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歡迎光臨 1 血液制品基礎(chǔ)知識 免疫球蛋白類 主講人 2 目錄 血液的組成 免疫球蛋白的分類及種類 免疫球蛋白的臨床應(yīng)用 免疫球蛋白藥理學 免疫球蛋白的制備6 其他 3 一 血液的組成 4 免疫球蛋白的種類 免疫球蛋白 Immunoglobulin Ig 是指具有抗體活性或化學結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白 Ig可分為五個結(jié)構(gòu)性或類型 分別為 IgG IgM IgA IgD和IgE 5 免疫球蛋白 免疫作用球蛋白包括a1 a2 和 等幾種成分 其中 丙種 球蛋白含有多種抗體 能與抗原 如細菌 病毒或異種蛋白 相結(jié)合 從而殺滅致病因素 如果這種免疫球蛋白含量不足時 機體抵抗疾病的能力下降 球蛋白還可與血漿中的脂類 如膽固醇 甘油 磷脂等 相結(jié)合 成為血漿脂蛋白而運輸上述物質(zhì) 它也是一些激素和脂溶性維生素 如維生素A D E等 在血液中運輸所必需的 補體也是一種血漿中的蛋白質(zhì) 它可與免疫球蛋白結(jié)合 共同作用于病原體或異物 破壞其細胞膜的結(jié)構(gòu) 從而具有溶菌或溶細胞的作用 6 免疫球蛋白 Ig分子的基本結(jié)構(gòu)是由四肽鏈組成的 即由二條相同的分子量較小的肽鏈稱為輕鏈和二條相同的分子量較大的肽鏈稱為重鏈組成的 輕鏈與重鏈是由二硫鍵連接形成一個四肽鏈分子稱為Ig分子的單體 是構(gòu)成免疫球蛋白分子的基本結(jié)構(gòu) Ig單體中四條肽鏈兩端游離的氨基或羧基的方向是一致的 分別命名為氨基端 N端 和羧基端 C端 7 免疫球蛋白分子的基本結(jié)構(gòu)示意圖 8 IVIG的臨床應(yīng)用 被動免疫 直接作用 抗原與抗體相互作用 直接中和毒素與殺死細菌和病毒的作用 被動免疫治療要及時 并根據(jù)臨床病癥的不同 確定最佳的劑量和療程 先天性和獲得性體液免疫缺乏的治療 1 用于預(yù)防治療先天性免疫球蛋白缺乏 如伴X染色體的無免疫球蛋白血癥 IgG亞類缺乏癥和嚴重聯(lián)合免疫缺乏 2 獲得性免疫球蛋白缺乏患者的抗感染治療 包括早產(chǎn)新生兒感染 燒傷 病毒感染 慢性淋巴細胞白血病 多發(fā)性骨髓瘤 骨髓移植和嚴重創(chuàng)傷患者 9 IVIG的作用機制 單核吞噬細胞系統(tǒng)暫時封閉學說 單核吞噬細胞通過巨噬細胞表面的Fc受體和結(jié)合了抗原的IgG連接 隨后將其吞噬 清楚 大劑量的IVIG的輸入 封閉了Fc受體 阻止其對于已與自身抗體結(jié)合的自身細胞的破壞和免疫清除 免疫調(diào)節(jié)學說 a 大量IVIG的輸入抑制自身抗體的生成量 b IVIG中存在多種針對自身抗體基因型抗原特異性的抗獨特型抗體 10 免疫球蛋白適應(yīng)癥 1 預(yù)防某些病毒和細菌感染如麻疹 傳染性肝炎等 可使用正常免疫球蛋白 2 代替異種血清制品 避免不良反應(yīng)發(fā)生如抗破傷風免疫球蛋白 3 替代治療 免疫缺陷疾患 原發(fā)性低丙種球蛋白血癥 4 抑制原發(fā)性免疫反應(yīng) RhO D 的同種免疫預(yù)防可用RhO D IgG 5 特發(fā)性血小板減少性紫癜 11 免疫球蛋白劑量通常注射的劑量取決于疾病種類 免疫球蛋白制品和患者體重 低丙種球蛋白血癥患者的治療是將IgG水平提升到2 4g L 