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第1講 基因工程 1．(2018年天津一中月考)chlL基因是藍(lán)藻DNA上控制葉綠素合成的基因，為研究該基因?qū)θ~綠素合成的控制，需要構(gòu)建該種生物缺失chlL基因的變異株細(xì)胞。技術(shù)路線如圖甲所示，請(qǐng)據(jù)圖分析回答： (1)與真菌相比較，藍(lán)藻在結(jié)構(gòu)上最主要的特點(diǎn)是____________________，在功能上最主要的特點(diǎn)是____________________。 (2)①②過程中均使用的工具酶有____________________________。 (3)構(gòu)建重組質(zhì)粒B在整個(gè)操作過程中的目的是__________________________________ ________________________________________________________________________。 (4)若含有chlL基因的DNA片段和選用的質(zhì)粒上的限制酶切割位點(diǎn)如圖乙所示。請(qǐng)回答： ①構(gòu)建含chlL基因的重組質(zhì)粒A時(shí)，應(yīng)選用的限制酶是__________________，對(duì)__________________進(jìn)行切割。 ②同時(shí)用酶1和酶4切割圖乙中的質(zhì)粒，則產(chǎn)生含有1 800對(duì)堿基和8 200對(duì)堿基的兩種片段；用圖中四種酶同時(shí)切割此質(zhì)粒，則產(chǎn)生含有600對(duì)堿基和8 200對(duì)堿基的兩種片段；若換用酶1和酶3同時(shí)切割此質(zhì)粒，則產(chǎn)生的片段是_______________________________ ________________________________________________________________________。 【答案】(1)無以核膜為界限的細(xì)胞核　能夠進(jìn)行光合作用 (2)限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶 (3)破壞chlL基因，操作成功后篩選出該變異株細(xì)胞 (4)①酶1和酶3　質(zhì)粒和含chlL基因的DNA?、诤? 200對(duì)堿基和8 800對(duì)堿基的兩種片段 【解析】(1)藍(lán)藻為原核生物，無以核膜為界限的細(xì)胞核，其體內(nèi)含有光合色素及與光合作用有關(guān)的酶，能進(jìn)行光合作用。(2)表達(dá)載體構(gòu)建時(shí)需限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)和DNA連接酶等工具酶。(3)由題干信息“構(gòu)建該種生物缺失chlL基因的變異株細(xì)胞”可知，構(gòu)建重組質(zhì)粒B的目的在于破壞chlL基因并篩選出變異株細(xì)胞。(4)①由圖乙知，獲得chlL基因需酶1和酶3對(duì)此基因所在的DNA進(jìn)行切割，同時(shí)對(duì)質(zhì)粒也要用同種酶切割處理，以便構(gòu)建重組質(zhì)粒A。②由題意知四種酶同時(shí)切割時(shí)含600對(duì)堿基的片段共有3個(gè)。若用酶1和酶3同時(shí)切割時(shí)，產(chǎn)生的片段有8 200＋600＝8 800(對(duì))堿基；另一片段為6002＝1 200(對(duì))堿基。 2．我國科學(xué)家張道遠(yuǎn)先生通過從耐旱灌木白花檉柳中克隆得到TSOD基因，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)轉(zhuǎn)化到棉花中，獲得了具備更強(qiáng)抗旱性的T4代轉(zhuǎn)基因棉花株系。下圖為轉(zhuǎn)基因抗旱棉花的培育過程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答： (1)①過程表示用________擴(kuò)增目的基因的方法。②過程用到的工具酶有_________________________。 步驟③一般用________處理農(nóng)桿菌，使其易吸收周圍環(huán)境中的DNA分子。 (2)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入棉花細(xì)胞除步驟④所示的方法外，還可采用______________。如果受體細(xì)胞是動(dòng)物的受精卵，則一般采用的方法是______________。 (3)外植體培養(yǎng)成為試管苗的過程采用了________技術(shù)，利用了______________________的原理，步驟⑤⑥表示______________。 (4)為了確定抗旱轉(zhuǎn)基因棉花是否培育成功，可先用放射性同位素標(biāo)記的________作探針進(jìn)行分子水平鑒定，再______________進(jìn)行個(gè)體水平鑒定棉花植株的抗旱性。 