優(yōu)質(zhì)醋化醋桿菌菌種常用劃線法接種在固體培養(yǎng)基斜面上低溫保存。(3)將酒－水混合物pH調(diào)至7.0有利于醋化醋桿菌生長與繁殖，縮短發(fā)酵時間，因此發(fā)酵前，瓶內(nèi)酒－水混合物的pH需調(diào)至7.0，A正確；醋化醋桿菌是嗜氧菌，因此發(fā)酵過程中，充氣口要適時適量充氣，B正確；醋化醋桿菌發(fā)酵不會產(chǎn)生二氧化碳，發(fā)酵過程中，排氣口排出含氧量較少的空氣，C錯誤；發(fā)酵完成后，不會有醋酸再產(chǎn)生，因此出料口的pH值不再減少，D正確。 7．葡萄收獲的季節(jié)性較強，并且不易運輸，易造成積壓，腐爛變質(zhì)。為了解決上述問題且滿足不同人群的需求，可以將其加工制作成果汁、果酒、果醋等。圖1是簡單的生產(chǎn)流程圖，結(jié)合所學(xué)知識回答下列問題： 圖1 (1)果膠酶的使用過程①中，需要對酶的活性、酶的用量進行研究。在圖2甲、乙兩個曲線中，果膠酶活性受環(huán)境因素影響的變化曲線是________；乙曲線中縱軸還可以用_____________來表示。自變量X可以代表____________；自變量Y可以代表____________。 圖2 (2)果膠酶的最適用量是圖2中的____點對應(yīng)的量。 (3)③→⑤過程中不用滅菌一般也不會受到雜菌的污染，原因是____________________ ________________________________________________________________________。 (4)果酒和果醋的制作過程相比，從發(fā)酵條件來看，二者不同之處是____。 A．都需要氧氣 B．都不需要氧氣 C．前者需要氧氣，后者不需要氧氣 D．前者不需要氧氣，后者需要氧氣 答案　(1)甲　過濾得到的果汁體積　溫度、pH等　果膠酶的濃度(或用量)　(2)B　(3)培養(yǎng)液中缺氧環(huán)境及酵母菌產(chǎn)生的乙醇能抑制絕大多數(shù)細菌的生長繁殖　(4)D 解析　(1)果膠酶的活性受溫度、pH等條件的影響，每一種酶的最適pH和最適溫度是一定的。衡量實驗結(jié)果的指標有兩種，一個是果汁的量，另一個是果汁的澄清度。(2)果膠酶的最適用量是過濾得到果汁澄清度最高時對應(yīng)的最小酶量，B點后酶量增加而澄清度不再增加，因此B點對應(yīng)的量為最適用量。(3)缺氧條件不利于大多數(shù)細菌的生存，同時乙醇有殺菌作用。(4)酒精發(fā)酵為厭氧發(fā)酵，醋酸發(fā)酵為需氧發(fā)酵。 8．請回答下列有關(guān)微生物培養(yǎng)、發(fā)酵過程中的相關(guān)問題： (1)在“分離以尿素為氮源的微生物”的實驗中，配制好的尿素固體培養(yǎng)基加上封口膜后用________________方法滅菌，冷卻后加入用G6玻璃砂漏斗過濾的尿素溶液。玻璃砂漏斗用后需用適宜濃度的________浸泡，再用________沖洗，干燥后保存。 (2)在“果汁中的果膠和果膠酶”實驗中，可以用________(A.50%的乙醇　B．70%的乙醇　C．90%的乙醇　D．95%的乙醇)鑒別果膠。果膠酶可以從黑曲霉或________中提取，配制這些微生物的培養(yǎng)基時需要將pH調(diào)至________。 (3)在“用果汁制作果酒”實驗中，為了增加果酒的含糖量，可以在發(fā)酵瓶中加入一定量的________。 答案　(1)高壓蒸汽滅菌　HCl　蒸餾水　(2)D　蘋果青霉　中性偏酸　(3)蔗糖 解析　(1)培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌法滅菌。玻璃砂漏斗用后需用適宜濃度的HCl浸泡，再用蒸餾水沖洗，干燥后保存。(2)在“果汁中的果膠和果膠酶”實驗中，可以用95%的乙醇鑒別果膠。果膠酶可以從黑曲霉或蘋果青霉中提?。缓谇够蛱O果青霉都屬于真菌，配制真菌的培養(yǎng)基時需要將pH調(diào)至中性偏酸。(3)在“用果汁制作果酒”實驗中，為了增加果酒的含糖量，可以在發(fā)酵瓶中加入一定量的蔗糖。 7 加試特訓(xùn)2　生物技術(shù)實踐(B) 1．某研究小組利用酵母菌發(fā)酵葡萄生產(chǎn)葡萄酒?；卮鹣铝袉栴}： (1)欲從土壤中分離野生型酵母菌，最好采用________法進行接種，經(jīng)過培養(yǎng)后，觀察培養(yǎng)基上微生物的________，從中選出酵母菌。 (2)為提高生產(chǎn)效率，做了對比實驗。甲發(fā)酵罐中保留一定量的氧氣，乙發(fā)酵罐中沒有氧氣，其余條件相同且適宜，定期測得的數(shù)據(jù)如圖所示。 甲發(fā)酵罐提供氧氣的目的是______________________，12 h后，甲、乙兩發(fā)酵罐消耗的葡萄糖量之比為________(A.3∶4　B．4∶3　C．5∶3　D．3∶5)。實驗后檢測發(fā)現(xiàn)，盡管酵母菌菌種合適、原料充足、操作正確、發(fā)酵溫度和pH適宜，但乙醇含量比預(yù)期低，可能的原因是________________________。 (3)在釀制葡萄酒時，加入果膠酶將果膠分解成可溶性的____________，瓦解植物的胞間層，可以提高果汁的出汁率，并使果汁澄清，提高葡萄酒的品質(zhì)。 答案　(1)劃線分離(或涂布分離)　菌落　(2)使酵母菌進行需氧呼吸，快速繁殖　B　乙醇增多會抑制酵母菌的酒精發(fā)酵過程　(3)半乳糖醛酸 解析　(1)欲從土壤中分離野生型酵母菌，最好采用劃線分離法或涂布分離法進行接種，經(jīng)過培養(yǎng)后，觀察培養(yǎng)基上微生物的菌落，從中選出酵母菌。