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免疫學(xué)檢驗(yàn) 第二十五章自身免疫病及免疫檢驗(yàn) 目錄 1 自身耐受 self tolerance 正常情況下 免疫系統(tǒng)對(duì)宿主自身的組織和細(xì)胞不產(chǎn)生免疫應(yīng)答 2 自身免疫 autoimmunity 當(dāng)某種原因使自身耐受性破壞時(shí) 免疫系統(tǒng)就會(huì)對(duì)自身組織成分 細(xì)胞成分及其產(chǎn)物發(fā)生免疫應(yīng)答 第一節(jié)概述 一 基本知識(shí) 3 自身免疫病 autoimmunedisease AID 自身免疫應(yīng)答過(guò)強(qiáng)或持續(xù)時(shí)間過(guò)久 表現(xiàn)為質(zhì)和量的異常 所產(chǎn)生的自身抗體和 或 自身致敏淋巴細(xì)胞對(duì)表達(dá)自身靶抗原的細(xì)胞和組織發(fā)動(dòng)攻擊 導(dǎo)致?lián)p傷或功能障礙 并出現(xiàn)相應(yīng)臨床癥狀 二 自身免疫病的分類 1 按病程分為急性和慢性兩種2 按病因清楚與否分為原發(fā)性與繼發(fā)性兩種3 按受累的解剖系統(tǒng)分為結(jié)締組織病 神經(jīng)肌肉疾病 消化系統(tǒng)病和內(nèi)分泌疾病等4 按自身抗原的分布范圍分為器官特異性和非器官特異性兩類 按發(fā)病部位的解剖系統(tǒng)分類 器官特異性自身免疫病 器官非特異性自身免疫病 患者的病變常局限于某一特定的器官 由對(duì)器官的特異性抗原的免疫應(yīng)答引起 全身性或系統(tǒng)性自身免疫性疾病 患者的病變可見于多種器官及結(jié)締組織 結(jié)締組織病或膠原病 按自身抗原的分布范圍分類 三 自身免疫病的共同特點(diǎn) 1 血清中有自身抗體或自身反應(yīng)性致敏T淋巴細(xì)胞 自身抗體和 或 自身反應(yīng)性T細(xì)胞作用于靶抗原所在的組織細(xì)胞 導(dǎo)致組織損傷和功能障礙 2 可復(fù)制出與AID相似的動(dòng)物模型 并可通過(guò)血清或致敏的淋巴細(xì)胞使疾病被動(dòng)轉(zhuǎn)移 3 有一定的遺傳傾向 病情轉(zhuǎn)歸與自身免疫反應(yīng)的強(qiáng)度密切相關(guān) 4 部分自身免疫病好發(fā)于女性 且發(fā)病率隨年齡增長(zhǎng)而上升 5 免疫抑制劑治療有效但不能根治 一 自身抗原形成 第二節(jié)自身免疫病的發(fā)病機(jī)制 1 隱蔽抗原的釋放 2 自身抗原改變 交感性眼炎 3 分子模擬 4 表位擴(kuò)展 2 B細(xì)胞的多克隆激活 二 免疫細(xì)胞和免疫調(diào)節(jié)功能的異常 3 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的功能異常 1 T B細(xì)胞的異常活化 4 MHC II類分子異常表達(dá) 三 遺傳因素 HLA基因與自身免疫病相關(guān)性舉例 四 生理因素 五 環(huán)境因素 1 自身免疫病的發(fā)病率隨年齡增長(zhǎng)呈上升趨勢(shì) 2 自身免疫病的發(fā)病也具有明顯的性別差異 女性發(fā)病率較高 自身免疫病的發(fā)生與日曬 潮濕 寒冷等環(huán)境因素可能有關(guān) 1 自身抗體介導(dǎo)細(xì)胞破壞 六 自身免疫病的病理?yè)p傷機(jī)制 病理機(jī)制 II型超敏反應(yīng) 常見疾病 新生兒溶貧 重癥肌無(wú)力 Graves病 自身免疫性溶血性貧血 重癥肌無(wú)力 Graves病 3 自身反應(yīng)性T細(xì)胞引發(fā)炎癥性損傷 2 循環(huán)免疫復(fù)合物介導(dǎo)組織損傷 病理機(jī)制 III型超敏反應(yīng) 病理機(jī)制 IV型超敏反應(yīng) 抗核抗體 antinuclearantibody ANA 是以真核細(xì)胞的核成分為靶抗原的自身抗體的總稱 在某些因素作用下改變細(xì)胞核某些成分性質(zhì) 