《乙肝病毒DNA的實(shí)驗(yàn)室檢測》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《乙肝病毒DNA的實(shí)驗(yàn)室檢測（27頁珍藏版）》請?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

LOREMIPSUMDOLOR 乙肝病毒DNA的實(shí)驗(yàn)室檢測袁立云 1 熒光定量PCR技術(shù)2 乙肝病毒的感染3 HBV DNA與臨床 熒光定量PCR技術(shù) 熒光定量PCR技術(shù) Polymerasechainreaction PCR 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 是一種DNA的快速擴(kuò)增技術(shù) PCR技術(shù)通過兩個(gè)短的稱為引物的DNA小片段和一種耐熱酶 TaqDNA聚合酶 的作用 經(jīng)過高溫變性 低溫退火 適溫延伸三個(gè)步驟在3個(gè)小時(shí)內(nèi)反復(fù)循環(huán)25 30次 把特定的DNA片段擴(kuò)增1000萬倍 每個(gè)PCR體系含4種主要成分 含有待擴(kuò)增序列的DNA模板 引物 TaqDNA聚合酶 脫氧核糖核酸三磷酸 dNTP 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù) 是指在反應(yīng)體系中加入熒光標(biāo)記 利用熒光信號積累實(shí)時(shí)檢測整個(gè)PCR過程 通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對PCR終產(chǎn)物的分析 最終實(shí)現(xiàn)對未知的起始模版進(jìn)行定量分析的一種技術(shù) 是迄今對已知基因序列的核酸測定中最靈敏的方法 熒光定量PCR技術(shù) PCR反應(yīng)過程 d NTPs Taq酶 Primers 反應(yīng)組分 變性 延伸 重復(fù) 退火 循環(huán)24個(gè)拷貝 循環(huán)38個(gè)拷貝 熒光定量PCR原理 插入染料法SYBRGreenI雜交探針法 最常用 TaqMan TaqMan探針 d NTPs Taq酶 Primers 反應(yīng)體系 變性 l 退火 1 鏈取代 2 水解 3 聚合 4 檢測熒光 l 乙肝病毒的感染 乙肝病毒的感染 一 乙型肝炎病毒結(jié)構(gòu)及特點(diǎn) HBsAg 是HBV感染的主要標(biāo)志HBsAb 保護(hù)性抗體HBcAg 僅存于感染的肝細(xì)胞核內(nèi) 一般不存在于血循環(huán)中HBcAb 非保護(hù)性抗體 HBcAb IgM提示HBV處于復(fù)制狀態(tài)HBeAg HBV復(fù)制及強(qiáng)感染性的指標(biāo)HBeAb 有一定的保護(hù)作用 預(yù)后良好 乙肝病毒的感染 二 HBV DNA與 兩對半 1 兩對半 機(jī)體的免疫反應(yīng)狀態(tài) 2 攜帶者 大三陽 小三陽 等免疫學(xué)指標(biāo)不能反應(yīng)體內(nèi)病毒復(fù)制水平與感染程度 FQ PCR 檢測的是HBV本身的遺傳物質(zhì) DNA 是病毒存在和復(fù)制的最可靠 最直接的指標(biāo) 3 血清學(xué)指標(biāo) 不能排除HBV感染 乙肝病毒的感染 5 HBeAg陽性標(biāo)本HBVDNA檢出率90 左右HBeAg與HBVDNA有著良好的相關(guān)性 4 也可能出現(xiàn)HBsAg HBV DNA 乙肝病毒的感染 乙肝病毒的感染 慢性HBV感染分期及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo) 魯鳳民 莊輝 乙型肝炎實(shí)驗(yàn)室診斷研究進(jìn)展2009 HBV DNA與臨床 HBVDNA檢測的臨床意義 HBVDNA是HBV存在最直接的依據(jù)HBVDNA是HBV復(fù)制的標(biāo)志HBVDNA是患者具有傳染性的標(biāo)志HBVDNA對乙肝兩對半起補(bǔ)充作用HBVDNA是目前判斷乙肝抗病毒藥物療效最敏感的指標(biāo)HBVDNA可檢測出隱匿性慢性乙型肝炎 有利于獻(xiàn)血員窗口期病毒核酸的篩查和早期診斷 提供直接證據(jù)縮短 窗口期 HBVDNA檢測的臨床意義 調(diào)查表明并不是所有 大三陽 的病人都處于HBV復(fù)制期 具有傳染性 也不是所有 小三陽 的病人HBV都無復(fù)制 因此 要準(zhǔn)確知道HBV是否處于復(fù)制狀態(tài) 最準(zhǔn)確的方法還是通過檢測HBVDNA來決定 HBVDNA檢測的臨床意義 HBVDNA檢測的臨床意義 HBsAg和HBeAg均陽性而HBVDNA陰性 干擾素或拉米夫定等治療后病毒復(fù)制受抑制 PCR所用引物相應(yīng)的DNA序列發(fā)生突變 此引物與突變DNA不能配對結(jié)合 病毒DNA整合于宿主肝細(xì)胞染色體而血中游離HBVDNA很少或缺乏 目前尚無一種能迅速 直接殺死清除乙肝病毒的藥物 最好的抗病毒藥物療效也僅能達(dá)到50 左右 目前國際醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的治療慢性乙肝有確切療效的抗病毒藥物主要有兩大類 干擾素 重組人 1b干擾素 2a 2b干擾素等 核苷類似物 拉米夫定 阿德福韋 乙肝的治療 主要包括抗病毒 免疫調(diào)節(jié) 抗炎保肝 抗纖維化等對于HBVDNA 105的患者應(yīng)進(jìn)行抗病毒治療 乙肝的治療 謝謝