(2)甲發(fā)酵罐提供氧氣的目的是使酵母菌進行需氧呼吸，快速繁殖。由于甲發(fā)酵罐中含有一定量的氧氣，因此甲發(fā)酵罐中進行需氧呼吸和酒精發(fā)酵，由題圖可知，甲發(fā)酵罐中的氧氣是6 mol，則需氧呼吸消耗的葡萄糖是1 mol，產(chǎn)生的乙醇是18 mol，則酒精發(fā)酵消耗的葡萄糖是9 mol，故消耗的葡萄糖共10 mol；乙發(fā)酵罐不含有氧氣，只進行酒精發(fā)酵，產(chǎn)生的酒精是15 mol，則酒精發(fā)酵消耗的葡萄糖是7.5 mol。因此，甲、乙兩發(fā)酵罐消耗的葡萄糖之比為10∶7.5＝4∶3。實驗后檢測發(fā)現(xiàn)，盡管酵母菌菌種合適、原料充足、操作正確、發(fā)酵溫度和pH適宜，但乙醇含量比預(yù)期低，可能的原因是乙醇增多會抑制酵母菌的酒精發(fā)酵過程。(3)果膠酶將果膠分解成可溶性的半乳糖醛酸。 2．下列問題是有關(guān)大腸桿菌的培養(yǎng)實驗，請回答： (1)配制培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基時，根據(jù)“細菌喜葷，霉菌喜素”的規(guī)律，通常在培養(yǎng)基中加入蛋白胨和____________作為營養(yǎng)物質(zhì)，為維持一定的滲透壓，常需加入一定量的________。 (2)大腸桿菌培養(yǎng)和分離的實驗中，在________________中進行擴大培養(yǎng)，培養(yǎng)液經(jīng)________后，在LB固體培養(yǎng)基上進行________，并將培養(yǎng)皿________放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，可以獲得如圖效果。為了檢測接種、培養(yǎng)過程是否受雜菌污染以及________________，應(yīng)同時將未接種的培養(yǎng)基放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 (3)通常對獲得的純菌種可以依據(jù)________的形狀、大小等特征進行初步的鑒定。 (4)關(guān)于“大腸桿菌培養(yǎng)和分離”的操作中，下列敘述正確的是________。 A．高壓滅菌加熱結(jié)束時，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋 B．倒平板時，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上 C．為了防止污染，接種工具經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落 D．用記號筆標記培養(yǎng)皿中菌落時，應(yīng)標記在皿底上 (5)科學(xué)家利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素，其過程如圖。由甲和載體乙拼接形成的丙通常稱為________，構(gòu)建得到丙時必需的工具酶有________________________。在此過程中，用來處理丁以增加細菌細胞壁通透性的化學(xué)試劑是________。 A．氯化鈉 B．氯化鈣 C．次氯酸鈉 D．纖維素酶 答案　(1)酵母提取物　NaCl　(2)LB液體培養(yǎng)基　稀釋　分離　倒置　無菌操作是否規(guī)范　(3)菌落　(4)D(5)重組質(zhì)粒(重組DNA分子)　限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶　B 解析　(1)配制培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基時，根據(jù)“細菌喜葷，霉菌喜素”的規(guī)律，通常在培養(yǎng)基中加入蛋白胨和酵母提取物作為營養(yǎng)物質(zhì)，為維持一定的滲透壓，常需加入一定量的NaCl。(2)大腸桿菌培養(yǎng)和分離的實驗中，在LB液體培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng)，培養(yǎng)液經(jīng)稀釋后，在LB固體培養(yǎng)基上進行分離，并將培養(yǎng)皿倒置放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；為了檢測接種、培養(yǎng)過程是否受雜菌污染以及無菌操作是否規(guī)范，應(yīng)同時將未接種的培養(yǎng)基放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(3)通常對獲得的純菌種可以依據(jù)菌落的形狀、大小等特征進行初步鑒定。(4)高壓滅菌加熱結(jié)束，等待壓力表指針回到零后，才能開啟鍋蓋，不能直接打開放氣閥使壓力表指針回到零；倒平板過程中只能打開皿蓋的一邊，不能將皿蓋放在一邊，以防止雜菌污染；接種環(huán)在火焰上灼燒，待冷卻后才可以快速挑取菌落；用記號筆標記培養(yǎng)皿中菌落時，應(yīng)標記在皿底上。(5)由目的基因甲和載體乙拼接形成的丙通常稱為重組質(zhì)粒；構(gòu)建重組DNA分子時，需先用限制性核酸內(nèi)切酶切割外源DNA分子和載體，再用DNA連接酶將目的基因與載體連接形成重組DNA分子；將重組質(zhì)粒導(dǎo)入微生物細胞時，常用氯化鈣來處理微生物細胞，以增加細胞壁通透性，使之成為感受態(tài)細胞，有利于重組質(zhì)粒向內(nèi)部轉(zhuǎn)移。 3．