激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生許多抗不同核成分的抗體 第三節(jié)自身免疫病檢驗(yàn) 一 自身抗體的檢測(cè) 一 抗核抗體檢測(cè) ANA主要是IgG 也有IgM IgA IgD和IgE ANA無(wú)器官特異性和種屬特異性 ANA主要存在于血清中 將檢出ANA作為AID存在的依據(jù) 抗DNA抗體 抗dsDNA 抗nDNA 抗ssDNA 抗dDNA等抗組蛋白抗體 AHA 抗H1 抗H2A 抗H2B 抗H3 抗H4抗體等抗非組蛋白抗體 抗nRNP 抗U1RNP 抗Scl 70 抗SSA 抗Sm 抗SSB 抗Jo 1 抗Rib抗體 AnuA 抗DNP 抗DM53抗體抗RANA抗體 抗著絲點(diǎn) 抗Ku抗體等抗核仁抗體 抗PM Scl抗體 抗Th To抗體 抗U3 RNP 抗4 6 S RNA抗體等 1 ANA的類型和臨床意義 ANA譜 抗天然DNA nativeDNA nDNA 抗體 又稱抗雙鏈DNA doublestrandedDNA dsDNA 抗體 抗變性DNA denaturedDNA dDNA 抗體 又稱抗單鏈DNA singlestrandedDNA ssDNA 抗體 對(duì)SLE有高特異性 SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)之一 緩解期降低 70 90 SLE活動(dòng)期增高 藥物療效 抗dsDNA抗體 抗DNA抗體 抗組蛋白抗體 anti histonicantibody AHA 由H1 H2A H2B H3和H4五個(gè)亞單位 各自都有特異性抗體 AHA 檢出百分率 抗dsDNA 50 70 90 100 藥物誘導(dǎo)性狼瘡只能檢出此 SLE AHA AHA 抗組蛋白抗體 可提取性核抗原 extractablenuclearantigen ENA 是鹽水可提取性核抗原的總稱 是非組蛋白的核蛋白 屬酸性核蛋白抗原 由許多小分子量的RNA和多肽組成 抗ENA抗體 對(duì)類風(fēng)濕有特異診斷價(jià)值的ENA 抗nRNP nuclearRNP nRNP 抗體 抗Sm抗體 抗SSA抗體 抗SSB抗體 抗Scl 70抗體 抗Jo 1抗體 抗核糖體抗體 核蛋白 DNP 由DNA和蛋白質(zhì)組成 DNP抗原有不溶性及可溶性兩種 分別產(chǎn)生相應(yīng)的抗體 檢出百分率 抗DNP 20 40 60 80 SLE非活動(dòng)期 SLE活動(dòng)期 抗不溶性DNP抗體 抗DNP 抗DNP 100 RA滑膜液中 抗DNP 抗可溶性DNP抗體 1 抗DNP抗體 抗核小體抗體 anti nucleosomeantibody AnuA 核小體是細(xì)胞核染色質(zhì)的基本組成單位 細(xì)胞凋亡致核小體大量蓄積 并誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生AnuAAnuA是SLE特異的標(biāo)志性抗體 抗dsDNA抗體 抗核小體抗體 抗dsDNA和抗Sm陰性的SLE陽(yáng)性率為60 80 特異性 97 2 抗核小體抗體 2 ANA的檢測(cè)方法 稀釋患者血清可做定量檢測(cè) 1 80稀釋仍呈陽(yáng)性對(duì)診斷SLE有較大參考價(jià)值 1 間接熒光免疫法 均質(zhì)型 抗核抗體核型 著絲點(diǎn)型 核仁型 斑點(diǎn)型 用間接ELISA檢測(cè)抗dsDNA抗體 抗組蛋白抗體和抗核小體抗體 2 ELISA法 SDS PAGE 加待檢血清 形成分子大小不同區(qū)帶 分離 電轉(zhuǎn)移 PVDF膜或NC膜 抗ENA與相應(yīng)抗原特異結(jié)合 抗人IgG HRP ENA 抗ENA 抗人IgG HRP 3 免疫印跡法 顯色并判讀結(jié)果 類風(fēng)濕因子 rheumatoidfactor RF 抗變性IgG的自身抗體 可為19S的IgM 也可為7S的IgG和IgA 可與人變性IgG結(jié)合 但不與正常IgG發(fā)生凝集 RF可在RA患者檢出 約70 90 的血清 約60 的滑膜液可檢出IgG類的RF 二 