這個水平對維持效果是有益的 通常劑量100mg kg或0 6mg kg 每3 4周注射一次 甲型肝炎注射免疫球蛋白0 02 0 1ml kg 乙型肝炎注射超免疫球蛋白0 06ml kg 破傷風預(yù)防劑量為超免疫球蛋白250 500Iu 治療劑量為超免疫球蛋白500 1000Iu 風疹注射帶狀皰疹免疫球蛋白0 05 0 2ml 狂犬病注射超免疫球蛋白20Iu Rho D 新生兒溶血病注射Rho D 免疫球蛋白300ug 敗血癥注射免疫球蛋白1ml 特發(fā)性血小板減少性紫癜 ITP 0 05g 溶于200ml生理鹽水中靜滴2小時內(nèi)滴完 連續(xù)5天 12 免疫球蛋白輸注方法免疫球蛋白分肌肉注射與靜脈注射兩種 肌肉注射不能用作靜脈注射 靜脈注射免疫球蛋白要單獨輸注 避免與其他溶液混合 輸注速度應(yīng)慢 前30分鐘為0 01 0 02ml Kg 如無不良反應(yīng) 可把輸注速度增加到0 02 0 04ml Kg 在靜脈注射前30分鐘 注射氫考50 100mg 消除不良反應(yīng) 13 IVIG用于自身免疫性疾病的治療 特發(fā)性血小板減少性紫癜 自身免疫性種性粒細胞減少癥 自身免疫性溶血 重癥肌無力癥 抗凝血因子 自身免疫 系統(tǒng)性紅斑狼瘡 習慣性流產(chǎn) 風濕性關(guān)節(jié)炎 多發(fā)性硬化癥等 IVIG用于炎癥疾病的治療 川崎病 難治性多肌炎 干性角膜結(jié)膜炎綜合癥 小兒難治性癲癇等 14 IVIG的作用機制 單核吞噬細胞系統(tǒng)暫時封閉學說 單核吞噬細胞通過巨噬細胞表面的Fc受體和結(jié)合了抗原的IgG連接 隨后將其吞噬 清楚 大劑量的IVIG的輸入 封閉了Fc受體 阻止其對于已與自身抗體結(jié)合的自身細胞的破壞和免疫清除 免疫調(diào)節(jié)學說 a 大量IVIG的輸入抑制自身抗體的生成量 b IVIG中存在多種針對自身抗體基因型抗原特異性的抗獨特型抗體 15 高效特異性乙肝免疫球蛋白 HBIg 的臨床應(yīng)用 1945年開始用Ig預(yù)防甲肝 二十世紀70年代開始用HBIg防治乙肝 1970年開始用乙肝疫苗 適用于 乙型肝炎表面抗原陽性母親的新生兒 預(yù)防意外感染的人群 輸血 透析 皮膚破損 針刺 16 3 與乙型肝炎密切接觸的乙肝人群 免疫功能低下者 服務(wù)性行業(yè)工作者 旅游人員及其配偶 用法 在24小時內(nèi)肌肉注射本品200 400國際單位 隨后注射乙型肝炎疫苗做主動免疫 0月 1月 2月 6月齡時各一次 17 免疫球蛋白藥理學 普通免疫球蛋白 以一般人群混合血漿為原料 已經(jīng)多種抗原自然免疫 多聚體含量 8 不可靜脈注射 特異性免疫球蛋白 以已知對某一特定抗原免疫具有高滴度抗體的混合血漿制備 IMIG 注射劑量有限 IgG再吸收時間長 注射3天后才能達到峰值 IVIG 保留完整的生物活性 具有良好的為穩(wěn)定性 18 華蘭公司現(xiàn)有免疫球蛋白類制品名稱 靜注人免疫球蛋白 pH4 人免疫球蛋白破傷風人免疫球蛋白乙型肝炎人免疫球蛋白狂犬病人免疫球蛋白 19 免疫球蛋白的制備 我公司靜注人免疫球蛋白 PH4 系由經(jīng)乙型肝炎疫苗免疫的健康人的血漿經(jīng)低溫乙醇法分離提取的組分II沉淀 經(jīng)60 10小時加溫滅活病毒后再加工去除抗補體活性制成的專供靜脈輸注的正常人免疫球蛋白液體制劑 分裝后進行低pH孵放可有效滅活病毒 增加制品的安全性 制品為無色或淺黃色澄清液體 可帶輕微乳光 依據(jù) 