請回答微生物篩選和培養(yǎng)實驗的有關(guān)問題： (1)不同微生物的生存環(huán)境不同，獲得理想微生物的第一步是從適合的環(huán)境采集菌樣，然后再按一定的方法分離、純化。培養(yǎng)嗜鹽菌的菌樣應(yīng)從__________________環(huán)境采集。 (2)富集培養(yǎng)指創(chuàng)設(shè)僅適合待分離微生物旺盛生長的特定環(huán)境條件，使其在群落中的數(shù)量大大增加，從而分離出所需微生物的培養(yǎng)方法。對產(chǎn)耐高溫淀粉酶微生物的富集培養(yǎng)應(yīng)選擇____________的培養(yǎng)基，并在________條件下培養(yǎng)。 (3)為獲得一種能高效降解農(nóng)藥的細菌(目的菌)，向培養(yǎng)基中加入某種化合物，將初步篩選得到的目的菌轉(zhuǎn)到固體培養(yǎng)基中，常采用的接種方法是____________；實驗結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進行滅菌處理后才能倒掉，這樣做是為了________________。 (4)配制培養(yǎng)基時各種成分在溶化后分裝前必須進行________，接種前要進行____________，在整個微生物的分離和培養(yǎng)中，一定要注意在無菌條件下進行。 答案　(1)海灘等高鹽　(2)以淀粉為唯一碳源　高溫　(3)劃線分離法　防止造成環(huán)境污染　(4)pH調(diào)整　高壓蒸汽滅菌 4．果膠酶能分解果膠等物質(zhì)，澄清果蔬飲料，在食品加工業(yè)中有著廣泛的應(yīng)用。某興趣小組的同學(xué)對三種不同品牌的果膠酶制劑(制劑中果膠酶濃度相同)進行了探究，其實驗設(shè)計及實驗結(jié)果如表所示。 分組 蒸餾水(mL) 緩沖液(mL) 果汁(mL) 果膠酶制劑(mL) 果汁渾濁程度 甲 乙 丙 1 2 2 5 2 0 0 ＋ 2 2 2 5 0 2 0 ＋＋＋ 3 2 2 5 0 0 2 ＋＋ 4 X 2 5 0 0 0 Y 注：“＋”越多表示果汁越渾濁。 (1)表中X所代表的數(shù)值應(yīng)為__________，Y的果汁渾濁程度應(yīng)表示為______________(用若干個“＋”表示)。 (2)除了觀察果汁渾濁程度外，還可以通過檢測____________的變化量來判斷不同品牌果膠酶制劑的效果。若使用該方法，相關(guān)物質(zhì)變化量最大的是________組。 (3)微生物是生產(chǎn)果膠酶的優(yōu)良生物資源。分離和篩選能產(chǎn)生果膠酶的微生物，使用的培養(yǎng)基應(yīng)以________為唯一碳源；如需進一步純化果膠酶，可根據(jù)果膠酶分子的___________(至少寫出兩點)等特性進行分離提純。由于果膠酶的活性容易受到外界環(huán)境因素的干擾，所以應(yīng)利用____________技術(shù)減少影響從而保護酶的活性。 答案　(1)4?。?或多于＋＋＋)　(2)反應(yīng)物(或“果膠”“半乳糖醛酸”“生成物”“產(chǎn)物”)　1　(3)果膠　形狀和大小(或“所帶電荷性質(zhì)和多少”“溶解度”“吸附性質(zhì)和對其他分子的親和力”等)　固定化酶 解析　(1)對照實驗應(yīng)遵循單一變量原則，要嚴格控制無關(guān)變量適宜且相同。由題中實驗分組處理可知，第4組實驗中沒有添加果膠酶制劑，為保證各組實驗溶液體積相同，X應(yīng)為4；果膠酶能分解果膠等物質(zhì)以澄清果蔬飲料，故沒有添加果膠酶制劑的第4組的果汁渾濁程度應(yīng)當最高。(2)果膠酶可水解果膠，可通過反應(yīng)中反應(yīng)物的減少量或生成物的生成量來表示果膠酶的作用效果。(3)果膠可作為微生物培養(yǎng)的碳源，并且果膠的水解需要果膠酶，故在分離和篩選能產(chǎn)生果膠酶的微生物時，要使用果膠作為唯一碳源的培養(yǎng)基。分離提純物質(zhì)一般根據(jù)其物質(zhì)的相關(guān)特性設(shè)置分離提純方法，如：“形狀和大小”“所帶電荷性質(zhì)和多少”“溶解度”“吸附性質(zhì)和對其他分子的親和力”等。固定化酶技術(shù)能有效地減少外界環(huán)境對酶的影響。 5．如圖是泡菜的制作及測定亞硝酸鹽含量的實驗流程示意圖，請據(jù)圖回答： (1)制作泡菜宜選用新鮮的蔬菜，原因是__________________________________。 (2)制備泡菜的鹽水中清水與鹽的質(zhì)量比約為4∶1，鹽水需煮沸并冷卻后才可使用，原因是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)泡菜的制作方法不當，很容易造成泡菜變質(zhì)，甚至發(fā)霉變味，試分析可能的原因(只要求寫一個原因)：_________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (4)測定亞硝酸鹽含量的方法是____________________，其原理是：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生________反應(yīng)后，與________________________偶聯(lián)，形成紫紅色產(chǎn)物。 答案　(1)亞硝酸鹽的含量低　(2)加熱煮沸是為了殺滅雜菌，冷卻之后使用是為了保證乳酸菌等微生物的生命活動不受影響　(3)泡菜壇子密封不嚴或取食工具不衛(wèi)生或鹽的比例過小或溫度過高都會引起雜菌滋生、泡菜變質(zhì)　(4)光電比色法　重氮化　N-1-萘基乙二胺 6．