類風(fēng)濕因子測(cè)定 IgG類抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后發(fā)生變性 炎癥過(guò)程亦可發(fā)生IgG變性 構(gòu)成自身抗原 刺激機(jī)體產(chǎn)生各種抗IgG抗體 滑膜液中的IgG類RF與變性IgG結(jié)合可形成中等大小的免疫復(fù)合物 相比血清中的IgM類RF更易致病 RF檢測(cè)方法 最常采用的檢測(cè)方法 以吸附在聚苯乙烯膠乳顆粒上的IgG作診斷試劑 與待檢血清中的RF結(jié)合后 出現(xiàn)膠乳凝集顆粒 此法的靈敏度和特異性不高 且只能檢出血清中的IgM類的RF 1 間接膠乳凝集試驗(yàn) 稀釋待檢血清至一定濃度后 加入定量的變性IgG診斷試劑 即用透射比濁或速率散射比濁儀 檢測(cè)血清中的RF 此法快速 敏感性高 精密度高 穩(wěn)定性好 可定量分析 但仍只能檢測(cè)IgM類RF 2 免疫比濁法 IgM IgG和IgA類RF可用ELISA檢測(cè) 臨床上多采用雙抗原夾心法或間接ELISA進(jìn)行測(cè)定 3 ELISA法 三 其他自身抗體測(cè)定 二 細(xì)胞檢查 一 淋巴細(xì)胞檢測(cè) 1 特異性致敏淋巴細(xì)胞 2 淋巴細(xì)胞數(shù)量和比例 如淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)或吞噬細(xì)胞移動(dòng)抑制試驗(yàn) 檢測(cè)淋巴細(xì)胞的總數(shù) T B細(xì)胞分類與計(jì)數(shù) CD4 CD8亞群比例等進(jìn)行 二 狼瘡 lupuserythmatosus LE 細(xì)胞試驗(yàn) LE細(xì)胞為胞漿內(nèi)含有大塊狀聚合DNA的中性粒細(xì)胞 有75 80 的SLE病人LE呈陽(yáng)性 RA 結(jié)節(jié)性動(dòng)脈炎 多發(fā)性硬化癥 硬皮病 部分肝炎 皮肌炎和變態(tài)反應(yīng)病等偶爾亦可呈陽(yáng)性反應(yīng) 三 免疫復(fù)合物和補(bǔ)體檢測(cè) 四 細(xì)胞因子檢測(cè) 1 CK在自身免疫病的免疫病理?yè)p傷中有重要作用 2 檢測(cè)CK 對(duì)研究疾病的發(fā)生機(jī)制 了解病情 指導(dǎo)治療均有意義 對(duì)診斷部分自身免疫病和判斷疾病的活動(dòng)情況有一定的意義 1 篩選試驗(yàn)與確診性試驗(yàn)的合理組合 2 結(jié)合臨床癥狀選擇性檢測(cè)相關(guān)的自身抗體 3 切忌盲目的全面檢測(cè)自身抗體 4 通常以抗核抗體作為篩選試驗(yàn) ANA在許多AID中可呈陽(yáng)性 5 ANA陽(yáng)性時(shí) 再進(jìn)行針對(duì)特異性靶抗原成分的自身抗體的檢測(cè) 達(dá)到明確診斷的目的 第四節(jié)自身抗體的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)選擇的原則 一 自身抗體檢測(cè)的一般原則 二 實(shí)驗(yàn)室方法的選擇及結(jié)果的確認(rèn) IIF法 篩選試驗(yàn) ANA 抗dsDNA IB法ELISA法IFA法 特異性實(shí)驗(yàn) 抗原基質(zhì)片 如Hep 2 小鼠肝印片 切片 加入自身抗體后與抗原相結(jié)合 再與熒光標(biāo)記的抗抗體結(jié)合 根據(jù)細(xì)胞的熒光著色進(jìn)行定性 定位分析 以特異性純化抗原包被載體 檢測(cè)特異性自身抗體 但特異性抗原不易純化或不明確 用ELISA和IBT等檢測(cè)自身抗體存在一定誤差 小結(jié) 自身免疫病是由于某種原因使自身免疫應(yīng)答過(guò)強(qiáng)或持續(xù)時(shí)間過(guò)久 表現(xiàn)為質(zhì)和量的異常 所產(chǎn)生的自身抗體和 或 自身致敏淋巴細(xì)胞對(duì)表達(dá)自身靶抗原的細(xì)胞和組織發(fā)動(dòng)攻擊 導(dǎo)致?lián)p傷或功能障礙 并出現(xiàn)相應(yīng)臨床癥狀