中華人民共和國藥典 三部 2005年版 指定處方 成品免疫球蛋白含量95 0 以上 麥芽糖含量為90 110g L 臨床上主要用于治療各種原發(fā)和繼發(fā)性免疫球蛋白缺陷病以及一些自身免疫性疾病 20 FI III制作參數(shù) 離子強度調(diào)整 用氯化鈉或注射用水調(diào)整制品電導率至1 30 1 35ms cm 制品PH值調(diào)整 加乙醇前調(diào)制品pH至5 15 5 25 乙醇濃度的調(diào)整 用預(yù)冷至 15 以下的95 乙醇調(diào)整制品乙醇濃度至14 PH值至5 20 5 30 制品溫度的調(diào)整 乙醇滴加結(jié)束時制品溫度降至 2 50 3 50 21 FII制作參數(shù) 制品PH值調(diào)整 加乙醇前調(diào)制品pH至7 20 7 30 乙醇濃度的調(diào)整 用預(yù)冷至 15 以下的95 乙醇調(diào)整制品乙醇濃度至25 PH值至7 15 7 25 制品溫度的調(diào)整 乙醇滴加結(jié)束時制品溫度降至 8 0 9 0 22 巴氏滅活制作參數(shù) 制品蛋白質(zhì)含量調(diào)整 用25 0 30 0 的注射用水將制品蛋白質(zhì)含量稀釋至19 0g L 甘氨酸濃度的調(diào)整 按制品蛋白質(zhì)含量19 0g L時的體積100g L添加甘氨酸 制品PH值調(diào)整 調(diào)制品pH至7 35 7 45 23 巴氏滅活 制品溫度升至60 0 0 5 并保持溫度600分鐘 在滅活過程中每隔20 5分鐘觀測并記錄滅活罐內(nèi)制品溫度 60 0 0 5 夾層循環(huán)水回水溫度 制品溫度若低于59 5 應(yīng)立即檢查自控系統(tǒng)是否異常 解除異常后將制品溫度升溫至60 0 0 5 并且重新開始滅活記時 若溫度高于60 5 立即停止滅活 并將制品溫度降至60 0 0 5 上報等候處理 24 滅活過程中影響制品質(zhì)量的相關(guān)因素 pH 調(diào)pH時溫度應(yīng)低于30 高于30 蛋白直接變性 影響收率 蛋白質(zhì)含量巴氏滅活過程中 蛋白質(zhì)含量越高 產(chǎn)生的多聚體較多 純度越低 熱穩(wěn)定性越好 相反多聚體產(chǎn)生的越少 純度越高 熱穩(wěn)定性越較差 攪拌效果 攪拌應(yīng)溫和有效 若攪拌效果差制品溫度不均勻影響滅活效果 若攪拌過于劇烈產(chǎn)生泡沫較多蛋白質(zhì)容易變性 25 一次沉淀制作參數(shù) 制品蛋白質(zhì)含量調(diào)整 用15 0 20 0 的注射用水將加溫前的總蛋白量稀釋至10 0g L 制品PH值調(diào)整 加乙醇前調(diào)制品pH至6 90 6 95 乙醇濃度的調(diào)整 用預(yù)冷至 15 以下的95 乙醇調(diào)整制品乙醇濃度至19 PH值至6 80 6 90 離子強度調(diào)整 用氯化鈉調(diào)整制品電導率至1 30 1 40ms cm 制品溫度的調(diào)整 乙醇滴加結(jié)束時制品溫度降至4 0 5 0 26 二次沉淀制作參數(shù) 蛋白質(zhì)含量調(diào)整 制品PH值調(diào)整 加乙醇前調(diào)pH至7 20 7 30 乙醇濃度的調(diào)整 用預(yù)冷至 15 以下的95 乙醇調(diào)整制品乙醇濃度至25 PH值至7 20 7 30 離子強度調(diào)整 用氯化鈉制品電導率至1 70 