【答案】(1)PCR技術(shù)　限制酶(限制性核酸內(nèi)切酶)和DNA連接酶　Ca2＋(或CaCl2) (2)花粉管通道法(基因槍法)　顯微注射法 (3)植物組織培養(yǎng)　植物細(xì)胞的全能性　脫分化、再分化 (4)抗旱基因(TSOD基因、目的基因)　移栽到干旱土地中 【解析】(1)①過程表示用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因。②過程用到的工具酶有限制酶(限制性核酸內(nèi)切酶)和DNA連接酶。步驟③一般用Ca2＋(或CaCl2)處理農(nóng)桿菌，使其易吸收周圍環(huán)境中的DNA分子。(2)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入棉花細(xì)胞除步驟④所示的方法外，還可采用花粉管通道法(基因槍法)。如果受體細(xì)胞是動(dòng)物的受精卵，則一般采用的方法是顯微注射法。(3)外植體培養(yǎng)成為試管苗的過程采用了植物組織培養(yǎng)技術(shù)，利用了植物細(xì)胞的全能性的原理，步驟⑤⑥表示脫分化、再分化。(4)為了確定抗旱轉(zhuǎn)基因棉花是否培育成功，可先用放射性同位素標(biāo)記的抗旱基因(TSOD基因、目的基因)作探針進(jìn)行分子水平鑒定，再移栽到干旱土地中進(jìn)行個(gè)體水平鑒定棉花植株的抗旱性。 3．GDNF蛋白是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子，對(duì)損傷的神經(jīng)細(xì)胞具有營養(yǎng)和保護(hù)作用。研究人員構(gòu)建了含GDNF基因的基因表達(dá)載體(如圖所示)，并導(dǎo)入到大鼠神經(jīng)干細(xì)胞，用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療。請(qǐng)回答下列相關(guān)問題： (1)在培養(yǎng)大鼠神經(jīng)干細(xì)胞時(shí)，常先用__________________把組織分離，獲得單個(gè)細(xì)胞。當(dāng)培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞相互接觸后停止分裂，通過分瓶培養(yǎng)可以使細(xì)胞繼續(xù)增殖，該過程稱為________。 (2)除目的基因、啟動(dòng)子外，基因表達(dá)載體通常還含有___________________________，在構(gòu)建GDNF基因的表達(dá)載體時(shí)，需選擇圖中的________限制酶進(jìn)行酶切。 (3)根據(jù)上圖，酶切后的載體和GDNF基因經(jīng)______酶處理，可獲得________種含有目的基因的產(chǎn)物。 【答案】(1)胰蛋白酶或膠原蛋白酶　傳代培養(yǎng) (2)終止子和標(biāo)記基因　XhoⅠ (3)DNA連接　兩 【解析】(1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，需要先用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理動(dòng)物組織，使動(dòng)物細(xì)胞彼此分離成單個(gè)細(xì)胞。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中會(huì)出現(xiàn)接觸抑制的現(xiàn)象。(2)目的基因的表達(dá)載體除了含有目的基因、啟動(dòng)子外，還要含有終止子和標(biāo)記基因等。從圖中可以看出，目的基因的兩側(cè)含有限制酶XhoⅠ的切割位點(diǎn)，所以要用XhoⅠ對(duì)質(zhì)粒和目的基因進(jìn)行切割。(3)目的基因與質(zhì)粒的結(jié)合要用DNA連接酶處理。從圖中可以看出，獲得的三種質(zhì)粒中，只有兩種含有目的基因。 4．(2018年海南模擬)糖尿病是近年來高發(fā)的“富貴病”，常見類型有遺傳型糖尿病和Ⅱ型糖尿病。遺傳型糖尿病的主要病因之一是胰島受損?？蒲袡C(jī)構(gòu)作出如下設(shè)計(jì)：取糖尿病患者的細(xì)胞，將人的正常胰島素基因?qū)肫渲?，然后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，誘導(dǎo)產(chǎn)生胰島組織，重新植入患者的胰島，使胰島恢復(fù)功能。Ⅱ型糖尿病需要注射胰島素治療。目前臨床使用的胰島素制劑注射120 min后才出現(xiàn)高峰，與人體生理狀態(tài)不符?？蒲腥藛T通過一定的工程技術(shù)手段，將胰島素B鏈的28號(hào)和29號(hào)氨基酸互換，獲得了速效胰島素，速效胰島素已通過臨床試驗(yàn)。 (1)對(duì)遺傳型糖尿病進(jìn)行基因治療的方案中，胰島素基因稱為__________，實(shí)驗(yàn)室中要先對(duì)該基因利用________技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。將該基因?qū)胝＜?xì)胞所用的方法是________________。 (2)科研人員利用蛋白質(zhì)工程合成速效胰島素，該技術(shù)的實(shí)驗(yàn)流程為： → 其中，流程A是_______________________________________________________， 流程B是___________________________________________________________。 (3)與基因工程相比，蛋白質(zhì)工程是以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過基因__________或基因__________，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行________，制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)生活需要。 【答案】(1)目的基因　PCR　顯微注射法 (2)預(yù)期蛋白質(zhì)的功能　相應(yīng)的氨基酸序列 (3)修飾　合成　改造 【解析】(1)根據(jù)題意，在進(jìn)行基因治療時(shí)，胰島素基因是目的基因，在體外條件下可利用PCR技術(shù)對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增，在基因工程中將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞的常用方法是顯微注射法。(2)根據(jù)蛋白質(zhì)工程的流程示意圖，可知整個(gè)流程是根據(jù)預(yù)期蛋白質(zhì)的功能設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)，然后推測(cè)相應(yīng)的氨基酸序列，并找到相應(yīng)的脫氧核苷酸序列，最后合成相應(yīng)的蛋白質(zhì)。(3)與基因工程相比，蛋白質(zhì)工程是以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過基因修飾或基因合成對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)生活需要。 5．請(qǐng)分析下圖回答問題： (1)圖甲中①～⑤所示的生物工程為____________。 (2)圖甲中序號(hào)④所示過程叫作________。 (3)如圖乙，一個(gè)基因表達(dá)載體的組成，除了目的基因外，在基因尾端還必須有[2]__________；圖中[3]________的作用是為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。 (4)若預(yù)期蛋白質(zhì)欲通過乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)，則構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，圖乙中序號(hào)[1]代表的是____________________________；且在圖甲中⑨過程之前，要對(duì)精子進(jìn)行篩選，保留含性染色體________的精子。 (5)為獲得較多的受精卵進(jìn)行研究，圖甲中⑥過程一般用激素對(duì)供體做________處理；為提高培育成功率，進(jìn)行⑩過程之前，要對(duì)________動(dòng)物做________處理。若圖甲中的卵母細(xì)胞來自從屠宰場收集的卵巢，則其在⑧之前需進(jìn)行體外培養(yǎng)到____________期方能受精。 (6)用________技術(shù)處理發(fā)育到________期或囊胚期的早期胚胎，可獲得同卵雙胎或多胎。若是對(duì)囊胚進(jìn)行處理，要注意將______________均等分割。 【答案】(1)蛋白質(zhì)工程 (2)反轉(zhuǎn)錄 (3)終止子　標(biāo)記基因 (4)乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子　X (5)超數(shù)排卵　供、受體　同期發(fā)情　減數(shù)第二次分裂中(或MⅡ中) (6)胚胎分割　桑椹胚　內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 【解析】(1)蛋白質(zhì)工程的一般過程為：①根據(jù)中心法則逆推以確定目的基因的堿基序列：預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因)。②最終還是回到基因工程上來進(jìn)行蛋白質(zhì)的合成。(2)據(jù)圖分析，圖甲中④表示的是從細(xì)胞質(zhì)中獲取相關(guān)蛋白質(zhì)的核酸片段，即模板信使RNA，反轉(zhuǎn)錄形成目的基因。(3)基因表達(dá)載體的組成：目的基因＋啟動(dòng)子＋終止子＋標(biāo)記基因，其中在基因首端是[1]啟動(dòng)子，在基因尾端是[2]終止子，[3]是標(biāo)記基因，標(biāo)記基因的作用是為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。(4)通過乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)預(yù)期蛋白質(zhì)，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，[1]代表的是乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子；將目的基因?qū)胧芫褧r(shí)，要篩選出含有X性染色體的精子進(jìn)行體外受精，形成的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物在哺乳期才能表達(dá)出預(yù)期蛋白質(zhì)。