請回答從土壤中分離產(chǎn)脲酶細菌和脲酶固定化實驗的有關(guān)問題： (1)LB固體培養(yǎng)基：取適量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸餾水溶解，再加________，滅菌備用。 (2)尿素固體培養(yǎng)基：先將適宜濃度的尿素溶液用____________滅菌過的G6玻璃砂漏斗過濾，因為G6玻璃砂漏斗__________________________，故用于過濾除菌。然后將尿素溶液加入到已經(jīng)滅菌的含有酚紅的培養(yǎng)基中，備用。 (3)取適量含產(chǎn)脲酶細菌的10－4、10－5兩種土壤稀釋液，分別涂布接種到LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48 h，推測固體培養(yǎng)基上生長的菌落最少的是______(A.10－5稀釋液＋尿素固體培養(yǎng)基　B．10－5稀釋液＋LB固體培養(yǎng)基　C．10－4稀釋液＋尿素固體培養(yǎng)基　D．10－4稀釋液＋LB固體培養(yǎng)基)。在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶細菌菌落周圍出現(xiàn)________，其原因是細菌產(chǎn)生的脲酶催化尿素分解產(chǎn)生________所致。 (4)制備固定化脲酶時，用石英砂吸附脲酶，裝柱。再用蒸餾水洗滌固定化酶柱，其作用是________________________________________________________________________。 答案　(1)瓊脂糖　(2)高壓蒸汽　孔徑小，細菌不能濾過(3)A　紅色環(huán)帶　氨(或NH3)　(4)除去游離的脲酶 解析　(1)固體培養(yǎng)基中需添加瓊脂糖起到凝固的作用。(2)因為G6玻璃砂漏斗中存在雜菌，所以在其過濾除菌之前需進行高壓蒸汽滅菌；G6玻璃砂漏斗能過濾除菌的原理是其孔徑較小，細菌不能通過。(3)土壤中的微生物在LB全營養(yǎng)培養(yǎng)基中都能生長，在尿素固體培養(yǎng)基中只有能利用尿素的微生物能生長，10－4土壤稀釋液中微生物數(shù)量較多，所以推測固體培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)最少的是10－5稀釋液＋尿素固體培養(yǎng)基；在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶的細菌周圍會出現(xiàn)紅色環(huán)帶，因為細菌產(chǎn)生的脲酶催化尿素分解產(chǎn)生了氨(NH3)，導(dǎo)致培養(yǎng)基呈堿性，培養(yǎng)基中的酚紅物質(zhì)在堿性條件下會變紅。(4)并不是所有的脲酶都能吸附在石英砂上，所以裝柱后需用蒸餾水洗滌固定化酶柱，以洗去多余的未吸附的脲酶。 7．大腸桿菌是生存在人體腸道中的正常菌群，每克糞便中含有109個，且能夠與致病菌混雜生長。如果食品和飲用水中出現(xiàn)大腸桿菌，就意味著食物可能被糞便污染而帶上致病菌，因而常將大腸桿菌的數(shù)量作為食品衛(wèi)生的檢測指標之一。請據(jù)此回答下列問題： (1)大腸桿菌異化作用的類型是____________，大腸桿菌在腸道中一般對人無害，但如果進入人的________，會對人體產(chǎn)生危害。 (2)測定街邊出售的奶茶中大腸桿菌的數(shù)目，常用涂布分離法進行測定。在操作過程中錯誤的是________。 A．將玻璃刮刀從70%酒精中取出后需放在酒精燈火焰上灼燒 B．涂布時需轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿以使涂布均勻 C．每一濃度需設(shè)多個培養(yǎng)皿進行涂布 D．也可以利用劃線分離法進行測定 (3)根據(jù)菌落測出的大腸桿菌數(shù)比實際數(shù)值要________(高、低)，原因是__________________ ________________________________________________________________________。 實驗完成后需要對培養(yǎng)基進行________處理，然后才能倒掉。 答案　(1)兼性厭氧型　泌尿系統(tǒng)　(2)D　(3)低　培養(yǎng)基中可能有兩個或多個細菌緊挨在一起，共同形成一個菌落　滅菌 8．以下是有關(guān)泡菜發(fā)酵過程中的相關(guān)問題，請回答下列問題： (1)蔬菜剛?cè)雺瘯r，其表面帶有不抗酸的大腸桿菌和酵母菌等微生物。其中的酵母菌最初的呼吸作用方式是________________，請寫出相關(guān)反應(yīng)式：____________________________。 (2)到發(fā)酵中期，無氧環(huán)境形成，乳酸菌開始活躍，并產(chǎn)生大量乳酸，使乳酸積累量達到0.6%～0.8%，pH為3.5～3.8，試分析此時壇內(nèi)其他微生物的活動情況及原因。 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)發(fā)酵后期，乳酸含量繼續(xù)增加，當達到1.2%以上時，發(fā)酵速度逐漸變緩甚至停止，主要原因是________________________________________。 (4)請在下列坐標圖中畫出該過程中乳酸菌、乳酸和亞硝酸鹽含量的變化趨勢。 答案　(1)需氧呼吸　C6H12O6＋6O2酶,6CO2＋6H2O＋能量 (2)其他微生物活動減慢甚至停止，因為pH不適宜 (3)pH過低抑制了乳酸菌的生長 (4)如圖所示 解析　(1)蔬菜入壇的初期，壇內(nèi)氧氣充足，酵母菌主要進行需氧呼吸產(chǎn)生CO2和H2O。