1 75ms cm 制品溫度的調(diào)整 乙醇滴加結(jié)束時制品溫度降至 7 0 8 0 27 2006年靜注人免疫球蛋白 分子大小分布一項指標在下滑 靜丙煙氣問題ACA問題特免效價收率熱原質(zhì) 28 影響產(chǎn)品質(zhì)量的相關(guān)因素 一 制作調(diào)PH時 緩沖液滴加速度的快慢 1 決定沉淀干濕程度的主要因素 2 壓濾埋下隱患 二 乙醇濃度調(diào)整 1 與PH調(diào)整后的間隔時間 2 滴加速度直接影響著沉淀的最終狀態(tài) 3 滴加方式 三 溫度 在調(diào)制乙醇濃度過程中 制品溫度應(yīng)隨著乙醇濃度逐步提高進行梯度降溫 一次2 以下 29 離子強度 1 FII超濾滅活75 收率 FII直接滅活55 收率 蛋白質(zhì)含量 30 一次沉淀制造 1 一次沉淀制作現(xiàn)增加一次 二次沉淀調(diào)制前取樣檢測蛋白質(zhì)含量 計算滅活后蛋白收率及異常情況的發(fā)現(xiàn) 31 一次沉淀是去除滅活時的變性蛋白及聚合體 為了提高純度 降低多聚體 例 2005年試驗三批 滅活后直接過濾 制作二次沉淀 結(jié)果 其他項目均合格 收率偏高 多聚體過高 FII沉淀外觀 FII沉淀顏色黃 顏色黃主要為FIII FIII內(nèi)主要含 因子 過濾 超濾 一次壓濾壓力高 速度較慢 直接影響收率 32 超濾 調(diào)整制品PH靜丙至3 68 3 71 肌丙類4 50 4 60范圍內(nèi) 透析過程中制品蛋白質(zhì)含量控制在60 20g L 調(diào)整超濾壓力 前壓 3 0bar 后壓 1 0bar 33 超濾的目的 1 透析去除制品內(nèi)含有的乙醇和無機鹽類 2 濃縮制品蛋白質(zhì)含量至要求范圍內(nèi) 34 影響超濾效果的因素 1 加入的透析液 制品回液和超濾罐內(nèi)制品三者的混勻程度 2 超濾透析用透析液的倍數(shù) 3 超濾系統(tǒng)存在死角 35 靜注人免疫球蛋白配制 根據(jù)制品體積 L 和IgG含量 g L 計算制品IgG含量為50g L時的配制體積 配制體積 L 制品體積 L IgG含量 g L 50 0g L根據(jù)配制體積按100g L計算麥芽糖加量 麥芽糖加量 kg 配制體積 L 100 0g L 10001 0mol L枸櫞酸溶液 以 500ml min加入超濾罐 調(diào)整pH至4 23 4 27 36 肌注人免疫球蛋白配制 按制品蛋白質(zhì)含量103 0g L時體積的2 25 添加甘氨酸 制品 原液 體積的3 0 添加葡萄糖 按制品 原液 體積的0 75 添加氯化鈉 加入1 0mol L氫氧化鈉溶液調(diào)整pH在6 80 6 90之間 37 超濾 配制對除菌的效果影響因素 1 超濾過程中蛋白質(zhì)含量應(yīng)不高于160g L2 試劑添加的順序 速度 3 攪拌效果 以上均影響產(chǎn)品質(zhì)量及一次除菌速度 38 生物制品國家批簽發(fā)的含義 生物制品國家批簽發(fā) natiohallotrealeaseforbiologicalproduet 是國家對規(guī)定的有關(guān)生物制品在其每批產(chǎn)品上市銷售前或進口時 實行強制性對其生產(chǎn) 鑒定資料進行審查和產(chǎn)品檢驗 并簽發(fā)合格或不合格證書的一種管理制度 39 謝謝 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