(5)為獲得較多的受精卵，圖甲中⑥過程用促性腺激素對(duì)供體做超數(shù)排卵處理；⑩胚胎移植之前，要對(duì)供、受體動(dòng)物做同期發(fā)情處理，使得供體與受體具有相同的生理變化，為供體的胚胎植入受體提供了相同的生理環(huán)境。從屠宰場收集的卵巢中采集卵母細(xì)胞，要在體外經(jīng)人工培養(yǎng)成熟，即培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中(或MⅡ中)期，才能與獲能的精子受精。(6)進(jìn)行胚胎分割時(shí)，應(yīng)選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的桑椹胚或囊胚；對(duì)囊胚階段的胚胎進(jìn)行分割時(shí)要注意將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割，否則會(huì)影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。 6．下圖是利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育抗病小麥的過程。請(qǐng)據(jù)圖回答問題。 (1)重組質(zhì)粒T除含有目的基因外，還必須有__________、____________和____________等。 (2)圖示中將基因表達(dá)載體構(gòu)建完成后沒有直接導(dǎo)入農(nóng)桿菌，而是先將其導(dǎo)入大腸桿菌，目的是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)在步驟⑤⑥中都需用________處理。為了確認(rèn)目的基因通過⑦導(dǎo)入植物細(xì)胞后是否轉(zhuǎn)錄，通常采用________法進(jìn)行檢測(cè)；驗(yàn)證目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后是否成功表達(dá)，通常采用__________________法從分子水平進(jìn)行檢測(cè)。 (4)假設(shè)該抗病基因D，通過基因工程導(dǎo)入小麥后連接到小麥的一條染色體上，則該小麥進(jìn)行減數(shù)分裂的細(xì)胞在聯(lián)會(huì)時(shí)有________個(gè)D基因。 【答案】(1)啟動(dòng)子　終止子　標(biāo)記基因 (2)獲取大量重組質(zhì)粒(讓目的基因擴(kuò)增) (3)Ca2＋　分子雜交　抗原—抗體雜交 (4)2 【解析】(1)重組質(zhì)粒T除含有目的基因外，還必須有啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。(2)圖示中將基因表達(dá)載體構(gòu)建完成后沒有直接導(dǎo)入農(nóng)桿菌，而是先將其導(dǎo)入大腸桿菌，目的是獲取大量重組質(zhì)粒(讓目的基因擴(kuò)增)。(3)將目的基因?qū)爰?xì)菌細(xì)胞時(shí)，需要用Ca2＋處理，使其成為易于吸收周圍環(huán)境中DNA的感受態(tài)。因此步驟⑤⑥中都需用Ca2＋處理。從分子水平檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄，常采用分子雜交法；驗(yàn)證目的基因是否表達(dá)，通常采用抗原—抗體雜交法。(4)假設(shè)該抗病基因D，通過基因工程導(dǎo)入小麥后連接到小麥的一條染色體上，在減數(shù)第一次分裂間期小麥細(xì)胞中進(jìn)行了DNA復(fù)制，因此聯(lián)會(huì)時(shí)細(xì)胞中有2個(gè)D基因。 7．PCR技術(shù)是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室里的一種常規(guī)手段，其原理是利用DNA的半保留復(fù)制，在試管中進(jìn)行DNA的人工復(fù)制(如圖所示)，在很短的時(shí)間內(nèi)，將DNA擴(kuò)增幾百萬倍甚至幾十億倍，使實(shí)驗(yàn)室所需要的遺傳物質(zhì)不再受限于活的生物體。 (1)PCR的全稱是__________________，94 ℃高溫使DNA雙鏈打開，這一步是打開______鍵，稱為______。而這一過程在細(xì)胞內(nèi)是通過________酶實(shí)現(xiàn)的。 (2)當(dāng)溫度降低時(shí)，引物與模板________端結(jié)合，在__________________的作用下，引物沿模板延伸，此過程中原料是______________，遵循的原則是________________。 (3)PCR技術(shù)的必要條件除模板、原料、ATP、酶以外，至少還需要三個(gè)條件，即液體環(huán)境、適宜的________和____________，前者由PCR儀自動(dòng)調(diào)控，后者則靠________來維持。 (4)DNA的復(fù)制需要引物，其主要原因是________________________。引物的實(shí)質(zhì)是________，若將1個(gè)DNA分子拷貝10次，則需要在緩沖溶液中至少加入________個(gè)引物。 