(3)發(fā)酵后期發(fā)酵速度變緩甚至停止的主要原因是過多的乳酸使pH過低，抑制了乳酸菌的生長。 7 加試特訓(xùn)3　現(xiàn)代生物科技專題(A) 1．植物甲具有極強的耐旱性，其耐旱性與某個基因有關(guān)。若從該植物中獲得該耐旱基因，并將其轉(zhuǎn)移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性?；卮鹣铝袉栴}： (1)若要從植物甲中獲得耐旱基因，可首先建立該植物的基因組文庫，再從中________出所需的耐旱基因。 (2)將耐旱基因?qū)朕r(nóng)桿菌，并通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將其導(dǎo)入植物________的體細胞中，經(jīng)過一系列的過程得到再生植株。要確認該耐旱基因是否在再生植株中正確表達，應(yīng)檢測此再生植株中該基因的________，如果檢測結(jié)果呈陽性，再在田間實驗中檢測植株的________是否得到提高。 (3)假如用得到的二倍體轉(zhuǎn)基因耐旱植株自交，子代中耐旱與不耐旱植株的數(shù)量比為15∶1，則可推測該耐旱基因整合到了__________________。 答案　(1)篩選　(2)乙　表達產(chǎn)物　耐旱性　(3)兩對同源染色體上 解析　(1)從基因文庫中獲取目的基因需要進行篩選。(2)要提高植物乙的耐旱性，需要利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將耐旱基因?qū)胫参镆业捏w細胞中。要檢測目的基因(耐旱基因)是否表達應(yīng)該用抗原－抗體雜交法檢測目的基因(耐旱基因)的表達產(chǎn)物(即耐旱的相關(guān)蛋白質(zhì))；個體水平檢測可以通過田間實驗，觀察檢測其耐旱情況。(3)因為子代中耐旱與不耐旱植株的數(shù)量比為15∶1(9∶3∶3∶1的變式)，所以可將該轉(zhuǎn)基因植株的基因型設(shè)為AaBb，且兩對等位基因滿足自由組合定律，則推測該耐旱基因整合到了兩對同源染色體上。 2．科學(xué)家將蜘蛛的蛛絲蛋白基因?qū)肷窖蝮w內(nèi)，得到轉(zhuǎn)基因山羊，使羊奶中含有一種獨特的蛛絲蛋白，生產(chǎn)原理見圖。請回答： 　　　　―→ 　　　　　　　　　　　　　　　　　乙↓ 　 (1)將蛛絲蛋白基因和質(zhì)粒通過甲過程形成的X物質(zhì)為________________。如果選取的受體細胞為體細胞，當在培養(yǎng)過程中出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象時，需要進行________培養(yǎng)。要使重組細胞具有發(fā)育的全能性，乙過程需要的技術(shù)操作是________。 (2)下列關(guān)于丙過程的敘述，正確的是________。 A．該過程為動物細胞培養(yǎng)，目的是獲得更多的重組細胞 B．該過程所用培養(yǎng)液的成分往往是相同的 C．該過程在無菌條件下進行，需要提供CO2來調(diào)節(jié)pH D．通過現(xiàn)代生物技術(shù)可以將重組細胞在體外培養(yǎng)成山羊個體 (3)為了快速繁殖轉(zhuǎn)基因山羊，還可在丁過程前對早期胚胎進行________，經(jīng)培養(yǎng)后再分別移植到________________的代孕母羊的相應(yīng)部位。 答案　(1)重組DNA分子(重組質(zhì)粒)　傳代(分瓶)　核移植　(2)C　(3)胚胎分割　同期發(fā)情、未經(jīng)配種 解析　轉(zhuǎn)基因山羊的產(chǎn)生利用了基因工程、細胞工程和胚胎工程技術(shù)，從流程圖判斷圖中的甲過程是構(gòu)建重組質(zhì)粒；乙過程為細胞核移植，因動物體細胞不能像受精卵那樣發(fā)揮全能性，但體細胞核具有全能性；丙過程為胚胎體外培養(yǎng)；丁過程為胚胎移植過程。結(jié)合上述分析可知：(1)X物質(zhì)為重組質(zhì)?；蛑亟MDNA分子；動物細胞培養(yǎng)如出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象，則需要進行傳代培養(yǎng)；乙過程為細胞核移植，即將體細胞核移入去核的同種生物卵細胞中，構(gòu)建重組細胞，以利于細胞全能性的表達。(2)丙過程為胚胎體外培養(yǎng)過程，結(jié)果是得到早期胚胎，培養(yǎng)過程要求在不同時期更換培養(yǎng)液的成分，同時與動物細胞培養(yǎng)一樣需要提供CO2調(diào)節(jié)pH，C正確。(3)為了快速繁殖更多轉(zhuǎn)基因山羊，可對早期胚胎進行胚胎分割后再進行胚胎移植，以得到更多的相同后代；代孕母羊需進行同期發(fā)情處理，并且不能配種。 3．(2016·浙江六校聯(lián)考)下圖為利用生物技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因生物的過程，據(jù)圖回答： (1)在基因工程中，A表示________，A進入受體細胞的非酶工具是________。 (2)在②過程中一般采用________作受體細胞。 (3)④過程必須利用到的生物技術(shù)有________________、________________。 (4)形成轉(zhuǎn)基因抗蟲棉D(zhuǎn)的變異類型屬于________。 (5)下列關(guān)于過程⑤的說法不正確的是________。 