【答案】(1)多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　氫　變性　解旋 (2)3′　熱穩(wěn)定DNA聚合酶　四種脫氧核苷酸　堿基互補(bǔ)配對(duì) (3)溫度　pH　緩沖液 (4)DNA的復(fù)制不能從頭開始，DNA聚合酶只能從引物的3′端延伸DNA鏈　單鏈RNA或者單鏈DNA分子　211－2 【解析】打開DNA雙鏈需破壞堿基對(duì)間的氫鍵；引物的游離端為5′端，即合成DNA時(shí)從新鏈的5′→3′端延伸，故引物需與模板的3′端結(jié)合；PCR所用液體環(huán)境需保證適宜的溫度和pH，其pH可借助緩沖液維持；DNA復(fù)制不能從頭開始，故必須提供引物。在DNA分子擴(kuò)增時(shí)，需要2種引物，由于新合成的鏈都需要引物作為復(fù)制的起點(diǎn)，故所需的引物數(shù)目等于新合成的DNA鏈的數(shù)目，即2210－2＝211－2(個(gè))。 8．在培育轉(zhuǎn)基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因(kan)常作為標(biāo)記基因，只有含卡那霉素抗性基因的細(xì)胞才能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上生長。如圖為獲得抗蟲棉的技術(shù)流程。請(qǐng)據(jù)圖回答問題： (1)基因工程的基本操作程序主要包括四個(gè)步驟：目的基因的獲取、________________、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、________________。 (2)A過程需要的酶有____________和______________。 (3)要把重組質(zhì)粒導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌，首先必須用___________處理土壤農(nóng)桿菌，使土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)變?yōu)開_______態(tài)，然后將______________________在緩沖液中混合培養(yǎng)完成轉(zhuǎn)化過程。 (4)含有重組質(zhì)粒的土壤農(nóng)桿菌侵染離體棉花葉片組織后，將離體棉花葉片組織培養(yǎng)成再生植株要經(jīng)過[C]________和[E]________。如要確保再生植株中含有抗蟲基因，可在C過程的培養(yǎng)基中加入______________。 (5)目的基因能否在棉花植株體內(nèi)維持和表達(dá)其遺傳特性的關(guān)鍵是________________。 這需要通過檢測(cè)才能知道，檢測(cè)采用的方法是______________________。 【答案】(1)基因表達(dá)載體的構(gòu)建　目的基因的檢測(cè)與鑒定 (2)限制酶　DNA連接酶 (3)Ca2＋　感受　重組質(zhì)粒和感受態(tài)細(xì)胞 (4)脫分化　再分化　卡那霉素 (5)目的基因是否插入受體細(xì)胞的DNA分子上　DNA分子雜交技術(shù) 【解析】(1)基因工程的基本操作程序主要包括四個(gè)步驟：目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定。(2)基因表達(dá)載體構(gòu)建過程中，需要用同種限制酶切割目的基因和載體，使它們產(chǎn)生相同的黏性末端，再用DNA連接酶把這兩個(gè)DNA片段連接起來。(3)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入目的基因時(shí)，首先必須用Ca2＋處理土壤農(nóng)桿菌，使土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)變?yōu)楦惺軕B(tài)，然后將重組質(zhì)粒和感受態(tài)細(xì)胞在緩沖液中混合培養(yǎng)完成轉(zhuǎn)化過程。(4)植物組織培養(yǎng)過程的關(guān)鍵步驟是脫分化和再分化。因?yàn)橹挥泻敲顾乜剐曰虻募?xì)胞才能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上生長，故若要確保再生植株中含有抗蟲基因，可在C過程的培養(yǎng)基中加入卡那霉素。(5)目的基因能否在棉花植株體內(nèi)維持和表達(dá)其遺傳特性的關(guān)鍵是目的基因是否插入受體細(xì)胞的DNA分子上，檢測(cè)采用的方法是DNA分子雜交技術(shù)。 9．如圖是獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和植物的流程圖，請(qǐng)據(jù)圖回答問題： (1)圖示獲得大量目的基因的方法是________。 (2)圖中過程②采用的方法是________________。過程③通常用________處理，為使過程④中的受體生理狀況適宜，可用激素對(duì)受體進(jìn)行________處理。 (3)構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒的過程⑤中需要用到的工具酶為__________________和DNA連接酶。 (4)如果過程⑥導(dǎo)入到萵苣的體細(xì)胞中，則需要通過________________技術(shù)才能獲得轉(zhuǎn)基因萵苣，該技術(shù)的原理和首要條件分別是_______________________________和__________________。 (5)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因萵苣中目的基因是否表達(dá)，所采用的分子水平檢測(cè)方法是________________________________________________________________________。 【答案】(1)PCR (2)顯微注射法　促性腺激素　同期發(fā)情 (3)限制性核酸內(nèi)切酶 (4)植物組織培養(yǎng)　植物細(xì)胞具有全能性　離體培養(yǎng) (5)抗原—抗體雜交 【解析】(1)通過PCR技術(shù)可以獲得大量目的基因。(2)過程②常采用顯微注射法把重組DNA導(dǎo)入受精卵中，過程③是采用促性腺激素對(duì)供體進(jìn)行超數(shù)排卵處理，為保證受體和供體生理狀況相同，需要對(duì)受體進(jìn)行同期發(fā)情處理。(3)構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)需要限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶。(4)導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞需處于離體條件通過植物組織培養(yǎng)才可以獲得轉(zhuǎn)基因植物，該過程的原理是植物細(xì)胞的全能性。(5)采用抗原—抗體雜交法可以檢測(cè)目的基因是否表達(dá)。 10．圖示方案為人們獲得生物新品種的過程，請(qǐng)回答下列問題： 方案Ⅰ：抗凍蛋白基因煙草細(xì)胞―→抗凍煙草 方案Ⅱ：A基因免疫過的B細(xì)胞―→體外培養(yǎng)―→單克隆抗體 方案Ⅲ：人的生長激素基因牛的受精卵―→早期胚胎受體母牛―→轉(zhuǎn)基因牛 (1)基因工程的核心步驟是__________________。農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中，根據(jù)農(nóng)桿菌的特點(diǎn)，如果將抗凍蛋白基因插入______________上，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以使目的基因進(jìn)入植物細(xì)胞，并將其插入植物細(xì)胞中________________上。 (2)推測(cè)方案Ⅱ中A基因所起的作用是_____________________________________， 請(qǐng)寫出該方案獲得的細(xì)胞中遺傳信息傳遞時(shí)所遵循的法則：______________________。 (3)方案Ⅲ中的轉(zhuǎn)基因?？梢酝ㄟ^分泌乳汁來生產(chǎn)人的生長激素。這需要將人的生長激素基因與______________的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起。該方案中的早期胚胎在移植入受體母牛子宮之前，必須進(jìn)行性別鑒定，一般是取處于__________時(shí)期的__________細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。 【答案】(1)基因表達(dá)載體的構(gòu)建　Ti質(zhì)粒的T－DNA　染色體DNA (2)調(diào)控細(xì)胞無限增殖 (3)乳腺蛋白基因　囊胚　滋養(yǎng)層 【解析】(1)基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心步驟。農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中，將抗凍蛋白基因插入Ti質(zhì)粒的T－DNA上，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以使目的基因插入植物細(xì)胞中染色體DNA上。(2)方案Ⅱ中將A基因?qū)朊庖哌^的B淋巴細(xì)胞生產(chǎn)單克隆抗體，說明A基因使得細(xì)胞無限增殖，即A基因能夠調(diào)控細(xì)胞無限增殖，該基因在受體細(xì)胞中能夠復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯。(3)方案Ⅲ中將人的生長激素基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起，使得轉(zhuǎn)基因?？梢酝ㄟ^分泌乳汁來生產(chǎn)人的生長激素。囊胚中的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)將來發(fā)育成胎兒的各種組織，滋養(yǎng)層細(xì)胞發(fā)育成胎盤和胎膜，將早期胚胎移植入受體母牛子宮之前，一般取處于囊胚時(shí)期的滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行性別檢測(cè)。