A．其利用的原理是植物細胞具有全能性 B．一般要經(jīng)歷脫分化和再分化過程 C．必須放在二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) D．按進程，要調(diào)整培養(yǎng)基中植物激素的種類和比例 (6)下列關(guān)于生物工程的說法不正確的是________。 A．基因工程的核心是構(gòu)建重組DNA分子 B．動物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是動物細胞和組織培養(yǎng) C．植物細胞工程技術(shù)就是在原生質(zhì)體培養(yǎng)的基礎(chǔ)上的原生質(zhì)體融合技術(shù) D．胚胎工程技術(shù)可以加快畜牧業(yè)的發(fā)展速度，使家畜優(yōu)良品種的生產(chǎn)工廠化 答案　(1)目的基因　載體　(2)受精卵　(3)胚胎體外培養(yǎng)　胚胎移植(可以互換)　(4)基因重組　(5)C(6)C 解析　(1)在基因工程中，人們感興趣的基因即目的基因，題干中可從人的DNA分子或蘇云金芽孢桿菌中獲得目的基因。基因工程主要有三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和載體。其中，載體是能夠?qū)⑼庠椿蜻\送到細胞中的非酶工具。(2)動物的受精卵全能性高，因此受體細胞一般選用受精卵。由于棉花是植物，體細胞具有全能性，因此受體細胞可以用體細胞。(3)受精卵要發(fā)育成早期胚胎，需要進行胚胎體外培養(yǎng)，但是由于胚胎經(jīng)體外培養(yǎng)不能發(fā)育成完整個體，因此，胚胎移植成為胚胎工程中獲得后代的唯一方法。(4)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的原理是基因重組。(5)過程⑤是植物組織培養(yǎng)技術(shù)，包括脫分化和再分化過程，原理是植物細胞具有全能性，A、B正確；動物細胞培養(yǎng)利用液體培養(yǎng)基，CO2培養(yǎng)箱可調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的pH，而植物組織培養(yǎng)一般使用固體培養(yǎng)基或半固體培養(yǎng)基，植物組織培養(yǎng)不需要CO2培養(yǎng)箱，C錯誤；再分化時要通過平衡植物激素的配比進行調(diào)控，從而誘導(dǎo)根和芽的分化，D正確。(6)植物細胞工程技術(shù)不僅僅是原生質(zhì)體融合技術(shù)，還包括借助基因工程方法，將外源遺傳物質(zhì)(DNA)導(dǎo)入受體細胞(包括原生質(zhì)體)中等，C錯誤。 4．(2016·金華十校高考模擬)通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出乳汁中含人β-酪蛋白的山羊，其流程圖如下?；卮鹩嘘P(guān)問題。 (1)過程①需要借助______________________________酶才能完成。若人β-酪蛋白基因的序列是已知的，則可以通過________方法獲得該基因，然后再利用________技術(shù)進行擴增。 (2)在培育轉(zhuǎn)基因山羊時必須________。 A．從能表達β-酪蛋白的人體細胞中獲取目的基因 B．選擇不含Y染色體的受精卵為目的基因受體細胞 C．用含青霉素的培養(yǎng)基篩選受精卵 D．在8細胞胚時期進行過程② (3)為獲得較多的轉(zhuǎn)基因山羊，在過程②可對早期胚胎通過機械切割和________方法進行分割。下列對早期胚胎進行分割處理操作中正確的是________。 (4)過程③需要利用________________、________________和胚胎移植技術(shù)才能實現(xiàn)。 答案　(1)限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接　化學(xué)合成　PCR　(2)B　(3)酶處理　B　(4)細胞核移植　胚胎體外培養(yǎng) 解析　(1)步驟①為形成重組DNA分子的過程，需要用同種限制性核酸內(nèi)切酶切割含有目的基因的外源DNA分子和載體Ti質(zhì)粒，還需要用DNA連接酶將目的基因和載體連接形成重組質(zhì)粒。對于序列已知的目的基因，我們可以用化學(xué)方法合成目的基因，然后再利用PCR技術(shù)擴增。(2)人體的任何一個有核的細胞都含有β-酪蛋白基因，不一定要從能表達β-酪蛋白基因的細胞獲取，A錯誤；要培育出乳汁中含有β-酪蛋白的山羊，應(yīng)該選含XX染色體的受精卵作為受體細胞，這樣發(fā)育成的雌性動物能分泌乳汁，B正確；當受體細胞為受精卵時，不能用含青霉素的培養(yǎng)基篩選，C錯誤；②為胚胎移植，通常移植的最適宜時期是發(fā)育到8細胞以上的胚胎，如早期囊胚，D錯誤。(3)胚胎分割有兩種方法：在顯微鏡下用切割刀或切割針分割胚胎，或者用酶處理將卵裂球中的細胞分散開。在胚胎分割時要注意將內(nèi)細胞團均等分割，否則會出現(xiàn)含內(nèi)細胞團多的部分發(fā)育的能力強，少的部分發(fā)育受阻或發(fā)育不良，甚至不能發(fā)育等問題。選項中灰色部分代表內(nèi)細胞團，因此本題選B。(4)過程③為動物的無性繁殖——克隆，需要利用的技術(shù)有細胞核移植、胚胎體外培養(yǎng)和胚胎移植。 5．下圖表示通過克隆技術(shù)獲得煙草植株的過程，請回答： (1)①過程往往選取煙草的幼嫩部位，需經(jīng)過________處理，才能置于培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。 (2)②過程稱為________，③過程稱為________。 (3)通過懸浮培養(yǎng)形成的單細胞可發(fā)育成________，繼而形成植物幼體；也可利用________________水解細胞壁，獲得的________培養(yǎng)后也可形成植株。 (4)在培養(yǎng)過程中，若要誘導(dǎo)芽的產(chǎn)生，則配制植物激素時要________。 A．添加適量的生長素和適當減除其他某些激素 B．適當配比的生長素和細胞分裂素 C．添加適量的生長素和適當增加其他某些激素 D．適當增加細胞分裂素和生長素的量 (5)煙草細胞很容易再生出新植株，但在長期培養(yǎng)過程中，其胚胎發(fā)生的器官形成能力下降，不可能的原因是________。 A．染色體畸變或細胞核變異 B．組織或細胞中的激素平衡被打破 C．產(chǎn)生了缺乏成胚性的細胞系 D．植物細胞全能性喪失 答案　(1)消毒　(2)脫分化　再分化　(3)幼胚(胚狀體)　纖維素酶和果膠酶　原生質(zhì)體　(4)B　(5)D 解析　(1)植物組織培養(yǎng)過程中如果在培養(yǎng)基上有細菌等微生物存在，它們比植物細胞具有更強的新陳代謝能力，比植物細胞生長繁殖得更快，而且它們會產(chǎn)生毒素，使培養(yǎng)基上的植物細胞死亡。因此，在培養(yǎng)過程中要求一系列的消毒、滅菌，并且要求無菌操作。(2)植物組織培養(yǎng)的原理是植物體細胞具有全能性。培養(yǎng)過程可概括為：離體的植物器官、組織或細胞脫分化形成愈傷組織，然后再分化為根、芽或胚狀體，最后發(fā)育為完整植株。(3)液體懸浮培養(yǎng)形成的單細胞在適宜的培養(yǎng)基中可以發(fā)育成胚狀體，最后形成植株；植物細胞壁的成分是纖維素和果膠，可以用纖維素酶和果膠酶處理獲得裸露的原生質(zhì)體，進行原生質(zhì)體培養(yǎng)，也可以獲得植株。(4)適量的生長素和細胞分裂素配比可以誘導(dǎo)芽的產(chǎn)生，添加適量的生長素和適當減除其他某些激素，則是誘導(dǎo)生根。(5)在長期的培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)物的胚胎發(fā)生和器官形成能力下降的可能原因是染色體畸變、細胞核變異或者非整倍體的產(chǎn)生；細胞或者組織的激素平衡被打破，或細胞對外源生長物質(zhì)的敏感性改變；或者由于其他原因產(chǎn)生了缺乏成胚性的細胞系。 6．(2016·寧波高二下學(xué)期九校聯(lián)考)苦蕎富含黃酮類化合物等營養(yǎng)物質(zhì)，在降血糖、降血脂等方面功效顯著。查爾酮合成酶(CHS)是黃酮類化合物合成的關(guān)鍵酶，下圖為將CHS基因?qū)肟嗍w，培育高產(chǎn)黃酮苦蕎品系示意圖。 (1)基因工程的核心是________________。 (2)可利用________________、________________方法獲取CHS基因。 (3)過程①中切開質(zhì)粒的酶是________________。它能在質(zhì)粒特定的部位切割的原因是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (4)過程②③分別是________________。苦蕎細胞能培養(yǎng)成植株的根本原因是________________________________________。 (5)為培育轉(zhuǎn)基因苦蕎植物，還可將該植物幼葉消毒后，用________________酶混合液處理，獲得原生質(zhì)體。酶混合液中含有適宜濃度的甘露醇，其作用是________________。將目的基因?qū)朐|(zhì)體，經(jīng)培養(yǎng)形成愈傷組織，再通過________________得到分散的胚性細胞，發(fā)育成________________，生長發(fā)育后獲得該轉(zhuǎn)基因植株。 (6)愈傷組織繼代次數(shù)過多會喪失細胞全能性的表達能力，下列原因錯誤的是________(填選項編號)。 A．愈傷組織發(fā)生遺傳變異 B．愈傷組織不能分散成單細胞 C．愈傷組織中激素平衡發(fā)生改變 D．愈傷組織對外源激素敏感性發(fā)生改變 答案　(1)構(gòu)建重組DNA分子　(2)從基因文庫中獲取　化學(xué)方法合成　PCR合成(任答兩項即可)　(3)限制性核酸內(nèi)切酶　能識別特定的核苷酸序列并在特定的切點上切割DNA分子　(4)脫分化、再分化　植物細胞的全能性(細胞中含有發(fā)育成完整個體所必需的全部基因)　(5)纖維素酶和果膠　維持滲透壓　液體懸浮培養(yǎng)　胚狀體　(6)B 解析　(1)基因工程的核心是構(gòu)建基因表達載體(即重組DNA分子)。(2)獲取目的基因的方法有：從基因文庫中獲取、化學(xué)方法合成、PCR合成。(3)過程①中切開質(zhì)粒的酶是限制性核酸內(nèi)切酶，它能在質(zhì)粒特定的部位切割的原因是限制性核酸內(nèi)切酶能識別特定的核苷酸序列并在特定的切點上切割DNA分子。(4)過程②是脫分化形成愈傷組織，過程③是再分化形成試管苗?？嗍w細胞能培養(yǎng)成植株的根本原因是植物細胞具有全能性(細胞中含有發(fā)育成完整個體所必需的全部基因)。(5)由植物細胞獲得原生質(zhì)體，需要用纖維素酶和果膠酶去除細胞壁。處理過程中酶混合液中含有適宜濃度的甘露醇，其作用是維持滲透壓，防止原生質(zhì)體過度吸水或者失水死亡。將目的基因?qū)朐|(zhì)體，經(jīng)培養(yǎng)形成愈傷組織，再通過液體懸浮培養(yǎng)得到分散的胚性細胞，發(fā)育成胚狀體，生長發(fā)育后獲得該轉(zhuǎn)基因植株。(6)愈傷組織繼代次數(shù)過多會喪失細胞全能性的表達能力，可能的原因有愈傷組織發(fā)生遺傳變異，愈傷組織中激素平衡發(fā)生改變，愈傷組織對外源激素敏感性發(fā)生改變等，故選B。 7．如圖為某研究小組欲將已知Bt毒蛋白基因(抗蟲基因)導(dǎo)入原生質(zhì)體培育抗蟲棉的過程。 請回答： (1)Bt毒蛋白基因來源于________細胞，為獲得大量Bt毒蛋白基因，可通過PCR技術(shù)進行________，也可將其連接到質(zhì)粒上，通過大腸桿菌培養(yǎng)擴增。 (2)制備葉片原生質(zhì)體的酶混合液中，一般含較高濃度的________，其目的是維持制備的原生質(zhì)體的________。酶混合液需通過________________過濾除菌，才能用于無菌原生質(zhì)體的制備，整個無菌操作過程需在超凈臺中進行。 (3)將Bt毒蛋白基因?qū)肴旧w的________中，其方法有基因槍法、________________等方法。導(dǎo)入后的原生質(zhì)體需再生出細胞壁，經(jīng)持續(xù)分裂獲得________，進一步分化獲得再生植株并擴大繁殖。 (4)利用帶有標記的Bt毒蛋白基因特殊片段與從轉(zhuǎn)基因植株提取的__________進行分子雜交，驗證抗蟲基因是否被整合到受體的細胞中并轉(zhuǎn)錄。通過擴大繁殖的再生植株是否對棉鈴蟲具有__________的特性來初步篩選出抗蟲棉。 (5)為了獲得大量該抗蟲棉，可將帶腋芽的莖段轉(zhuǎn)入適宜培養(yǎng)基中獲得大量叢狀苗，然后轉(zhuǎn)入________培養(yǎng)基中誘導(dǎo)形成再生植株。再生植株需進行________(A.滅菌 B．煉苗　C．消毒　D．暗處理)后才能移種到大田。 答案　(1)原核　擴增　(2)甘露醇　滲透壓　G6玻璃砂漏斗　(3)DNA　農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法　愈傷組織(4)mRNA　抗性　(5)生根　B 解析　(1)Bt毒蛋白基因來源于蘇云金芽孢桿菌，屬于原核細胞；為獲得大量Bt毒蛋白基因，可通過PCR技術(shù)進行擴增。(2)植物原生質(zhì)體是用纖維素酶和果膠酶處理植物細胞壁后得到的，酶混合液中一般含較高濃度的甘露醇，目的是維持原生質(zhì)體的滲透壓；酶在高溫下易變性，因此酶混合液需通過G6玻璃砂漏斗過濾除菌。(3)Bt毒蛋白基因可用基因槍法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法等方法導(dǎo)入染色體的DNA中；導(dǎo)入后的原生質(zhì)體再生出細胞壁后，先經(jīng)脫分化獲得愈傷組織，然后通過再分化獲得再生植株。(4)驗證抗蟲基因是否已整合到受體細胞中并轉(zhuǎn)錄，可通過將帶有標記的Bt毒蛋白基因特殊片段與從轉(zhuǎn)基因植株提取的mRNA進行分子雜交的方法來進行；抗蟲棉則可通過觀察再生植株是否對棉鈴蟲具有抗性來進行初步篩選。(5)要獲得大量該抗蟲棉可采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)：先將帶腋芽的莖段轉(zhuǎn)入適宜培養(yǎng)基中脫分化后得到愈傷組織，再分化獲得大量叢狀苗，然后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)形成再生植株；再生植株需進行煉苗后才能移種到大田。 8．(改編)酵母菌與人類的生活息息相關(guān)，目前被廣泛運用于食品、釀酒、醫(yī)藥衛(wèi)生等方面。如圖為科學(xué)家利用相關(guān)技術(shù)改造酵母菌以提高釀酒工藝。請據(jù)圖回答： (1)圖中α－淀粉酶基因來自于地衣芽孢桿菌，若目的基因的序列未知，通常從________中獲取。圖甲中，過程①需要的酶有________________和________________，培養(yǎng)工程酵母菌的核心操作步驟是________。 A．獲取α－淀粉酶基因 B．將目的基因與載體結(jié)合構(gòu)建重組DNA分子 C．將α－淀粉酶基因?qū)虢湍妇毎? D．目的基因的檢測和表達 (2)為達到篩選目的，平板內(nèi)的固體培養(yǎng)基應(yīng)以________作為唯一碳源，制備固體培養(yǎng)基最后要將平板倒置，其主要目的是防止__________________________________________。②③過程需要重復(fù)幾次，目的是________________________________________________。 答案　(1)基因文庫　限制性核酸內(nèi)切酶　DNA連接酶　B　(2)淀粉　培養(yǎng)皿蓋上的水珠滴入培養(yǎng)基造成污染，影響菌落的形成　進一步篩選出分解淀粉能力強的酵母菌 解析　(1)若目的基因序列已知，則可以用人工合成法或者用PCR法擴增目的基因；若目的基因序列未知，則可以從基因文庫中獲得目的基因。形成重組DNA分子的過程需要借助限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶，基因工程操作過程的核心是構(gòu)建重組DNA分子。(2)為獲得分解淀粉能力較強的工程菌需要提供以淀粉作為唯一碳源的培養(yǎng)基，這樣才能篩選出目的菌。平板倒置的主要目的是防止培養(yǎng)皿蓋上的水珠滴入培養(yǎng)基造成污染影響菌落的形成，重復(fù)②③過程的目的是進一步篩選出分解淀粉能力強的酵母菌。 8